RU2421236C2

RU2421236C2 - Stabilised pharmaceutical composition containing peptide

Info

Publication number: RU2421236C2
Application number: RU2005137370/15A
Authority: RU
Inventors: Клаус ЮУУЛ-МОРТЕНСЕН (DK); Клаус ЮУУЛ-МОРТЕНСЕН; Дорт Кот ЭНГЕЛУНД (DK); Дорт Кот ЭНГЕЛУНД
Original assignee: Ново Нордиск А/С
Priority date: 2003-06-03
Filing date: 2004-06-03
Publication date: 2011-06-20
Also published as: RU2005137370A

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention refers to pharmaceutical industry, and concerns a method of increasing a shelf life of a parenteral pharmaceutical composition containing glucagonlike peptide, its analogue or derivative analogue. The composition is prepared of an unprepacked finished peptide product which has been processed at pH within the range 8.1 to 11.5, and an unprepacked finished peptide product prepared by lyophilisation of a solution or a suspension of said peptide at specified pH.

EFFECT: invention provides higher product stability.

27 cl, 2 tbl

Description

Область техникиTechnical field

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям. Более конкретно изобретение относится к способам изготовления стабильных фармацевтических композиций, которые готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который подвергают обработке при рН выше нейтрального.The present invention relates to pharmaceutical compositions. More specifically, the invention relates to methods for the manufacture of stable pharmaceutical compositions which are prepared from a bulk peptide product that is processed at a pH above neutral.

Предшествующий уровень техникиState of the art

Терапевтические пептиды широко применяют в медицинской практике. Как правило, необходимо, чтобы фармацевтические композиции таких терапевтических пептидов имели срок годности несколько лет. Однако пептидные композиции по существу нестабильны, поскольку они подвержены химическому и физическому разрушению. При химическом разрушении, таком как окисление, гидролиз, рацемизация или поперечная сшивка, подвергаются изменению ковалентные связи. При физическом разрушении происходят конформационные изменения нативной структуры пептида, то есть вторичной и третичной структуры, такие как агрегация, осаждение или адсорбция на поверхностях.Therapeutic peptides are widely used in medical practice. As a rule, it is necessary that the pharmaceutical compositions of such therapeutic peptides have a shelf life of several years. However, the peptide compositions are essentially unstable because they are susceptible to chemical and physical degradation. In chemical degradation, such as oxidation, hydrolysis, racemization or crosslinking, covalent bonds are altered. With physical destruction, conformational changes in the native structure of the peptide, i.e., secondary and tertiary structures, such as aggregation, deposition, or adsorption on surfaces, occur.

Глюкагон десятилетиями применяют в медицинской практике при диабете, а некоторые глюкагоноподобные пептиды разработаны для различных медицинских показаний. Ген препроглюкагона кодирует и глюкагон, и глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1), и глюкагоноподобный пептид 2 (GLP-2). Аналоги и производные GLP-1, а также гомологичный пептид ящериц, эксендин-4, разрабатываются для лечения гипергликемии при диабете типа 2. GLP-2 является потенциально полезным при лечении желудочно-кишечных заболеваний. Однако все эти пептиды, содержащие 29-39 аминокислот, обладают высокой степенью гомологии и имеют ряд общих свойств, к которым относятся склонность к агрегации и к образованию нерастворимых фибрилл. Вероятно эти свойства обусловлены переходом от преобладающей альфа-спиральной конформации к бета-листкам (Blundell T.L. (1983) The conformation of glucagon. In: Lefébvre P.J. (Ed) Glucagon I. Springer Verlag, pp 37-55, Senderoff R.I. et ai., J. Pharm. Sci. 87 (1998) 183-189, WO 01/55213). Агрегация глюкагоноподобных пептидов главным образом наблюдается при перемешивании или встряхивании растворов этих пептидов, на границе раздела фазы раствора и газовой фазы (воздуха) и при контакте с гидрофобными поверхностями, такими как Teflon®.Glucagon has been used in medical practice for diabetes for decades, and some glucagon-like peptides have been developed for a variety of medical reasons. The preproglucagon gene encodes both glucagon and glucagon-like peptide 1 (GLP-1) and glucagon-like peptide 2 (GLP-2). GLP-1 analogs and derivatives, as well as the homologous lizard peptide, exendin-4, are being developed for the treatment of hyperglycemia in type 2 diabetes. GLP-2 is potentially useful in the treatment of gastrointestinal diseases. However, all these peptides containing 29-39 amino acids have a high degree of homology and have a number of common properties, which include a tendency to aggregate and to the formation of insoluble fibrils. These properties are likely due to the transition from the prevailing alpha-helical conformation to beta leaflets (Blundell TL (1983) The conformation of glucagon. In: Lefébvre PJ (Ed) Glucagon I. Springer Verlag, pp 37-55, Senderoff RI et ai., J. Pharm. Sci. 87 (1998) 183-189, WO 01/55213). Aggregation of glucagon-like peptides is mainly observed by stirring or shaking the solutions of these peptides, at the interface between the solution phase and the gas phase (air), and upon contact with hydrophobic surfaces such as Teflon®.

Таким образом, в фармацевтические композиции глюкагоноподобных пептидов часто следует добавлять различные эксципиенты с целью улучшения их стабильности. Срок годности жидких парентеральных препаратов этих пептидов должен составлять как минимум год, предпочтительно более. Период, при котором продукт может транспортироваться и ежедневно встряхиваться при температуре окружающей среды, предпочтительно должен составлять несколько недель. Следовательно, существует необходимость в фармацевтических композициях глюкагоноподобных пептидов, которые обладают улучшенной стабильностью.Thus, various excipients should often be added to pharmaceutical compositions of glucagon-like peptides in order to improve their stability. The shelf life of the liquid parenteral preparations of these peptides should be at least a year, preferably more. The period during which the product can be transported and shaken daily at ambient temperature should preferably be several weeks. Therefore, there is a need for pharmaceutical compositions of glucagon-like peptides that have improved stability.

Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что при обработке пептидных продуктов при рН выше 8,0 наблюдается повышение стабильности фармацевтических композиций, изготовленных из этих пептидных продуктов.The inventors unexpectedly found that when processing peptide products at pH above 8.0, there is an increase in the stability of pharmaceutical compositions made from these peptide products.

ОпределенияDefinitions

Ниже представлено подробное определение терминов, использованных в описании.The following is a detailed definition of the terms used in the description.

Термин "эффективное количество", как его используют здесь, означает дозу, которая достаточна для того, чтобы она была эффективна для лечения пациента по сравнению с отсутствием лечения.The term "effective amount", as used here, means a dose that is sufficient to be effective for treating a patient compared with no treatment.

Термин "восстановленный", как его используют здесь в отношении фармацевтической композиции, означает водную композицию, которая составлена путем добавления воды или соответствующего водного раствора к твердому веществу, содержащему активный фармацевтический ингредиент. Восстановленные фармацевтические композиции применяют, если невозможно изготовить жидкую композицию с приемлемым сроком годности. Примером восстановленной фармацевтической композиции является раствор, который получается в результате добавления воды или подходящего водного раствора к лиофилизированной композиции. Этот раствор часто предназначен для парентерального введения, и, следовательно, для восстановления твердого вещества используют воду для инъекций или любой другой подходящий растворитель.The term “reconstituted,” as used herein in relation to a pharmaceutical composition, means an aqueous composition which is formulated by adding water or an appropriate aqueous solution to a solid substance containing the active pharmaceutical ingredient. Reconstituted pharmaceutical compositions are used if it is not possible to produce a liquid composition with an acceptable shelf life. An example of a reconstituted pharmaceutical composition is a solution that results from the addition of water or a suitable aqueous solution to a lyophilized composition. This solution is often intended for parenteral administration, and therefore water for injection or any other suitable solvent is used to reconstitute the solid.

Термин "лечение заболевания", как его используют здесь, означает оказание помощи и уход за пациентом, у которого развилось заболевание, состояние или расстройство. Целью лечения является борьба с заболеванием, состоянием или расстройством. Лечение включает введение активных соединений для устранения заболевания, состояния или расстройства или борьбы с ними, а также для облегчения симптомов или осложнений, связанных с заболеванием, состоянием или расстройством.The term “treating a disease” as used herein means assisting and caring for a patient who has developed a disease, condition or disorder. The goal of treatment is to combat a disease, condition or disorder. Treatment includes the administration of active compounds to eliminate or control a disease, condition or disorder, and to alleviate the symptoms or complications associated with the disease, condition or disorder.

Термин "глюкагоноподобный пептид", как его используют здесь, относится к гомологичным пептидам, имеющим происхождение от гена препроглюкагона, эксендинам, их аналогам и производным. Пептидами, имеющими происхождение от гена препроглюкагона, являются глюкагон, глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1), глюкагоноподобный пептид 2 (GLP-2) и оксинтомодулин (ОХМ). Эксендины, которые обнаружены у ядозуба, гомологичны GLP-1 и также проявляют инсулинотропный эффект. Примерами эксендинов являются эксендин-4 и эксендин-3.The term “glucagon-like peptide”, as used herein, refers to homologous peptides derived from the preproglucagon gene, exendins, their analogs and derivatives. Peptides derived from the preproglucagon gene are glucagon, glucagon-like peptide 1 (GLP-1), glucagon-like peptide 2 (GLP-2), and oxyntomodulin (OXM). The exendins found in the puffer are homologous to GLP-1 and also exhibit an insulinotropic effect. Examples of exendins are exendin-4 and exendin-3.

Глюкагоноподобные пептиды имеют приведенные ниже последовательности:Glucagon-like peptides have the following sequences:

Термин "аналог", как его используют здесь в отношении пептида, означает модифицированный пептид, где один или более чем один аминокислотный остаток заменен другими аминокислотными остатками, и/или где один или более чем один аминокислотный остаток делетирован из пептида, и/или где один или более чем один аминокислотный остаток добавлен к пептиду. Такие добавление или делеция аминокислотных остатков могут иметь место при N-конце пептида и/или при С-конце пептида. Для описания аналогов часто используют две различные и простые системы: например, Arg³⁴-GLP-1(7-37) или K34R-GLP-1(7-37) обозначает аналог GLP-1, где аминокислотные остатки в положениях 1-6 делетированы, а лизин в положении 34 заменен аргинином (стандартное простое буквенное сокращение для аминокислот, используемое согласно номенклатуре IUPAC-IUB).The term “analogue,” as used herein with respect to a peptide, means a modified peptide where one or more amino acid residues are replaced by other amino acid residues, and / or where one or more than one amino acid residue is deleted from the peptide, and / or where one or more than one amino acid residue is added to the peptide. Such addition or deletion of amino acid residues can occur at the N-terminus of the peptide and / or at the C-terminus of the peptide. Two different and simple systems are often used to describe analogues: for example, Arg ³⁴ -GLP-1 (7-37) or K34R-GLP-1 (7-37) denotes an analog of GLP-1, where the amino acid residues at positions 1-6 are deleted and the lysine at position 34 is replaced by arginine (the standard simple letter abbreviation for amino acids used according to the IUPAC-IUB nomenclature).

Термин "производное", как его используют здесь в отношении исходного пептида, означает химически модифицированный исходный пептид или его аналог, где по меньшей мере один заместитель отсутствует в исходном белке или его аналоге, то есть исходный белок, который был ковалентно модифицирован. Типичными модификаторами являются амиды, углеводы, алкильные группы, ацильные группы, эфиры, пэгилирования и тому подобное. Примерами производного GLP-1(7-37) являются Arg³⁴, Lys²⁶(N^ε-(γ-Glu(N^α-гексадеканоил)))-GLP-1(7-37).The term “derivative”, as used herein with respect to a parent peptide, means a chemically modified parent peptide or an analogue thereof, where at least one substituent is absent in the parent protein or its analogue, that is, the parent protein that has been covalently modified. Typical modifiers are amides, carbohydrates, alkyl groups, acyl groups, esters, pegylations and the like. Examples of the GLP-1 derivative (7-37) are Arg ³⁴ , Lys ²⁶ (N ^ε - (γ-Glu (N ^α -hexadecanoyl))) - GLP-1 (7-37).

Термин "пептид GLP-1", как его используют здесь, означает GLP-1(7-37), аналог GLP-1, производное GLP-1 или производное аналога GLP-1.The term “GLP-1 peptide,” as used herein, means GLP-1 (7-37), an analog of GLP-1, a derivative of GLP-1, or a derivative of an analog of GLP-1.

Термин "пептид GLP-2", как его используют здесь, означает GLP-2(1-33), аналог GLP-2, производное GLP-2 или производное аналога GLP-2.The term “GLP-2 peptide,” as used herein, means GLP-2 (1-33), an analog of GLP-2, a derivative of GLP-2, or a derivative of an analog of GLP-2.

Термин "пептид эксендин-4", как его используют здесь, означает эксендин-4 (1-39), аналог эксендина-4, производное эксендина-4 или производное аналога эксендина-4.The term “exendin-4 peptide”, as used herein, means exendin-4 (1-39), an exendin-4 analog, an exendin-4 derivative, or an exendin-4 analog derivative.

Термин "стабильное соединение эксендина-4", как его используют здесь, означает химически модифицированный эксендин-4(1-39), то есть аналог или производное, который имеет полураспад в плазме in vivo по меньшей мере 10 часов у человека, как определено приведенным ниже способом. Способ определения полураспада в плазме соединения эксендин-4 у человека: соединение растворяют в изотоническом буфере, рН 7,4, PBS (фосфатно-солевой буфер) или любом другом подходящем буфере. Эту дозу инъецируют на периферии, предпочтительно в живот или в верхнюю часть бедра. Образцы крови для определения активного соединения берут через короткие интервалы на протяжении достаточно продолжительного времени, чтобы захватить момент полного распада (например, перед введением дозы, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 24 (сутки 2), 36 (сутки 2), 48 (сутки 3), 60 (сутки 3), 72 (сутки 4) и 84 (сутки 4) часа после введения дозы). Определение концентрации активного соединения проводят, как описано в Wilken et al., Diabetologia 43 (51): А143, 2000. Полученные фармакокинетические параметры вычисляют на основании данных концентрация-время для каждого индивидуального субъекта путем использования некомпартментных методов, используя имеющееся в продаже программное обеспечение WinNonlin Version 2.1 (Pharsight, Cary, NC, USA). Константу скорости элиминации оценивают на основании линейно-логарифмической регрессии на конечном участке линейно-логарифмической кривой концентрация-время и используют для вычисления периода полураспада.The term “stable compound of exendin-4,” as used here, means a chemically modified exendin-4 (1-39), that is, an analog or derivative that has a half-life in plasma in vivo of at least 10 hours in humans, as defined by below way. Method for determining half-life in plasma of exendin-4 compound in humans: the compound is dissolved in isotonic buffer, pH 7.4, PBS (phosphate-buffered saline) or any other suitable buffer. This dose is injected at the periphery, preferably in the abdomen or in the upper thigh. Blood samples to determine the active compound are taken at short intervals for a sufficiently long time to capture the moment of complete decay (for example, before a dose is administered, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 24 ( day 2), 36 (day 2), 48 (day 3), 60 (day 3), 72 (day 4) and 84 (day 4) hours after the dose). The concentration of the active compound is determined as described in Wilken et al., Diabetologia 43 (51): A143, 2000. The obtained pharmacokinetic parameters are calculated based on concentration-time data for each individual subject using non-compartmental methods using the commercially available WinNonlin software Version 2.1 (Pharsight, Cary, NC, USA). The elimination rate constant is estimated based on a linear-logarithmic regression in the final section of the linear-logarithmic concentration-time curve and is used to calculate the half-life.

Термин "DPP-IV защищенное соединение эксендина-4", как его используют здесь, означает соединение эксендина-4, которое химически модифицировано, чтобы сделать указанное соединение устойчивым к пептидазе плазмы дипептидиламинопептидазе-4 (DPP-IV).The term “DPP-IV protected exendin-4 compound,” as used herein, means an exendin-4 compound that is chemically modified to make the compound resistant to plasma peptidase dipeptidylamine peptidase-4 (DPP-IV).

Термин "иммуномодулированное соединение эксендина-4", как его используют здесь, означает соединение эксендина-4, которое представляет собой аналог или производное эксендина-4(1-39), обладающие сниженным иммунным ответом у людей по сравнению с эксендином-4(1-39). Способ оценки иммунного ответа представляет собой измерение концентрации антител, способных к взаимодействию с соединением эксендина-4 после 4 недель лечения пациента.The term “immunomodulated exendin-4 compound,” as used herein, means an exendin-4 compound, which is an analog or derivative of exendin-4 (1-39), having a reduced immune response in humans compared to exendin-4 (1- 39). A method for assessing the immune response is a measurement of the concentration of antibodies capable of interacting with the exendin-4 compound after 4 weeks of treatment of the patient.

Термин "нерасфасованный продукт" или "нерасфасованный пептидный продукт", как его используют здесь, означает очищенный пептидный продукт, который нужно использовать для изготовления фармацевтической композиции. Таким образом, нерасфасованный продукт обычно получают в виде продукта стадии конечной очистки, высушивания или приведения в соответствие с нормами. Нерасфасованный продукт может представлять собой кристаллы, осадок, раствор или суспензию. Понятие «нерасфасованный продукт» также применяют в данной области техники для обозначения субстанции лекарства.The term “bulk product” or “bulk peptide product,” as used herein, means a purified peptide product that must be used to make a pharmaceutical composition. Thus, the bulk product is usually obtained in the form of a product of the stage of final purification, drying or bringing into compliance with the norms. The bulk product may be crystals, precipitate, solution or suspension. The term "bulk product" is also used in the art to denote the substance of a drug.

Термин "изоэлектрическая точка", как его используют здесь, означает значение рН, где суммарный заряд макромолекулы, такой как пептид, равен нулю. В пептидах может быть много заряженных групп, и в изоэлектрической точке сумма всех этих зарядов равна нулю, то есть число отрицательных зарядов равно числу положительных зарядов. При рН выше изоэлектрической точки суммарный заряд пептида будет отрицательным, тогда как при значениях рН ниже изоэлектрической точки суммарный заряд пептида будет положительным. Изоэлектрическую точку пептида можно определить с помощью изоэлектрического фокусирования либо ее можно оценить на основании последовательности пептида с помощью компьютерных алгоритмов, известных в данной области техники.The term "isoelectric point", as used here, means a pH value, where the total charge of a macromolecule, such as a peptide, is zero. There can be many charged groups in peptides, and at the isoelectric point the sum of all these charges is zero, that is, the number of negative charges is equal to the number of positive charges. At a pH above the isoelectric point, the total charge of the peptide will be negative, while at pH values below the isoelectric point, the total charge of the peptide will be positive. The isoelectric point of the peptide can be determined using isoelectric focusing, or it can be estimated based on the sequence of the peptide using computer algorithms known in the art.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит глюкагоноподобный пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,1 до 9,6.In one aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a glucagon-like peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent, and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product that has been processed at a pH in the range of 8, 1 to 9.6.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит глюкагоноподобный пептид и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,1 до 9,6.In another aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a glucagon-like peptide and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product that has been processed at a pH in the range of 8.1 to 9.6 .

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,1 до 9,6.In another aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent, and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product that has been processed at a pH in the range of 8.1 up to 9.6.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит пептид и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептида, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,1 до 9,6.In another aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a peptide and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide that has been processed at a pH in the range of 8.1 to 9.6.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит глюкагоноподобный пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,5 до 9,6.In another aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a glucagon-like peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent, and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product that has been processed at a pH in the range of 8, 5 to 9.6.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит глюкагоноподобный пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 9,0 до 9,6.In another aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a glucagon-like peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent, and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product that has been processed at a pH in the range of 9, 0 to 9.6.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения срока годности фармацевтической композиции, которая содержит глюкагоноподобный пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, при котором указанную фармацевтическую композицию готовят из нерасфасованного пептидного продукта, который был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,1 до 11,5.In another aspect, the present invention relates to a method for increasing the shelf life of a pharmaceutical composition that comprises a glucagon-like peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent, and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product that has been processed at a pH in the range of 8, 1 to 11.5.

В одном воплощении нерасфасованный пептидный продукт был подвергнут рН в интервале от 8,1 до 10,0.In one embodiment, the bulk peptide product has been subjected to a pH in the range of 8.1 to 10.0.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,5 до 11,5.In another embodiment, the bulk peptide product has been processed at a pH in the range from 8.5 to 11.5.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт был подвергнут обработке при рН в интервале от 8,5 до 10,0.In another embodiment, the bulk peptide product has been processed at a pH in the range of 8.5 to 10.0.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт был подвергнут обработке при рН в указанном интервале в течение периода от примерно 1 минуты до примерно 12 часов и при температуре от более высокой, чем температура образования центров кристаллизации (такого как либо гетерогенное, либо гомогенное образование центров кристаллизации) нерасфасованного пептидного продукта, до 25°С.In another embodiment, the bulk peptide product has been processed at a pH in the indicated range for a period of from about 1 minute to about 12 hours and at a temperature higher than the temperature at which crystallization centers (such as either heterogeneous or homogeneous crystallization centers) are formed peptide product, up to 25 ° C.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт был подвергнут обработке при рН в указанном интервале в течение периода от примерно 1 минуты до 30 минут и при температуре от примерно 5°С до примерно 25°С.In another embodiment, the bulk peptide product has been processed at a pH in the indicated range for a period of from about 1 minute to 30 minutes and at a temperature of from about 5 ° C to about 25 ° C.

Должно быть понятно, что изобретение можно осуществить посредством различных комбинаций значений рН, температуры и времени. Эти три переменные можно комбинировать в пределах вышеупомянутых интервалов. Однако если значения одной или двух из этих переменных близки к верхнему пределу диапазона, значения одной или двух из остальных переменных обычно являются более низкими. Например, если используют высокое значение рН, такое как рН 10, его предпочтительно сочетают с более низкой температурой, такой как 5-10°С, и/или коротким промежутком времени, таким как время от менее примерно 1 минуты до примерно 6 часов. Полезными комбинациями переменных являются: рН 10,0 при 5°С в течение примерно 3 часов, рН 10,0 при 15°С в течение примерно 1 часа или рН 11,0 при 5°С в течение примерно 1 часа.It should be understood that the invention can be practiced by various combinations of pH, temperature, and time. These three variables can be combined within the above ranges. However, if the values of one or two of these variables are close to the upper limit of the range, the values of one or two of the other variables are usually lower. For example, if a high pH value, such as pH 10, is used, it is preferably combined with a lower temperature, such as 5-10 ° C., and / or a short period of time, such as a time from less than about 1 minute to about 6 hours. Useful combinations of variables are: pH 10.0 at 5 ° C for about 3 hours, pH 10.0 at 15 ° C for about 1 hour, or pH 11.0 at 5 ° C for about 1 hour.

Рост ледяных кристаллов, либо в виде монокристалла, либо в виде поликристалла, представляет собой начальную стадию образования центров кристаллизации, только лед образуется при замораживании воды или водного раствора при низких давлениях, как при медленном, так и при быстром замораживании. Образование центров кристаллизации растворов может происходить двумя способами в зависимости от концентрации растворенного вещества и от температуры. Если насыщенный раствор охлаждают, тогда он может стать не только переохлажденным в отношении ледяной фазы, но также перенасыщенным в отношении растворенного вещества. В отсутствие подходящих центров замерзания раствор может быть переохлажденным. Таким образом, температуру, используемую в процессе обработки пептида при более высоком рН, следует поддерживать выше температуры образования центров кристаллизации пептида в основных условиях. Температура образования центров кристаллизации известна специалистам в данной области техники, и ее можно определить рутинным путем для соответствующего пептида с помощью экспериментов при различных температурах.The growth of ice crystals, either in the form of a single crystal or in the form of a polycrystal, represents the initial stage of the formation of crystallization centers, only ice is formed when freezing water or an aqueous solution at low pressures, both during slow and fast freezing. The formation of solution crystallization centers can occur in two ways, depending on the concentration of the solute and on the temperature. If the saturated solution is cooled, then it can become not only supercooled in relation to the ice phase, but also oversaturated in relation to the solute. In the absence of suitable freezing centers, the solution may be supercooled. Thus, the temperature used in the processing of the peptide at a higher pH should be maintained above the temperature of formation of the crystallization centers of the peptide under basic conditions. The temperature at which crystallization centers form is known to those skilled in the art and can be determined routinely for the corresponding peptide using experiments at different temperatures.

В одном воплощении фармацевтическая композиция представляет собой раствор.In one embodiment, the pharmaceutical composition is a solution.

В другом воплощении фармацевтическая композиция представляет собой суспензию.In another embodiment, the pharmaceutical composition is a suspension.

В другом воплощении фармацевтическая композиция представляет собой твердое вещество, например лиофилизированный препарат, к которому врач или пациент добавляет растворитель перед применением. Растворитель, используемый для восстановления, может представлять собой воду для инъекций или другой подходящий растворитель.In another embodiment, the pharmaceutical composition is a solid, such as a lyophilized preparation, to which a doctor or patient adds a solvent before use. The solvent used for reconstitution may be water for injection or another suitable solvent.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт готовят путем лиофилизации раствора или суспензии указанного глюкагоноподобного пептида при указанном рН.In another embodiment, a bulk peptide product is prepared by lyophilization of a solution or suspension of said glucagon-like peptide at a specified pH.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт обрабатывают при указанном рН в процессе изготовления указанной фармацевтической композиции.In another embodiment, the bulk peptide product is processed at the indicated pH in the manufacturing process of said pharmaceutical composition.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт обрабатывают при указанном рН после конечной стадии очистки в процессе изготовления.In another embodiment, the bulk peptide product is treated at the indicated pH after the final purification step in the manufacturing process.

В другом воплощении нерасфасованный пептидный продукт обрабатывают при указанном рН перед смешиванием с указанным фармацевтически приемлемым буферным веществом.In another embodiment, the bulk peptide product is treated at the indicated pH before being mixed with said pharmaceutically acceptable buffering agent.

В другом воплощении рН фармацевтической композиции ниже, чем рН, при котором обрабатывают раствор или суспензию нерасфасованного пептида.In another embodiment, the pH of the pharmaceutical composition is lower than the pH at which a solution or suspension of bulk peptide is treated.

В другом воплощении рН фармацевтической композиции по меньшей мере на 0,8 единицы рН ниже, чем рН, при котором обрабатывают раствор или суспензию нерасфасованного пептида.In another embodiment, the pH of the pharmaceutical composition is at least 0.8 pH units lower than the pH at which a solution or suspension of bulk peptide is treated.

В другом воплощении рН фармацевтической композиции по меньшей мере на 1,5 единицы рН ниже, чем рН, при котором обрабатывают раствор или суспензию нерасфасованного пептида.In another embodiment, the pH of the pharmaceutical composition is at least 1.5 pH units lower than the pH at which a solution or suspension of the bulk peptide is treated.

Фармацевтические композиции, содержащие глюкагоноподобный пептид согласно настоящему изобретению, можно вводить парентерально пациентам, нуждающимся в таком лечении. Парентеральное введение можно осуществлять путем подкожной инъекции, внутримышечной инъекции или внутривенной инъекции с помощью шприца, возможно шприца карандашного типа. Альтернативно введение можно осуществлять путем инфузии, например, путем использования инфузионной помпы.Pharmaceutical compositions containing the glucagon-like peptide of the present invention can be administered parenterally to patients in need of such treatment. Parenteral administration can be carried out by subcutaneous injection, intramuscular injection or intravenous injection using a syringe, possibly a pencil-type syringe. Alternatively, administration can be carried out by infusion, for example, by using an infusion pump.

В одном воплощении рН указанной фармацевтической композиции или восстановленного раствора указанной фармацевтической композиции составляет от рН 7,0 до рН 8,0, предпочтительно от рН 7,2 до рН 7,8. В другом воплощении рН указанной фармацевтической композиции или восстановленного раствора указанной фармацевтической композиции составляет от рН 7,2 до рН 7,6. В другом воплощении рН указанной фармацевтической композиции или восстановленного раствора указанной фармацевтической композиции составляет от рН 7,4 до рН 7,8.In one embodiment, the pH of said pharmaceutical composition or reconstituted solution of said pharmaceutical composition is from pH 7.0 to pH 8.0, preferably from pH 7.2 to pH 7.8. In another embodiment, the pH of said pharmaceutical composition or a reconstituted solution of said pharmaceutical composition is from pH 7.2 to pH 7.6. In another embodiment, the pH of said pharmaceutical composition or reconstituted solution of said pharmaceutical composition is from pH 7.4 to pH 7.8.

В другом воплощении изоэлектрическая точка указанного глюкагоноподобного пептида находится в интервале от 3,0 до 7,0, предпочтительно от 4,0 до 6,0.In another embodiment, the isoelectric point of said glucagon-like peptide is in the range from 3.0 to 7.0, preferably from 4.0 to 6.0.

В одном воплощении указанный глюкагоноподобный пептид представляет собой глюкагон, аналог глюкагона или его производное.In one embodiment, said glucagon-like peptide is glucagon, a glucagon analog or derivative thereof.

В другом воплощении указанный глюкагоноподобный пептид представляет собой оксинтомодулин.In another embodiment, said glucagon-like peptide is oxyntomodulin.

В одном воплощении указанный глюкагоноподобный пептид представляет собой GLP-1, аналог GLP-1, производное GLP-1 или производное аналога GLP-1.In one embodiment, said glucagon-like peptide is GLP-1, an analog of GLP-1, a derivative of GLP-1, or a derivative of an analog of GLP-1.

В другом воплощении указанный аналог GLP-1 выбран из группы, состоящей из Gly⁸-GLP-1(7-36)-амида, Gly⁸-GLP-1(7-37), Val⁸-GLP-1(1-36)-амида, Val⁸-GLP-1(7-37), Val⁸Asp²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Asp²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Lys²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Lys²²-GLP-1(7-37), Val⁸Arg²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸Arg²²-GLP-1(7-37), Val⁸His²²-GLP-1(7-36)-амида, Val⁸His²²-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁹Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²Val²⁵-GLP-1(7-37), Val⁸Tyr¹⁶Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Leu¹⁶Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Tyr¹⁸Glu₂₂-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²His³⁷-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶Glu²²Val²⁵lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶Glu²²lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²Val²⁵lle³³-GLP-1(7-37), Val⁸Trp¹⁶Glu²²Val²⁵-GLP-1(7-37) и их аналогов.In another embodiment, said GLP-1 analogue is selected from the group consisting of Gly ^8- GLP-1 (7-36) amide, Gly ^8- GLP-1 (7-37), Val ^8- GLP-1 (1-36 ) -amide, Val ⁸ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Asp ²² -GLP-1 (7-36) -amide, Val ⁸ Asp ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² -GLP-1 (7-36) -amide, Val ⁸ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Lys ²² -GLP-1 (7-36) -amide, Val ⁸ Lys ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Arg ²² -GLP-1 (7-36) -amide, Val ⁸ Arg ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ His ²² -GLP-1 (7-36) - amide, Val ⁸ His ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁹ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² Val ²⁵ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Tyr ¹⁶ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Leu ¹⁶ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Tyr ¹⁸ Glu ₂₂ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² His ³⁷ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² lle ³³ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² Val ²⁵ lle ^33- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² lle ^33- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² Val ²⁵ lle ^33- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² Val ²⁵ -GLP-1 (7-37) and their analogues.

В другом воплощении указанное производное аналога GLP-1 представляет собой Arg³⁴, Lys²⁶(N^ε-(γ-Glu(N^α-гексадеканоил)))-GLP-1(7-37).In another embodiment, said GLP-1 analog derivative is Arg ³⁴ , Lys ²⁶ (N ^ε - (γ-Glu (N ^α -hexadecanoyl))) - GLP-1 (7-37).

Способы получения GLP-1, его аналогов, а также производных GLP-1 можно найти, например, в WO 99/43706, WO 00/55119, WO 00/34331 и WO 03/18516.Methods for producing GLP-1, its analogs, as well as derivatives of GLP-1 can be found, for example, in WO 99/43706, WO 00/55119, WO 00/34331 and WO 03/18516.

В другом воплощении указанный раствор или суспензию нерасфасованного пептидного продукта подвергают обработке при рН 9,5, и рН указанной фармацевтической композиции составляет 7,4.In another embodiment, said solution or suspension of a bulk peptide product is processed at a pH of 9.5 and the pH of said pharmaceutical composition is 7.4.

В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой пептид GLP-1, и концентрация глюкагоноподобного пептида в фармацевтической композиции или в восстановленной композиции составляет от 0,1 мг/мл до 50 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 25 мг/мл, от 1 мг/мл до 25 мг/мл, от 1 мг/мл до 10 мг/мл или от 3 мг/мл до 8 мг/мл.In another embodiment, the glucagon-like peptide is a GLP-1 peptide, and the concentration of the glucagon-like peptide in the pharmaceutical composition or in the reconstituted composition is from 0.1 mg / ml to 50 mg / ml, from 0.1 mg / ml to 25 mg / ml, from 1 mg / ml to 25 mg / ml, from 1 mg / ml to 10 mg / ml or from 3 mg / ml to 8 mg / ml.

В одном воплощении указанный глюкагоноподобный пептид представляет собой GLP-2, аналог GLP-2, производное GLP-2 или производное аналога GLP-2.In one embodiment, said glucagon-like peptide is GLP-2, a GLP-2 analog, a GLP-2 derivative, or a GLP-2 analog derivative.

В другом воплощении производное GLP-2 или производное аналога GLP-2 имеет лизиновый остаток, такой как один лизин, где липофильный заместитель, возможно через спейсер, присоединен к эпсилон-аминогруппе указанного лизина.In another embodiment, the GLP-2 derivative or the GLP-2 analog derivative has a lysine residue, such as a lysine alone, where a lipophilic substituent, optionally via a spacer, is attached to the epsilon amino group of said lysine.

Способы получения аналогов GLP-2, а также производных GLP-2 можно найти, например, в WO 99/43361 и WO 00/55119.Methods for the preparation of GLP-2 analogs as well as GLP-2 derivatives can be found, for example, in WO 99/43361 and WO 00/55119.

В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой пептид GLP-2, и концентрация глюкагоноподобного пептида в его фармацевтической композиции или в восстановленной композиции составляет от 0,1 мг/мл до 100 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 25 мг/мл или от 1 мг/мл до 25 мг/мл.In another embodiment, the glucagon-like peptide is a GLP-2 peptide, and the concentration of the glucagon-like peptide in its pharmaceutical composition or in the reconstituted composition is from 0.1 mg / ml to 100 mg / ml, from 0.1 mg / ml to 25 mg / ml or from 1 mg / ml to 25 mg / ml.

В одном воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой эксендин-4, аналог эксендина-4, производное эксендина-4 или производное аналога эксендина-4.In one embodiment, the glucagon-like peptide is exendin-4, an exendin-4 analogue, an exendin-4 derivative, or an exendin-4 analogue derivative.

В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой эксендин-4. В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой стабильный эксендин-4. В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой DPP-IV-защищенный эксендин-4. В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой иммуномодулированный эксендин-4. В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой ZP-10 ([Ser³⁸Lys³⁹]эксендин-4(1-39)LysLysLysLysLys-амид).In another embodiment, the glucagon-like peptide is exendin-4. In another embodiment, the glucagon-like peptide is stable exendin-4. In another embodiment, the glucagon-like peptide is DPP-IV protected exendin-4. In another embodiment, the glucagon-like peptide is immunomodulated exendin-4. In another embodiment, the glucagon-like peptide is ZP-10 ([Ser ³⁸ Lys ³⁹ ] exendin-4 (1-39) LysLysLysLysLys amide).

Способы получения эксендина-4, его аналогов, а также производных эксендина-4 можно найти, например, в WO 99/43708, WO 00/41546 и WO 00/55119.Methods for producing exendin-4, its analogs, as well as derivatives of exendin-4 can be found, for example, in WO 99/43708, WO 00/41546 and WO 00/55119.

В другом воплощении глюкагоноподобный пептид представляет собой пептид эксендин-4, и концентрация глюкагоноподобного пептида в фармацевтической композиции или в восстановленной композиции составляет от 5 мкг/мл до 10 мг/мл, от 5 мкг/мл до 5 мг/мл, от 5 мкг/мл до 5 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 3 мг/мл или от 0,2 мг/мл до 1 мг/мл.In another embodiment, the glucagon-like peptide is an exendin-4 peptide, and the concentration of the glucagon-like peptide in the pharmaceutical composition or in the reconstituted composition is from 5 μg / ml to 10 mg / ml, from 5 μg / ml to 5 mg / ml, from 5 μg / ml to 5 mg / ml, from 0.1 mg / ml to 3 mg / ml or from 0.2 mg / ml to 1 mg / ml.

Буферные вещества, пригодные для использования в фармацевтических композициях, известны специалистам в данной области техники и включают, но не ограничены ими, ортофосфат, ТРИС, глицин, N-глицилглицин, ацетоцитрат натрия, карбонат натрия, глицилглицин, гистидин, лизин, аргинин, фосфат натрия и цитрат натрия или их смеси. В одном воплощении фармацевтическая композиция содержит буферное вещество, которое представляет собой Трис. В одном воплощении фармацевтическая композиция содержит буферное вещество, которое представляет собой глицин.Buffer substances suitable for use in pharmaceutical compositions are known to those skilled in the art and include, but are not limited to, orthophosphate, TRIS, glycine, N-glycylglycine, sodium acetate, sodium carbonate, glycine glycine, histidine, lysine, arginine, sodium phosphate and sodium citrate or mixtures thereof. In one embodiment, the pharmaceutical composition comprises a buffering agent that is Tris. In one embodiment, the pharmaceutical composition comprises a buffering agent that is glycine.

Консерванты для использования в фармацевтических композициях известны специалистам в данной области техники и включают, но не ограничены ими, фенол, мета-крезол, метил-пара-гидроксибензоат, пропил-пара-гидроксибензоат, 2-феноксиэтанол, бутил-пара-гидроксибензоат, 2-фенилэтанол, бензиловый спирт, хлорбутанол и тиомеросал или их смеси.Preservatives for use in pharmaceutical compositions are known to those skilled in the art and include, but are not limited to, phenol, meta-cresol, methyl para-hydroxybenzoate, propyl para-hydroxybenzoate, 2-phenoxyethanol, butyl para-hydroxybenzoate, 2- phenylethanol, benzyl alcohol, chlorobutanol and thiomerosal or mixtures thereof.

В одном воплощении фармацевтическая композиция содержит изотонический агент.In one embodiment, the pharmaceutical composition comprises an isotonic agent.

В другом воплощении фармацевтическая композиция содержит изотонический агент, который представляет собой хлорид натрия, ксилит, маннит, сорбит, глицерин, глюкозу, мальтозу, сахарозу, L-глицин, L-гистидин, аргинин, лизин, изолейцин, аспарагиновую кислоту, триптофан, треонин, диметилсульфон, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль или их смеси.In another embodiment, the pharmaceutical composition comprises an isotonic agent which is sodium chloride, xylitol, mannitol, sorbitol, glycerin, glucose, maltose, sucrose, L-glycine, L-histidine, arginine, lysine, isoleucine, aspartic acid, tryptophan, threonine, dimethyl sulfone, polyethylene glycol, propylene glycol or mixtures thereof.

В другом воплощении настоящего изобретения фармацевтическая композиция дополнительно содержит стабилизатор.In another embodiment of the present invention, the pharmaceutical composition further comprises a stabilizer.

В следующем воплощении изобретения препарат дополнительно содержит стабилизатор, выбранный из группы высокомолекулярных полимеров или низкомолекулярных соединений.In a further embodiment of the invention, the preparation further comprises a stabilizer selected from the group of high molecular weight polymers or low molecular weight compounds.

В следующем воплощении изобретения стабилизатор выбран из полиэтиленгликоля (например, ПЭГ3350), поливинилового спирта (ПВС), поливинилпирролидона, карбоксиметилцеллюлозы, различных солей (например, хлорида натрия), L-глицина, L-гистидина, имидазола, аргинина, лизина, изолейцина, аспарагиновой кислоты, триптофана, треонина и их смесей. Каждый из этих конкретных стабилизаторов составляет альтернативное воплощение изобретения. В предпочтительном воплощении изобретения стабилизатор выбран из группы, состоящей из L-гистидина, имидазола и аргинина.In a further embodiment of the invention, the stabilizer is selected from polyethylene glycol (e.g., PEG3350), polyvinyl alcohol (PVA), polyvinylpyrrolidone, carboxymethyl cellulose, various salts (e.g. sodium chloride), L-glycine, L-histidine, imidazole, arginine, lysine, isoleucine, isoleucine, acids, tryptophan, threonine and mixtures thereof. Each of these specific stabilizers constitutes an alternative embodiment of the invention. In a preferred embodiment of the invention, the stabilizer is selected from the group consisting of L-histidine, imidazole and arginine.

В другом воплощении настоящего изобретения стабилизатор выбран из группы, состоящей из ПЭГ3350, поливинилового спирта, поливинилпирролидона, карбоксиметилцеллюлозы, хлорида натрия, L-глицина, L-гистидина, имидазола, L-аргинина, L-лизина, L-изолейцина, L-аспарагиновой кислоты, L-триптофана, L-треонина и их смесей.In another embodiment of the present invention, the stabilizer is selected from the group consisting of PEG3350, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxymethyl cellulose, sodium chloride, L-glycine, L-histidine, imidazole, L-arginine, L-lysine, L-isoleucine, L-aspartic acid , L-tryptophan, L-threonine and mixtures thereof.

В следующем воплощении изобретения препарат дополнительно содержит хелатирующий агент. В следующем воплощении изобретения хелатирующий агент выбран из солей этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), лимонной кислоты и аспарагиновой кислоты и их смесей. Каждый из этих конкретных хелатирующих агентов составляет альтернативное воплощение изобретения.In a further embodiment of the invention, the preparation further comprises a chelating agent. In a further embodiment of the invention, the chelating agent is selected from salts of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), citric acid and aspartic acid, and mixtures thereof. Each of these specific chelating agents constitutes an alternative embodiment of the invention.

В другом воплощении настоящего изобретения фармацевтическая композиция дополнительно содержит сурфактант. В следующем воплощении изобретения сурфактант выбран из детергента, этоксилированного касторового масла, полигликозилированных глицеридов, ацетилированных моноглицеридов, сорбитановых эфиров жирных кислот, полоксамеров, таких как 188 и 407, полиоксиэтиленсорбитановых эфиров жирных кислот, производных полиоксиэтилена, таких как алкилированные и алкоксилированные производные (твины, например Твин-20 или Твин-80), моноглицеридов или их этоксилированных производных, дигдицеридов или их полиоксиэтиленовых производных, глицерина, холевой кислоты или ее производных, лецитинов, спиртов и фосфолипидов, глицерофосфолипидов (лецитинов, кефалинов, фосфатидилсерина), глицерогликолипидов (галактопиранозида), сфингофосфолипидов (сфингомиелина) и сфингогликолипидов (церамидов, ганглиозидов), ДКН (докузата натрия, CAS регистрационный № [577-11-7]), докузата кальция (регистрационный № CAS [128-49-4]), докузата калия (регистрационный № CAS [7491-09-0]), ДСН (додецилсульфата натрия или лаурилсульфата натрия), дипальмитоилфосфатидной кислоты, каприлата натрия, желчных кислот и их солей и глициновых или тауриновых конъюгатов, урсодезоксихолевой кислоты, холата натрия, дезоксихолата натрия, таурохолата натрия, гликохолата натрия, N-гексадецил-N,N-диметил-3-аммонио-1-пропансульфоната, одновалентных сурфактантов анионных (алкиларилсульфонатов), пальмитоил-лизофосфатидил-L-серина, лизофосфолипидов (например, 1-ацил-sn-глицеро-3-фосфатных эфиров этаноламина, холина, серина или треонина), алкил-, алкоксил(алкилэфир)-, алкокси(алкилэфир)-производных лизофосфатидила и фосфатидилхолинов, например лауроил- и миристоилпроизводных лизофосфатидилхолина, дипальмитоилфосфатидилхолина и модификаций полярной головной группы, таких как холины, этаноламины, фосфатидная кислота, серины, треонины, глицерин, инозит и положительно заряженные DODAC (диоктадецилдиметиламмоний), DOTMA (1,2-диолеил-3-N,N,N-триметиламинопропан), DCP (дицетилфосфат), BISHOP, лизофосфатидилсерина и лизофосфатидилтреонина, цвиттерионных сурфактантов (например, N-алкил-N,N-диметиламмонио-1-пропансульфонатов, 3-холамидо-1-пропилдиметиламмонио-1-пропансульфоната, додецилфосфохолина, миристоиллизофосфатидилхолина, лизолецитина куриного яйца), катионных сурфактантов (оснований четвертичного аммония) (например, бромида цетил-триметиламмония, хлорида цетилпиридиния), неионных сурфактантов, блок-сополимеров полиэтиленоксида/полипропиленоксида (Pluronics/Tetronics, тритона Х-100, додецил-β-D-глюкопиранозида) или полимерных сурфактантов (твин-40, твин-80, Brij-35), производных фузидиновой кислоты (например, тауродигидрофузидата натрия и т.д.), длинноцепочечных жирных кислот C₆-C₁₂ и их солей (например, олеиновой кислоты и каприловой кислоты), ацилкарнитинов и производных, N^α-ацилированных производных лизина, аргинина или гистидина или ацилированных по боковой цепи производных лизина или аргинина, N^α-ацилированных производных дипептидов, содержащих любое сочетание лизина, аргинина или гистидина и нейтральной или кислой аминокислоты, N^α-ацилированного производного трипептида, содержащего содержащих любое сочетание нейтральной аминокислоты и двух заряженных аминокислот, либо сурфактант может быть выбран из группы производных имидазолина или их смесей. Каждый из этих конкретных сурфактантов составляет альтернативное воплощение изобретения.In another embodiment of the present invention, the pharmaceutical composition further comprises a surfactant. In a further embodiment of the invention, the surfactant is selected from a detergent, ethoxylated castor oil, polyglycosylated glycerides, acetylated monoglycerides, sorbitan fatty acid esters, poloxamers such as 188 and 407, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene derivatives such as alkylated and alkylic and alkylic Tween-20 or Tween-80), monoglycerides or their ethoxylated derivatives, digdicerides or their polyoxyethylene derivatives, glycerol, cholic acid lots or its derivatives, lecithins, alcohols and phospholipids, glycerophospholipids (lecithins, cephalins, phosphatidylserine), glyceroglycolipids (galactopyranoside), sphingophospholipids (sphingomyelin) and sphingoglycolipids (ceramides, sodium gangliosides 5-11 7]), calcium docusate (registration number CAS [128-49-4]), potassium docate (registration number CAS [7491-09-0]), SDS (sodium dodecyl sulfate or sodium lauryl sulfate), dipalmitoyl phosphate acid, sodium caprylate, bile acids and their salts and glycine or tauri new conjugates, ursodeoxycholic acid, sodium cholate, sodium deoxycholate, sodium taurocholate, sodium glycocholate, N-hexadecyl-N, N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate, monovalent anionic surfactants (alkylarylsulfonyl sulfonyl sulfonate, l-palmito-palmito , lysophospholipids (e.g. 1-acyl-sn-glycero-3-phosphate esters of ethanolamine, choline, serine or threonine), alkyl, alkoxyl (alkyl ether) -, alkoxy (alkyl ether) derivatives of lysophosphatidyl and phosphatidylcholine, for example lauro lysophosphatidylcholine dip limmitoylphosphatidylcholine and modifications of the polar head group, such as choline, ethanolamines, phosphatidic acid, serines, threonines, glycerin, inositol and positively charged DODACs (dioctadecyldimethylammonium), DOTMA (1,2-dioleyl-3-N, N, N-trimethyl) DCP (dicetyl phosphate), BISHOP, lysophosphatidylserine and lysophosphatidyltreonine, zwitterionic surfactants (e.g., N-alkyl-N, N-dimethylammonio-1-propanesulfonates, 3-cholamido-1-propyldimethylamine phosphonyl sulfonulfonyl sulfonyl sulfonyl sulfonyl sulfonulfonyl aminosulfonyl aminosulfonyl sulfonyl sulfonyl sulfonulfonyl sulfonulfonyl aminosulfonate cationic surfactants (quaternary ammonium bases) (e.g. cetyl trimethylammonium bromide, cetyl pyridinium chloride), nonionic surfactants, polyethylene oxide / polypropylene oxide block copolymers (Pluronics / Tetronics, Triton X-100, dodecyl-β-d-aminosulfonamide glucopyr (tween-40, tween-80, Brij-35), derivatives of fusidic acid (e.g. sodium taurodihydrofusidate, etc.), C ₆ -C ₁₂ long chain fatty acids and their salts (e.g. oleic acid and caprylic acid), acylcarnitines and derivatives, N ^α -acylated derivatives x lysine, arginine or histidine, or side-chain acylated derivatives of lysine or arginine, N ^α -acylated derivatives of dipeptides comprising any combination of lysine, arginine or histidine and a neutral or acidic amino acid, N ^α -acylated derivative of a tripeptide comprising any combination containing a neutral amino acid and two charged amino acids, or the surfactant may be selected from the group of imidazoline derivatives or mixtures thereof. Each of these specific surfactants constitutes an alternative embodiment of the invention.

Использование эксципиентов, таких как консерванты, изотонические агенты и сурфактанты, в фармацевтических композициях хорошо известно специалистам в данной области техники. Можно сослаться на Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995.The use of excipients, such as preservatives, isotonic agents and surfactants, in pharmaceutical compositions is well known to those skilled in the art. Reference is made to Remington: The Science and Practice of Pharmacy , 19 ^th edition, 1995.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, которая содержит глюкагоноподобный пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, отличающейся тем, что она изготовлена способом согласно настоящему изобретению.In a further aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition which comprises a glucagon-like peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent and a pharmaceutically acceptable preservative, characterized in that it is made by the method of the present invention.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей глюкагоноподобный пептид и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, рН которой составляет между примерно 7,2 и примерно 7,8, причем эта композиция стабильна при хранении, как измерено на основании менее чем двукратного повышения флуоресценции окрашенного тиофлавином Т глюкагоноподобного пептида, содержащегося в указанной композиции, после хранения этой композиции в течение одного месяца при 37°С.In a further aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a glucagon-like peptide and at least one pharmaceutically acceptable excipient, the pH of which is between about 7.2 and about 7.8, the composition being stable during storage, as measured on the basis of less than twice increase the fluorescence of a glucagon-like peptide stained with thioflavin T contained in the composition after storing this composition for one month at 37 ° C.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, которая содержит пептид, фармацевтически приемлемое буферное вещество и фармацевтически приемлемый консервант, отличающейся тем, что указанную фармацевтическую композицию готовят способом согласно настоящему изобретению.In a further aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition which comprises a peptide, a pharmaceutically acceptable buffering agent and a pharmaceutically acceptable preservative, characterized in that said pharmaceutical composition is prepared by the method of the present invention.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения гипергликемии, при котором парентерально вводят эффективное количество фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.In a further aspect, the present invention relates to a method for treating hyperglycemia, wherein an effective amount of a pharmaceutical composition according to the present invention is parenterally administered.

Исходный глюкагоноподобный пептид может быть получен путем пептидного синтеза, например твердофазного пептидного синтеза, с использованием методов t-Вос или F-Moc или других хорошо разработанных методик. Исходный глюкагоноподобный пептид также может быть получен способом, при котором культивируют клетку-хозяина, содержащую последовательность ДНК, кодирующую этот полипептид, и способную к экспрессии этого полипептида в подходящей питательной среде в условиях, дающих возможность экспрессии этого пептида, после чего полученный в результате пептид выделяют из культуры.The starting glucagon-like peptide can be obtained by peptide synthesis, for example, solid-phase peptide synthesis, using t-Boc or F-Moc methods or other well-developed methods. An initial glucagon-like peptide can also be obtained by a method in which a host cell is cultured containing a DNA sequence encoding this polypeptide and capable of expressing this polypeptide in a suitable nutrient medium under conditions allowing expression of this peptide, after which the resulting peptide is isolated from culture.

Среда, используемая для культивирования клеток, может представлять собой любую общепринятую среду, пригодную для выращивания клеток-хозяев, такую как минимальная или комплексная среда, содержащая подходящие добавки. Подходящая среда имеется в продаже или может быть приготовлена в соответствии с опубликованными рецептами (например, в каталогах Американской коллекции типовых клеточных культур). Пептид, продуцируемый клетками, можно затем выделить из культуральной среды с помощью общепринятых методик, включающих отделение клеток-хозяев от среды путем центрифугирования или фильтрования, осаждение белковых компонентов супернатанта или фильтрата солью, например сульфатом аммония, очистку с помощью ряда хроматографических методик, например ионообменной хроматографии, гель-фильтрационной хроматографии, аффинной хроматографии или тому подобного, в зависимости от типа интересующего пептида.The medium used for culturing cells may be any conventional medium suitable for growing host cells, such as a minimal or complex medium containing suitable additives. A suitable medium is commercially available or can be prepared in accordance with published recipes (for example, in catalogs of the American type cell culture collection). The peptide produced by the cells can then be isolated from the culture medium using conventional techniques, including separating the host cells from the medium by centrifugation or filtration, precipitating the protein components of the supernatant or filtrate with a salt, for example ammonium sulfate, and purification using a number of chromatographic techniques, for example, ion exchange chromatography gel filtration chromatography, affinity chromatography, or the like, depending on the type of peptide of interest.

Последовательность ДНК, кодирующая исходный пептид, может иметь геномное или кДНК происхождение, например, может быть получена путем создания геномной или кДНК библиотеки и скрининга ее на последовательности ДНК, кодирующие полноразмерный пептид или его участок, путем гибридизации с использованием синтетических олигонуклеотидных зондов в соответствии со стандартными методиками (см., например, Sambrook, J, Fritsch, EF and Maniatis, Т, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989). Последовательность ДНК, кодирующая пептид, может быть также получена синтетически с помощью разработанных стандартных способов, например фосфоамидитового способа, описанного Beaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869, или способа, описанного Matthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801-805. Последовательность ДНК может быть также получена с помощью полимеразной цепной реакции с использованием соответствующих праймеров, например, как описано в US 4683202 или Saiki et al., Science 239 (1988), 487-491.The DNA sequence encoding the parent peptide can be of genomic or cDNA origin, for example, can be obtained by creating a genomic or cDNA library and screening it for DNA sequences encoding a full-length peptide or its portion, by hybridization using synthetic oligonucleotide probes in accordance with standard methods (see, for example, Sambrook, J, Fritsch, EF and Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989). The DNA sequence encoding the peptide can also be obtained synthetically using standard methods developed, for example, the phosphoamidite method described by Beaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869, or the method described by Matthes et al., EMBO Journal 3 ( 1984), 801-805. The DNA sequence can also be obtained by polymerase chain reaction using appropriate primers, for example, as described in US 4683202 or Saiki et al., Science 239 (1988), 487-491.

Последовательность ДНК может быть встроена в любой вектор, который можно подвергать методикам рекомбинантных ДНК, и выбор вектора будет часто зависеть от клетки-хозяина, в которую его нужно вводить. Таким образом, этот вектор может представлять собой автономно реплицирующийся вектор, то есть вектор, который существует в виде внехромосомной частицы, репликация которой независима от хромосомной репликации, например, плазмиды. Альтернативно вектор может быть таким, который при введении в клетку-хозяина интегрирует в геном этой клетки-хозяина и реплицируется вместе с хромосомой(ами), в которую(ые) он интегрирован.The DNA sequence can be integrated into any vector that can be subjected to recombinant DNA techniques, and the choice of vector will often depend on the host cell into which it is to be introduced. Thus, this vector can be an autonomously replicating vector, that is, a vector that exists as an extrachromosomal particle whose replication is independent of chromosomal replication, for example, a plasmid. Alternatively, the vector may be one which, when introduced into a host cell, integrates into the genome of that host cell and replicates together with the chromosome (s) into which it is integrated.

Вектор предпочтительно представляет собой экспрессионный вектор, в котором последовательность ДНК, кодирующая пептид, функционально связана с дополнительными сегментами, необходимыми для транскрипции ДНК, такими как промотор. Промотор может представлять собой любую последовательность ДНК, которая проявляет транскрипционную активность в выбранной клетке-хозяине, и может быть получен из генов, кодирующих белки, либо гомологичные, либо гетерологичные для клетки-хозяина. Примеры подходящих промоторов для направления транскрипции ДНК, кодирующей пептид по изобретению, в ряде клеток-хозяев хорошо известны в данной области техники, см., например, Sambrook et al., выше.The vector is preferably an expression vector in which the DNA sequence encoding the peptide is operably linked to additional segments necessary for transcription of the DNA, such as a promoter. The promoter can be any DNA sequence that exhibits transcriptional activity in a selected host cell, and can be obtained from genes encoding proteins, either homologous or heterologous to the host cell. Examples of suitable promoters for directing the transcription of DNA encoding a peptide of the invention in a number of host cells are well known in the art, see, for example, Sambrook et al., Supra.

Последовательность ДНК, кодирующая пептид, может быть также, если необходимо, функционально связана с подходящим терминатором, сигналами полиаденилирования, транскрипционными энхенсерными последовательностями и трансляционными энхенсерными последовательностями. Рекомбинантный вектор по изобретению может дополнительно содержать последовательность ДНК, обеспечивающую репликацию вектора в интересующей клетке-хозяине.The DNA sequence encoding the peptide can also be, if necessary, functionally linked to a suitable terminator, polyadenylation signals, transcriptional enhancer sequences and translational enhancer sequences. The recombinant vector of the invention may further comprise a DNA sequence that replicates the vector in the host cell of interest.

Вектор может также содержать селективный маркер, например ген, продукт которого восполняет дефект клетки-хозяина либо придает ей устойчивость к лекарству, например к ампициллину, канамицину, тетрациклину, хлорамфениколу, неомицину, гигромицину или метотрексату.The vector may also contain a selective marker, for example a gene, the product of which fills the defect of the host cell or imparts resistance to the drug, for example, ampicillin, kanamycin, tetracycline, chloramphenicol, neomycin, hygromycin or methotrexate.

Для направления исходного пептида по настоящему изобретению в секреторный путь клеток-хозяев рекомбинантный вектор может содержать сигнальную последовательность (также известную как лидерная последовательность, препропоследовательность или препоследовательность). Секреторную сигнальную последовательность присоединяют к последовательности ДНК, кодирующей пептид, в правильной рамке считывания. Секреторные сигнальные последовательности обычно располагают в 5' направлении к последовательности ДНК, кодирующей пептид. Секреторная сигнальная последовательность может быть такой, которая в норме связана с этим пептидом, либо из гена, кодирующего другой секретируемый белок.To direct the parent peptide of the present invention to the secretory pathway of host cells, the recombinant vector may contain a signal sequence (also known as a leader sequence, prepro sequence or presequence). The secretory signal sequence is attached to the DNA sequence encoding the peptide in the correct reading frame. Secretory signal sequences are usually located in the 5 'direction to the DNA sequence encoding the peptide. The secretory signal sequence may be one that is normally linked to this peptide, or from a gene encoding another secreted protein.

Методики, используемые для лигирования последовательностей ДНК, кодирующих настоящий пептид, промотор и, возможно, терминатор и/или секреторную сигнальную последовательность, соответственно, и для их вставки в подходящие векторы, содержащие информацию, необходимую для репликации, хорошо известны специалистам в данной области техники (см., например, Sambrook etat.., выше).The techniques used to ligate DNA sequences encoding the present peptide, promoter, and possibly terminator and / or secretory signal sequence, respectively, and to insert them into suitable vectors containing the information necessary for replication, are well known to specialists in this field of technology ( see, for example, Sambrook etat .., above).

Клетка-хозяин, в которую вводят последовательность ДНК или рекомбинантный вектор, может представлять собой любую клетку, которая способна продуцировать настоящий пептид, и включает бактерии, дрожжи, грибы и высшие эукариотические клетки. Примерами подходящих клеток-хозяев, хорошо известных и используемых в данной области техники, являются без ограничения E.coli, Saccharomyces cerevisiae или клеточные линии млекопитающих ВНK или СНО.A host cell into which a DNA sequence or recombinant vector is introduced may be any cell that is capable of producing the present peptide and includes bacteria, yeast, fungi, and higher eukaryotic cells. Examples of suitable host cells well known and used in the art are, without limitation, E. coli, Saccharomyces cerevisiae, or mammalian BHK or CHO cell lines.

Далее настоящее изобретение проиллюстрировано приведенными ниже примерами, которые, однако, не следует рассматривать как ограничивающие объем защиты. Признаки, раскрытые в приведенном выше описании и в последующих примерах, как отдельно, так и в любом их сочетании могут представлять собой материал для реализации изобретения в различных его формах.The present invention is further illustrated by the following examples, which, however, should not be construed as limiting the scope of protection. The features disclosed in the above description and in the following examples, both individually and in any combination thereof, may constitute material for implementing the invention in its various forms.

Осуществление изобретенияThe implementation of the invention

ПРИМЕРЫEXAMPLES

Далее "Соединение 1" означает: Arg³⁴, Lys²⁶ (N^ε-(γ-Glu(N^α-гексадеканоил)))-GLP-1(7-37).Further, “Compound 1” means: Arg ³⁴ , Lys ²⁶ (N ^ε - (γ-Glu (N ^α -hexadecanoyl))) - GLP-1 (7-37).

Перед лиофилизацией раствора или суспензии пептида их рН был доведен до желаемого значения. После лиофилизации фармацевтические препараты готовили в соответствии с общими методиками 1 и 2.Before lyophilization of the solution or suspension of the peptide, their pH was adjusted to the desired value. After lyophilization, pharmaceutical preparations were prepared in accordance with general methods 1 and 2.

Общая методика 1General method 1

Консервант, изотонический агент и буферное вещество растворяли в воде и доводили рН до 7,4. После этого растворяли лиофилизированный пептид при медленном перемешивании. Доводили рН до 7,4, используя гидроксид натрия и/или соляную кислоту. Наконец, препарат фильтровали через фильтр 0,22 мкм.The preservative, isotonic agent and buffering agent were dissolved in water and the pH was adjusted to 7.4. After that, the lyophilized peptide was dissolved with slow stirring. The pH was adjusted to 7.4 using sodium hydroxide and / or hydrochloric acid. Finally, the drug was filtered through a 0.22 μm filter.

Общая методика 2General method 2

Консервант, изотонический агент и буферное вещество растворяли в воде и доводили рН до 7,4. Пептид растворяли в воде при медленном перемешивании. Эти два раствора смешивали и доводили рН до 7,4, используя гидроксид натрия и/или соляную кислоту. Наконец, препарат фильтровали через фильтр 0,22 мкм.The preservative, isotonic agent and buffering agent were dissolved in water and the pH was adjusted to 7.4. The peptide was dissolved in water with slow stirring. The two solutions were mixed and adjusted to pH 7.4 using sodium hydroxide and / or hydrochloric acid. Finally, the drug was filtered through a 0.22 μm filter.

Другим путем получения стабильного фармацевтического препарата является повышение рН выше нейтрального рН (>8) в растворе, содержащем лекарственное вещество. Этот фармацевтический препарат готовят, как описано в общей методике 3.Another way to obtain a stable pharmaceutical product is to increase the pH above a neutral pH (> 8) in a solution containing a drug substance. This pharmaceutical preparation is prepared as described in General Procedure 3.

Общая методика 3General method 3

Консервант, изотонический агент и буферное вещество растворяли в воде и доводили рН до 7,4 или ниже. Соединение 1 растворяли в воде при медленном перемешивании и доводили рН до 11,5 добавлением гидроксида натрия. Примерно через 5 мин эти два раствора смешивали и доводили рН до 7,4, используя гидроксид натрия и/или соляную кислоту. Наконец, препарат фильтровали через фильтр 0,22 мкм.The preservative, isotonic agent and buffering agent were dissolved in water and the pH was adjusted to 7.4 or lower. Compound 1 was dissolved in water with slow stirring and the pH was adjusted to 11.5 by the addition of sodium hydroxide. After about 5 minutes, the two solutions were mixed and the pH adjusted to 7.4 using sodium hydroxide and / or hydrochloric acid. Finally, the drug was filtered through a 0.22 μm filter.

Физическую стабильность препаратов оценивают с помощью теста с окрашиванием тиофлавином Т. Физическую стабильность различных препаратов характеризуют на основании их склонности к образованию фибрилл. Способом определения присутствия фибрилл является тест с окрашиванием тиофлавином Т. Гистологический тиазоловый краситель Тиофлавин Т (ТhТ) используют в качестве индикатора образования амилоидных фибрилл. Этот способ основан на флуоресцентных характеристиках ТhТ. В присутствии амилоидных фибрилл флуоресценция ТhТ проявляет максимум возбуждения при 450 нм и усиленную эмиссию при 482 нм. Интенсивность флуоресценции ТhТ, как показано, является линейной с увеличением концентрации амилоидных фибрилл. Физическую стабильность препаратов оценивают с помощью ТhТ-теста после хранения препарата в заполненных доверху стеклянных картриджах в течение различных периодов времени.The physical stability of the drugs is evaluated using a test with staining with thioflavin T. The physical stability of various drugs is characterized on the basis of their tendency to form fibrils. A method for determining the presence of fibrils is a test with staining with thioflavin T. The histological thiazole stain Thioflavin T (ThT) is used as an indicator of the formation of amyloid fibrils. This method is based on the fluorescence characteristics of ThT. In the presence of amyloid fibrils, ThT fluorescence exhibits a maximum of excitation at 450 nm and enhanced emission at 482 nm. The ThT fluorescence intensity, as shown, is linear with an increase in the concentration of amyloid fibrils. The physical stability of the preparations was evaluated using the ThT test after storing the preparation in glass cartridges filled to the top for various periods of time.

Результаты для фармацевтического препарата, содержащего лекарственное вещество, имеющего рН выше нейтрального (>8) перед лиофильной сушкойResults for a pharmaceutical preparation containing a drug having a pH above neutral (> 8) before freeze drying

Результаты ThT-теста в начале (t=0) и после 1 месяца хранения при 37°С можно видеть в таблице 1.The results of the ThT test at the beginning (t = 0) and after 1 month of storage at 37 ° C can be seen in table 1.

Таблица 1Table 1 Результаты ThT-теста (единицы флуоресценции) после 1 недели или 1 месяца ускоренного тестирования на стабильностьThT test results (fluorescence units) after 1 week or 1 month of accelerated stability testing рН соединения 1 перед лиофильной сушкойpH of compound 1 before freeze drying Концентрация соединения 1 в фармацевтическом препаратеThe concentration of compound 1 in a pharmaceutical preparation pН фармацевтического препаратаpH of a pharmaceutical preparation Единицы флуоресценции после хранения при 37°СFluorescence units after storage at 37 ° C Т=0
недельT = 0
weeks Т=1
неделяT = 1
a week Т=1
месяцT = 1
month 8,08.0 3 мг/мл3 mg / ml 7,47.4 66 Не определялиNot determined 2828 9,59.5 3 мг/мл3 mg / ml 7,47.4 66 Не определялиNot determined 77 11,511.5 3 мг/мл3 mg / ml 7,47.4 66 Не определялиNot determined 77 8,08.0 6,25 мг/мл6.25 mg / ml 7,47.4 1313 20twenty 3737 9,59.5 6,25 мг/мл6.25 mg / ml 7,47.4 14fourteen 1313 1313 11,511.5 6,25 мг/мл6.25 mg / ml 7,47.4 14fourteen 1313 14fourteen

Из таблицы видно, что фармацевтические препараты, содержащие соединение 1, с рН, доведенным до 9,5 и 11,5 перед лиофильной сушкой, более физически стабильны после 1 недели и 1 месяца хранения при 37°С (поскольку не наблюдается увеличение ThT) по сравнению с фармацевтическим препаратом, содержащим соединение 1, с рН, доведенным до 8,0 перед лиофильной сушкой (где наблюдается увеличение ThT).The table shows that pharmaceutical preparations containing compound 1, with a pH adjusted to 9.5 and 11.5 before freeze drying, are more physically stable after 1 week and 1 month of storage at 37 ° C (since there is no increase in ThT) by compared with a pharmaceutical preparation containing compound 1, with a pH adjusted to 8.0 before freeze drying (where an increase in ThT is observed).

Результаты для фармацевтического препарата, изготовленного с повышением рН выше нейтрального (>8) в растворе, содержащем лекарственное вещество.Results for a pharmaceutical preparation made with an increase in pH above neutral (> 8) in a solution containing the drug substance.

Таблица 2table 2 Результаты ThT-теста (единицы флуоресценции) после 1 месяца ускоренного тестирования на стабильностьThT test results (fluorescence units) after 1 month of accelerated stability testing рН раствора, содержащего лекарствен
ное веществоpH of a solution containing a drug
substance Концентрация соединения 1 в фармацевтическом препаратеThe concentration of compound 1 in a pharmaceutical preparation рН фармацевтического препаратаpH of a pharmaceutical Единицы флуоресценции после хранения при 37°СFluorescence units after storage at 37 ° C Т=0 недельT = 0 weeks Т=1 неделяT = 1 week Т=1 месяцT = 1 month 8,08.0 6,25 мг/мл6.25 mg / ml 7,47.4 14fourteen 20twenty 4141 11,511.5 6,25 мг/мл6.25 mg / ml 7,47.4 1313 1212 1313

Из таблицы видно, что фармацевтический препарат, изготовленный с повышением рН выше нейтрального (>8) в растворе, содержащем лекарственное вещество, физически стабилен после 1 месяца хранения при 37°С (поскольку видно отсутствие увеличения ThT) по сравнению с фармацевтическим препаратом, изготовленным без увеличения рН до значения выше нейтрального (>8).The table shows that a pharmaceutical preparation manufactured with an increase in pH above neutral (> 8) in a solution containing a drug substance is physically stable after 1 month of storage at 37 ° C (since there is no increase in ThT) as compared to a pharmaceutical preparation made without increase in pH to a value above neutral (> 8).

Claims

1. A method of increasing the shelf life of a pharmaceutical composition comprising GLP-1, an analog of GLP-1, a derivative of GLP-1 or a derivative of an analog of GLP-1, a pharmaceutically acceptable buffer and a pharmaceutically acceptable preservative, wherein said pharmaceutical composition is prepared from a bulk peptide product, which has been processed at a pH in the range from 8.1 to 11.5, the bulk preformed peptide product being prepared by lyophilization of a solution or suspension of said GLP-1, GLP-1 analogue, GLP-1 derivative, or analogue of GLP-1 at the indicated pH.

2. The method according to claim 1, where the pH range is from 8.5 to 9.6.

3. The method according to claim 1, where the pH range is from 9.0 to 9.6.

4. The method according to claim 1, in which the bulk finished peptide product was subjected to processing at pH in the specified interval for a period of from 10 minutes to 12 hours and at a temperature of from about 5 ° C to about 25 ° C.

5. The method according to claim 1, in which the bulk ready-made peptide product was processed at pH in the indicated interval for a period of from 1 to 30 minutes and at a temperature of from about 5 ° C to about 25 ° C.

6. The method according to claim 1, where the specified pharmaceutical composition is a solution.

7. The method according to claim 1, where the specified pharmaceutical composition is a suspension.

8. The method according to claim 1, where the specified pharmaceutical composition is a solid.

9. The method of claim 8, wherein said pharmaceutical composition must be reconstituted with water for injection or another suitable solvent.

10. The method according to claim 1, where the pH of the pharmaceutical composition is lower than the pH at which a solution or suspension of the bulk peptide product is processed.

11. The method according to claim 1, where the pH of the pharmaceutical composition is at least 0.8 pH units lower than the pH at which a solution or suspension of a bulk peptide product is processed.

12. The method according to claim 1, where the pH of the pharmaceutical composition is at least 1.5 pH units lower than the pH at which a solution or suspension of a bulk peptide product is processed.

13. The method according to claim 1, where the pharmaceutical composition is suitable for parenteral administration, for example, by injection or infusion.

14. The method according to claim 1, where the pH of the pharmaceutical composition or a reconstituted solution of the pharmaceutical composition is from 7.0 to 8.0, preferably from 7.2 to 7.8.

15. The method according to claim 1, where the isoelectric point of GLP-1, GLP-1 analogue, GLP-1 derivative or GLP-1 derivative is from 3.0 to 7.0, preferably from 4.0 to 6.0.

16. The method according to claim 1, where the GLP-1 analogue is selected from the group consisting of Gly ^8- GLP-1 (7-36) amide, Gly ^8- GLP-1 (7-37), Val ^8- GLP- 1 (7-36) -amide, Val ⁸ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Asp ²² -GLP-1 (7-36) -amide, Val ⁸ Asp ²² -GLP-1 (7-37) , Val ⁸ Clu ²² -GLP-1 (7-36) amide, Val ⁸ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Lys-GLP-1 (7-36) amide, Val ⁸ Lys ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Arg ²² -GLP-1 (7-36) -amide, Val ⁸ Arg ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ His ²² -GLP-1 (7 -36) -amide, Val ⁸ His ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁹ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² Val ²⁵ -GLP-1 (7-37 ), Val ⁸ Tyr ¹⁶ Glu ²² GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ^22- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Leu ¹⁶ Glu ^22- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Tyr ¹⁸ Glu ²² -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² His ³⁷ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² lle ³³ -GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² Val ²⁵ lle ^33- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² lle ^33- GLP-1 (7-37), Val ⁸ Glu ²² Val ²⁵ lle ^33- GLP-1 (7- 37), Val ⁸ Trp ¹⁶ Glu ²² Val ²⁵ -GLP-1 (7-37) and their analogs.

17. The method according to claim 1, where the derivative of the GLP-1 analog is Arg ³⁴ , Lys ²⁶ (N ^ε - (γ-Glu (N ^α -hexadecanoyl))) - GLP-1 (7-37).

18. The method according to claim 1, where the solution or suspension of bulk ready-made peptide product is subjected to processing at a pH of 9.5, and the pH of the pharmaceutical composition is 7.4.

19. The method according to claim 1, where the concentration of GLP-1, GLP-1 analog, GLP-1 derivative or GLP-1 analog derivative in the pharmaceutical composition is from 0.1 to 50 mg / ml, from 0.1 to 25 mg / ml, from 1 to 25 mg / ml, from 1 to 10 mg / ml or from 3 to 8 mg / ml.

20. The method according to claim 1, where the specified buffer is selected from orthophosphate, TRIS, glycine, N-glycylglycine, sodium acetate, sodium carbonate, glycylglycine, histidine, lysine, arginine, sodium phosphate and sodium citrate, or mixtures thereof.

21. The method according to claim 1, where the specified preservative is selected from phenol, meta-cresol, methyl para-hydroxybenzoate, propyl para-hydroxybenzoate, 2-phenoxyethanol, butyl para-hydroxybenzoate, 2-phenylethanol, benzyl alcohol, chlorobutanol and thiomerosal or mixtures thereof.

22. The method according to claim 1, where the pharmaceutical composition contains an isotonic agent.

23. The method according to item 22, where the isotonic agent is sodium chloride, xylitol, mannitol, sorbitol, glycerin, glucose, maltose, sucrose, L-glycine, L-histidine, arginine, lysine, isoleucine, aspartic acid, tryptophan, threonine , dimethyl sulfone, polyethylene glycol, propylene glycol or mixtures thereof.

24. The method according to claim 1, where the pharmaceutical composition contains a surfactant.

25. A pharmaceutical composition comprising GLP-1, an analog of GLP-1, a derivative of GLP-1 or a derivative of an analog of GLP-1, characterized in that it is obtained by the method according to any one of claims 1-24.

26. The pharmaceutical composition according A.25, having a pH between about 7.2 and about 7.8, containing GLP-1, an analog of GLP-1, a derivative of GLP-1 or a derivative of an analog of GLP-1 and at least one pharmaceutically acceptable excipient which is storage stable as measured by the thioflavin T stain test based on a less than twofold increase in fluorescence of GLP-1, GLP-1 analogue, GLP-1 derivative or GLP-1 derivative analogue contained in said composition, after storage of this composition for one month at 37 ° C.

27. A method of treating hyperglycemia, in which an effective amount of the pharmaceutical composition according to any one of claims 25 and 26 is parenterally administered.