RU2445271C2 - Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы - Google Patents
Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2445271C2 RU2445271C2 RU2010105422/10A RU2010105422A RU2445271C2 RU 2445271 C2 RU2445271 C2 RU 2445271C2 RU 2010105422/10 A RU2010105422/10 A RU 2010105422/10A RU 2010105422 A RU2010105422 A RU 2010105422A RU 2445271 C2 RU2445271 C2 RU 2445271C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- activity
- stabilizer
- enzyme
- nanoparticles
- enzymatic activity
- Prior art date
Links
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 title claims abstract description 13
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 13
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 claims abstract description 21
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 claims abstract description 21
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 34
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 abstract description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 50
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 50
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 15
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 11
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 9
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 9
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 7
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 6
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 5
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 5
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 5
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 5
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 4
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 4
- -1 N-protected amino Chemical group 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000323 aluminium silicate Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 4
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 4
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- UOHMMEJUHBCKEE-UHFFFAOYSA-N prehnitene Chemical compound CC1=CC=C(C)C(C)=C1C UOHMMEJUHBCKEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 3
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 3
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 3
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229910001566 austenite Inorganic materials 0.000 description 2
- HOWJQLVNDUGZBI-UHFFFAOYSA-N butane;propane Chemical compound CCC.CCCC HOWJQLVNDUGZBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006229 carbon black Substances 0.000 description 2
- 238000003763 carbonization Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000005293 ferrimagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 150000002816 nickel compounds Chemical class 0.000 description 2
- OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N orcinol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1 OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 2
- 229910052596 spinel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011029 spinel Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000004876 x-ray fluorescence Methods 0.000 description 2
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108050008938 Glucoamylases Proteins 0.000 description 1
- 229910000760 Hardened steel Inorganic materials 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001354 calcination Methods 0.000 description 1
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L calcium;(2s,3s,4s,5s,6r)-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxy-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxylato-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Ca+2].O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H](C([O-])=O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)[C@H](C(O)=O)O1 OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005255 carburizing Methods 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000007233 catalytic pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000051 modifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000011858 nanopowder Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical compound CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000004071 soot Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910003153 β-FeOOH Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Предложен стабилизатор ферментативной активности пероксидазы. Стабилизатор представляет собой наноразмерные частицы кобальтовой феррошпинели, компоненты которой изменяются в интервале Co0,7±0,05Fe2,3±0,05O4÷Co1±0,05Fe2±0,05O4, суспендированные в натрий-фосфатном буферном растворе в концентрации 0.01-10 мг/мл. Изобретение способствует сохранению 40-42% ферментативной активности пероксидазы в течение 105-255 суток при заданной намагниченности частиц кобальтовой феррошпинели. 2 табл.
Description
Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для повышения коэффициента полезного действия ферментов, так как низкая биокаталитическая эффективность ферментов зачастую задерживает развитие крупномасштабных биопроизводств, способных конкурировать с традиционными химическими процессами.
Известны в основном два способа повышения активности и продления срока хранения ферментативных препаратов.
Первый способ относится к обработке ферментативного препарата различными веществами.
Известен способ ферментативной стабилизации органического осадка (SU 1227604, 1986), включающий введение смеси ферментов, содержащих амилазу, протеазу, глюконазу, перемешивание и выдерживание при 25-40°С и рН 5-8 в течение 5-10 часов с последующим разделением на стабилизированный ил и иловую воду, отличающийся тем, что с целью повышения степени стабилизации и уменьшения потребности в ферментах, в смесь осадка и ферментов вводят стабилизатор - комплексообразователь - динатрийгидрогенэтилендиаминтетраацетат.
Основным недостатком стабилизатора является низкая степень стабилизации, в результате необходимо вводить большое количество комплексообразователя в смесь ферментов и проводить термическую обработку.
Известен способ стабилизации водного раствора или суспензии металлопротеазы и стабилизированный водный раствор или суспензия металлопротеазы, отличающийся тем, что в водный раствор или суспензию в качестве стабилизатора вводят N-защищенную аминокислоту (бензилоксикарбониламинокислоту) в молярной концентрации, превышающей более чем в 30-500 и даже 900 раз молярную концентрацию металлопротеазы (RU 2167937, 1996).
Основным недостатком стабилизатора является необходимость большого количества последнего, значительно превышающего молярную концентрацию металлопротеазы. Кроме того, при приготовлении раствора фермента необходимы операции с контролируемыми температурами и два стабилизатора: ионы кальция и аминокислота.
Известны «Stabilized Agueous enzyme compositions», включающие введение в раствор, содержащий водные амилолитические ферменты в качестве стабилизатора, активаторов - водорастворимой кальциевой соли и алифатического гликоля (НО-СНСНО) или пропандиола (US Patent 3819528, 1974).
Основным недостатком этих веществ является низкий уровень стабилизации и активации фермента.
Известен способ стабилизации и активации гидролитических ферментов, в частности амилосубтилина или ксиланазы, включающий введение в качестве стабилизатора водного раствора 5-метилрезорцина в концентрации 0.05-1.0 мГ/мл (предпочтительно 0.5-1 мГ/мл для амилосубтилина и 0.05-0.2 мГ/мл для ксиланазы) и инкубирование полученной смеси при температуре 50°С в течение 10 мин (RU 2238318, 2004).
Основным недостатком технического решения является малое время, в течение которого фермент остается стабильным.
Известны стабилизаторы тетраметилбензол или люминал (в темноте), которые позволяют пероксидазе хрена сохранять ферментативную активность на постоянном уровне в течение 84 дней. Однако при выдерживании на свету через 42 дня их активность падает на 80% и составляет только 20%, кроме того, тетраметилбензол является канцерогеном (Schuetz, Andreas; Winkler Michael; Welleir Michael G; Niessner, Reinhard Proc. SPIE vol.3105, P.332-340, Chemical, Biochemical and environmental Fiber Sensors IX, Robert A. Lieberman; Ed (SPIE Homepage).
Известен способ хранения пероксидазы хрена и глюкооксидазы в присутствии стабилизатора - поливинилового спирта (ПВА), однако он позволяет сохранять активность более 75% только в течение 15 дней, при этом в контроле с Micro-o-Protect (PBSM) сохраняется только 40% (Scott Boyd, Kristy Letcher, Hiroshi Yamazaki Stabilization Effect of Polyvinil Alcohol on Horseradish peroxidase, Glucose oxidase, β-Galactosidase and Alkaline Phosphatase (Biotechnology Techniques, vol.10, №9 (1996), pp.693-698.
Второй способ повышения активности и продления срока хранения основан на иммобилизации фермента на стабилизаторах-носителях различного вида и в ряде случаев дополнительной обработке ферментативного препарата специально подобранными веществами. Улучшение биокаталитической эффективности может быть достигнуто путем управления структурой стабилизатора-носителя фермента.
Известен способ стабилизации протеазы Bacillus SUBTILIS, включающий иммобилизацию препарата на стабилизаторе - специальной целлюлозной матрице - и промывание водным раствором солей органических кислот. Такая обработка существенно увеличивает стабильность препарата при хранении (SU 1597390, 1990).
Основным недостатком стабилизатора является сложность при изготовлении и активировании 2,4,6-трихлор-1,3,5-сим-триазином целлюлозной матрицы.
Известен способ стабилизации фермента инвертазы при иммобилизации. Для этого инвертазу включают в структуру стабилизатора - органического геля (Aziz Tanriseven, Senay Dogan. Immobilization of invertase within calcium alginate gel capsules / Process Biochemistry 2001, 36, pp.1081-1083).
Существенным недостатком стабилизатора являются трудности при изготовлении органических гелевых матриц, цена которых очень высока.
Известен способ иммобилизации группы ферментов, в том числе содержащей инвертазу на стабилизаторах - гранулах активированного угля, покрытых полиаминами. С поверхностью носителя фермент связан ковалентно с помощью специальных сшивающих реагентов (US Patent 4438196, 1984).
Основные недостатки стабилизатора заключаются в сложности, многостадийности и большой трудоемкости его изготовления. Кроме того, сшивающие реагенты способны уменьшать ферментативную активность.
Известен способ приготовления биокатализаторов, при осуществлении которых инвертаза иммобилизована на стабилизаторах - неорганических глинистых носителях (каолин, бентонит) путем адсорбции (FR 2020527, 1970).
Недостатком стабилизатора является малая активность фермента в его присутствии.
Известен биокатализатор для получения инвертного сахара и способ получения инвертного сахара, в котором инвертаза, выделенная из микроскопических грибов или дрожжей, иммобилизована на поверхности стабилизатора - твердого носителя, в качестве которого используют алюмосиликатный носитель в виде пеноматериала, гранул, сотовых монолитов или пеноматериал из нержавеющей стали, или углеродсодержащий материал в виде гранул, сотовых монолитов или волокнистого слоя из углеродных нитей с заданной площадью удельной поверхности и содержанием углерода не менее 0,1 мас.% (RU 2224020, 2003).
Основными недостатками этого технического решения являются трудности, связанные с изготовлением носителя, которое предусматривает, например, осаждение двухвалентного соединения никеля на ячеистый алюмосиликатный пеноматериал, его восстановление в токе водорода до металлического никеля, а затем проведение процесса каталитического пиролиза пропан-бутановой смеси до образования каталитического волокнистого углерода. Сложным является также процесс иммобилизации на стабилизаторе растворимой инвертазы, который проводится в статическом режиме в течение суток при перемешивании, после чего следует процесс промывания биокатализатора.
Известно изобретение «Биокатализатор для инверсии сахарозы, носитель для биокатализатора, способ приготовления биокатализатора и способ инверсии сахарозы», в котором вместо фермента инвертазы используют дрожжевые мембраны с инвертазной активностью не менее 15 ЕА/мг, которые иммобилизуют на гранулированном углеродсодержащем носителе, изготовленном на основе сапропелей и имеющим макропористую структуру со средним диаметром пор 1-2 мкм, объемом пор 1.0-1.6 см3/г и площадью удельной поверхности не менее 80 м2/г (RU 22794751, 2006).
Основным недостатком технического решения является использование сложного и многоступенчатого процесса приготовления стабилизатора-носителя, включающего изготовление гранул, их сушку, карбонизацию и газификацию во вращающемся реакторе при 600°С с последующей активацией при 800°С в атмосфере водяного пара.
Известен биокатализатор, состоящий из глюкоамилазы, иммобилизованной на активированном угле, и способ его приготовления (US Patent №4289853, 1981).
Основным недостатком этого технического решения является сложный многоступенчатый способ изготовления стабилизатора - активированного угля с площадью удельной поверхности 600-1000 м2/г, включающий модификацию поверхности угля обработкой концентрированными кислотами, в основной азотной, последующую выдержку в растворе бифункционального сшивающего агента, затем контактирование с раствором глюкоамилазы. В результате образуется только 10-30% пор, пригодных для размещения молекул фермента и предложенный биокатализатор имеет недостаточно высокие ферментативную активность и стабильность, сохраняя 80% первоначальной активности при хранении в течение месяца при 30°С.
Известно изобретение «Биокатализатор для осахаривания крахмала, способ его приготовления, твердый носитель для иммобилизации глюкоамилазы и способ осахаривания крахмала», в котором фермент глюкоамилаза иммобилизован на твердом носителе - зауглероженном алюмосиликате с углеродным покрытием не менее 1.5 мас.% углерода, при этом носитель имеет площадь удельной поверхности не менее 2 м2/г (RU 2167197, 2001).
Основным недостатком этого технического решения является сложный способ изготовления стабилизатора-носителя на основе зауглероженного алюмосиликата, включающий прокаливание при 900°С, нанесение соединений никеля, восстановление и зауглероживание носителя в процессе пиролиза пропан-бутановой смеси с целью получения структуры из большого числа мезопор заданного размера, в которых должны располагаться молекулы фермента глюкоамилазы. Кроме того, биокаталитическая активность материала, изготовленного в соответствии с предложенным техническим решением, низка, так как использование носителя в виде пеноматериала или сотовых изделий в реакторе с неподвижным слоем катализатора создает застойные зоны, снижающие эффективность катализатора.
Известно изобретение «Биокатализатор для осахаривания декстрина, способ его приготовления и способ осахаривания декстрина», в котором фермент глюкоамилаза иммобилизован на твердом гранулированном углеродном носителе, приготовленном из сажи и обладающим мезопористой структурой со средним размером пор 100-400 Å и объемом пор 0.7-0.9 см3/г (RU 2281328, 2006).
Основным недостатком этого технического решения является сложный процесс изготовления стабилизатора, включающий высокотемпературную карбонизацию и газификацию технического углерода - сажи с последующей активацией водяным паром.
В последние годы в качестве стабилизаторов-носителей для иммобилизации ферментов используют наночастицы, в том числе магнитные. Наночастицы являются практически идеальным средством оптимизации структуры для иммобилизации ферментов, так как они обладают минимальными диффузионными ограничениями и максимальной площадью поверхности на единицу массы, что резко увеличивает возможность нагружения ферментами.
Известен способ иммобилизации алкалинфосфатазы на стабилизаторе - наночастицах оксида железа (Fe2O3) со средним размеров 40 нм в результате карбодиимидной модификации. Ферментативный препарат проявил более высокую стабильность в течение 16 недель, однако его каталитическая активность составила всего 20-40% от исходного уровня (Z.M.Saiyed, S.Sharma, R.Godawat et al. Activity and stability of alkaline phosphatase (ALP) immobilized onto magnetic nanoparticles (Fe2O3). Journal of Biotechnology, 131 (2007), pp.240-244).
Известен способ повышения активности фермента глюкозооксидазы путем его иммобилизации различными методами на стабилизаторе - наноразмерных (9÷13 нм) частицах оксида железа Fe3O4, полученных термическим соосаждением. В результате свободный фермент сохранял биокаталитическую активность в течение малого времени 20 дней (контроль), после активации наночастицами путем ацетилирования - 28 дней, а путем карбоимидирования - 33 дня (Gilles К.Konasci, Joseph Irudayaraj, Gregory McCarty Activity of glucose oxidase functionalized onto magnetic nanoparticles. Biomagnetic Research and Technology 2005, 3:1: http://www.biomagres.com/content/3/1/1).
Подобные результаты получены также для холестеролоксидазы, иммобилизованной на наноразмерных частицах Fe3O4. Свободная холестеролоксидаза через 15 дней хранения теряла свою биокаталитическую активность, а связанная с наночастицами сохраняла в эти сроки 59% активности, а через 30 дней 27% активности, что недостаточно (G.K.Konassi, J.Irudayaraj, G.McCarty. Examination of Cholesterol oxidase attachment to magnetic nanoparticles. Journal of Nanobiotechology, 2005, 3:1).
Известен способ иммобилизации липазы дрожжей путем глуторальной сшивки на стабилизаторе - магнитных наночастицах γ-Fe2O3, средний размер которых составляет 20±10 нм (Ansil Dyal, Katja Loos, Mayumi Noto et al. Activity of Candida Rugosa Lipase Immobilized on γ-Fe2O3 Magnetic Nanoparticles / Journal of the American Chemical Society. 2003, v.125 (7), pp.1684-1685).
Основной недостаток стабилизатора состоит в том, что в результате иммобилизации липаза существенно снижает свою ферментативную активность.
Известен стабилизатор липазы - магнитные наночастицы Fe3O4 со средним диаметром 12.7 нм, при использовании которых активность липазы сохраняется на постоянном уровне в течение 42 суток, в то время как в контроле активность фермента исчезает через 13 дней (Shih-Hung Huang, Min-Hung Liao, Dong-Hwang Chen. Direct Binding and Characterization of lipase onto Magnetic Nanoparticles. Biotechnol. Prog. 2003, v.19, pp.1096-1100).
Основной недостаток стабилизатора - малые сроки сохранения активности, составляющие по нашим данным примерно 20 суток.
Известен способ сохранения ферментативной активности, использующий в качестве стабилизатора наноразмерные (31 нм) полиакриламидные частицы, содержащие пероксидазу хрена и флуоресцентный краситель. Однако при этом фермент сохраняет всего 15% своей активности, что является существенным недостатком стабилизатора (Alan К. Poulsen, Anne Marie Sharff-Poulsen, Lars F. Olsen, Horseradish peroxidase embedded in Polyacrylamide nanoparticles enables detection of reactive oxygen species / Analytical Biochemistry 366 (2007) 29-36.
Известен стабилизатор-матрица из гидратированных наночастиц оксида кремния (Silica) со средним размером 31 нм, иммобилизующий внутри себя фермент пероксидазу хрена (Т.К.Jain, I.Roy, Т.К.De, A.Maitra, Nanometer Silica Particles Encapsulating Active Compounds. A Novel Ceramic Drug Carrier, J.Am. Chem. Soc, 1998, 120 (43), 11092-11095). К сожалению, данные об активности фермента приведены за очень короткое время, равное 15 минутам.
Наиболее близким техническим решением является способ иммобилизации, при котором пероксидаза хрена инкапсулирована стабилизатором - наночастицами золота (R.Kumar, A.N.Maitra, P.K.Patanjali, P.Sharma. Hollow gold nanoparticles encapsulating peroxidase. Biomaterials 26 (2005), 6743-6753). Основными недостатками стабилизатора являются малая величина биокаталитической активности (10%), которую сохраняет фермент, и высокая цена наночастиц из золота.
Целью настоящего изобретения является стабилизация ферментативной активности пероксидазы, а именно увеличение сроков сохранения повышенной биокаталитической активности при заданной намагниченности, в частности, необходимой для магнитного осаждения.
Поставленная цель достигается использованием в качестве стабилизатора ферментативной активности пероксидазы магнитоуправляемых наноразмерных частиц кубической кобальтовой феррошпинели, компоненты которой изменяются в интервале Со0,7±0,05Fe2,3±0,05O4÷Co1±0,05Fe2±0,05O4, суспендированные в натрий-фосфатном буферном растворе в концентрации 0.01-10 мг/мл.
Для получения наноразмерных частиц кобальтовой феррошпинели используют реакцию:
В качестве исходных материалов для синтеза применяют реактивы марок Ч, ХЧ и ЧДА. Все они, за исключением карбоната натрия, являются кристаллогидратами. С целью предотвращения нагрева смеси реагентов (см. р.) и агрегации наночастиц дополнительно вводят инертный компонент - хлорид натрия - в соотношениях mсм.р..:mNaCl=1:1; 1:2, 1:4 и 1:5. Полученную смесь герметизируют в закаленных стальных барабанах со стальными шарами диаметром 5 мм. Механохимический синтез проводят в планетарной мельнице МПВ (ускорение 60 g) при соотношении масс порошка и шаров mn:mm=1:20 в течение различного времени (t=5÷60 мин). Полученный продукт промывают на фильтре дистиллированной водой до полного удаления солей и высушивают при комнатной температуре, после чего обрабатывают ультразвуком и центрифугируют (УЗДН-2Т и «Bekman J2-21»).
Фазовый состав, морфологию, дисперсность и параметры структуры наноразмерных порошков определяют с помощью рентгеноструктурного анализа (РСА, установка «Schimadzu XRD-6000», CuKα-излучение) и просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ, прибор ЭМ-125), площадь удельной поверхности (S) - методом тепловой десорбции азота («СОРБИ N 4.1»), химический состав - методом рентгеновского флуоресцентного анализа (РФА, установка «Schimadzu XRF-1800»). Данные рентгеноструктурного анализа обрабатывают, используя программу полнопрофильного анализа POWDER CELL 2,5. Из значений площади удельной поверхности и плотности частиц рассчитывают их средний диаметр.
При исследовании магнитных свойств синтезированной феррошпинели кобальта используют методы анализа температурных зависимостей начальной магнитной проницаемости на частоте 10 кГц, а также кривых намагничивания и их производных, полученных в импульсных магнитных полях напряженностью до 3 Тл по методике, аналогичной описанной В.Ю.Креслиным и Е.П.Найденым (ПТЭ. 2001. №5. С.63).
Исследование конечных продуктов механохимического синтеза показывает, что порошок кобальтовой феррошпинели состоит из наноразмерных сферических частиц со средним диаметром 9.2 нм. Конечный продукт содержит 96-99 об.% феррошпинели кобальта кубической сингонии и небольшое количество аморфной фазы. Площадь удельной поверхности порошка кобальтовой феррошпинели равна 113 м2/г.
Химический состав порошка феррошпинели кобальта при соотношении массы смеси реагентов и массы инертного компонента, равном 1:2, установленный методом рентгенофлуоресцентного анализа, заметно отличается от стехиометрического, и его химическая формула может быть представлена в виде Со0,7±0,05Fe2,3±0,05O4. Увеличение содержания инертного разбавителя в два раза приводит к получению порошков практически стехиометрического состава (Co1±0,05Fe2±0,05O4). Присутствие примесей марганца (~0,14 ат.%) и хрома (0.22-0.38 ат%) вызвано в основном намолом материала мелющих тел - шаров из стали ШХ15. Магнитоуправляемость наноразмерных порошков определяется магнитными свойствами частиц кобальтовой феррошпинели, удельная намагниченность которых в зависимости от состава равна 20-22 Гс·см3/г.
Суспензию частиц нанопорошков феррита кобальта в натрий-фосфатном буфере (рН=7.0) получают методом ультразвуковой дезинтеграции (Bandelin HD2070). К суспензии наночастиц (1 мг/мл) добавляют раствор пероксидазы хрена («Merck», Германия) до конечной концентрации 1 мкМ и инкубируют в течение 24 часов на роторе (Multi RS - 60) при 25°С.
Ферментативную активность определяют по окислению орто-фенилендиамина (1,2-фенилендиамин) перекисью водорода в присутствии пероксидазы хрена (Т.М.Hamilton, A.A.Dobie-Galuska, S.M.Wietstock. The O-Phenylenediamine - Horseradish Peroxidase System: Enzyme Kinetics in the General Chemistry Laboratory // Journal of Chemical Education, vol.76, №5, May 1999; M. Диксон, Э.Уэбб. Ферменты. Пер. с англ. - М.: Мир, 1982. - Т.1. - 392 с). Реакцию проводят при 25°С в 20 мМ натрий-цитратном буфере (рН 5.0). Удельную активность фермента выражают в мкМ/мин продукта на 1 мг фермента.
Для исследования возможных модифицирующих эффектов наночастиц кобальтовой феррошпинели на каталитические свойства пероксидазы хрена измеряют удельную активность при изменении рН среды реакции в интервале от 3.0 до 9.0.
Для исследования изменения активности фермента при хранении исследуемые пробы пероксидазы хранят в термостате при 37°С в течении 255 суток.
Количественное соотношение компонентов в кобальтовой феррошпинели определяется известными условиями механохимического синтеза, изложенными выше. При понижении степени разбавления хлоридом натрия менее 1:2 образуется многофазный продукт, кроме кобальтовой феррошпинели образуется фаза β-FeOOH и другие, состав и свойства такого продукта сложно контролировать. При повышении степени разбавления хлоридом натрия более 1:4 состав кобальтовой шпинели соответствует Co1±0,05Fe2±0,05O4, но существенно снижается выход целевого продукта, что невыгодно.
Для оценки влияния наночастиц кобальтовой феррошпинели на остаточную удельную активность фермента наночастицы вводят в буферный раствор в заданной концентрации и определяют удельную ферментативную активность после хранения в течение различного времени по сравнению с контролем. Измерения удельной активности пероксидазы в присутствии ферримагнитных частиц в интервале рН реакционного буфера 3.0-9.0 показывают, что рН-оптимум реакции окисления орто-фенилендиамина пероксидазой хрена находится при значении рН=5.0 и не сдвигается в присутствии ферримагнитных частиц. Сдвиг рН реакционной среды от оптимального значения в кислую или щелочную область приводит к значительному снижению удельной активности пероксидазы хрена, как в опытной, так и контрольной группах. Поэтому в дальнейшем все измерения удельной активности пероксидазы проводят при рН=5.0.
Концентрационные границы содержания наноразмерных частиц кобальтовой феррошпинели в буферном растворе определяются следующими соображениями. При содержании наночастиц, равном 0.01 мг/мл, заметное отличие от контроля, в качестве которого выбран буферный раствор с ферментом без наночастиц, наблюдается примерно на 43 сутки (табл.1) При такой продолжительности испытания контроль практически полностью теряет свою ферментативную активность, а раствор с наночастицами сохраняет 22% ферментативной активности вплоть до 69 суток, после чего эксперимент прекращают. Такой же результат был получен при содержании наночастиц в буферном растворе, равном 10 мг/мл (табл.1). Снижение и повышение концентрации наночастиц в растворе до 0.005 мг/мл и 12 мг/мл соответственно существенно не изменяет эти результаты (табл.1), поэтому значения 0.01 и 10 мг/мл были приняты за граничные концентрации.
Поскольку концентрация наночастиц кобальтовой шпинели в буферном растворе, равная 1 мг/мл, является оптимальной и позволяет ферменту сохранить высокую активность через 69 суток, оценку максимальных сроков сохранения активности проводят при указанной концентрации, а измерения удельной ферментативной активности проводят вплоть до 255 суток.
Установлено, что остаточная удельная активность фермента при хранении в течение 105-255 суток составляет примерно 40-42% и не имеет тенденции к снижению (табл.2). При этом в контроле фермент теряет свою активность на 43 сутки (табл.2).
Использование кобальтовой феррошпинели в выбранных экспериментальным путем границах содержания основных элементов и ее концентрации в буферном растворе обеспечивает достаточно высокий уровень стабилизации ферментативной активности пероксидазы и сроки хранения, существенно превышающие таковые для свободной периксидазы и пероксидазы с наночастицами золота.
| Таблица 1 | |||||
| Влияние концентраций наночастиц Co0,7±0,05Fe2,3±0,05O4 на стабильность пероксидазы хрена при хранении при 37°С | |||||
| Концентрация Co0,7±0,05Fe2,3±0,05O4, мг/мл | Остаточная удельная активность фермента при хранении, % | ||||
| Количество суток | |||||
| 1 сутки | 12 суток | 25 сутки | 43 сутки | 69 сутки | |
| 12 | 75 | 72 | 72 | 48 | 20 |
| 10 | 80 | 75 | 76 | 51 | 22 |
| 1 | 90 | 93 | 93 | 78 | 60 |
| 0.1 | 91 | 84 | 67 | 33 | 32 |
| 0.01 | 93 | 72 | 40 | 22 | 22 |
| 0.005 | 96 | 80 | 63 | 10 | 0 |
| 0 (контроль) | 100 | 83 | 66 | 3 | 0 |
| Таблица 2 | |||||||||||||||||
| Влияние наночастиц кобальтовой феррошпинели на ферментативную активность пероксидазы хрена при хранении (Т=37°С, концентрация в буферном растворе 1 мг/мл) | |||||||||||||||||
| Сорт наночастиц | Остаточная удельная активность фермента при хранении, % | ||||||||||||||||
| Количество суток | |||||||||||||||||
| 1 | 12 | 15 | 23 | 25 | 38 | 43 | 48 | 59 | 69 | 71 | 83 | 107 | 182 | 210 | 226 | 255 | |
| Co0,7±0,05Fe2,3±0,05O4 | 90 | 93 | 94 | 94 | 93 | 80 | 78 | 73 | 69 | 60 | 56 | 51 | 42 | 43 | 42 | 42 | 40 |
| Co1±0,05Fe2±0,05O4 | 92 | 93 | 94 | 93 | 93 | 81 | 76 | 74 | 71 | 58 | 56 | 52 | 43 | 44 | 43 | 42 | 42 |
| Контроль | 100 | 90 | 79 | 71 | 22 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |||||||
Claims (1)
- Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы, представляющий собой наноразмерные частицы кобальтовой феррошпинели, компоненты которой изменяются в интервале Co0,7±0,05Fe2,3±0,05O4÷Co1±0,05Fe2±0,05O4, суспендированные в натрий-фосфатном буферном растворе в концентрации 0.01-10 мг/мл.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010105422/10A RU2445271C2 (ru) | 2010-02-15 | 2010-02-15 | Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010105422/10A RU2445271C2 (ru) | 2010-02-15 | 2010-02-15 | Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010105422A RU2010105422A (ru) | 2011-08-20 |
| RU2445271C2 true RU2445271C2 (ru) | 2012-03-20 |
Family
ID=44755527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010105422/10A RU2445271C2 (ru) | 2010-02-15 | 2010-02-15 | Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2445271C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2545393C1 (ru) * | 2013-10-29 | 2015-03-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Томский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук (ТНЦ СО РАН) | НАНОРАЗМЕРНЫЙ СОРБЕНТ ДЛЯ СОРБЦИИ ШТАММОВ АЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Micrococcus albus И Pseudomonas putida |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2005784C1 (ru) * | 1990-06-05 | 1994-01-15 | Ставропольский сельскохозяйственный институт | Способ получения иммобилизованной пероксидазы |
-
2010
- 2010-02-15 RU RU2010105422/10A patent/RU2445271C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2005784C1 (ru) * | 1990-06-05 | 1994-01-15 | Ставропольский сельскохозяйственный институт | Способ получения иммобилизованной пероксидазы |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HUANG S.-H., LIAO М.-Н., CHEN D.-H. Direct Binding and Characterization of lipase onto Magnetic Nanoparticles // Biotechnol. Prog. 2003, v.19, №3, pp.1096-1100. KUMAR R., MAITRA A.N., PATANJALI P.K, SHARMA P. Hollow gold nanoparticles encapsulating peroxidase. Biomaterials. 26 (2005), 6743-6753. * |
| KIBA N. et al. Flow-through Micro Sensor Using Immobilized Peroxidase with Chemiluminometric FIA System for Detemining Hydrogen Peroxide // Analytical Sciences, v.19, №6, 2003, pp.823-827. КОСТЫЛЕВА Е.В. и др. Механохимический синтез, свойства и применение в медицине наноразмерных ферримагнитных оксидных материалов // Физика и химия наноматериалов: сб. материалов 2-й Междунар. шк.-конф. молодых ученых, Томск, Россия, 12-16 окт. 2009 г. - Томск: ТМЛ-Пресс, 2009. - С.359-363. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2545393C1 (ru) * | 2013-10-29 | 2015-03-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Томский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук (ТНЦ СО РАН) | НАНОРАЗМЕРНЫЙ СОРБЕНТ ДЛЯ СОРБЦИИ ШТАММОВ АЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Micrococcus albus И Pseudomonas putida |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2010105422A (ru) | 2011-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wen et al. | Bimetal based inorganic-carbonic anhydrase hybrid hydrogel membrane for CO2 capture | |
| Li et al. | Self-assembly of activated lipase hybrid nanoflowers with superior activity and enhanced stability | |
| Almulaiky et al. | Hydroxyapatite-decorated ZrO2 for α-amylase immobilization: Toward the enhancement of enzyme stability and reusability | |
| Poorakbar et al. | Synthesis of magnetic gold mesoporous silica nanoparticles core shell for cellulase enzyme immobilization: improvement of enzymatic activity and thermal stability | |
| Netto et al. | Superparamagnetic nanoparticles as versatile carriers and supporting materials for enzymes | |
| Kumar et al. | Immobilization of xylanase using a protein-inorganic hybrid system | |
| EP0158909A2 (en) | Immobilized enzymes, processes for preparing same and use thereof | |
| Uygun et al. | Novel magnetic nanoparticles for the hydrolysis of starch with Bacillus licheniformis α‐amylase | |
| Golikova et al. | A study of biocatalysts based on glucose oxidase | |
| Shang et al. | Immobilization of Candida rugosa lipase on ZnO nanowires/macroporous silica composites for biocatalytic synthesis of phytosterol esters | |
| Wang et al. | Improving the stability and reusability of dextranase by immobilization on polyethylenimine modified magnetic particles | |
| Nawaz et al. | Use of nanomaterials for the immobilization of industrially important enzymes | |
| Miao et al. | Effects of pore size and crosslinking methods on the immobilization of myoglobin in SBA-15 | |
| Putra et al. | Nanocellulose and natural deep eutectic solvent as potential biocatalyst system toward enzyme immobilization | |
| Ma et al. | Fabrication of immobilized bromelain using cobalt phosphate material prepared in deep eutectic solvent as carrier | |
| Ashikin et al. | Optimization and characterization of immobilized E. coli for engineered thermostable xylanase excretion and cell viability | |
| Karaca Açarı et al. | Immobilization of α-amylase onto quantum dots prepared from Hypericum perforatum L. flowers and Hypericum capitatum seeds: its physicochemical and biochemical characterization | |
| Kawachi et al. | Enzyme encapsulation in silica gel prepared by polylysine and its catalytic activity | |
| RU2445271C2 (ru) | Стабилизатор ферментативной активности пероксидазы | |
| Yang et al. | Spatial distribution and proximity effect-dependent multi-enzyme cascades catalysis operating in dendritic mesoporous silica nanoparticles | |
| Sun et al. | Preparation of 3D porous cellulose‐chitosan hybrid gel macrospheres by alkaline urea system for enzyme immobilization | |
| Mahmoud | Immobilization of invertase by a new economical method using wood sawdust waste | |
| Gianfreda et al. | Stabilizing enzymes as synthetic complexes | |
| KR101717818B1 (ko) | 산화철 요크 쉘 나노구조체를 이용한 효소 고정화 | |
| Zhao et al. | Programmable and printable formaldehyde dehydrogenase as an excellent catalyst for biodegradation of formaldehyde |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170216 |