RU2431829C1 - Method for determination of chloramphenicol content in food products and sorbent for its implementation - Google Patents
Method for determination of chloramphenicol content in food products and sorbent for its implementation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2431829C1 RU2431829C1 RU2010125162/15A RU2010125162A RU2431829C1 RU 2431829 C1 RU2431829 C1 RU 2431829C1 RU 2010125162/15 A RU2010125162/15 A RU 2010125162/15A RU 2010125162 A RU2010125162 A RU 2010125162A RU 2431829 C1 RU2431829 C1 RU 2431829C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chloramphenicol
- sorbent
- vermiculite
- solution
- antibiotic
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения антибиотика левомицетина в пищевых продуктах методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.The invention relates to analytical chemistry, and in particular to methods for determining the antibiotic chloramphenicol in food products by the method of reverse phase high performance liquid chromatography.
Антибиотики, в частности левомицетин (хлорамфеникол), используют в качестве эффективных противоинфекционных средств в ветеринарии и при профилактике заболеваний домашней птицы и скота. При этом антибиотик способен переходить в мясо, молоко животных, яйца птиц и другие пищевые продукты. Так как в последние годы в мире наблюдается устойчивая тенденция ужесточения требований к качеству пищевых продуктов, необходима разработка и введение в практику новых, более эффективных и чувствительных методов анализа.Antibiotics, in particular chloramphenicol (chloramphenicol), are used as effective anti-infective agents in veterinary medicine and in the prevention of diseases of poultry and livestock. In this case, the antibiotic is able to pass into meat, animal milk, bird eggs and other food products. Since in recent years there has been a steady tendency in the world to tighten food quality requirements, it is necessary to develop and put into practice new, more effective and sensitive analysis methods.
Существуют различные методы определения левомицетина в пищевых продуктах (иммуноферментный анализ, химические методы (качественные реакции на данный антибиотик с различными специально подобранными реагентами), физико-химические методы (вольтамперометрия, полярография, спектрофотометрия), тонкослойная хроматография, газовая хроматография). При использовании данных методов анализа часто сталкиваются с определенными трудностями, например необходимостью использования специфических, редких и достаточно дорогостоящих реактивов; невозможностью определения сразу нескольких препаратов при совместном присутствии и неудовлетворительным нижним пределом обнаружения антибиотика; необходимостью использования предколонки (для газовой хроматографии).There are various methods for determining chloramphenicol in foods (enzyme-linked immunosorbent assay, chemical methods (qualitative reactions to this antibiotic with various specially selected reagents), physico-chemical methods (voltammetry, polarography, spectrophotometry), thin-layer chromatography, gas chromatography). When using these methods of analysis, they often encounter certain difficulties, for example, the need to use specific, rare and quite expensive reagents; the impossibility of determining several drugs at once with the joint presence and unsatisfactory lower detection limit of the antibiotic; the need to use a pre-column (for gas chromatography).
Одним из наиболее перспективных методов определения антибиотика левомицетина является метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ), который дает возможность извлекать, разделять, идентифицировать и количественно определять лекарственные препараты в биологических жидкостях.One of the most promising methods for determining the antibiotic levomycetin is the method of reverse phase high performance liquid chromatography (RP HPLC), which makes it possible to extract, separate, identify and quantify drugs in biological fluids.
Известен способ количественного определения левомицетина в пищевых продуктах измерением массовой доли антибиотика методом ОФ ВЭЖХ с фотометрическим детектированием с использованием жидкостного хроматографа «Люмахром» [1]. Способ состоит в экстракции левомицетина из образца дистиллированной водой, дальнейшей очистке экстракта при помощи концентрирующего патрона ДИАПАК-C16 и в определении левомицетина методом ОФ ВЭЖХ с использованием фотометрического детектора (254 нм). Патроны ДИАПАК-С16 представляют собой корпусы из химически устойчивого полимера, заполненные высококачественными химически модифицированными сорбентами на основе силикагеля с привитыми гексадецильными группами. Способ имеет ряд недостатков: левомицетин из проб экстрагируется водой, что затрудняет дальнейший анализ, т.к. экстракты получаются достаточно загрязненными посторонними, мешающими определению антибиотика веществами; способ предполагает использование летучих и токсичных растворителей - хлороформа и гексана; определение левомицетина методом ОФ ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором проводят при длине волны 254 нм. Однако в этой области спектра интенсивное поглощение характерно для практически всех веществ, содержащих ароматический цикл; следовательно, известный метод определения левомицетина не гарантирует точных результатов.A known method for the quantitative determination of chloramphenicol in food products by measuring the mass fraction of the antibiotic by RP HPLC with photometric detection using a Lumahrom liquid chromatograph [1]. The method consists in extracting chloramphenicol from a sample with distilled water, further purifying the extract with a DIAPAC-C 16 concentrating cartridge and determining chloramphenicol by RP-HPLC using a photometric detector (254 nm). Diapak-S 16 cartridges are chemically stable polymer cases filled with high-quality chemically modified sorbents based on silica gel with grafted hexadecyl groups. The method has several disadvantages: chloramphenicol is extracted from the samples with water, which complicates further analysis, because extracts are obtained with sufficiently contaminated extraneous substances that interfere with the determination of the antibiotic; the method involves the use of volatile and toxic solvents - chloroform and hexane; determination of chloramphenicol by RP-HPLC with an ultraviolet detector is carried out at a wavelength of 254 nm. However, in this spectral region, intense absorption is characteristic of almost all substances containing an aromatic cycle; therefore, the known method for determining chloramphenicol does not guarantee accurate results.
Исследована возможность патронов ДИАПАК-C16 для концентрирования антибиотиков цефазолина и левомицетина из разбавленных растворов с последующим их определением методом ОФ-ВЭЖХ [2]. Сорбцию препаратов проводят в статическом и динамическом режимах, антибиотики десорбируют ацетонитрилом, полученные растворы анализируют методом ОФ ВЭЖХ с использованием подвижной фазы (ацетонитрил-вода, 50:50 об./об.); колонки Zorbax ODS C18 (15×0,46 см), рабочие длины волн - 210 и 254 нм. Однако данная методика позволяет осуществлять выделение и анализ антибиотиков из разбавленных водных растворов фармацевтических препаратов и не адаптирована для анализа пищевых продуктов с высоким содержанием жира.The possibility of DIAPAC-C 16 cartridges for the concentration of cefazolin and chloramphenicol antibiotics from dilute solutions with their subsequent determination by RP-HPLC was studied [2]. Sorption of the drugs is carried out in static and dynamic modes, antibiotics are desorbed with acetonitrile, the resulting solutions are analyzed by RP HPLC using the mobile phase (acetonitrile-water, 50:50 v / v); Zorbax ODS C 18 columns (15 × 0.46 cm), working wavelengths - 210 and 254 nm. However, this technique allows the isolation and analysis of antibiotics from dilute aqueous solutions of pharmaceuticals and is not adapted for the analysis of foods with a high fat content.
Известен способ определения левомицетина в мясе краба и в креветках с помощью ВЭЖХ с масс-детектированием [3]. Антибиотик экстрагируют этилацетатом, в качестве подвижной фазы используют метанол. Недостатками данного способа являются: применение высокотоксичного метанола в качестве подвижной фазы; использование дорогостоящего и сложного в освоении жидкостного хроматографа с масс-детектором, что затрудняет широкое применение известного способа анализа.A known method for the determination of chloramphenicol in crab meat and shrimp using HPLC with mass detection [3]. The antibiotic is extracted with ethyl acetate, methanol is used as the mobile phase. The disadvantages of this method are: the use of highly toxic methanol as a mobile phase; the use of an expensive and difficult to master liquid chromatograph with a mass detector, which complicates the widespread use of the known method of analysis.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к способу определения левомицетина в пищевых продуктах является способ извлечения антибиотиков из пищевой продукции органическими растворителями - метанолом и ацетонитрилом с последующей очисткой экстракта растворами Карреза (водный раствор Zn(СН3СОО)2 и K4[Fe(CN)6]×3H2O), после чего экстракт обрабатывают диэтиловым эфиром для удаления липидов и анализируют методом ОФ ВЭЖХ с использованием подвижной фазы (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.) (колонка Zorbax ODS C18 (15×0,46 см), с УФ-детектированием при 220, 254 и 273 нм) [4]. Количество антибиотика в пробе определяют с помощью градуировочного графика. Предел обнаружения антибиотика левомицетина в способе-прототипе составляет 0,9±0,2 нг в одной порции раствора, вводимой в хроматограф для анализа. Недостатками данного способа являются необходимость применения высокотоксичного реагента - метанола, а также недостаточная точность определения левомицетина вследствие частичного осаждения антибиотика на хлопьевидном осадке гексацианоферрата цинка.The closest in technical essence and the achieved result to the method for determining chloramphenicol in food products is the method of extracting antibiotics from food products with organic solvents - methanol and acetonitrile, followed by purification of the extract with Carreza solutions (aqueous solution of Zn (CH 3 COO) 2 and K 4 [Fe ( CN) 6 ] × 3H 2 O), after which the extract is treated with diethyl ether to remove lipids and analyzed by RP-HPLC using the mobile phase (acetonitrile: water, 70:30 v / v) (Zorbax ODS C 18 column (15 × 0.46 cm), with UV detection tion at 220, 254 and 273 nm) [4]. The amount of antibiotic in the sample is determined using a calibration graph. The detection limit of the antibiotic chloramphenicol in the prototype method is 0.9 ± 0.2 ng in one portion of the solution introduced into the chromatograph for analysis. The disadvantages of this method are the need to use a highly toxic reagent - methanol, as well as the lack of accuracy in determining chloramphenicol due to partial deposition of the antibiotic on a flocculent precipitate of zinc hexacyanoferrate.
Задачей заявляемого изобретения является разработка воспроизводимого, прецизионного способа выделения и концентрирования левомицетина из пищевых продуктов, а также его количественного определения.The task of the invention is to develop a reproducible, precision method for the isolation and concentration of chloramphenicol from food products, as well as its quantitative determination.
Поставленная задача достигается тем, что левомицетин экстрагируют из пробы ацетонитрилом, отделяют на центрифуге раствор, в котором находится антибиотик, к центрифугату добавляют сорбент - вермикулит (массовое соотношение которого 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе) и встряхивают в течение 30 минут, затем раствор отделяют и пропускают через смесь сорбентов - активированного угля и вермикулита, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, и промывают дистиллированной водой, элюируют левомицетин этанолом, элюат упаривают досуха на водяной бане и охлаждают до комнатной температуры, затем остаток растворяют в подвижной фазе (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.), раствор левомицетина переносят дозатором в сухие виалы и количественно определяют левомицетин методом ОФ ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм; содержание антибиотика рассчитывают при помощи градуировочного графика.The task is achieved by the fact that chloramphenicol is extracted from the sample with acetonitrile, the solution containing the antibiotic is separated in a centrifuge, sorbent - vermiculite is added to the centrifuge (mass ratio of which is 0.1 g of sorbent per 1 g of fat in the sample) and shaken for 30 minutes , then the solution is separated and passed through a mixture of sorbents - activated carbon and vermiculite, taken in a mass ratio of 1: 1, and washed with distilled water, eluted with chloramphenicol ethanol, the eluate is evaporated to dryness in a water bath and about cooled to room temperature, then the residue was dissolved in the mobile phase (acetonitrile: water, 70:30 vol./about.), the chloramphenicol solution was transferred to dry vials with a dispenser and quantitatively determined chloramphenicol by RP-HPLC with UV detection at a wavelength of 278 nm; the antibiotic content is calculated using a calibration graph.
Поставленная задача наилучшим образом решается новыми, ранее не известными из уровня техники условиями пробоподготовки образца, а именно:The problem is best solved by new conditions of sample preparation, not previously known from the prior art, namely:
- последовательным применением сорбентов:- consistent use of sorbents:
- вначале - вермикулита, массовое соотношение которого 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе;- first - vermiculite, the mass ratio of which is 0.1 g of sorbent per 1 g of fat in the sample;
- затем - смеси активированного угля и вермикулита при их массовом соотношении, равном 1:1;- then - a mixture of activated carbon and vermiculite with their mass ratio equal to 1: 1;
- последующей переэкстракцией антибиотика этанолом.- subsequent re-extraction of the antibiotic with ethanol.
В заявляемом способе используют вермикулит (природный цеолит) Кокшаровского месторождения Приморского края.In the inventive method, vermiculite (natural zeolite) of the Koksharovskoye deposit of the Primorsky Territory is used.
Указанные существенные отличительные признаки заявляемого изобретения обеспечивают концентрирование антибиотика, очистку экстракта от мешающих анализу компонентов, что особенно актуально при анализе пищевых продуктов с высоким (>30%) содержанием жира, и позволяют определить левомицетин известным ОФ ВЭЖХ-методом с достаточной степенью точности.These significant distinguishing features of the claimed invention provide the concentration of the antibiotic, purification of the extract from the components that interfere with the analysis, which is especially important when analyzing foods with a high (> 30%) fat content and make it possible to determine levomycetin by the known RP HPLC method with a sufficient degree of accuracy.
Техническим результатом предлагаемого способа определения содержания левомицетина в пищевых продуктах является повышение точности количественного определения антибиотика в пищевых продуктах с различным содержанием жира, а также снижение токсичности проведения аналитических исследований.The technical result of the proposed method for determining the content of chloramphenicol in foods is to increase the accuracy of quantitative determination of the antibiotic in foods with different fat contents, as well as reducing the toxicity of analytical studies.
Способ определения содержания левомицетина в пищевых продуктах осуществляют следующим образом. Левомицетин экстрагируют из пробы ацетонитрилом и отделяют раствор, в котором находится антибиотик с примесями, от осадка (свернувшийся белок). В полученный раствор антибиотика в ацетонитриле добавляют вермикулит, массовое соотношение которого 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе, встряхивают колбу со смесью в течение 30 минут на встряхивателе и отделяют раствор от сорбента. Отфильтрованный раствор пропускают через смесь сорбентов (активированный уголь и вермикулит, взятых при массовом соотношении, равном 1:1), промывают дистиллированной водой и элюируют антибиотик этанолом. Элюат в круглодонных колбах упаривают досуха на водяной бане, охлаждают до комнатной температуры и растворяют в подвижной фазе (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.). Раствор левомицетина переносят дозатором в сухие виалы и количественно определяют антибиотик методом ОФ ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм; содержание антибиотика рассчитывают при помощи градуировочного графика.The method for determining the content of chloramphenicol in food products is as follows. Chloramphenicol is extracted from the sample with acetonitrile and the solution containing the antibiotic with impurities is separated from the precipitate (coagulated protein). Vermiculite is added to the obtained antibiotic solution in acetonitrile, the mass ratio of which is 0.1 g of sorbent per 1 g of fat in the sample, the flask with the mixture is shaken for 30 minutes on a shaker and the solution is separated from the sorbent. The filtered solution is passed through a mixture of sorbents (activated carbon and vermiculite taken at a mass ratio of 1: 1), washed with distilled water and the antibiotic is eluted with ethanol. The eluate in round-bottom flasks was evaporated to dryness in a water bath, cooled to room temperature and dissolved in the mobile phase (acetonitrile: water, 70:30 v / v). The solution of chloramphenicol is transferred by the dispenser to dry vials and the antibiotic is quantified by RP-HPLC with UV detection at a wavelength of 278 nm; the antibiotic content is calculated using a calibration graph.
Экспериментально установлена необходимость последовательного применения сорбентов: вначале - вермикулита для дополнительной очистки экстракта от примесей. Необходимость использования вермикулита при его массовом соотношении, равном 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе, подтверждена экспериментальным путем и обусловлена тем, что при статической сорбции из раствора на вермикулите происходит сорбция примесей (липиды, белки и др.), которые присутствуют в экстракте. Таким образом, достигается предварительная очистка экстракта от балластных веществ.The need for consistent use of sorbents has been experimentally established: first, vermiculite for additional purification of the extract from impurities. The need to use vermiculite with its mass ratio equal to 0.1 g of sorbent per 1 g of fat in the sample has been experimentally confirmed and is due to the fact that during sorption from the solution on the vermiculite sorption of impurities (lipids, proteins, etc.) occurs in the extract. Thus, a preliminary purification of the extract from ballast substances is achieved.
Для сорбции левомицетина из раствора после отделения вермикулита используется бинарный сорбент (активированный уголь и вермикулит при их массовом соотношении, равном 1:1), применение которого позволяет не только проводить доочистку экстракта от соэкстрагированных примесей, но и концентрировать левомицетин в количествах, необходимых для хроматографического анализа. Активированный уголь сорбирует примеси из раствора левомицетина в этаноле, обеспечивает получение прозрачного и пригодного для ОФ ВЭЖХ-анализа раствора левомицетина. Для того чтобы минимизировать возможность сорбции антибиотика на угле, необходимое количество активированного угля предварительно рассчитывают по формуле (1), если содержание жира в продукте ≥3,9%; и по формуле (2), если содержание жира в продукте меньше чем 3,9%:For sorption of chloramphenicol from the solution after separation of vermiculite, a binary sorbent is used (activated carbon and vermiculite at a mass ratio of 1: 1), the use of which allows not only to purify the extract from coextracted impurities, but also to concentrate chloramphenicol in the amounts necessary for chromatographic analysis . Activated carbon adsorbs impurities from a solution of chloramphenicol in ethanol, provides a transparent and suitable for RP HPLC analysis of a solution of chloramphenicol. In order to minimize the possibility of sorption of the antibiotic on coal, the required amount of activated carbon is preliminarily calculated according to formula (1) if the fat content in the product is ≥3.9%; and according to the formula (2), if the fat content in the product is less than 3.9%:
где mS - масса сорбента;where m S is the mass of the sorbent;
Δm=mR-mP,, Δm = m R -m P ,,
гдеWhere
mP - навеска продукта;m P is the sample of the product;
mR - масса остатка после экстракции ацетонитрилом;m R is the mass of the residue after extraction with acetonitrile;
f - содержание жира в исследуемом продукте.f is the fat content in the test product.
где mS2 - масса сорбента, необходимая для анализа пищевого продукта, с содержанием жира менее 3,9%,where m S2 is the mass of the sorbent necessary for the analysis of a food product with a fat content of less than 3.9%,
f - содержание жира в исследуемом продукте.f is the fat content in the test product.
После расчета навески активированного угля, необходимой для анализа продукта на левомицетин, готовят смесь сорбентов при их массовом соотношении, равном 1:1; такое соотношение сорбентов является оптимальным и установлено экспериментально.After calculating the weight of activated carbon necessary for the analysis of the product for chloramphenicol, a mixture of sorbents is prepared at a mass ratio of 1: 1; this ratio of sorbents is optimal and experimentally established.
Изменение соотношения активированный уголь:вермикулит приводит либо к уменьшению степени извлечения антибиотика, либо к получению мутных растворов, непригодных для анализа методом ОФ ВЭЖХ.A change in the ratio of activated carbon: vermiculite leads either to a decrease in the degree of extraction of the antibiotic, or to the formation of turbid solutions unsuitable for analysis by RP HPLC.
Элюирование левомицетина осуществляется этанолом, поскольку этот растворитель обладает достаточной полярностью для наиболее полного элюирования левомицетина с сорбента. Менее полярные растворители извлекают с сорбента и неполярные примеси, что приводит к уменьшению точности анализа антибиотика заявляемым способом. Не маловажным при выборе растворителя на стадии элюирования левомицетина является меньшая токсичность этанола по сравнению с метанолом, используемым в способе-прототипе.Elution of chloramphenicol is carried out with ethanol, since this solvent has sufficient polarity for the most complete elution of chloramphenicol from the sorbent. Less polar solvents are removed from the sorbent and non-polar impurities, which leads to a decrease in the accuracy of the analysis of the antibiotic of the claimed method. Not unimportant when choosing a solvent at the stage of elution of chloramphenicol is lower toxicity of ethanol compared to methanol used in the prototype method.
Заявляемый способ впервые позволяет анализировать пищевые продукты с различным содержанием жира - от 1,0% до 60% с достаточно высокой степенью извлечения антибиотика, а именно (98,5-90)%, что подтверждается данными таблицы.The inventive method for the first time allows you to analyze foods with different fat contents - from 1.0% to 60% with a sufficiently high degree of antibiotic extraction, namely (98.5-90)%, which is confirmed by the table.
Правильность предлагаемого способа определения содержания левомицетина в пищевых продуктах подтверждена методом «введено-найдено» и экспериментальными данными (примеры 1-3); хроматограммы представлены на фигурах 1-4.The correctness of the proposed method for determining the content of chloramphenicol in food products is confirmed by the method of "entered-found" and experimental data (examples 1-3); chromatograms are shown in figures 1-4.
На фиг.1 представлена хроматограмма стандартного раствора левомицетина с концентрацией антибиотика 0,01 мг/мл, приготовленного из фармацевтического препарата «Хлорамфеникола натрия сукцинат», приобретенного в аптечной сети. Пик вещества со временем удерживания 2,492 мин принят за пик левомицетина.Figure 1 presents the chromatogram of a standard solution of chloramphenicol with an antibiotic concentration of 0.01 mg / ml, prepared from the pharmaceutical preparation "Chloramphenicol sodium succinate", purchased in the pharmacy network. The peak of the substance with a retention time of 2.492 min was taken as the peak of chloramphenicol.
На фиг.2 представлена хроматограмма раствора левомицетина с концентрацией 0,01 мг/мл, внесенного в пищевой продукт (растительный маргарин, жирностью 40%) и выделенного из него по заявляемому способу. Пик вещества со временем удерживания 2,429 мин принят за пик левомицетина.Figure 2 presents the chromatogram of a solution of chloramphenicol with a concentration of 0.01 mg / ml, introduced into a food product (vegetable margarine, 40% fat) and isolated from it by the present method. The peak of the substance with a retention time of 2.429 min was taken as the peak of chloramphenicol.
На фиг.3 представлена хроматограмма раствора левомицетина, выделенного по заявляемому способу из пищевого продукта «яйцо куриное». Пик вещества со временем удерживания 2,418 мин принят за пик левомицетина.Figure 3 presents the chromatogram of a solution of chloramphenicol isolated by the present method from the food product "chicken egg". The peak of the substance with a retention time of 2.418 min was taken as the peak of chloramphenicol.
На фиг.4 представлена хроматограмма раствора левомицетина с концентрацией 0,01 мг/мл, внесенного в пищевой продукт (растительный маргарин, жирностью 60%) и выделенного из него по заявляемому способу. Пик вещества со временем удерживания 2,437 мин принят за пик левомицетина.Figure 4 presents the chromatogram of a solution of chloramphenicol with a concentration of 0.01 mg / ml, introduced into a food product (vegetable margarine, fat content of 60%) and isolated from it by the present method. The peak of the substance with a retention time of 2.437 min was taken as the peak of chloramphenicol.
Возможность осуществления заявляемого способа иллюстрируется примерами.The possibility of implementing the proposed method is illustrated by examples.
Пример 1. Определение левомицетина (хлорамфеникола) в яйцах куриныхExample 1. Determination of chloramphenicol (chloramphenicol) in chicken eggs
В коническую колбу вместимостью 100,0 мл вносят 50 г куриных яиц, предварительно тщательно гомогенизированных в стеклянной посуде, приливают 100 мл ацетонитрила (хч) и ставят на встряхиватель на 2 часа. Полученный экстракт фильтруют через стекловату, помещенную в стеклянную воронку и промытую 5 мл ацетонитрила. В полученный раствор добавляют 1 г вермикулита. Колбу с экстрактом и сорбентом помещают на встряхиватель на 30 минут, фильтруют раствор и пропускают через бинарный сорбент - смесь 3,85 г активированного угля и 3,85 г вермикулита, после чего сорбенты промывают 10 мл дистиллированной воды. Затем левомицетин элюируют 10 мл этанола и упаривают раствор на водяной бане в круглодонной колбе досуха. Колбу охлаждают на воздухе до комнатной температуры и ополаскивают 1 мл подвижной фазы (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.). Раствор антибиотика в подвижной фазе собирают дозатором на 1000 мкл и переносят в сухую чистую виалу. Количество антибиотика находят методом ОФ ВЭЖХ (жидкостный хроматограф Shimadzu LC-6A с УФ-детектором, колонка Zorbax ODS C18 (15×0,46 см), подвижная фаза (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.) при рабочей длине волны 278 нм. Содержание левомицетина (мг/кг), рассчитанное по методу градуировочного графика составило: 0,0140±0,0011 мг/кг; степень извлечения - 98,9% (фиг.3).In a conical flask with a capacity of 100.0 ml, 50 g of chicken eggs, previously thoroughly homogenized in a glass dish, are added, 100 ml of acetonitrile (hc) are added and put on a shaker for 2 hours. The resulting extract was filtered through glass wool, placed in a glass funnel and washed with 5 ml of acetonitrile. To the resulting solution add 1 g of vermiculite. The flask with the extract and the sorbent is placed on the shaker for 30 minutes, the solution is filtered and passed through a binary sorbent - a mixture of 3.85 g of activated carbon and 3.85 g of vermiculite, after which the sorbents are washed with 10 ml of distilled water. Then, chloramphenicol was eluted with 10 ml of ethanol and the solution was evaporated in a water bath in a round bottom flask to dryness. The flask was cooled in air to room temperature and rinsed with 1 ml of the mobile phase (acetonitrile: water, 70:30 v / v). A solution of the antibiotic in the mobile phase is collected with a 1000 μl dispenser and transferred to a dry, clean vial. The amount of antibiotic is determined by RP-HPLC (Shimadzu LC-6A liquid chromatograph with UV detector, Zorbax ODS C 18 column (15 × 0.46 cm), mobile phase (acetonitrile: water, 70:30 v / v) at operating wavelength of 278 nm, the content of chloramphenicol (mg / kg), calculated by the method of the calibration graph was: 0.0140 ± 0.0011 mg / kg; the degree of extraction of 98.9% (figure 3).
Пример 2. Определение левомицетина в маргарине с жирностью 40,0%Example 2. Determination of chloramphenicol in margarine with a fat content of 40.0%
Определение антибиотика проводили по примеру 1, но перед экстракцией 50 г маргарина растопили в колбе при температуре 55°С (достаточная температура, чтобы растопить жир, содержащийся в маргарине, и не разрушить антибиотик), добавили 1 мл раствора левомицетина с концентрацией 0,1 мг/мл. Затем, не охлаждая образец, прибавили 100 мл ацетонитрила и проводили экстракцию левомицетина на встряхивателе в течение 3 часов при температуре 50°С. В полученный раствор добавили 1 г вермикулита. Колбу с экстрактом и сорбентом помещали на встряхиватель на 30 минут, отфильтровывали раствор и пропускали через бинарный сорбент - смесь 27,0 г активированного угля и 27,0 г вермикулита. Далее - по примеру 1. Содержание левомицетина составило 0,09105 мг/кг; степень извлечения - 91% (фиг.2).The antibiotic was determined as in Example 1, but before extraction, 50 g of margarine was melted in a flask at 55 ° C (sufficient temperature to melt the fat contained in margarine and not destroy the antibiotic), 1 ml of 0.1 mg chloramphenicol solution was added / ml Then, without cooling the sample, 100 ml of acetonitrile was added and the chloramphenicol was extracted on a shaker for 3 hours at a temperature of 50 ° C. To the resulting solution was added 1 g of vermiculite. The flask with the extract and sorbent was placed on a shaker for 30 minutes, the solution was filtered and passed through a binary sorbent - a mixture of 27.0 g of activated carbon and 27.0 g of vermiculite. Further, according to example 1. The content of chloramphenicol was 0.09105 mg / kg; the degree of extraction is 91% (figure 2).
Пример 3. Определение содержания левомицетина в маргарине жирностью 60,0% Количество внесенного антибиотика такое же, как в примере 2. Время экстракции ацетонитрилом - 4 часа. Бинарный сорбент - 40,5 г активированного угля и 45,5 г вермикулита. Содержание левомицетина составило 0,0891 мг/кг; степень извлечения - 89% (фиг.4).Example 3. Determination of the content of chloramphenicol in margarine with a fat content of 60.0%. The amount of antibiotic added is the same as in Example 2. The extraction time with acetonitrile is 4 hours. Binary sorbent - 40.5 g of activated carbon and 45.5 g of vermiculite. The content of chloramphenicol was 0.0891 mg / kg; the degree of extraction is 89% (figure 4).
Экспериментально установлено, что в зависимости от содержания жира в продукте время экстракции необходимо изменять. Для продуктов с содержанием жира от 1 до 10% оно составляет 2 часа, для продуктов с содержанием жира от 10 до 40% - 3 часа, выше 40% - 4 часа. Увеличение времени экстракции более 4 часов не приводит к увеличению степени извлечения антибиотика; при времени экстракции менее 2 часов экстракция левомицетина не является полной.It was experimentally established that, depending on the fat content in the product, the extraction time must be changed. For products with a fat content of 1 to 10%, it is 2 hours, for products with a fat content of 10 to 40% - 3 hours, above 40% - 4 hours. An increase in extraction time of more than 4 hours does not increase the degree of extraction of the antibiotic; at an extraction time of less than 2 hours, the extraction of chloramphenicol is not complete.
Заявляемый способ выделения, концентрирования и идентификации антибиотика левомицетина (хлорамфеникола) прост, не трудоемок, не требует большого количества реактивов и может быть применен в любой химической лаборатории, где имеется жидкостный хроматограф с УФ-детектором. Погрешность измерения составляет 3-4% для концентрации до 0,01 мг/кг и 10% для больших концентраций.The inventive method for isolation, concentration and identification of the antibiotic chloramphenicol (chloramphenicol) is simple, not laborious, does not require a large number of reagents, and can be used in any chemical laboratory where there is a liquid chromatograph with a UV detector. The measurement error is 3-4% for concentrations up to 0.01 mg / kg and 10% for large concentrations.
Список литературыBibliography
1. № М 01-28-2002. «Методика выполнения измерений массовой доли левомицетина (хлорамфеникола) в продуктах животного происхождения методом ОФ ВЭЖХ с фотометрическим детектированием с использованием жидкостного хроматографа «Люмахром»». - г.Санкт-Петербург: ООО «Люмэкс», 2008.1. No. M 01-28-2002. "The methodology for measuring the mass fraction of chloramphenicol (chloramphenicol) in animal products by RP HPLC with photometric detection using a Lumahrom liquid chromatograph." - St. Petersburg: Lumex LLC, 2008.
2. Концентрирование антибиотиков цефазолина, цефотаксима и левомицетина на модифицированных кремнеземах. / Л.И.Соколова, И.В.Чучалина. // Журнал аналитической химии. - 2006. - Т.61, №12, с.1238-1242.2. Concentration of antibiotics cefazolin, cefotaxime and chloramphenicol on modified silicas. / L.I. Sokolova, I.V. Chuchalina. // Journal of analytical chemistry. - 2006. - T.61, No. 12, p.1238-1242.
3. Rupp. H.S. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry analysis of chloramphenicol in cooked crabmeat / H.S.Rupp, J.S.Stuart, J.A.Hurlbut // Journal of AOAC International. - 2005. - Vol.88, N 4. - PP.1155-1159.3. Rupp. H.S. Liquid chromatography / tandem mass spectrometry analysis of chloramphenicol in cooked crabmeat / H.S. Rupp, J.S. Stuart, J.A. Hurlbut // Journal of AOAC International. - 2005. - Vol.88, N 4. - PP.1155-1159.
4. Определение бензилпенициллина, левомицетина и тетрациклина в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. / Л.И.Соколова, А.П.Черняев. // Журнал аналитической химии. - 2001. - Т.56, №11, с.1177-1180.4. Determination of benzylpenicillin, chloramphenicol and tetracycline in foods by high performance liquid chromatography. / L.I. Sokolova, A.P. Chernyaev. // Journal of analytical chemistry. - 2001. - T.56, No. 11, pp. 1177-1180.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010125162/15A RU2431829C1 (en) | 2010-06-18 | 2010-06-18 | Method for determination of chloramphenicol content in food products and sorbent for its implementation |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010125162/15A RU2431829C1 (en) | 2010-06-18 | 2010-06-18 | Method for determination of chloramphenicol content in food products and sorbent for its implementation |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2431829C1 true RU2431829C1 (en) | 2011-10-20 |
Family
ID=44999263
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010125162/15A RU2431829C1 (en) | 2010-06-18 | 2010-06-18 | Method for determination of chloramphenicol content in food products and sorbent for its implementation |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2431829C1 (en) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102901778A (en) * | 2011-07-29 | 2013-01-30 | 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 | Pretreatment method for detecting chloramphenicol in milk or mild products and method for detecting chloramphenicol in milk or mild products |
CN103389350A (en) * | 2013-08-09 | 2013-11-13 | 中国检验检疫科学研究院 | Method for measuring chloramphenicol antibiotics in cosmetics |
CN104198625A (en) * | 2014-08-16 | 2014-12-10 | 中山鼎晟生物科技有限公司 | Rapid detection method of tetracycline antibiotics in cosmetics |
CN104515834A (en) * | 2014-09-20 | 2015-04-15 | 中山鼎晟生物科技有限公司 | Detection kit for chloramphenicol in cosmetics and detection method thereof |
CN104880522A (en) * | 2015-04-28 | 2015-09-02 | 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 | Method for determining residual quantity of chloramphenicol in bee wax by n-hexane pre-treatment-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry |
RU2566422C2 (en) * | 2013-10-31 | 2015-10-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный университет" (ОГУ) | Method of sorption-chromatographic determination of tetracycline in milk and dairy products |
CN106442747A (en) * | 2016-06-20 | 2017-02-22 | 浙江公正检验中心有限公司 | Method for simultaneously determining for residue amounts of chlorfenuron, 2,4-D and paclobutrazol in fruits and vegetables with gas chromatography-mass spectrometry |
CN106526012A (en) * | 2016-11-03 | 2017-03-22 | 百奥森(江苏)食品安全科技有限公司 | Detection method for chloramphenicol in fodder |
-
2010
- 2010-06-18 RU RU2010125162/15A patent/RU2431829C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
СОКОЛОВА Л.И., ЧЕРНЯЕВ А.П. Журнал аналитической химии. 2001, т.56, №11, с.1177-1180. * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102901778A (en) * | 2011-07-29 | 2013-01-30 | 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 | Pretreatment method for detecting chloramphenicol in milk or mild products and method for detecting chloramphenicol in milk or mild products |
CN103389350A (en) * | 2013-08-09 | 2013-11-13 | 中国检验检疫科学研究院 | Method for measuring chloramphenicol antibiotics in cosmetics |
RU2566422C2 (en) * | 2013-10-31 | 2015-10-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный университет" (ОГУ) | Method of sorption-chromatographic determination of tetracycline in milk and dairy products |
CN104198625A (en) * | 2014-08-16 | 2014-12-10 | 中山鼎晟生物科技有限公司 | Rapid detection method of tetracycline antibiotics in cosmetics |
CN104515834A (en) * | 2014-09-20 | 2015-04-15 | 中山鼎晟生物科技有限公司 | Detection kit for chloramphenicol in cosmetics and detection method thereof |
CN104880522A (en) * | 2015-04-28 | 2015-09-02 | 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 | Method for determining residual quantity of chloramphenicol in bee wax by n-hexane pre-treatment-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry |
CN106442747A (en) * | 2016-06-20 | 2017-02-22 | 浙江公正检验中心有限公司 | Method for simultaneously determining for residue amounts of chlorfenuron, 2,4-D and paclobutrazol in fruits and vegetables with gas chromatography-mass spectrometry |
CN106442747B (en) * | 2016-06-20 | 2019-02-22 | 浙江公正检验中心有限公司 | A kind of method that chloropyuril in fruits and vegetables, 2,4-D, paclobutrazol residual quantity are measured simultaneously using gas chromatography mass spectrometry |
CN106526012A (en) * | 2016-11-03 | 2017-03-22 | 百奥森(江苏)食品安全科技有限公司 | Detection method for chloramphenicol in fodder |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2431829C1 (en) | Method for determination of chloramphenicol content in food products and sorbent for its implementation | |
Zhang et al. | A review of pretreatment and analytical methods of biogenic amines in food and biological samples since 2010 | |
Pérez-Rodríguez et al. | An overview of the main foodstuff sample preparation technologies for tetracycline residue determination | |
Cinelli et al. | Study of XAD-2 adsorbent for the enrichment of trace levels of phthalate esters in hydroalcoholic food beverages and analysis by gas chromatography coupled with flame ionization and ion-trap mass spectrometry detectors | |
Erim | Recent analytical approaches to the analysis of biogenic amines in food samples | |
Hernández et al. | Analysis of antibiotics in biological samples by capillary electrophoresis | |
Du et al. | Combined solid‐phase microextraction and high‐performance liquid chromatography with ultroviolet detection for simultaneous analysis of clenbuterol, salbutamol and ractopamine in pig samples | |
Martins et al. | Miniaturized sample preparation techniques and ambient mass spectrometry as approaches for food residue analysis | |
Varela-Martinez et al. | Quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) extraction | |
CN217981374U (en) | Multidimensional liquid chromatography device for simultaneously detecting multiple biological small molecules in biological sample | |
Gomez et al. | Solid phase extraction/cyclodextrin-modified micellar electrokinetic chromatography for the analysis of melatonin and related indole compounds in plants | |
Neofotistos et al. | Emerging trends in biogenic amines analysis | |
Nie et al. | New method of aqueous two phase with solid phase extraction (ATP-SPE) for detection of sulfonamides | |
Zhu et al. | Simultaneous detection of fifteen biogenic amines in animal derived products by HPLC-FLD with solid-phase extraction after derivatization with dansyl chloride | |
CN109900825B (en) | Separation and detection method for mycotoxin generated in transportation process of corn in bulk grain container | |
Haagsma et al. | A rapid thin‐layer chromatographic screening method for five sulfonamides in animal tissues | |
CN114669280B (en) | Purifying filler for sulfonamide residue and pretreatment method | |
Qian et al. | A high‐throughput screening method for determination of multi‐antibiotics in animal feed | |
RU2546530C1 (en) | Method for quantitation of blood penzapyrene by liquid chromatography | |
RU2696010C1 (en) | Method for bacitracin determination in meat and meat products using high-performance liquid chromatography | |
Xu et al. | Selective extraction of methenamine from chicken eggs using molecularly imprinted polymers and LC-MS/MS confirmation | |
Patyra et al. | Screening method for the determination of selected tetracyclines in water by liquid chromatography with diode array detector | |
He | Microextraction and its application to forensic toxicology analysis | |
Tanaka et al. | An improved, highly sensitive HPLC-based method for determining uric acid levels in microliter plasma volumes | |
CN101750242A (en) | Sample pretreatment method for detecting harmful substances in meat product and aquatic product |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140619 |