RU2405834C1

RU2405834C1 - Method of increasing activity of streptomycin antibiotic towards streptomycin-resistant m tuberculosis

Info

Publication number: RU2405834C1
Application number: RU2009118972/10A
Authority: RU
Inventors: Анатолий Алексеевич Евглевский (RU); Анатолий Алексеевич Евглевский; Владислав Михайлович Коломиец (RU); Владислав Михайлович Коломиец; Дмитрий Анатольевич Евглевский (RU); Дмитрий Анатольевич Евглевский; Игорь Владиславович Коломиец (RU); Игорь Владиславович Коломиец
Priority date: 2009-05-19
Filing date: 2009-05-19
Publication date: 2010-12-10

Abstract

FIELD: chemistry. ^ SUBSTANCE: method of increasing activity of streptomycin antibiotic towards streptomycin-resistant M. tuberculosis involves polymerisation and detoxification of streptomycin by treating with 0.150.05% formalin solution at 40.02.0C for 5-7 days. Use of streptomycin antibiotic preparations obtained using disclosed method enables to lower concentration of formalin in lyophilisated form to 0.01% without changing concentration of the antibiotic. ^ EFFECT: high effectiveness of treating tuberculosis caused by streptomycin-resistant M tuberculosis. ^ 1 tbl

Description

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии и фтизиатрии и может быть использовано при лечении больных лекарственно устойчивым туберкулезом легких.The invention relates to microbiology, biotechnology and phthisiology and can be used in the treatment of patients with drug-resistant pulmonary tuberculosis.

При заболевании туберкулезом основным видом лечения является антибактериальная терапия, одним из основных антибиотиков используется стрептомицин. Однако при заболевании туберкулезом и массивной микробной популяции или вследствие нерационального использования антибиотика могут путем селекции или адаптации развиваться устойчивые к нему М.tuberculosis.In case of tuberculosis, the main treatment is antibiotic therapy, streptomycin is used as one of the main antibiotics. However, with tuberculosis and a massive microbial population or due to the irrational use of an antibiotic, M. tuberculosis resistant to it can develop by selection or adaptation.

В последнее время выделение М.tuberculosis, устойчивых к стрептомицину, отмечается у до 20% впервые выявленных больных (М.В.Шилова. Туберкулез в России в 2006 году. - Воронеж, 2007. - 150 с.).Recently, the isolation of M. tuberculosis resistant to streptomycin has been observed in up to 20% of newly diagnosed patients (MV Shilova. Tuberculosis in Russia in 2006. - Voronezh, 2007. - 150 p.).

Развитие лекарственно устойчивых форм туберкулеза требует изменения режимов лечения и использования более токсичных и дорогостоящих препаратов резервного ряда (канамицин, фторхинолоны). При развитии полирезистентности возбудителя снижается эффективность лечения и ухудшается эпидемическая ситуация, что приводит к снижению качества жизни человека и экономическим потерям общества.The development of drug-resistant forms of tuberculosis requires a change in treatment regimens and the use of more toxic and expensive reserve drugs (kanamycin, fluoroquinolones). With the development of multi-resistance of the pathogen, the effectiveness of treatment decreases and the epidemic situation worsens, which leads to a decrease in the quality of human life and economic loss to society.

Основным механизмом формирования устойчивости к аминогликозидам, в том числе и стрептомицину, является ферментативная инактивация антибиотика путем модификации, в результате чего препарат не может связываться с рибосомами микроорганизма и подавлять синтез белка в ядре последнего (С.В.Сидоренко и М.В.Эйдельштейн. Механизмы резистентности микроорганизмов // Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Под ред. Л.С.Страчунского, Ю.Б.Белоусова, С.Н.Козлова. Смоленск: МАКМАХ, 2007. - 464 с). С целью повышения активности антибиотиков в отношении устойчивых к ним микроорганизмов используются, в основном, методы введения в состав антибиотика ингибиторов.The main mechanism for the formation of resistance to aminoglycosides, including streptomycin, is the enzymatic inactivation of the antibiotic by modification, as a result of which the drug cannot bind to the ribosomes of the microorganism and inhibit protein synthesis in the nucleus of the latter (S.V.Sidorenko and M.V. Eidelshtein. Mechanisms of resistance of microorganisms // A Practical Guide to Anti-Infectious Chemotherapy. Edited by L. S. Strachunsky, Yu. B. Belousov, S. N. Kozlov. Smolensk: MAKMAX, 2007. - 464 s). In order to increase the activity of antibiotics against microorganisms resistant to them, mainly methods of introducing inhibitors into the antibiotic are used.

В настоящее время наиболее близким к заявляемому изобретению является получение антибиотика амоксициллин/клавуланат, когда с целью повышения активности препарата для воздействия на устойчивые к нему микроорганизмы в состав введен ингибитор b-лактамаз - клавулановая кислота (С.В.Сидоренко, С.Н.Козлов. Группа пенициллинов // Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Под ред. Л.С.Страчунского, Ю.Б.Белоусова, С.Н.Козлова. Смоленск: МАКМАХ, 2007. - 464 с). К недостаткам прототипа можно отнести то, что полученный этим способом препарат не действует на М.tuberculosis.Currently, the closest to the claimed invention is to obtain the antibiotic amoxicillin / clavulanate, when in order to increase the activity of the drug to influence microorganisms resistant to it, a b-lactamase inhibitor, clavulanic acid, was introduced into the composition (S.V.Sidorenko, S.N.Kozlov Penicillin group // A Practical Guide to Anti-Infectious Chemotherapy, Edited by L. S. Strachunsky, Yu. B. Belousov, S. N. Kozlov. Smolensk: MAKMAKH, 2007. - 464 p. The disadvantages of the prototype include the fact that the preparation obtained in this way does not act on M. tuberculosis.

Цель изобретения - повышение активности антибиотика стрептомицина в отношении устойчивых к нему М.tuberculosis. В результате будет повышена эффективность лечения туберкулеза, вызванного устойчивыми к стрептомицину М.tuberculosis.The purpose of the invention is to increase the activity of the antibiotic streptomycin in relation to M. tuberculosis resistant to it. As a result, the treatment of tuberculosis caused by streptomycin-resistant M. tuberculosis will be improved.

Поставленная цель достигается полимеризацией и детоксикацией антибиотика раствором формалина с концентрацией не более 0,15±0,05 при температуре 40,0±2,0°С в течение 5-7 суток. При таком способе обработки исходная концентрация антибиотика не изменяется, а концентрация формалина в лиофилизированном виде снижается до 0,01%.The goal is achieved by polymerization and detoxification of the antibiotic with a formalin solution with a concentration of not more than 0.15 ± 0.05 at a temperature of 40.0 ± 2.0 ° C for 5-7 days. With this method of treatment, the initial concentration of the antibiotic does not change, and the concentration of formalin in lyophilized form is reduced to 0.01%.

Пример осуществления способа.An example implementation of the method.

Было использовано 40 флаконов лиофилизированного стрептомицина, в которое с помощью шприца внесли по 5,0 мл 0,2% раствора формалина для детоксикации и полимеризации при 42°С в течении 7 суток.40 vials of lyophilized streptomycin were used, into which 5.0 ml of a 0.2% formalin solution were added via syringe to detoxify and polymerize at 42 ° C for 7 days.

При проведении исследований по повышению эффективности антибиотика стрептомицина путем его полимеризации и обработки формалином были получены следующие результаты. У десяти больных туберкулезом различной продолжительности и с различными клиническими формами были выделены из мокроты М.tuberculosis, путем разведений определена их чувствительность к антибактериальным препаратам, в том числе и к стрептомицину. Анамнестически и с учетом режима проводимой терапии у четырех больных определена вторичная (приобретенная) и у шести - первичная лекарственная устойчивость микобактерий (ЛУ МБТ) к стрептомицину и другим антибактериальным препаратам (АБП). Выделенные культуры были посеяны на классические среды Левенштейна, одна из которых содержала обычный стандартный стрептомицин (субстанция), а вторая, опытная - модифицированный антибиотик стрептомицин, обработанный по заявляемому способу. Исследуемые препараты антибиотика вносили в среду в виде водных растворов из расчета 10 ЕД на 1 мл среды.When conducting studies to improve the effectiveness of the antibiotic streptomycin by polymerizing it and treating it with formalin, the following results were obtained. In ten patients with tuberculosis of various durations and with various clinical forms, M. tuberculosis was isolated from sputum, and dilutions were used to determine their sensitivity to antibacterial drugs, including streptomycin. Anamnestically and taking into account the regimen of therapy, four patients determined secondary (acquired) and six - primary drug resistance of mycobacteria (LU MBT) to streptomycin and other antibacterial drugs (ABP). The selected cultures were seeded on the classical Levenshtein medium, one of which contained the usual standard streptomycin (substance), and the second, experimental one, a modified antibiotic streptomycin processed according to the claimed method. The studied antibiotic preparations were introduced into the medium in the form of aqueous solutions at the rate of 10 PIECES per 1 ml of medium.

Учет результатов роста проводили последовательно каждые десять дней в течение 45 дней. Результаты представлены в таблице.The calculation of growth results was carried out sequentially every ten days for 45 days. The results are presented in the table.

№ больногоPatient number Форма туберкулезаForm of tuberculosis Характер ЛУ МБТCharacter LU Office ЛУ МБТ к АБПLU Office for ABP Результат роста МБТOffice growth result опытexperience контрольthe control 1one ИТЛITL ПервичнаяPrimary SS -- ++ 22 ФКТЛFCTL ВторичнаяSecondary HSPHsp ++ ++ 33 ФКТЛFCTL ВторичнаяSecondary SHSH -- ++ 4four ДТЛDTL ПервичнаяPrimary SS -- ++ 55 ДТЛDTL ПервичнаяPrimary SS -- ++ 66 ИТЛITL ПервичнаяPrimary SS -- ++ 77 ЦТЛCTL ВторичнаяSecondary SESE -- ++ 88 ИТЛITL ПервичнаяPrimary SS -- ++ 99 ДТЛDTL ВторичнаяSecondary SS -- ++ 1010 ФКТЛFCTL ПервичнаяPrimary SHSH ++ ++ В таблице обозначены: 1) клинические формы: ИТЛ - инфильтративный, ДТЛ - диссеминированный, ЦТЛ - цирротический и ФКТЛ - фиброзно-кавернозный туберкулез легких; 2) ЛУ к АБП: S - к стрептомицину, Н - изониазиду, Р - ПАСК и Е - этамбутолу; 3) рост культуры: «-» - роста нет, «+» - рост имеется.The table indicates: 1) clinical forms: ITL - infiltrative, DTL - disseminated, CTL - cirrhotic and FCL - fibro-cavernous pulmonary tuberculosis; 2) LU to ABP: S - to streptomycin, N - isoniazid, P - PASK and E - ethambutol; 3) culture growth: “-” - no growth, “+” - there is growth.

Таким образом, положительный результат роста МБТ получен на двух культурах, которые были выделены у больных с далеко зашедшими формами туберкулеза органов дыхания как с первичной, так и вторичной ЛУ МБТ, при этом в обоих случаях - с полирезистентными штаммами М.tuberculosis.Thus, a positive result of MBT growth was obtained in two cultures that were isolated in patients with advanced forms of respiratory tuberculosis with both primary and secondary MDR MBT, in both cases with multiresistant M. tuberculosis strains.

Однако получены отрицательные результаты роста МБТ и по полирезистентным штаммам М.tuberculosis с первичной и вторичной ЛУ МБТ, но не более чем к двум антибактериальным препаратам.However, negative results of MBT growth were also obtained for multiresistant strains of M. tuberculosis with primary and secondary LU MBT, but not more than for two antibacterial drugs.

Claims

A method of increasing the activity of streptomycin antibiotic against M. tuberculosis resistant to it, characterized in that it is polymerized and detoxified by treatment with 0.15 ± 0.05% formalin solution at 40.0 ± 2.0 ° C for 5 -7 days.