RU2403566C2 - Method of quantitative determination of reducing sugars - Google Patents
Method of quantitative determination of reducing sugars Download PDFInfo
- Publication number
- RU2403566C2 RU2403566C2 RU2008149186/21A RU2008149186A RU2403566C2 RU 2403566 C2 RU2403566 C2 RU 2403566C2 RU 2008149186/21 A RU2008149186/21 A RU 2008149186/21A RU 2008149186 A RU2008149186 A RU 2008149186A RU 2403566 C2 RU2403566 C2 RU 2403566C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- glucose
- picric acid
- volume
- laminaride
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к способам количественного определения восстанавливающих сахаров и может найти применение в фармации, пищевой промышленности.The invention relates to methods for the quantitative determination of reducing sugars and may find application in pharmacy, food industry.
В литературе описаны различные способы определения количественного содержания восстанавливающих сахаров. Известен способ количественного определения углеводов методом Бертрана, основанный на образовании осадка оксида меди (I) при кипячении пробы сахара с раствором Фелинга с последующим гравиметрическим определением осадка (Жданов Ю.А. Практикум по химии углеводов. - М.: ВШ, 1973). Ввиду того что выделяющийся при определении сахаров оксид меди (I) легко окисляется кислородом воздуха, малейшее несоблюдение методики определения приводит к неточным результатам. Описана методика количественного определения альдоз методом Вильштеттера и Шеделя, заключающаяся в окислении альдоз до альдоновых кислот щелочным раствором гипойодита натрия (Жданов Ю.А., 1973). Определению альдоз указанным методом мешает присутствие в растворе сахарозы или фруктозы. Известно микрохимическое определение сахаров, основанное на окислении углеводов перйодатом натрия до муравьиной кислоты, которая затем определяется методом кислотно-основного титрования в присутствии индикатора метилового красного (Жданов Ю.А., 1973). Данная методика позволяет определить очень малые количества углеводов (0,2-3 мг). Наиболее часто для количественного определения используется метод осаждения полисахаридов спиртом 95% с последующим гравиметрическим определением выделившегося осадка (Государственная фармакопея СССР. - М.: Медицина, 1990, XI изд., вып.2, ст.83). При обработке водного экстракта спиртом 95% происходит разбавление последнего, в результате чего низкомолекулярные фракции, входящие в состав полисахаридных препаратов, не осаждаются.The literature describes various methods for quantifying reducing sugars. A known method for the quantitative determination of carbohydrates by the Bertrand method, based on the formation of a precipitate of copper oxide (I) by boiling a sugar sample with a Feling solution followed by gravimetric determination of the precipitate (Zhdanov Yu.A. Workshop on the chemistry of carbohydrates. - M .: VS, 1973). Due to the fact that copper (I) oxide released during the determination of sugars is easily oxidized by atmospheric oxygen, the slightest non-compliance with the determination procedure leads to inaccurate results. A procedure for the quantitative determination of aldoses by the Willstätter and Schedel methods is described, which consists in the oxidation of aldoses to aldonic acids with an alkaline solution of sodium hypoiodite (Zhdanov Yu.A., 1973). The determination of aldoses by this method is impeded by the presence of sucrose or fructose in the solution. The microchemical determination of sugars is known, based on the oxidation of carbohydrates by sodium periodate to formic acid, which is then determined by acid-base titration in the presence of methyl red indicator (Zhdanov Yu.A., 1973). This technique allows the determination of very small amounts of carbohydrates (0.2-3 mg). Most often for quantitative determination, the method of deposition of polysaccharides with 95% alcohol is used, followed by gravimetric determination of the precipitate released (State Pharmacopoeia of the USSR. - M .: Medicine, 1990, XI ed.,
Описана методика определения восстанавливающих сахаров в пересчете на глюкозу в лекарственном препарате «Ламинарид», полученном из морской капусты (Чушенко В.Н. Исследование в области анализа полисахаридных препаратов: автореф. дис. … канд. фармац. наук. - Харьков, 1980. - 23 с.). Определение основано на кислотном гидролизе ламинарида до глюкозы, взаимодействии глюкозы с пикриновой кислотой в щелочной среде с образованием пикраминовой кислоты и последующем фотометрическом определении продукта реакции при длине волны 460 нм на фоне раствора сравнения, содержащего все те же реагенты, кроме ламинарида. Методика определения восстанавливающих сахаров указанным методом заключается в следующем: к навеске ламинарида массой около 0,1 г (точная навеска) приливают 5,0 мл 10% раствора серной кислоты, проводят гидролиз в колбе, соединенной с обратным холодильником, в течение 2 часов. Затем гидролизат охлаждают, количественно переносят в мерную колбу объемом 10 мл, объем раствора доводят водой до метки (раствор А). Далее 5 мл полученного раствора А помещают в стакан и нейтрализуют по бумаге конго: сначала 30% раствором едкого натра, затем 10% раствором серной кислоты и, наконец, снова 30% раствором едкого натра. Нейтрализованный раствор фильтруют через бумажный фильтр, переносят в мерную колбу емкостью 25 мл и доводят водой до метки (раствор В). В плоскодонную колбу вносят 1 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3 мл 20% раствора карбоната натрия и 1 мл раствора В; колбу нагревают в кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждают, содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу емкостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 460 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на фоне раствора сравнения, состоящего из 1 мл воды, 1 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3 мл 20% раствора карбоната натрия, обработанного аналогично испытуемому раствору. Параллельно измеряют оптическую плотность при длине волны 460 нм 1 мл раствора рабочего стандартного образца (РСО) глюкозы, обработанного аналогично испытуемому раствору. Для приготовления раствора РСО глюкозы 0,14 г (точная навеска) глюкозы помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки, затем 10 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят водой до метки. Данный способ количественного определения восстанавливающих сахаров наиболее близок к заявляемому способу и выбран за прототип.The methodology for the determination of reducing sugars in terms of glucose in the drug “Laminarid” obtained from sea kale is described (Chushenko V.N. Research in the field of analysis of polysaccharide preparations: abstract of thesis ... candidate of pharmaceutical sciences. - Kharkov, 1980. - 23 s.). The determination is based on the acid hydrolysis of laminaride to glucose, the interaction of glucose with picric acid in an alkaline medium with the formation of picraminic acid and the subsequent photometric determination of the reaction product at a wavelength of 460 nm against a background of a comparison solution containing all of the same reagents except laminaride. The method for determining reducing sugars by this method is as follows: 5.0 ml of a 10% sulfuric acid solution are poured onto a sample of laminarid weighing about 0.1 g (exact sample), hydrolysis is carried out in a flask connected to a reflux condenser for 2 hours. Then the hydrolyzate is cooled, quantitatively transferred to a 10 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with water (solution A). Next, 5 ml of the resulting solution A is placed in a glass and neutralized on Congo paper: first with a 30% sodium hydroxide solution, then with a 10% sulfuric acid solution, and finally again with a 30% sodium hydroxide solution. The neutralized solution is filtered through a paper filter, transferred to a 25 ml volumetric flask and adjusted to the mark with water (solution B). 1 ml of a 1% solution of picric acid, 3 ml of a 20% solution of sodium carbonate and 1 ml of solution B are added to a flat-bottomed flask; the flask is heated in a boiling water bath for 10 min, cooled, the contents of the flask are quantitatively transferred to a 25 ml volumetric flask and the volume of the solution is adjusted to the mark with water. The optical density of the resulting solution is measured at a wavelength of 460 nm in a cuvette with a layer thickness of 10 mm against a background of a comparison solution consisting of 1 ml of water, 1 ml of a 1% solution of picric acid, 3 ml of a 20% solution of sodium carbonate, treated similarly to the test solution. At the same time, the absorbance is measured at a wavelength of 460 nm of 1 ml of a solution of a working standard sample (RSO) of glucose treated in the same way as the test solution. To prepare a solution of PCO glucose, 0.14 g (accurately weighed) of glucose is placed in a 100 ml volumetric flask and the solution volume is adjusted to the mark with water, then 10 ml of the resulting solution is transferred to a 25 ml volumetric flask and adjusted to the mark with water. This method of quantitative determination of reducing sugars is closest to the claimed method and is selected as a prototype.
Недостатками указанного способа являются:The disadvantages of this method are:
- измерение оптической плотности анализируемого конечного раствора при длине волны 460 нм соответствует поглощению не продукта взаимодействия - пикраминовой кислоты, а той избыточной части пикриновой кислоты, которая не вступила в реакцию с глюкозой, т.е. измеренная при 460 нм оптическая плотность анализируемого раствора соответствует равновесной концентрации пикриновой кислоты, а не концентрации пикриновой кислоты, вступившей во взаимодействие с глюкозой, поэтому спектр поглощения имеет вид практически вертикальной прямой с последующим плавным убыванием плотности (фиг.1);- the measurement of the optical density of the analyzed final solution at a wavelength of 460 nm does not correspond to the absorption of the interaction product, picraminic acid, but the excess portion of picric acid that has not reacted with glucose, i.e. measured at 460 nm, the optical density of the analyzed solution corresponds to the equilibrium concentration of picric acid, and not the concentration of picric acid that interacted with glucose, so the absorption spectrum has the form of an almost vertical line with a subsequent smooth decrease in density (figure 1);
- величина оптической плотности анализируемого раствора, измеренная на фоне раствора сравнения, содержащего различные реагенты, в т.ч. и окрашенную пикриновую кислоту, находится в зависимости от концентрации, объема растворов пикриновой кислоты, в результате чего максимум поглощения анализируемых растворов не постоянен (варьирование максимума достигает до ±5,2 нм);- the optical density of the analyzed solution, measured against a background of a comparison solution containing various reagents, including and colored picric acid, depends on the concentration and volume of picric acid solutions, as a result of which the maximum absorption of the analyzed solutions is not constant (the maximum varies up to ± 5.2 nm);
- использование очень маленькой навески препарата (0,1 г), мерных колб вместимостью 10 мл, точной навески глюкозы (0,1400 г) при приготовлении раствора РСО глюкозы, а также применение бумажного индикатора конго при нейтрализации гидролизатов существенно повышают погрешность анализа (2,22%).- the use of a very small sample of the preparation (0.1 g), volumetric flasks with a capacity of 10 ml, an accurate weighed sample of glucose (0.1400 g) in the preparation of a solution of RSO glucose, and the use of a paper indicator of the Congo to neutralize hydrolysates significantly increase the error of analysis (2, 22%).
Цель изобретения - количественное определение восстанавливающих сахаров методом спектрофотометрии при четко фиксированном максимуме поглощения для достижения высокой точности и хорошей воспроизводимости результатов анализа.The purpose of the invention is the quantitative determination of reducing sugars by spectrophotometry with a clearly defined maximum absorption to achieve high accuracy and good reproducibility of the analysis results.
Поставленная цель достигается тем, что для количественного определения восстанавливающих сахаров методом спектрофотометрии навеску ламинарида или гранул ламинарида массой около 0,3 г (точная навеска) помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 15 мл 10% раствора кислоты серной, проводят гидролиз в колбе, соединенной с обратным холодильником, в течение 2 ч. Затем гидролизат охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, объем раствора доводят водой до метки. Далее 10 мл полученного раствора помещают в стакан и нейтрализуют сначала 30% раствором натра едкого до рН~9,7, затем 10% раствором кислоты серной до рН~3,5 и затем 30% раствором натра едкого до рН~8,9. Измерение рН растворов осуществляют с использованием рН-метра, в качестве ионоселективного электрода применяют стеклянный электрод, электродом сравнения служит хлорсеребряный электрод (Государственная фармакопея РФ. - М.: Научный центр экспертизы средств мед. применения, 2007, XII изд., часть 1, с.89-91). Нейтрализованный раствор фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл полученного раствора, 0,2 мл 1% раствора кислоты пикриновой и 3 мл 20% раствора карбоната натрия; колбу с содержимым погружают в кипящую водяную баню на 10 мин, затем охлаждают и доводят объем раствора водой до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 356 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на фоне воды. Параллельно измеряют на фоне воды оптические плотности при длине волны 356 нм 1 мл раствора РСО глюкозы и 0,2 мл 1% раствора кислоты пикриновой, обработанных аналогично испытуемому раствору. Для приготовления раствора PCO глюкозы навеску глюкозы массой около 0,14 г (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 60 мл воды, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают, затем 10 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят водой до метки.This goal is achieved in that for the quantitative determination of reducing sugars by spectrophotometry, a weighed sample of laminaride or granules of laminaride weighing about 0.3 g (accurate weighed) is placed in a flask with a capacity of 250 ml, 15 ml of a 10% solution of sulfuric acid are added, hydrolysis is carried out in a flask connected under reflux, for 2 hours. Then the hydrolyzate is cooled, quantitatively transferred to a 50 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with water. Then 10 ml of the resulting solution is placed in a glass and neutralized first with a 30% solution of caustic soda to a pH of ~ 9.7, then with a 10% solution of sulfuric acid to a pH of ~ 3.5 and then with a 30% solution of sodium hydroxide to a pH of ~ 8.9. The pH of the solutions is measured using a pH meter, a glass electrode is used as an ion-selective electrode, and a silver-silver electrode serves as a reference electrode (State Pharmacopoeia of the Russian Federation. - M.: Scientific Center for Expertise of Medical Applications, 2007, XII ed.,
Содержание восстанавливающих сахаров (С, %) вычисляют по формуле:The content of reducing sugars (C,%) is calculated by the formula:
где a1 - навеска глюкозы, в г;where a 1 - a portion of glucose, in g;
а2 - навеска полисахаридного препарата, в г;and 2 - a sample of the polysaccharide preparation, in g;
D1 - оптическая плотность раствора кислоты пикриновой;D 1 - the optical density of the solution of picric acid;
D2 - оптическая плотность раствора глюкозы;D 2 is the optical density of the glucose solution;
D3 - оптическая плотность испытуемого раствора;D 3 is the optical density of the test solution;
W - потеря глюкозы в массе при высушивании навески, в %;W is the loss of glucose in the mass upon drying of the sample, in%;
5000 - коэффициент, учитывающий разведения растворов при анализе.5000 - coefficient taking into account the dilution of solutions in the analysis.
В качестве анализируемых объектов использованы: ламинарид, содержащий полисахариды (ламинаран, альгиновую кислоту, ее кальциевые, натриевые соли), аминокислоты, спирт (маннит) (Кайшева Н.Ш. Исследование природных полиуронидов и получение лекарственных средств на их основе: автореф. дис. … докт. фармац. наук. - Пятигорск, 2004. - 46 с.), и гранулы ламинарида, содержащие 20% ламинарида и 80% сахарозы (ФС 42-2466-87 «Гранулы ламинарида»).The following objects were used as analyzed objects: laminaride containing polysaccharides (laminaran, alginic acid, its calcium, sodium salts), amino acids, alcohol (mannitol) (Kaysheva N.Sh. Study of natural polyuronides and preparation of medicines based on them: abstract of thesis. ... doctor of pharmaceutical sciences. - Pyatigorsk, 2004. - 46 p.), And laminaride granules containing 20% laminaride and 80% sucrose (FS 42-2466-87 "Laminaride granules").
В основе количественного определения восстанавливающих сахаров в способе-прототипе и в заявляемом способе лежит окислительно-восстановительная реакция взаимодействия пикриновой кислоты с глюкозой в щелочной среде (Коренман И.М. Методы определения органических соединений. / Под ред. А.К.Бабко. - М.: Химия, 1970. - С.231-232):The quantitative determination of reducing sugars in the prototype method and in the claimed method is based on the redox reaction of the interaction of picric acid with glucose in an alkaline medium (Korenman I.M. Methods for the determination of organic compounds. / Ed. By A.K. Babko. - M .: Chemistry, 1970. - S.231-232):
В данной реакции глюкоза является восстановителем, пикриновая кислота - окислителем. В результате гидролиза ламинарида образуется глюкоза, которая реагирует с пикриновой кислотой. Для пикраминовой кислоты Е1% 1 см=427,14; ε=8,5·103 (Коренман И.М., 1970), для пикриновой кислоты Е1% 1 см=611,35; ε=1,4·104.In this reaction, glucose is a reducing agent, picric acid is an oxidizing agent. As a result of hydrolysis of the laminaride, glucose is formed, which reacts with picric acid. For picraminic acid, E 1% 1 cm = 427.14; ε = 8.5 · 10 3 (Korenman I.M., 1970), for picric acid E 1% 1 cm = 611.35; ε = 1.4 · 10 4 .
Спектры поглощения продуктов взаимодействия пикриновой кислоты с РСО глюкозы (кривая 1) и с гидролизатом ламинарида (кривая 2) на фоне раствора сравнения (по способу-прототипу) приведены на фиг.1. Как видно из этой фигуры, увеличение оптической плотности растворов происходит строго по вертикали, а снижение плотности происходит плавно по наклонной кривой. Поскольку фотометрируемые растворы не имеют фиксированного максимума поглощения при 460 нм (он может варьировать на несколько нм в каждом конкретном случае), то определение плотности при 460 нм, не всегда соответствующей максимуму поглощения, может дать низкое значение плотности, а соответственно, и концентрации определяемых растворов. Если бы спектральные кривые имели вид плавных кривых, то измерение плотности вблизи (а не точно) максимума поглощения незначительно сказалось бы на результатах анализа. Варьирование максимума поглощения около 460 нм в дифференциальных спектрах связано с концентрацией, объемом растворов пикриновой кислоты и др. факторами. Подтверждением этому являются результаты, полученные по способу-прототипу и приведенные в табл.1 для различных серий ламинарида и гранул ламинарида. Как показывают данные табл.1, растворы, фотометрируемые на фоне растворов сравнения, имеют относительно непостоянные максимумы светопоглощения (Δλ для ламинарида составляет в среднем 5,22 нм, для гранул ламинарида 3,74 нм, для РСО глюкозы 4,34-4,94 нм), что сказывается на величине оптической плотности (ΔD соответственно 0,09147; 0,03027; 0,02990-0,03804) и, следовательно, на количественном содержании восстанавливающих сахаров (в среднем содержание сахаров колеблется в пределах 1,88% для ламинарида, 0,60% для гранул ламинарида). Если учесть, что нормативное содержание восстанавливающих сахаров в ламинариде должно быть не менее 18%, в гранулах ламинарида - не менее 3,2%, то варьирование содержания сахаров в зависимости от выбранной длины волны составляет для ламинарида 10,4%, для гранул ламинарида - 18,75%. При этом изменение добавляемых объемов растворов пикриновой кислоты, гидролизатов ламинарида, растворов глюкозы существенно влияет на сдвиг максимумов поглощения, а выявление максимумов поглощения для количественного анализа каждого фотометрируемого раствора недопустимо. Поэтому целесообразнее проводить измерение оптической плотности анализируемых растворов на фоне воды (постоянного компонента), а не раствора, содержащего пикриновую кислоту. Кроме того, использование большого избытка окрашенного раствора пикриновой кислоты ухудшает компенсацию в приборе, повышая нагрузку на него (фиг.2), что не позволяет получить сопоставимые результаты.The absorption spectra of the products of the interaction of picric acid with RSO glucose (curve 1) and with a laminaride hydrolyzate (curve 2) against a background of a comparison solution (by the prototype method) are shown in Fig. 1. As can be seen from this figure, the increase in the optical density of the solutions occurs strictly vertically, and the decrease in density occurs smoothly along an inclined curve. Since photometric solutions do not have a fixed absorption maximum at 460 nm (it can vary by several nm in each case), determining the density at 460 nm, which does not always correspond to the absorption maximum, can give a low density value, and, accordingly, the concentration of the detected solutions . If the spectral curves had the form of smooth curves, then the measurement of the density near (and not exactly) the absorption maximum would slightly affect the analysis results. The variation in the absorption maximum at about 460 nm in the differential spectra is related to the concentration, volume of picric acid solutions, and other factors. Confirmation of this are the results obtained by the prototype method and are given in table 1 for various series of laminaride and granules of laminaride. As the data in Table 1 show, solutions photometric against the background of comparison solutions have relatively inconsistent light absorption maxima (Δλ for a laminarid averages 5.22 nm, for a laminar granule 3.74 nm, for a glucose concentration of 4.34-4.94 nm), which affects the value of optical density (ΔD, respectively, 0.09147; 0.03027; 0.02990-0.03804) and, consequently, the quantitative content of reducing sugars (on average, the sugar content ranges from 1.88% for laminaride, 0.60% for granules of laminaride). If we take into account that the normative content of reducing sugars in laminarid should be at least 18%, in laminaride granules - not less than 3.2%, then the variation in sugar content depending on the selected wavelength is 10.4% for laminarid, for laminarid granules - 18.75%. In this case, a change in the added volumes of picric acid solutions, laminaride hydrolysates, glucose solutions significantly affects the shift of absorption maxima, and the identification of absorption maxima for the quantitative analysis of each photometric solution is unacceptable. Therefore, it is advisable to measure the optical density of the analyzed solutions against the background of water (a constant component), rather than a solution containing picric acid. In addition, the use of a large excess of a colored solution of picric acid worsens the compensation in the device, increasing the load on it (figure 2), which does not allow to obtain comparable results.
По способу-прототипу к 1 мл раствора глюкозы (5,6·10-4 г или 3,111·10-6 моль) добавляется 1 мл 1% раствора пикриновой кислоты (0,01 г или 4,367·10-5 моль), т.е. молярное соотношение между глюкозой и пикриновой кислотой составляет 1:14, в то время как по уравнению реакции это соотношение должно быть 3:1 или 1:0,33. Такой 42-кратный избыток пикриновой кислоты недопустим, т.к., с одной стороны, это приводит к смещению максимума светопоглощения фотометрируемого раствора при измерении дифференциальных спектров (по прототипу) и, с другой стороны, повышает нагрузку на спектрофотометр, не позволяя получить точные результаты. В заявляемом способе предлагается использовать реагенты - глюкозу и пикриновую кислоту в молярном соотношении 1:2,8. Для достижения такого соотношения берется 1 мл раствора ламинарида (содержащего примерно 7·10-6 моль глюкозы) и 0,2 мл 1% раствора пикриновой кислоты (в 1 мл раствора 8,734·10-6 моль кислоты). При этом 8-кратный избыток пикриновой кислоты по сравнению с требуемым соотношением по уравнению реакции достаточен при анализе препаратов, содержащих около или более 50% восстанавливающих сахаров. Применение меньших объемов растворов пикриновой кислоты улучшает компенсацию в приборе, в результате чего независимо от марки прибора можно получить сопоставимые или достаточно воспроизводимые результаты. Использование большого избытка растворов пикриновой кислоты приводит к снижению показателей поглощения пикриновой кислоты (Е1% 1 см=27,24; ε=623,8), а значит, и к снижению чувствительности определений.According to the prototype method, to 1 ml of glucose solution (5.6 · 10 -4 g or 3.111 · 10 -6 mol) is added 1 ml of 1% solution of picric acid (0.01 g or 4.367 · 10 -5 mol), t. e. the molar ratio between glucose and picric acid is 1:14, while according to the reaction equation this ratio should be 3: 1 or 1: 0.33. Such a 42-fold excess of picric acid is unacceptable, because, on the one hand, this leads to a shift in the light absorption maximum of the photometric solution when measuring differential spectra (according to the prototype) and, on the other hand, increases the load on the spectrophotometer, preventing accurate results . In the inventive method, it is proposed to use reagents - glucose and picric acid in a molar ratio of 1: 2.8. To achieve this ratio, 1 ml of a solution of laminaride (containing approximately 7 · 10 -6 mol of glucose) and 0.2 ml of a 1% solution of picric acid (in 1 ml of a solution of 8.734 · 10 -6 mol of acid) are taken. Moreover, an 8-fold excess of picric acid compared to the required ratio according to the reaction equation is sufficient for the analysis of preparations containing about or more than 50% reducing sugars. The use of smaller volumes of picric acid solutions improves the compensation in the device, as a result of which, regardless of the brand of the device, comparable or sufficiently reproducible results can be obtained. The use of a large excess of solutions of picric acid leads to a decrease in the absorption of picric acid (E 1% 1 cm = 27.24; ε = 623.8), and hence to a decrease in the sensitivity of the determinations.
Водный раствор пикриновой кислоты имеет максимум поглощения при 356 нм - максимум, характерный для хромофорных групп (трех нитрогрупп) пикриновой кислоты (Коренман И.М. Методы определения органических соединений. - М.: Химия, 1970. - С.126, 315). Глюкоза в водном растворе не имеет максимумов поглощения. После взаимодействия пикриновой кислоты с глюкозой или гидролизатом ламинарида концентрация пикриновой кислоты в растворе уменьшается, в результате чего оптическая плотность при максимуме 356 нм соответственно снижается. Эта разница оптической плотности соответствует той концентрации пикриновой кислоты, которая вступила в реакцию. При этом для пикриновой кислоты и продуктов ее взаимодействия по предлагаемому способу анализа на фоне воды наблюдаются четко фиксированные максимумы поглощения (фиг.3). В области спектра около 460 нм наблюдается незначительное расхождение кривых 1 и 2, 3 (отмечено стрелками), и именно на этом участке фактически происходит измерение оптической плотности в способе-прототипе, т.е. находится разница между поглощением пикриновой кислоты (кривая 1) и продуктом взаимодействия пикриновой кислоты с глюкозой или ламинаридом (кривые 2 и 3 соответственно), что соответствует равновесной концентрации пикриновой кислоты. В заявляемом способе количественное определение проводится за счет снижения оптической плотности исходной пикриновой кислоты в результате ее взаимодействия с глюкозой или ламинаридом. Учитывая потерю в массе при высушивании исследуемого образца ламинарида (9,52%), количественное содержание восстанавливающих сахаров составило 49,23%. Как видно из фиг.3, положение максимумов поглощения исследованных веществ на фоне воды практически совпадает. Аналогичные результаты получены при анализе других серий ламинарида и гранул ламинарида (табл.2).An aqueous solution of picric acid has a maximum absorption at 356 nm - the maximum characteristic of the chromophore groups (three nitro groups) of picric acid (Korenman IM Methods for the determination of organic compounds. - M .: Chemistry, 1970. - P.126, 315). Glucose in an aqueous solution has no absorption maxima. After the interaction of picric acid with glucose or a laminaride hydrolyzate, the concentration of picric acid in the solution decreases, as a result of which the optical density at a maximum of 356 nm decreases accordingly. This difference in optical density corresponds to the concentration of picric acid that has reacted. In this case, for picric acid and its interaction products according to the proposed analysis method, clearly fixed absorption maxima are observed against the background of water (Fig. 3). In the spectral region of about 460 nm, there is a slight discrepancy between
Как показывают данные табл.2, фотометрируемые растворы на фоне воды, приготовленные по предлагаемой методике, имеют относительно постоянные максимумы светопоглощения.As the data in Table 2 show, photometric solutions against the background of water prepared by the proposed method have relatively constant light absorption maxima.
Авторами определены метрологические характеристики по установлению максимума светопоглощения фотометрируемых растворов по способу, принятому за прототип, и предлагаемому способу (табл.3). Как показывают данные табл.3, отклонение максимума поглощения от среднего значения в способе-прототипе составляет 1,98 нм, а в заявляемом способе 0,19 нм. Поскольку в дифференциальных спектрах (способ-прототип) наблюдается крутой, практически вертикальный подъем оптической плотности (фиг.1), а в спектрах, полученных по абсолютному поглощению (заявляемый способ, фиг.3), - плавное изменение кривой, то даже незначительное отклонение от максимума в сторону длинноволновой части спектра покажет очень низкое значение плотности и, соответственно, концентрации растворов в способе-прототипе и практически не скажется при использовании спектрофотометрии.The authors determined the metrological characteristics to establish the maximum light absorption of photometric solutions according to the method adopted as a prototype and the proposed method (table 3). As the data in table 3 show, the deviation of the absorption maximum from the average value in the prototype method is 1.98 nm, and in the inventive method 0.19 nm. Since in the differential spectra (prototype method) there is a steep, almost vertical increase in optical density (Fig. 1), and in the spectra obtained by absolute absorption (the inventive method, Fig. 3), there is a smooth change in the curve, then even a slight deviation from the maximum towards the long-wavelength part of the spectrum will show a very low density and, accordingly, the concentration of solutions in the prototype method and will practically not affect when using spectrophotometry.
Использование меньшего избытка растворов пикриновой кислоты и более разбавленных растворов в предлагаемом способе приводит к увеличению показателей поглощения пикриновой кислоты (Е1% 1 см=82,48; ε=1888,8), а значит, и к повышению чувствительности определений в 3 раза по сравнению со способом-прототипом.The use of a smaller excess of solutions of picric acid and more dilute solutions in the proposed method leads to an increase in the absorption of picric acid (E 1% 1 cm = 82.48; ε = 1888.8), and hence to a 3-fold increase in the sensitivity of determinations Compared to the prototype method.
В предлагаемой методике введены, кроме указанных выше изменений, и некоторые другие изменения:In the proposed methodology, in addition to the above changes, some other changes were introduced:
1. навеска субстанции ламинарида увеличена от 0,1 г (прототип) до 0,3 г (предлагаемый способ), т.к. при количественных определениях целесообразно использовать большую навеску для повышения точности анализа (Государственная фармакопея СССР. - М.: Медицина, 1968. - Х издание); соответственно в 3 раза увеличен объем 10% раствора серной кислоты для гидролиза;1. a sample of the substance of laminaride increased from 0.1 g (prototype) to 0.3 g (the proposed method), because for quantitative determinations, it is advisable to use a large sample to increase the accuracy of the analysis (State Pharmacopoeia of the USSR. - M .: Medicine, 1968. - X edition); accordingly, the volume of a 10% solution of sulfuric acid for hydrolysis is 3 times increased;
2. мерные колбы емкостью 10 мл (прототип) заменены мерными колбами вместимостью 50 мл (предлагаемый способ); объем аликвотной части раствора увеличен с 5 мл до 10 мл; измерение рН растворов осуществлено не по бумаге конго (во время нейтрализации она ветшает, и переход окраски размыт), а с помощью рН-метра; точное взвешивание навески РСО глюкозы массой 0,1400 г заменено взятием навески около 0,14 г (точная навеска), масса которой учитывается в расчетной формуле.2. 10 ml volumetric flasks (prototype) replaced by 50 ml volumetric flasks (proposed method); the volume of an aliquot of the solution was increased from 5 ml to 10 ml; pH measurement of solutions was carried out not on Congo paper (during neutralization, it deteriorates and the color transition is blurred), but using a pH meter; the exact weighing of a sample of RNO glucose weighing 0.1400 g is replaced by taking a sample of about 0.14 g (exact sample), the mass of which is taken into account in the calculation formula.
Эти изменения существенно облегчают работу аналитика и способствуют снижению погрешности анализа (табл.4). Как показывают данные табл.4, погрешность известного способа превышает таковую заявляемого способа в 3 раза.These changes significantly facilitate the work of the analyst and contribute to reducing the analysis error (Table 4). As the data in table 4 show, the error of the known method exceeds that of the proposed method by 3 times.
Способ количественного определения восстанавливающих сахаров поясняется следующими примерами конкретного выполнения.The method for the quantitative determination of reducing sugars is illustrated by the following examples of specific performance.
Пример 1. Около 0,3 г ламинарида (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 15 мл 10% раствора кислоты серной, доводят раствор до кипения и кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и содержимое ее количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают. Далее 10 мл полученного раствора помещают в стакан и нейтрализуют сначала 30% раствором натра едкого до рН 9,69, затем 10% раствором кислоты серной до рН 3,49 и, наконец, 30% раствором натра едкого до рН 8,85. Измерение рН растворов осуществляют с использованием рН-метра, в качестве ионоселективного электрода применяют стеклянный электрод, электродом сравнения служит хлорсеребряный электрод (Гос. фармакопея РФ, 2007. - XII изд., часть 1. - С.89-91). Нейтрализованный раствор фильтруют через складчатый бумажный фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл полученного раствора, 0,2 мл 1% раствора кислоты пикриновой и 3 мл 20% раствора карбоната натрия; колбу с содержимым погружают в кипящую водяную баню на 10 мин, затем охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре марки «Perkin Elmer UV/VIS Spectrometer Lambda 20» при длине волны 356 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на фоне воды.Example 1. About 0.3 g of laminaride (accurately weighed) is placed in a flask with a thin section with a capacity of 250 ml, 15 ml of 10% sulfuric acid solution are added, the solution is brought to a boil and refluxed for 2 hours. The flask with contents is cooled to room temperature and its contents quantitatively transferred into a volumetric flask with a capacity of 50 ml, bring the volume of the solution with water to the mark and mix thoroughly. Then 10 ml of the resulting solution is placed in a glass and neutralized first with a 30% sodium hydroxide solution to a pH of 9.69, then with a 10% sulfuric acid solution to a pH of 3.49, and finally with a 30% sodium hydroxide solution to a pH of 8.85. The pH of the solutions is measured using a pH meter, a glass electrode is used as an ion-selective electrode, and a silver-silver electrode is used as a reference electrode (State Pharmacopoeia of the Russian Federation, 2007. - XII ed.,
Параллельно измеряют на фоне воды оптические плотности при длине волны 356 нм 1 мл раствора РСО глюкозы и 0,2 мл 1% раствора кислоты пикриновой, обработанных аналогично испытуемому раствору. Для приготовления раствора РСО глюкозы навеску глюкозы (высушенной до постоянной массы при температуре 100±5°С) массой около 0,14 г (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 60 мл воды, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают, затем 10 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят водой до метки.At the same time, against the background of water, optical densities are measured at a wavelength of 356 nm, 1 ml of a solution of RSO glucose and 0.2 ml of a 1% solution of picric acid, treated similarly to the test solution. To prepare a solution of RSO glucose, a weighed portion of glucose (dried to constant weight at a temperature of 100 ± 5 ° C) weighing about 0.14 g (accurately weighed) is placed in a volumetric flask with a capacity of 100 ml, dissolved in 60 ml of water, the volume of the solution is adjusted to the mark with water , stirred, then 10 ml of the resulting solution was transferred into a volumetric flask with a capacity of 25 ml and adjusted to the mark with water.
Результаты анализа:Analysis Results:
а1=0,1700 г, а2=0,3047 г, W=9,52%, D1=0,97988, D2=0,94610, D3=0,92594. Содержание восстанавливающих сахаров в ламинариде:a 1 = 0.1700 g, and 2 = 0.3047 g, W = 9.52%, D 1 = 0.97988, D 2 = 0.94610, D 3 = 0.92594. The content of reducing sugars in laminaride:
Для пикриновой кислоты: E1% 1 см=115,74; ε=2650,4.For picric acid: E 1% 1 cm = 115.74; ε = 2650.4.
Пример 2. Около 0,3 г (точная навеска) порошка растертых гранул ламинарида помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 15 мл 10% раствора кислоты серной, доводят раствор до кипения и кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и содержимое ее количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают. Далее 10 мл полученного раствора помещают в стакан и нейтрализуют сначала 30% раствором натра едкого до рН 9,69, затем 10% раствором кислоты серной до рН 3,49 и, наконец, 30% раствором натра едкого до рН 8,85. Измерение рН растворов осуществляют с использованием рН-метра, в качестве ионоселективного электрода применяют стеклянный электрод, электродом сравнения служит хлорсеребряный электрод (Гос. фармакопея РФ, 2007, XII изд., часть 1, с.89-91). Нейтрализованный раствор фильтруют через складчатый бумажный фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл полученного раствора, 0,2 мл 1% раствора кислоты пикриновой и 3 мл 20% раствора карбоната натрия; колбу с содержимым погружают в кипящую водяную баню на 10 мин, затем охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре марки «Perkin Elmer UV/VIS Spectrometer Lambda 20» при длине волны 356 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на фоне воды.Example 2. About 0.3 g (accurately weighed) of the powder of the crushed granules of laminaride is placed in a flask with a thin section with a capacity of 250 ml, 15 ml of a 10% sulfuric acid solution are added, the solution is brought to a boil and refluxed for 2 hours. the contents are cooled to room temperature and its contents are quantitatively transferred to a 50 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with water and mixed thoroughly. Then 10 ml of the resulting solution is placed in a glass and neutralized first with a 30% sodium hydroxide solution to a pH of 9.69, then with a 10% sulfuric acid solution to a pH of 3.49, and finally with a 30% sodium hydroxide solution to a pH of 8.85. The pH of the solutions is measured using a pH meter, a glass electrode is used as an ion-selective electrode, and a silver-silver electrode is used as a reference electrode (State Pharmacopoeia of the Russian Federation, 2007, XII ed.,
Параллельно измеряют на фоне воды оптические плотности при длине волны 356 нм 1 мл раствора РСО глюкозы и 0,2 мл 1% раствора кислоты пикриновой, обработанных аналогично испытуемому раствору. Раствор РСО глюкозы готовят, как описано в примере 1.At the same time, against the background of water, optical densities are measured at a wavelength of 356 nm, 1 ml of a solution of RSO glucose and 0.2 ml of a 1% solution of picric acid, treated similarly to the test solution. A solution of PCO glucose is prepared as described in example 1.
Результаты анализа:Analysis Results:
а1=0,1538 г, а2=0,3106 г, W=6,63%, D1=0,58438, D2=0,55899, D3=0,54885. Содержание восстанавливающих сахаров в гранулах ламинарида:a 1 = 0.1538 g, and 2 = 0.3106 g, W = 6.63%, D 1 = 0.58438, D 2 = 0.55899, D 3 = 0.54885. The content of reducing sugars in the granules of laminaride:
Для пикриновой кислоты: Е1% 1 см=70,8; ε=1621,4.For picric acid: E 1% 1 cm = 70.8; ε = 1621.4.
Таким образом, положительный эффект предлагаемого способа заключается в следующем.Thus, the positive effect of the proposed method is as follows.
1. Применение спектрофотометрии при измерении оптической плотности фотометрируемых растворов, т.е. измерение плотности на фоне воды, позволяет получить четко фиксированный максимум поглощения при длине волны 356±0,19 нм, в то время как при использовании дифференциальной спектрофотометрии (измерение оптической плотности на фоне раствора, содержащего все те же реагенты, кроме анализируемого) наблюдается варьирование максимума при 463±1,98 нм. Отклонение положения максимума в способе-прототипе в 10 раз превосходит отклонение в заявляемом способе. Поскольку в дифференциальном спектре наблюдается крутой, практически вертикальный подъем плотности, то даже незначительное отклонение от максимума в сторону длинноволновой части спектра резко скажется на величине плотности и, следовательно, концентрации. В случае получения спектров по заявляемому способу спектральная кривая имеет вид плавной кривой, и отклонения положения максимума незначительно влияют на определение концентрации растворов. Варьирование максимумов в способе-прототипе объясняется использованием в составе раствора сравнения окрашенного вещества - пикриновой кислоты, в то время как в предлагаемом способе применяется относительно постоянное (независимо от концентрации, объема и др.) вещество - вода. В среднем количественное содержание восстанавливающих сахаров в зависимости от измерения при истинном и среднем максимуме поглощения по известному способу колеблется для ламинарида и гранул ламинарида соответственно на 1,88 и 0,60%; это составляет 10,40 и 18,75% соответственно от нормативного содержания сахаров. Выявление максимума поглощения в каждом конкретном растворе при количественном определении недопустимо. Предлагаемый способ позволяет проводить измерение плотности при четко фиксированном максимуме.1. The use of spectrophotometry in measuring the optical density of photometric solutions, i.e. Density measurement against the background of water makes it possible to obtain a clearly fixed absorption maximum at a wavelength of 356 ± 0.19 nm, while when using differential spectrophotometry (optical density measurement against a background of a solution containing all of the same reagents except the analyzed one), the maximum at 463 ± 1.98 nm. The deviation of the maximum position in the prototype method is 10 times greater than the deviation in the claimed method. Since a steep, almost vertical increase in density is observed in the differential spectrum, even a slight deviation from the maximum towards the long-wavelength part of the spectrum will sharply affect the density and, consequently, the concentration. In the case of obtaining spectra according to the claimed method, the spectral curve has the form of a smooth curve, and deviations of the maximum position slightly affect the determination of the concentration of solutions. The variation of the maxima in the prototype method is explained by the use of a colored substance, picric acid, in the composition of the comparison solution, while the proposed method uses a relatively constant (regardless of concentration, volume, etc.) substance - water. On average, the quantitative content of reducing sugars, depending on the measurement, with a true and average absorption maximum by the known method varies for laminaride and granules of laminaride, respectively, by 1.88 and 0.60%; this amounts to 10.40 and 18.75%, respectively, of the standard sugar content. Identification of the maximum absorption in each particular solution in quantitative determination is unacceptable. The proposed method allows the measurement of density at a clearly fixed maximum.
2. Заявляемый способ позволяет проводить определение сахаров по концентрации пикриновой кислоты, вступившей в реакцию с сахарами (по убыли концентрации пикриновой кислоты) при 356 нм, в то время как известный способ предполагает определение равновесной концентрации пикриновой кислоты, т.е. той концентрации, которая не вступила в реакцию, на незначительном участке расхождения кривых (фиг.3).2. The inventive method allows the determination of sugars by the concentration of picric acid that has reacted with sugars (by decreasing the concentration of picric acid) at 356 nm, while the known method involves determining the equilibrium concentration of picric acid, i.e. the concentration that did not enter the reaction, on a small plot of the discrepancy of the curves (figure 3).
3. Заявляемый способ предлагает использование 8-кратного избытка пикриновой кислоты (а не 42-кратного, как по способу-прототипу), что достаточно для анализа углеводов и приводит к лучшей компенсации в приборе, снижая на него нагрузку. При этом достигается удовлетворительная воспроизводимость и сопоставимость результатов.3. The inventive method proposes the use of an 8-fold excess of picric acid (rather than a 42-fold, as in the prototype method), which is sufficient for the analysis of carbohydrates and leads to better compensation in the device, reducing the load on it. At the same time, satisfactory reproducibility and comparability of the results are achieved.
4. Введенные в предлагаемую методику анализа коррективы (увеличение навески ламинарида; замена мерных колб вместимостью 10 мл колбами емкостью 50 мл; контроль рН растворов не по бумаге конго, а с помощью рН-метра; взятие навески глюкозы около 0,14 г по точной массе; увеличение объемов растворов кислоты серной для гидролиза и аликвотных частей гидролизата) позволяют не только снизить погрешность определений, но и облегчить работу аналитика. Если по способу-прототипу ε пикриновой кислоты составляет 623,8, то по предлагаемому способу он составляет 1888,8, что свидетельствует о повышении чувствительности анализа.4. Adjustments introduced into the proposed analysis procedure (increase in the laminar sample; replacement of volumetric flasks with a capacity of 10 ml with flasks with a capacity of 50 ml; control of the pH of solutions not with Congo paper but with a pH meter; taking a sample of glucose of about 0.14 g by exact weight ; an increase in the volume of solutions of sulfuric acid for hydrolysis and aliquots of the hydrolyzate) can not only reduce the error of determination, but also facilitate the work of the analyst. If by the prototype method ε picric acid is 623.8, then by the proposed method it is 1888.8, which indicates an increase in the sensitivity of the analysis.
5. Погрешность заявляемого способа определения в 3 раза ниже погрешности известного способа (соответственно ±0,74 и 2,22%).5. The error of the proposed method for determining 3 times lower than the error of the known method (respectively ± 0.74 and 2.22%).
нии, %Loss in mass upon drying
nii,%
Claims (1)
где a1 - навеска глюкозы, г;
а2 - навеска полисахаридного препарата, г;
D1 - оптическая плотность раствора кислоты пикриновой;
D2 - оптическая плотность раствора глюкозы;
D3 - оптическая плотность испытуемого раствора;
W - потеря глюкозы в массе при высушивании, %;
5000 - коэффициент, учитывающий разведения растворов при анализе. A method for the quantitative determination of reducing sugars, characterized in that acid hydrolysis of 0.3 g of laminaride or laminaride granules with 15 ml of 10% sulfuric acid is carried out, the volume of the hydrolyzate is adjusted to 50 ml, an aliquot of the solution is taken with 10 ml and neutralized with sodium hydroxide first to a pH of 9.7, then a solution of sulfuric acid to a pH of 3.5, then a solution of caustic soda to a pH of 8.9, the pH of the solutions is controlled potentiometrically, filtering is carried out, the volume of the filtrate is adjusted with water to 25 ml, 1 ml of the resulting solution is treated with 0.2 ml of 1% rust picric acid thief in the presence of 3 ml of a 20% sodium carbonate solution when heated, the volume of the solution is adjusted to 25 ml and the optical density is measured against a background of water spectrophotometrically at a wavelength of 356 nm with a simultaneous measurement of optical density under the same conditions of 0.2 ml 1 % solution of picric acid and glucose solution, while the content of reducing sugars (C,%) is calculated by the formula
where a 1 - a portion of glucose, g;
and 2 - a sample of the polysaccharide preparation, g;
D 1 - the optical density of the solution of picric acid;
D 2 is the optical density of the glucose solution;
D 3 is the optical density of the test solution;
W is the loss of glucose in the mass upon drying,%;
5000 - coefficient taking into account the dilution of solutions in the analysis.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008149186/21A RU2403566C2 (en) | 2008-12-12 | 2008-12-12 | Method of quantitative determination of reducing sugars |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008149186/21A RU2403566C2 (en) | 2008-12-12 | 2008-12-12 | Method of quantitative determination of reducing sugars |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008149186A RU2008149186A (en) | 2010-06-20 |
| RU2403566C2 true RU2403566C2 (en) | 2010-11-10 |
Family
ID=42682358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008149186/21A RU2403566C2 (en) | 2008-12-12 | 2008-12-12 | Method of quantitative determination of reducing sugars |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2403566C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2457483C2 (en) * | 2010-04-06 | 2012-07-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Самарский государственный технический университет | Method of analysing reducing substances |
-
2008
- 2008-12-12 RU RU2008149186/21A patent/RU2403566C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Гос. фармакопея СССР. - М.: Медицина, 1990, XI изд., вып.2, с.83. ЖДАНОВ Ю.А. Практикум по химии углеводов. - М.: ВШ, 1973, с.1-200. Фармакопейная статья ФС 42-2466-87, Гранулы ламинарида. - М.: МЗ СССР, 07.05.1987. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2457483C2 (en) * | 2010-04-06 | 2012-07-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Самарский государственный технический университет | Method of analysing reducing substances |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008149186A (en) | 2010-06-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS60249037A (en) | Measuring device for substance to be analyzed and method of checking said device | |
| Saif et al. | A new spectrophotometric method for the determination of promethazine–HCl from pure and pharmaceutical preparations | |
| Mohamed et al. | Spectrofluorimetric determination of some water-soluble vitamins | |
| Wojciechowski et al. | Quantitative analysis of water-soluble vitamins by ATR-FTIR spectroscopy | |
| JP3045761B2 (en) | Color test paper with correction paper strip | |
| RU2403566C2 (en) | Method of quantitative determination of reducing sugars | |
| Li et al. | A benzothiazole-salt-based fluorescent probe for precise monitoring the changes of pH and viscosity | |
| Alhemiary et al. | Spectrophotometric determination of tinidazole using promethazine and ethyl vanillin reagents in pharmaceutical preparations | |
| Yano et al. | Measurement of the concentrations of glucose and citric acid in the aqueous solution of a blood anticoagulant using near infrared spectroscopy | |
| Pulgarín et al. | Direct determination of amiloride in urine using isopotential fluorimetry | |
| Kurochkin et al. | Reflectance spectrophotometry of plasticized membranes for the design of fast optical chemosensors | |
| Lakshmi et al. | Spectrophotometric determination of ezetimibe | |
| Sastry et al. | Assay of vancomycin and dobutamine using sodium metaperiodate | |
| RU2391659C1 (en) | Method of detecting silver using polymethacrylate matrix | |
| El-Dien et al. | Utility of π-acceptor reagents for spectrophotometric determination of sulphonamide drugs via charge-transfer complex formation | |
| Shokrollahi et al. | Determination of Acidity Constants of p-Rosolic acid and Bromoxylenol Blue by Solution Scanometric Method | |
| Asadpour-Zeynali et al. | Simultaneous standard addition method for novel determination of components in a single step: application in analysis of Sunset yellow and Carmoisine by a spectrophotometric technique | |
| Satyanarayana et al. | Simple and facile spectrophotometric methods for the determination of amisulpride in pharmaceutical formulations | |
| RU2812613C1 (en) | Method of quantitative determination of tizol® gel | |
| Morelli | Spectrophotometric determination of Rhodium (III) in aqueous and alcoholic media using 2-thiobarbituric acid | |
| Zrelova et al. | A novel method for the rapid determination of isonicotinic hydrazide in aqueous solutions using reflectance spectrophotometry and colorimetry | |
| Rydchuk et al. | Application of orange G as a complexing reagent in spectrophotometric determination of osmium (IV) | |
| Kumar et al. | Development of new spectrophotometric methods for the determination of Alfuzosin hydrochloride in bulk and pharmaceutical formulations | |
| Prasad et al. | Determination of Sapropterin Dihydrochloride in Solid Dosage form by Visible Spectrophotometry | |
| Michaëlsson et al. | A new diazo method for the determination of ascorbic acid in blood plasma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101213 |