RU2411947C1

RU2411947C1 - Medication increasing antitumour effect of methotrexate

Info

Publication number: RU2411947C1
Application number: RU2009122188/15A
Authority: RU
Inventors: Ольга Вячеславовна Калинина (RU); Ольга Вячеславовна Калинина; Борис Александрович Фролов (RU); Борис Александрович Фролов; Александр Альбертович Штиль (RU); Александр Альбертович Штиль; Нина Михайловна Перетолчина (RU); Нина Михайловна Перетолчина; Зоя Сергеевна Смирнова (RU); Зоя Сергеевна Смирнова
Priority date: 2009-06-09
Filing date: 2009-06-09
Publication date: 2011-02-20
Also published as: RU2009122188A

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention relates to medications and deals with application of miliacin as medication which increases antitumour effect of methotrexate.

EFFECT: extension of arsenal of medications, which increase antitumour effect of methotrexate.

3 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к химиотерапии онкологических больных, и может найти применение при разработке подходов повышения эффективности противоопухолевых препаратов (группы антиметаболитов).The invention relates to medicine, namely to chemotherapy of cancer patients, and may find application in the development of approaches to increase the effectiveness of antitumor drugs (groups of antimetabolites).

Химиотерапия злокачественных опухолей является одним из основных методов лечения онкологических больных, однако применение противоопухолевых препаратов сопровождается выраженными побочными эффектами из-за их низкой избирательности действия (Ветошкина Т.В., Дубская Т.Ю., Гольдберг В.Е., 1997; Кинзирская Ю.А., Богуш Т.А., Остапчук Н.В. и др., 2003; Молодых О.П., Лушникова Е.Л., Клинникова М.Г. и др., 2006). Химиопрепараты оказывают повреждающее действие как на опухолевые клетки, так и на нормальные клетки и ткани организма - костный мозг, лимфоидные органы, эпителий полости рта и желудочно-кишечного тракта, печень, волосяные фолликулы, репродуктивные органы. Как следствие указанных особенностей действия химиопрепаратов на организм к их побочным эффектам следует отнести миелодепрессию, диспептические расстройства, подавление реакций гуморального и клеточного иммунитета, функций репродуктивных органов, печени, аллопецию. В связи с этим разработка подходов, направленных на повышение эффективности противоопухолевых препаратов и уменьшение побочных эффектов химиотерапии, является актуальной задачей. К настоящему времени показана перспективность использования с этой целью биологически активных веществ растительного происхождения, обладающих гепатопротекторным действием и минимальными побочными эффектами (А.А.Саратиков, А.И.Венгеровский, 1995). Среди последних определенного внимания заслуживают тритерпеноиды как вещества с выраженной гепатотропной активностью (J. Liu et al, 1994; S. Martin-Aragon et al, 2001; J. Gao et al, 2004; Kinoshita et al, 2007). Такая активность установлена, в частности, у милиацина - пентациклического тритерпеноида, выделенного из просяного масла (Л.Е.Олифсон с соавт., 1991). В ранее выполненных исследованиях было показано, что в условиях острой интоксикации организма четыреххлористым углеродом, милиацин обусловливал уменьшение некротических и дистрофических изменений в печени, а также способствовал ускорению в ней регенераторных процессов (М.М.Павлова, 1976). В последующем была продемонстрирована способность милиацина оказывать мембраностабилизирующее действие (А.Н.Чернов, М.М.Павлова, Л.Е.Олифсон, 1983; А.В.Кириллова, 2004) и снижать процессы липопероксидации - ПОЛ (Т.В.Панфилова, А.А.Штиль, Б.А.Фролов, 2006). Вместе с тем уменьшение риска побочных эффектов химиотерапии может представлять практический интерес лишь в случае, если тритерпеноид не снижает противоопухолевого действия химиопрепарата. Сведения по данному вопросу, приводимые в литературе, свидетельствуют о том, что некоторые производные тритерпеноидов, а именно бетулоновой и глицирризиновой кислоты, обладают таким эффектом (Т.Г.Разина, Е.П.Зуева, Е.Н.Амосова и др., 1999; И.В.Сорокина, Т.Г.Толстикова, Н.А.Жукова и др., 2006; Гольдберг Е.Д., Амосова Е.Н., Зуева Е.П. и др., 2008). Более того, имеются данные о их стимулирующем влиянии на эффективность химиотерапии опухоли, которое, в частности, было обнаружено при сочетанном использовании циклофосфана и глицерама - монозамещенной аммонийной соли глицирризиновой кислоты, выделенной из корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) (Т.Г.Разина, Е.П.Зуева, Е.Н.Амосова и др., 1999; Е.Д.Гольдберг, Е.Н.Амосова, Е.П.Зуева и др., 2008). Вместе с тем для милиацина подобная активность не описана.Chemotherapy of malignant tumors is one of the main methods of treatment of cancer patients, however, the use of anticancer drugs is accompanied by pronounced side effects due to their low selectivity of action (Vetoshkina T.V., Dubskaya T.Yu., Goldberg V.E., 1997; Kinzirskaya Yu .A., Bogush T.A., Ostapchuk N.V. et al., 2003; Molodoy O.P., Lushnikova E.L., Klinnikova M.G. et al., 2006). Chemotherapy has a damaging effect on both tumor cells and normal cells and body tissues - bone marrow, lymphoid organs, epithelium of the oral cavity and gastrointestinal tract, liver, hair follicles, reproductive organs. As a consequence of these features of the action of chemotherapeutic agents on the body, their side effects include myelodepression, dyspeptic disorders, suppression of the reactions of humoral and cellular immunity, the functions of the reproductive organs, liver, and alopecia. In this regard, the development of approaches aimed at increasing the effectiveness of antitumor drugs and reducing the side effects of chemotherapy is an urgent task. To date, the prospects of using biologically active substances of plant origin with hepatoprotective effect and minimal side effects has been shown to be beneficial (A.A. Saratikov, A.I. Vengerovsky, 1995). Among the latter, triterpenoids as substances with pronounced hepatotropic activity deserve particular attention (J. Liu et al, 1994; S. Martin-Aragon et al, 2001; J. Gao et al, 2004; Kinoshita et al, 2007). Such activity has been established, in particular, in miliacin, a pentacyclic triterpenoid isolated from millet oil (L.E. Olifson et al., 1991). In previous studies, it was shown that in conditions of acute intoxication of the body with carbon tetrachloride, miliacin caused a decrease in necrotic and dystrophic changes in the liver, and also contributed to the acceleration of regenerative processes in it (M.M. Pavlova, 1976). Subsequently, the ability of miliacin to exert a membrane-stabilizing effect was demonstrated (A.N. Chernov, M.M. Pavlova, L.E. Olifson, 1983; A.V. Kirillova, 2004) and to reduce lipoperoxidation processes - POL (T.V. Panfilova , A.A. Shtil, B.A. Frolov, 2006). At the same time, reducing the risk of side effects of chemotherapy can be of practical interest only if the triterpenoid does not reduce the antitumor effect of the chemotherapy. Information on this issue, cited in the literature, indicates that some derivatives of triterpenoids, namely betulonic and glycyrrhizic acid, have such an effect (T.G. Razina, E.P. Zueva, E.N. Amosova, etc., 1999; I.V. Sorokina, T.G. Tolstikova, N.A. Zhukova et al., 2006; Goldberg E.D., Amosova E.N., Zueva E.P. et al., 2008). Moreover, there is evidence of their stimulating effect on the effectiveness of tumor chemotherapy, which, in particular, was found with the combined use of cyclophosphamide and glyceram, a monosubstituted ammonium salt of glycyrrhizic acid, isolated from the roots of licorice (Glycyrrhiza glabra L.) (T.G. Razina, E.P. Zueva, E.N. Amosova et al., 1999; E.D. Goldberg, E.N. Amosova, E.P. Zueva et al., 2008). At the same time, similar activity has not been described for miliacin.

Новизной предлагаемого изобретения является выявленное свойство тритерпеноида милиацина повышать терапевтическую активность противоопухолевых препаратов, в частности метотрексата.The novelty of the invention is the identified property of triterpenoid miliacin to increase the therapeutic activity of antitumor drugs, in particular methotrexate.

Существенным отличием является использование милиацина в качестве средства, повышающего противоопухолевый эффект метотрексата.A significant difference is the use of miliacin as a means of increasing the antitumor effect of methotrexate.

На основании масс-, ЯМР- и ИК-спектров, хроматографической однородности и качественного состава препарат отнесен к группе пентациклических тритерпенов, имеющих структуру 3-β-метокси-Δ¹⁸-олеанена. Милиацин представляет собой вещество белого цвета с температурой плавления 285-286°C. Он оптически активен, нерастворим в воде, слабо растворим в этиловом спирте, диэтиловом эфире, ацетоне, хорошо растворим в хлороформе. Милиацин обладает хорошей переносимостью в диапазоне доз от 2 до 1000 мг/кг. ЛД₅₀ этого соединения больше 1000 мг/кг, что свидетельствует об отсутствии у него токсических свойств (Олифсон Л.Е., Осадчая Н.Д., Нузов Б.Г. и др., 1991).Based on the mass, NMR and IR spectra, chromatographic uniformity and qualitative composition, the preparation is assigned to the group of pentacyclic triterpenes having the structure of 3-β-methoxy-Δ ¹⁸ -oleanene. Milyacin is a white substance with a melting point of 285-286 ° C. It is optically active, insoluble in water, slightly soluble in ethyl alcohol, diethyl ether, acetone, soluble in chloroform. Milyacin has good tolerance in the range of doses from 2 to 1000 mg / kg. The LD _{50 of} this compound is more than 1000 mg / kg, which indicates the absence of toxic properties (Olifson L.E., Osadchaya N.D., Nuzov B.G. et al., 1991).

Химическая структура пентациклического тритерпеноида-милиацина (3-β-метокси-Δ¹⁸-олеанена)Chemical structure of pentacyclic triterpenoid-miliacin (3-β-methoxy-Δ ¹⁸ -oleanene)

Описание экспериментаExperiment description

Эксперименты проведены на 63 мышах - самцах гибридов I поколения BDF₁ (C₅₇B1/6×DBA/2), полученных из питомника РАМН «Столбовая», массой 20-22 г. В качестве модели использовали перевиваемую эпидермоидную карциному легких Льюис (LLC). Штамм карциномы Льюис получен из лаборатории экспериментальной терапии метастазов НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН и поддерживался путем внутримышечных перевивок на мышах-самцах линии C₅₇B1/6. Для проведения эксперимента опухолевую ткань измельчали до гомогенной консистенции, добавляли среду 199 (1:10) и по 0,5 мл полученной суспензии (≈50 мг опухолевой массы) вводили подкожно в область правой подмышечной впадины мышам-самцам BDF₁. В работе использован штамм LLC третьего пассажа (Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др., 2005). После трансплантации опухолевых клеток LLC животные были разделены на четыре группы:The experiments were performed on 63 mice - male hybrids of the first generation BDF ₁ (C ₅₇ B1 / 6 × DBA / 2), obtained from the Stolbovaya RAMS nursery, weighing 20-22 g. Lewis transplantable epidermoid lung carcinoma (LLC) was used as a model . Lewis carcinoma strain obtained from the laboratory of experimental therapy of metastases NII EDiTO RONTs im. NN Blokhina RAMS and was supported by intramuscular inoculations on male mice line C ₅₇ B1 / 6. For the experiment, the tumor tissue was crushed to a homogeneous consistency, medium 199 (1:10) was added, and 0.5 ml of the resulting suspension (≈50 mg of the tumor mass) was injected subcutaneously into the area of the right axillary cavity in male BDF ₁ mice. The strain of LLC of the third passage was used in the work (Treschalina E.M., Zhukova O.S., Gerasimova G.K. et al., 2005). After transplantation of tumor cells LLC LLC animals were divided into four groups:

I - мыши (18 животных) нелеченные; II - мыши (15 животных), получавшие через 48 часов после инокуляции опухоли внутрибрюшинно однократно МТХ; III - мыши (15 животных), получавшие через 48 часов после перевивки опухоли МТХ с последующим 3-кратным введением растворителя милиацина - твина-21 в 0,9% растворе хлорида натрия (1,6×10^-7 моль/кг); IV - мыши (15 животных), получавшие через 48 часов после перевивки опухоли МТХ с последующим 3-кратным введением милиацина.I - mice (18 animals) untreated; II - mice (15 animals), received 48 hours after inoculation of the tumor intraperitoneally once MTX; III - mice (15 animals), received 48 hours after transplantation of an MTX tumor followed by 3-fold administration of a solvent of miliacin - Tween-21 in 0.9% sodium chloride solution (1.6 × 10 ^-7 mol / kg); IV - mice (15 animals), received 48 hours after transplantation of an MTX tumor followed by 3-fold administration of miliacin.

МТХ использовали австрийской фирмы-производителя «Эбеве» (серия 700045; срок годности до 12.09). Препарат вводили в дозе 10 мг/кг массы тела. Для оценки влияния милиацина на противоопухолевый эффект МТХ тритерпеноид вводили трехкратно внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг массы тела: через 1 час после введения МТ и в последующие два дня. Критериями оценки противоопухолевого эффекта служили (Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др., 2005):MTX was used by the Austrian manufacturer Ebeve (series 700045; shelf life until 12.09). The drug was administered at a dose of 10 mg / kg body weight. To assess the effect of miliacin on the antitumor effect of MTX, the triterpenoid was administered three times intraperitoneally at a dose of 2 mg / kg body weight: 1 hour after MT administration and the next two days. The evaluation criteria for the antitumor effect were (Treschalina E.M., Zhukova O.S., Gerasimova G.K. et al., 2005):

Торможение роста опухоли (ТРО, %).Inhibition of tumor growth (TPO,%).

Измеряли три максимальных взаимно перпендикулярных размера опухоли: длина (L), ширина (S), высота (H) у каждого животного и вычисляли объем (V), а затем средний объем опухоли в группе. Измерение объема опухоли проводили на 5, 7, 12, 17 и 19 сутки после введения МТХ.Three maximum mutually perpendicular tumor sizes were measured: length (L), width (S), height (H) for each animal, and volume (V) was calculated and then the average tumor volume in the group. Tumor volume was measured on days 5, 7, 12, 17, and 19 after administration of MTX.

V (мм³)=L×S×HV (mm ³ ) = L × S × H

Торможение роста опухоли вычисляли по формулеInhibition of tumor growth was calculated by the formula

ТРО(%)=(Vк-Vo)/Vк×100,SRW (%) = (Vк-Vo) / Vк × 100,

где Vк - средний объем (мм) опухолей в нелеченной группе (I),where Vк is the average volume (mm) of tumors in the untreated group (I),

Vo - средний объем опухолей (мм³) в сравниваемых леченных группах (II, III, IV).Vo is the average volume of tumors (mm ³ ) in the compared treated groups (II, III, IV).

Увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %)Increase in life expectancy (VL,%)

Сравнительную оценку противоопухолевого эффекта по продолжительности жизни нелеченных животных и животных сравниваемых леченных групп (II, III, IV) проводили после гибели всех животных от опухолевого процесса, вычисляя среднюю продолжительность жизни (СПЖ) (дни).A comparative assessment of the antitumor effect on the life expectancy of untreated animals and animals of the compared treated groups (II, III, IV) was carried out after the death of all animals from the tumor process, calculating the average life expectancy (LSS) (days).

Увеличение продолжительности жизни рассчитывали по формуле:The increase in life expectancy was calculated by the formula:

УПЖ(%) = (СПЖо-СПЖк)/СПЖк×100,UPZh (%) = (SPZhO-SPZhk) / SPZhk × 100,

где СПЖк - средняя продолжительность жизни животных в нелеченной группе, СПЖо - средняя продолжительность жизни животных в сравниваемых леченных группах. Минимальные критерии активности: торможение роста опухоли ≥50%; увеличение продолжительности жизни ≥25%.where FFA is the average life expectancy of animals in the untreated group, FFA is the average life expectancy of animals in the compared treated groups. Minimum activity criteria: inhibition of tumor growth ≥50%; increase in life expectancy of ≥25%.

Результаты обрабатывали с использованием непараметрического критерия X² и критерия Стьюдента (Гублер Е.В., Генкин А.А., 1973). Различия считали статистически достоверными при p<0,05.The results were processed using nonparametric criterion X ² and student criterion (Gubler E.V., Genkin A.A., 1973). Differences were considered statistically significant at p <0.05.

Анализ динамики роста LLC (фиг.1) свидетельствует о том, что во всех группах у животных, получавших МТХ (II, III, IV), препарат вызывал замедление роста опухолей. Однако, если у животных, получавших только МТХ (группа II) или МТХ с растворителем (группа III), значимое ТРО наблюдали лишь на протяжении 7 суток после введения МТХ (ТРО=77%, 54% и 83%, 59% соответственно) (фиг.2), то у мышей IV группы, которым вводили МТХ + милиацин, значимое ТРО отмечали в течение всего периода наблюдения (ТРО=91%, 89%, 84%, 63%, 60% соответственно срокам измерения опухоли). Следует отметить, что даже на 19 сутки после лечения ТРО у мышей IV группы сохранялось высоким и соответствовало таковому у животных II и III групп на 7 сутки после введения МТХ.Analysis of LLC growth dynamics LLC (Fig. 1) indicates that in all groups of animals treated with MTX (II, III, IV), the drug caused a slowdown in tumor growth. However, if animals receiving only MTX (group II) or MTX with a solvent (group III), significant TPO was observed only for 7 days after administration of MTX (TPO = 77%, 54% and 83%, 59%, respectively) ( figure 2), in group IV mice that were injected with MTX + mylacin, significant TPO was noted during the entire observation period (TPO = 91%, 89%, 84%, 63%, 60%, respectively, of the tumor measurement time). It should be noted that even on the 19th day after treatment with TPO, mice of group IV remained high and corresponded to that in animals of group II and III on day 7 after administration of MTX.

Применение милиацина позволило получить высокий противоопухолевый эффект у мышей (IV группа), леченных МТХ с последующим трехкратным введением тритерпеноида. Действие МТХ в комбинации с милиацином увеличило продолжительность жизни мышей, в среднем, на 36% по сравнению с нелеченными животными (фиг.3), при этом значение УПЖ в этой группе мышей (фиг.2) было выше минимального статистически значимого критерия (25%). В то же время у мышей II и III групп не выявлено увеличения продолжительности жизни мышей с LLC: 9% и 0% соответственно.The use of miliacin made it possible to obtain a high antitumor effect in mice (group IV) treated with MTX followed by a triple administration of triterpenoid. The effect of MTX in combination with miliacin increased the life expectancy of mice by an average of 36% compared with untreated animals (Fig. 3), while the value of VLP in this group of mice (Fig. 2) was higher than the minimum statistically significant criterion (25% ) At the same time, in mice of groups II and III there was no increase in the life expectancy of mice with LLCs: 9% and 0%, respectively.

Таким образом, трехкратное применение милиацина после введения МТХ повышает противоопухолевую эффективность МТХ в отношении карциномы легких LLC. Тритерпеноид растительного происхождения милиацин повышает терапевтическую эффективность МТХ, и их сочетанное применение вызывет высокое торможение роста эпидермоидной карциномы легких LLC в течение 12 дней после введения цитостатика - ТРО=91-84%, при этом статистически значимое ТРО сохраняется в течение длительного периода наблюдения (на 19 сутки ТРО=60%). МТХ в сочетании с милиацином увеличивают продолжительность жизни мышей с LLC на 36%, в то время как МТХ в монотерапии - на 9%.Thus, triple use of mylacin after administration of MTX increases the antitumor efficacy of MTX against LLC lung carcinoma. Plant-derived triterpenoid miliacin increases the therapeutic efficacy of MTX, and their combined use will cause high inhibition of LLC epidermoid carcinoma growth within 12 days after administration of cytostatic - TPO = 91-84%, while statistically significant TPO remains for a long observation period (by 19 SRW day = 60%). MTX in combination with miliacin increases the life expectancy of mice with LLC by 36%, while MTX in monotherapy by 9%.

Таким образом, данная работа служит основанием для предложения об использовании пентациклического тритерпеноида растительного происхождения - милиацина для повышения терапевтической эффективности метотрексата.Thus, this work serves as the basis for a proposal on the use of a pentacyclic triterpenoid of plant origin - miliacin to increase the therapeutic efficacy of methotrexate.

Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings

Фигура 1. Динамика роста опухоли LLC в исследуемых группах животных.Figure 1. The dynamics of the growth of the tumor LLC in the studied groups of animals.

* p<0,05 достоверность по отношению к I группе* p <0.05 reliability in relation to group I

Фигура 2. Влияние милиацина на противоопухолевый эффект метотрексата у мышей с карциномой легких Льюис.Figure 2. The effect of miliacin on the antitumor effect of methotrexate in mice with Lewis lung carcinoma.

* p<0,05 - достоверные отличия относительно нелеченной группы (I)* p <0.05 - significant differences relative to untreated group (I)

^○ p<0,05 - достоверные отличия относительно IV группы ^○ p <0.05 - significant differences relative to group IV

^Δ p<0,05 - достоверные отличия относительно IV группы ^Δ p <0.05 - significant differences relative to group IV

Фигура 3. Динамика гибели мышей BDF₁ в исследуемых группах животных с карциномой легкого LLC в интервале с 23 по 41 сутки после трансплантации опухоли.Figure 3. The dynamics of the death of BDF ₁ mice in the studied groups of animals with lung carcinoma LLC in the interval from 23 to 41 days after tumor transplantation.

ЛитератураLiterature

1. Ветошкина Т.В., Дубская Т.Ю., Гольдберг В.Е. Ранние и отдаленные последствия токсического действия на печень противоопухолевого препарата платины // Экспериментальная и клиническая фармакология - 1997. - Т.60. - №4, - С.57-59.1. Vetoshkina T.V., Dubskaya T.Yu., Goldberg V.E. Early and long-term effects of toxic effects on the liver of the antitumor drug platinum // Experimental and Clinical Pharmacology - 1997. - T.60. - No. 4, - P. 57-59.

2. Гольдберг Е.Д., Амосова Е.Н., Зуева Е.П. и др. Повышение эффективности химиотерапевтического и хирургического методов лечения перевиваемых опухолей препаратами солодки // Бюлл. эксп. биол. мед. - 2008. - Т.145. - №2. - С.213-217.2. Goldberg E.D., Amosova E.N., Zueva E.P. et al. Improving the effectiveness of chemotherapeutic and surgical methods for treating transplanted tumors with licorice // Bull. exp biol. honey. - 2008. - T.145. - No. 2. - S.213-217.

3. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. - Л.: Медицина, 1973, - 141 с.3. Gubler E.V., Genkin A.A. Application of nonparametric statistical criteria in biomedical research. - L .: Medicine, 1973, - 141 p.

4. Кинзирская Ю.А., Богуш Т.А., Остапчук Н.В. и др. Гепатотоксическое действие лекарственных препаратов некоторых фармакологических групп // Клиническая медицина. - 2003. - №10. - С.11-16.4. Kinzirskaya Yu.A., Bogush T.A., Ostapchuk N.V. et al. Hepatotoxic effects of drugs of certain pharmacological groups // Clinical Medicine. - 2003. - No. 10. - S.11-16.

5. Молодых О.П., Лушникова Е.Л., Клинникова М.Г. и др. Структурная реорганизация печени крыс при цитотоксическом действии доксорубицина // Бюлл. эксп. биол. мед. 2006. - Т.141. - №5 - С.579-585.5. Young O. P., Lushnikova E. L., Klinnikova M. G. et al. Structural reorganization of rat liver under the cytotoxic effect of doxorubicin // Bull. exp biol. honey. 2006. - T.141. - No. 5 - S.579-585.

6. Олифсон Л.Е., Осадчая Н.Д., Нузов Б.Г. и др. Химическая природа и биологическая активность милиацина // Вопросы питания. - 1991. - №2. - С.57-59.6. Olifson L.E., Osadchaya N.D., Nuzov B.G. et al. Chemical nature and biological activity of miliacin // Nutrition Issues. - 1991. - No. 2. - S. 57-59.

7. Разина Т.Г., Зуева Е.П., Амосова Е.Н. и др. Глицам как средство повышения эффективности химиотерапии и хирургического метода лечения экспериментальных опухолей // Вопросы онкологии. - 1999. - Т.45. №5. - С.554-556.7. Razina T.G., Zueva E.P., Amosova E.N. and other Glitsam as a means of increasing the effectiveness of chemotherapy and the surgical method of treating experimental tumors // Questions of Oncology. - 1999. - T. 45. No. 5. - S. 554-556.

8. Саратиков А.А., Венгеровский А.И. Новые гепатопротекторы природного происхождения // Эксперим. и клин. фармакол. Вопросы питания. - 1995. - Т.58. - №1. - С.8-10.8. Saratikov A.A., Vengerovsky A.I. New hepatoprotectors of natural origin // Experiment. and wedge. pharmacol. Nutrition issues. - 1995. - T. 58. - No. 1. - S.8-10.

9. Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Жукова Н.А. и др. Оценка противоопухолевого и антиметастатического эффектов амидов бетулоновой кислоты на мышах с перевиваемой карциномой Льюис // Бюлл. эксп. биол. мед. - 2006. - Т.142. - №7. - С.78-81.9. Sorokina I.V., Tolstikova T.G., Zhukova N.A. et al. Evaluation of the antitumor and antimetastatic effects of betulonic acid amides in mice with transplantable Lewis carcinoma // Bull. exp biol. honey. - 2006. - T.142. - No. 7. - S. 78-81.

10. Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К.и др. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - Под ред. чл. - корр. РАМН проф. Р.У.Хабриева. - М.: Медицина, 2005. - С.637-674.10. Treshchalina EM, Zhukova OS, Gerasimova GK and others. Guidelines for the study of the antitumor activity of pharmacological substances: a Guide to the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. - Ed. tsp - correspondent RAMS prof. R.U. Khabrieva. - M .: Medicine, 2005. - P.637-674.

11. Gao J., Tang X., Dou H. et al. Hepatoprotective activity of Terminalia catappa L. leaves and its two triterpenoids // J. Pharm Pharmacol. - 2004. - V.56. - №11. - p.1449-55.11. Gao J., Tang X., Dou H. et al. Hepatoprotective activity of Terminalia catappa L. leaves and its two triterpenoids // J. Pharm Pharmacol. - 2004 .-- V.56. - No. 11. - p. 1449-55.

12. Kinoshita S., Inoue Y., Nakama S. et al. Antioxidant and epatoprotective actions of medicinal herb, Terminalia catappa L. from Okinawa Island and its tannin corilagin // Phytomedicine. - 2007. - V.14. - №11. - P.755-62.12. Kinoshita S., Inoue Y., Nakama S. et al. Antioxidant and epatoprotective actions of medicinal herb, Terminalia catappa L. from Okinawa Island and its tannin corilagin // Phytomedicine. - 2007. - V.14. - No. 11. - P.755-62.

13. Liu J., Liu Y., Mao Q. et al. The effects of 10 triterpenoid compounds on experimental liver injury in mice // Fundam Appl Toxicol. - 1994. - V.22. - №1. - P.34-40.13. Liu J., Liu Y., Mao Q. et al. The effects of 10 triterpenoid compounds on experimental liver injury in mice // Fundam Appl Toxicol. - 1994. - V.22. - No. 1. - P.34-40.

14. Martin-Aragon S., de las Heras В., Sanchez - Reus M.I. et al. Pharmacological modification of endogenous antioxidant enzymes by ursolic acid on tetrachloride - induced liver damage in rats and primary cultures of rat hepatocytes // Exp. Toxicol. Pathol. - 2001. - V.53. - №2-3. - P.199-206.14. Martin-Aragon S., de las Heras B., Sanchez - Reus M.I. et al. Pharmacological modification of endogenous antioxidant enzymes by ursolic acid on tetrachloride - induced liver damage in rats and primary cultures of rat hepatocytes // Exp. Toxicol. Pathol. - 2001. - V.53. - No. 2-3. - P.199-206.

Claims

The use of miliacin as a means of increasing the antitumor effect of methotrexate.