RU2393845C2

RU2393845C2 - Oral mouth care compositions for prevention and reduction of bacteria adhesion to mouth surfaces

Info

Publication number: RU2393845C2
Application number: RU2007126845/15A
Authority: RU
Inventors: Харш М. ТРИВЕДИ (US); Харш М. ТРИВЕДИ; Тао СЮЙ (US); Тао СЮЙ; Кимберли ПАНАЛИГАН (US); Кимберли ПАНАЛИГАН
Original assignee: Колгейт-Палмолив Компани
Priority date: 2004-12-16
Filing date: 2005-11-28
Publication date: 2010-07-10
Also published as: RU2007126845A

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention refers to medicine and concerns a mouth care composition containing an antiadhesive agent, containing ficin, and an agent specified from papain and crillase.

EFFECT: invention provides inhibition of bounding or adhesion of a dental deposit forming material, namely a biological material, chemical compounds, microorganisms and bacterium.

14 cl, 4 ex, 1 tbl

Description

Перекрестная ссылка на родственную заявкуCross reference to related application

По настоящей заявке испрашивается приоритет на основании заявок на патент США № 60/636788 и 60/636787, каждая из которых подана 16 декабря 2004 г., содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.This application claims priority based on US patent applications Nos. 60/636788 and 60/636787, each of which was filed December 16, 2004, the contents of which are incorporated herein by reference.

Описание предшествующего уровня техникиDescription of the Related Art

Зубной налет или биологическая пленка налета представляет собой мягкое отложение, которое образуется на поверхностях ротовой полости, таких как ткань и зубы, и состоит из скопления бактерий и слюнных, а также пищевых побочных продуктов. Зубной налет прочно сцепляется в точках неровности или прерывистости (например, на шероховатых поверхностях зубного камня, у линии десен, на поверхности языка и внутри щелей и им подобных). Кроме непривлекательного вида зубной налет участвует в возникновении гингивита и других форм заболеваний периодонта.Dental plaque or biological plaque is a soft deposit that forms on the surfaces of the oral cavity, such as tissue and teeth, and consists of an accumulation of bacteria and salivary, as well as food by-products. Plaque adheres firmly at points of unevenness or discontinuity (for example, on rough surfaces of tartar, near the gum line, on the surface of the tongue and inside crevices and the like). In addition to the unattractive appearance, plaque is involved in the occurrence of gingivitis and other forms of periodontal disease.

В основном, бактерии в ротовой полости являются частью защитной биологической пленки, которая по существу делает их устойчивыми к большинству способов обработки. Немногие люди чистят свой язык после чистки зубов зубной щеткой, хотя было показано, что на нем можно обнаружить до 50% бактерий ротовой полости. Кроме того, для многих людей чистка щеткой или скобление языка затруднительны ввиду рвотного рефлекса. Поэтому немеханическая чистка языка очень желательна для тех, кто не способен делать это механическим устройством.Basically, bacteria in the oral cavity are part of a protective biological film, which essentially makes them resistant to most treatment methods. Few people brush their tongue after brushing their teeth, although it has been shown that up to 50% of bacteria in the mouth can be found on it. In addition, for many people, brushing or scraping the tongue is difficult due to the gag reflex. Therefore, non-mechanical cleaning of the tongue is very desirable for those who are not able to do this with a mechanical device.

В данной области было предложено широкое разнообразие средств для задержки образования зубного налета и инфекций полости рта и стоматологических заболеваний, связанных с образованием зубного налета.A wide variety of agents have been proposed in the art for delaying plaque formation and oral infections and dental diseases associated with plaque formation.

Несмотря на обширный предшествующий уровень техники, относящийся к антибактериальным средствам для чистки зубов и композициям для обработки ротовой полости, в данной области еще имеется потребность в составлении продукта с усиленным эффектом задержки скопления бактерий в зубном налете.Despite the extensive prior art relating to antibacterial dentifrices and oral compositions, there is still a need in the art to formulate a product with an enhanced effect of delaying the accumulation of bacteria in plaque.

Краткое описание сущности изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION

Настоящее изобретение охватывает композицию для обработки ротовой полости, содержащую антиадгезионный агент, предпочтительно, цистеинпротеазу, наиболее предпочтительно, фицин. В другом аспекте цистеинпротеаза находится в комбинации с одним или более ингредиентов, таких как антибактериальное средство и поверхностно-активное вещество. Антиадгезионный агент уменьшает взаимодействие между поверхностью ротовой полости и материалами, образующими зубной налет, такими как бактерии.The present invention encompasses a composition for treating an oral cavity containing a release agent, preferably a cysteine protease, most preferably ficin. In another aspect, cysteine protease is in combination with one or more ingredients, such as an antibacterial agent and a surfactant. A release agent reduces the interaction between the surface of the oral cavity and plaque forming materials such as bacteria.

Подробное описание изобретенияDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Настоящее изобретение относится к особому типу фермента для предотвращения, прерывания или по меньшей мере ингибирования связывания, или адгезии, или сцепления образующего зубной налет материала, включая биологический материал, химические вещества, микроорганизмы и бактерии, с поверхностями ротовой полости. Ферменты для использования в настоящем изобретении ингибируют наращивание бактериального слоя, который привел бы к образованию зубного налета. Считается, что такие ферменты функционируют путем сцепления с поверхностями ротовой полости, включая мягкую ткань, и таким образом ингибируют рост зубного налета или его дальнейший рост. Термины «против адгезии» и «против прикрепления» используются здесь взаимозаменяемо. Подходящие ферменты для использования в изобретении включают антиадгезионные протеазные ферменты, желательно, цистеинпротеазу, наиболее желательно, они выбраны из группы фицина, папаина и криллазы. Предпочтительно, антиадгезионный агент включает фицин и один или более других ферментов, таких как другой антиадгезионный фермент(ы) или другой тип фермента, такой как бромелаин, химотрипсин, алкалаза, амилазы, глюкозооксидаза, целлюлазы, липсазы и/или другая протеаза, кроме антиадгезионной цистеинпротеазы.The present invention relates to a particular type of enzyme for preventing, interrupting or at least inhibiting the binding, or adhesion, or adhesion of plaque-forming material, including biological material, chemicals, microorganisms and bacteria, to the surfaces of the oral cavity. Enzymes for use in the present invention inhibit the growth of the bacterial layer, which would lead to the formation of plaque. It is believed that such enzymes function by adhering to the surfaces of the oral cavity, including soft tissue, and thus inhibit plaque growth or its further growth. The terms “against adhesion” and “against adhesion” are used interchangeably herein. Suitable enzymes for use in the invention include release adhesion protease enzymes, preferably cysteine protease, most preferably selected from the group of ficin, papain and krillase. Preferably, the release agent includes ficin and one or more other enzymes, such as another release agent (s) or another type of enzyme, such as bromelain, chymotrypsin, alkalase, amylase, glucose oxidase, cellulase, lipase and / or other protease other than release cysteine protease .

Фицин для использования в изобретении можно получить любым средством. Предпочтительно, его получают сушкой и фильтрацией латекса из рода Ficus, например Ficus glabrata.Ficin for use in the invention can be obtained by any means. Preferably, it is obtained by drying and filtering latex from the genus Ficus, for example Ficus glabrata.

Количество антиадгезионного агента, присутствующего в композиции, зависит от предполагаемого использования. Он присутствует в количестве менее чем 100 частей по массе в композиции или в подходящем носителе. Антиадгезионный агент желательно присутствует в количестве по массе по меньшей мере 0,01 части на 100 частей композиции. В широком аспекте антиадгезионный агент в виде фермента присутствует в количестве по массе от примерно 0,01 до примерно 10 частей по массе для каждых 100 частей по массе всей композиции. Желательнее оно составляет по меньшей мере 0,05 частей, а предпочтительно, от 0,03 до 0,30 частей, подходящих для композиции в виде пасты.The amount of release agent present in the composition depends on the intended use. It is present in an amount of less than 100 parts by weight in the composition or in a suitable carrier. The release agent is desirably present in an amount by weight of at least 0.01 parts per 100 parts of the composition. In a broad aspect, the enzyme release agent is present in an amount by weight of from about 0.01 to about 10 parts by weight for every 100 parts by weight of the entire composition. More preferably, it is at least 0.05 parts, and preferably from 0.03 to 0.30 parts, suitable for a paste composition.

Одно или более других средств против зубного налета могут присутствовать в общем количестве, эффективном против зубного налета. Подходящие средства включают без ограничения соли двухвалентного олова, меди, магния и стронция, сополиолы диметикона, такие как сополиол цетилдиметикона, глюкоамилаза, глюкозооксидаза, мочевина, лактат кальция, глицерофосфат кальция, полиакрилаты стронция, и хелатообразующие агенты, такие как лимонная и винная кислоты, и их соли щелочных металлов.One or more other anti-plaque agents may be present in a total amount effective against plaque. Suitable agents include, but are not limited to, divalent tin, copper, magnesium, and strontium salts, dimethicone copolyols such as cetyl dimethicone copolyol, glucoamylase, glucose oxidase, urea, calcium lactate, calcium glycerophosphate, strontium polyacrylates, and chelating agents such as citric acid their alkali metal salts.

Композиции могут содержать другие дополнительные агенты и материалы, включая любые желательные активные или косметические средства, и/или обычные добавки для ухода за ротовой полостью или наполнители. Например, могут присутствовать антибактериальные средства, включая хлорид бензетония, хлорид диизобутилфеноксиэтоксиэтилдиметилбензиламмония и хлорид цетилпиридиния, а также средства, перечисленные в патенте США № 5776435, выданном Gaffar et al., содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки.The compositions may contain other additional agents and materials, including any desired active or cosmetic agents, and / or conventional oral care additives or excipients. For example, antibacterial agents may be present, including benzethonium chloride, diisobutylphenoxyethoxyethyl dimethylbenzylammonium chloride and cetylpyridinium chloride, as well as those listed in US Pat. No. 5776435 to Gaffar et al., The contents of which are incorporated herein by reference.

Композиции по изобретению могут также включать абразивы, такие как диоксид кремния или перлит; увлажнители, такие как глицерин, сорбит, ксилит и/или пропиленгликоль; загустители, поверхностно-активные вещества, источник ионов фторидов, синтетический анионный поликарбоксилат, ароматизирующий агент, агенты против образования зубного камня и красящие агенты, десенсибилизаторы (такие как нитрат калия), отбеливающие агенты, консерванты, силиконы и хлорофилловые соединения. Эти добавки в случае их присутствия включены в композицию для обработки ротовой полости в количествах, которые по существу не оказывают неблагоприятное воздействие на желаемые свойства и характеристики.The compositions of the invention may also include abrasives, such as silica or perlite; humectants, such as glycerin, sorbitol, xylitol and / or propylene glycol; thickeners, surfactants, fluoride ion source, synthetic anionic polycarboxylate, flavoring agent, anti-tartar agents and coloring agents, desensitizers (such as potassium nitrate), whitening agents, preservatives, silicones and chlorophyll compounds. These additives, if present, are included in the oral composition in amounts that do not substantially adversely affect the desired properties and characteristics.

Композицию для ухода за ротовой полостью можно получить любым обычным образом. Методика получения будет обязательно варьировать в зависимости от конечной желательной формы доставки, которая может включать любую известную для препаративной формы для ухода за ротовой полостью, такую как пасты, гели, суспензии, кондитерские изделия (резинка, конфеты, пастилки и лепешки), ленты, пленки, растворы для споласкивания и промывания и таблетки.A composition for caring for the oral cavity can be obtained in any conventional manner. The preparation method will necessarily vary depending on the final desired delivery form, which may include any known for the oral care formulation, such as pastes, gels, suspensions, confectionery products (gum, sweets, lozenges and lozenges), ribbons, films , rinse and rinse solutions and tablets.

Например, пасту можно получить следующим образом: увлажнители (например, глицерин, сорбит, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль) диспергируют в воде в обычной мешалке в условиях перемешивания. В дисперсию добавляют фермент или ферменты, органические загустители (такие как ксантановая смола), любой анионный поликарбоксилат, любые соли (такие как средства против кариеса из фторида натрия), тетранатрий пирофосфат, соли триполифосфата натрия против зубного камня и любые подслащивающие вещества; полученную смесь перемешивают до образования однородной фазы геля. В фазу геля добавляют пигмент (такой как TiO₂) и любую кислоту или основание, требуемые для доведения рН. Эти ингредиенты смешивают до получения однородной фазы. Затем смесь переносят в высокоскоростную/вакуумную мешалку, где к смеси добавляют ингредиенты в виде неорганического загустителя в форме диоксида кремния и поверхностно-активного вещества. В этот момент добавляют абразив из диоксида кремния с низкой абсорбцией масла наряду с другими абразивами, подлежащими использованию в композиции. Затем смесь смешивают с высокой скоростью в течение 5-30 мин, в вакууме примерно от 20 до 50 мм рт. ст., предпочтительно, примерно 30 мм рт. ст. Полученный продукт в каждом случае представляет собой однородный, полутвердый, экструдируемый продукт в виде пасты или геля.For example, a paste can be prepared as follows: humectants (for example, glycerol, sorbitol, propylene glycol and polyethylene glycol) are dispersed in water in a conventional stirrer under stirring conditions. An enzyme or enzymes, organic thickeners (such as xanthan gum), any anionic polycarboxylate, any salts (such as anti-caries sodium fluoride), tetrasodium pyrophosphate, sodium tripolyphosphate salts against tartar and any sweeteners are added to the dispersion; the resulting mixture is stirred until a uniform gel phase forms. A pigment (such as TiO ₂ ) and any acid or base required to adjust the pH are added to the gel phase. These ingredients are mixed until a homogeneous phase is obtained. The mixture is then transferred to a high speed / vacuum mixer, where ingredients are added to the mixture in the form of an inorganic thickener in the form of silica and a surfactant. At this point, a silica abrasive with low oil absorption is added along with other abrasives to be used in the composition. Then the mixture is mixed at high speed for 5-30 minutes, in a vacuum of about 20 to 50 mm RT. Art., preferably about 30 mm RT. Art. The resulting product in each case is a homogeneous, semi-solid, extrudable product in the form of a paste or gel.

Настоящее изобретение относится к полезным препаративным формам, поддерживающим и стабилизирующим активность протеазного фермента или по меньшей мере минимизирующим потерю активности. Преимущественно, антибактериальные средства объединяют с протеазным ферментом в препаративной форме для обеспечения синергических результатов на основании и антиадгезионной, и антибактериальной функциональности. Функциональность композиции по настоящему изобретению включает как антиадгезионное, так и разрушающее зубной налет действие. В одном аспекте для первого из указанных действий выбирают фицин, а для последнего предпочтительно выбирают папаин. В другом аспекте антиадгезионный тип действия обеспечивал эффективность против зубного налета в клиническом исследовании у людей, что проявлял и фицин, и папаин, причем фицин демонстрировал большую эффективность, чем папаин. Изобретение относится к протеазному ферменту, обладающему антиадгезионной активностью в отношении бактерий зубного налета ротовой полости, и композициям, подходящим для обработки ротовой полости, которые включают носитель для обработки, имеющий другие функциональные группы, которые также стабилизируют протеазный фермент. В итоге предпочтительный протеазный фермент, полученный из фиговых деревьев (фицин), продемонстрировал антиадгезионную активность в простых растворах, в жидких средствах для чистки зубов и в полных пастах. Соединение предотвращает адгезию бактерий одного вида и видов смешанных культур в сравнении с отрицательными контролями на поверхности из полистирола, поверхности из гидроксиапатита и настоящих зубов. Соединение, кроме того, проявляет способность модифицировать подобные зубам поверхности, а именно германиевые призмы, путем снижения поверхностной энергии таких поверхностей. Это соединение можно использовать отдельно или в виде смесей с другими ферментами или антибактериальными средствами. Композицию для обработки ротовой полости по настоящему изобретению можно применять для обработки тела любого индивидуума, имеющего ротовую полость, включая любое живое существо, человека и животное; и ротовая полость включает рот, язык, ткань, зубы, небо и эмаль и им подобные. Контакт пероральной композиции с ротовой полостью можно обеспечить любым из разнообразных способов, и он не ограничивается контактом любым определенным способом. Примеры включают жидкий носитель, такой как раствор для полоскания ротовой полости; носитель в виде пасты, такой как зубная паста; средство для чистки зубов; шарики и средства для освежения ротовой полости; жевательную резинку; игрушки; жевательные средства; композиции и гели для нанесения окрашиванием; употребляемые внутрь пищевые и кондитерские изделия.The present invention relates to useful formulations that support and stabilize the activity of a protease enzyme or at least minimize the loss of activity. Advantageously, the antibacterial agents are combined with the protease enzyme in a preparative form to provide synergistic results based on both the release and antibacterial functionality. The functionality of the composition of the present invention includes both release and plaque-destructive effects. In one aspect, ficin is selected for the first of these actions, and papain is preferably selected for the latter. In another aspect, the release type of action provided efficacy against plaque in a clinical study in humans, which showed both ficin and papain, with ficin being more effective than papain. The invention relates to a protease enzyme having anti-adhesive activity against oral plaque bacteria, and compositions suitable for treating the oral cavity, which include a treatment carrier having other functional groups that also stabilize the protease enzyme. As a result, the preferred protease enzyme derived from fig trees (ficin) showed release behavior in simple solutions, in liquid dentifrices, and in full pastes. The compound prevents the adhesion of bacteria of the same species and species of mixed cultures in comparison with the negative controls on the polystyrene surface, hydroxyapatite surface and real teeth. The compound also exhibits the ability to modify tooth-like surfaces, namely germanium prisms, by reducing the surface energy of such surfaces. This compound can be used alone or as mixtures with other enzymes or antibacterial agents. The oral composition for treatment of the present invention can be used to treat the body of any individual having an oral cavity, including any living creature, human being and animal; and the oral cavity includes the mouth, tongue, tissue, teeth, palate and enamel and the like. The contact of the oral composition with the oral cavity can be achieved in any of a variety of ways, and it is not limited to contact in any specific way. Examples include a liquid carrier, such as a mouthwash; a paste carrier such as a toothpaste; dentifrice; balls and means for refreshing the oral cavity; chewing gum; Toys chewing means; staining compositions and gels; food and confectionery used inside.

Пример I - Препаративная форма средства для чистки зубов, содержащая антиадгезионный фермент Example I - Preparative form of dentifrice containing release agent enzyme

Ферменты включены в состав в препаративной форме на основе диоксида кремния. В таблице 1 представлены иллюстративные препаративные формы средств для чистки зубов. При отсутствии других указаний все величины представляют собой процентные доли по массе. Ключевыми ингредиентами состава препаративной формы являются ферменты, фицин, папаин и криллаза в количестве 0,226 мас.%, смешанная абразивная система из диоксида кремния для лучшей очистки в количестве 25 мас.% и смешанная система поверхностно-активных веществ, каждое в количестве по массе от 0,5% SLS/1,5% pluronic и 1% бетаина. Также включена отдушка из мяты перечной - мяты колосовой, которая устойчива к ферментам. Каждая из композиций выбрана для придания свойств (таких как пена, аромат и вкус, ощущение в ротовой полости и эстетические характеристики), не снижая активность ферментов. Для определения концентрации ферментов перед выбором клинических препаративных форм было проведено исследование зависимости реакции от дозы, нацеленное на выбор эффективных уровней ферментов. На основании исследований in vitro в ОРТС (Стоматологическом Технологическом Центре) в условиях GMP (должной медицинской практики) были изготовлены клинические продукты.Enzymes are included in the composition on the basis of silicon dioxide. Table 1 presents illustrative formulations of dentifrices. Unless otherwise indicated, all values are percentages by weight. The key ingredients of the formulation are enzymes, ficin, papain and krillase in an amount of 0.226 wt.%, A mixed abrasive system of silicon dioxide for better cleaning in an amount of 25 wt.% And a mixed system of surfactants, each in an amount by weight of 0 5% SLS / 1.5% pluronic and 1% betaine. Also included is a fragrance from peppermint - spiky mint, which is resistant to enzymes. Each of the compositions is selected to impart properties (such as foam, aroma and taste, sensation in the oral cavity and aesthetic characteristics), without reducing the activity of enzymes. To determine the concentration of enzymes, before the choice of clinical preparative forms, a dose-dependent study was conducted aimed at choosing effective levels of enzymes. Based on in vitro studies at ORTS (Dental Technology Center) in the conditions of GMP (good medical practice), clinical products were made.

Таблица 1Table 1 Препаративные формы средств для чистки зубов,Formulations of dentifrices,
содержащих ферментыcontaining enzymes ИнгридиентIngredient ФицинFicin ПапаинPapain КриллазаKrillase 70% сорбит70% sorbitol 24,37424,374 24,37424,374 24,37424,374 99,5% синтетический глицерин - по Фармакопее США99.5% Synthetic Glycerin - USP 20,020,0 20,020,0 20,020,0 Очищенная водаPurified water 17,017.0 17,017.0 17,017.0 Диоксид кремния стоматологического типа (Sylodent XWA 650 - по Фармакопее США)Dental Type Silicon Dioxide (Sylodent XWA 650 - USP) 17,017.0 17,017.0 17,017.0 Диоксид кремния стоматологического типа (Zeodent 115)Dental Type Silicon Dioxide (Zeodent 115) 8,0008,000 8,0008,000 8,0008,000 Полиэтиленгликоль 600 (PEG-12) по Национальной ФармакопееPolyethylene glycol 600 (PEG-12) according to the National Pharmacopoeia 3,0003,000 3,0003,000 3,0003,000 № 2: Синтетический аморфный осажденный диоксид кремния - Zeodent 165No. 2: Synthetic Amorphous Precipitated Silica - Zeodent 165 2,5002,500 2,5002,500 2,5002,500 29% лаурилсульфат натрия29% sodium lauryl sulfate 0,50.5 0,50.5 0,50.5 Полоксомер 407Poloxomer 407 1,5001,500 1,5001,500 1,5001,500 Карбоксиметилцеллюлоза натрия - 12 Фармакопея СШАSodium Carboxymethyl Cellulose - 12 US Pharmacopoeia 1,2001,200 1,2001,200 1,2001,200 Натуральная и искусственная смешанная мята колосоваяNatural and artificial mixed spike mint 1,1001,100 1,1001,100 1,1001,100 30% кокамидопропил бетаин30% cocamidopropyl betaine 1,0001,000 1,0001,000 1,0001,000 Монофторфосфат натрия - по Фармакопее СШАSodium Monofluorophosphate - USP 0,7600.760 0,7600.760 0,7600.760 Тетранатрийпирофосфат - чистый (гранецентрированный кубический)Tetrasodium pyrophosphate - pure (face-centered cubic) 0,5000,500 0,5000,500 0,5000,500 Сахарин натрия - по Фармакопее СШАSaccharin Sodium - USP 0,5000,500 0,5000,500 0,5000,500 Ксантановая смола - по Национальной ФармакопееXanthan gum - according to the National Pharmacopoeia 0,4000.400 0,4000.400 0,4000.400 Поли OXWSR-N 750Poly OXWSR-N 750 0,1000,100 0,1000,100 0,1000,100 Blue Poly 50Blue poly 50 0,3000,300 0,3000,300 0,3000,300 Раствор голубого цветаBlue solution 0,0400,040 0,0400,040 0,0400,040 ФицинFicin 0,2260.226 00 00 ПапаинPapain 00 0,2260.226 00 КриллазаKrillase 00 00 0,2260.226 ВсегоTotal 100one hundred 100one hundred 100one hundred

Пример II: Исследование эффективности против прикрепления - Искусственная ротовая полость Example II : Study of efficacy against attachment - Artificial oral cavity

Для испытания эффективности активных ингредиентов в составах зубной пасты диски из гидроксиапатита (SHAP), покрытые слюной, служили в качестве искусственных зубов, и бактериальная культура, состоящая из основных бактерий ротовой полости у людей, протекала через систему со скоростью, согласующейся со скоростью потока слюны человека in vivo. 8 дисков для каждой обработки затем помещали в проточную хемостатическую кювету и культуре бактерий ротовой полости давали возможность протекать через диски в течение ночи (20-24 час) для установления, предотвратят ли активные вещества, нанесенные на поверхности дисков, образование биологической пленки. Через 24 час диски SHAP удаляли и проводили количественное определение бактерий. Затем измеряли и анализировали величину ABS₆₁₀ растворов. Этот результат дал показатель количества бактерий, которые сцеплялись с дисками SHAP. По этой величине оценивается процентная доля антиадгезионной эффективности паст относительно подобранного отрицательного контроля. Испытывали 2 концентрации протеазы для каждой из трех протеаз, а именно 0,226 мас.% и 0,065 мас.%. Антиадгезионный эксперимент на искусственной ротовой полости свидетельствует о том, что при двух испытанных концентрациях для каждой из трех протеаз, в среднем все 3 имели эффективность, превышающую эффективность паст, служивших отрицательным контролем, которые не содержали никакого фермента. Однако на основании статистического анализа эффективность криллазы не была продемонстрирована. Папаин и фицин проявили эффективность в концентрации 0,226%. Фицин проявил аналогичную эффективность в концентрации 0,065% и 0,226%. На основании этих результатов получали партии в соответствии с требованиями GMP для подтверждения концептуальных клинических исследований. Результаты in vitro показали, что фицин был лучше папаина, который был, в свою очередь, лучше, чем подобранная паста плацебо.To test the effectiveness of the active ingredients in toothpaste formulations, hydroxyapatite (SHAP) discs coated with saliva served as artificial teeth and a bacterial culture consisting of the main bacteria in the oral cavity in humans flowed through the system at a rate consistent with the flow rate of human saliva in vivo. 8 disks for each treatment were then placed in a flowing chemostatic cuvette and a culture of oral bacteria was allowed to flow through the disks overnight (20-24 hours) to determine whether the active substances deposited on the surface of the disks would prevent the formation of a biological film. After 24 hours, the SHAP discs were removed and bacteria quantified. Then, the ABS value of ₆₁₀ solutions was measured and analyzed. This result gave an indication of the number of bacteria that mated with SHAP disks. Based on this value, the percentage of the release effectiveness of pastes relative to the selected negative control is estimated. Two protease concentrations were tested for each of the three proteases, namely 0.226 wt.% And 0.065 wt.%. The release experiment on the artificial oral cavity suggests that, at two tested concentrations for each of the three proteases, on average, all 3 had an efficiency higher than that of pastes that served as a negative control, which did not contain any enzyme. However, based on statistical analysis, the effectiveness of krillase has not been demonstrated. Papain and ficin were effective at a concentration of 0.226%. Fitsin showed similar efficacy at a concentration of 0.065% and 0.226%. Based on these results, batches were obtained in accordance with GMP requirements to confirm conceptual clinical studies. In vitro results showed that ficin was better than papain, which was, in turn, better than matched placebo paste.

Пример III: Клиническая оценка in vivo Example III : Clinical Evaluation in vivo

Провели 2 клинических исследования у людей для испытания антиадгезионной эффективности продуктов относительно подобранной пасты отрицательного контроля. Клиническая процедура для измерения антиадгезионной эффективности с конечной выгодой сниженного образования зубного налета указана ниже.Conducted 2 clinical studies in humans to test the release effectiveness of products relative to the selected paste negative control. The clinical procedure for measuring release performance with the ultimate benefit of reduced plaque formation is listed below.

А. Модифицированное определение показателя образования зубного налета у краев десен (MGMPI) - Испытуемые продукты 0,226% фицина и подобранный отрицательный контроль A. Modified determination of plaque formation at gingival margins (MGMPI) - Test products 0.226% ficin and selected negative control

В это клиническое исследование были включены 15 сотрудников учреждения. 14 участников завершили это трехнедельное исследование. Один участник выбыл из исследования ввиду легкого заболевания, которое потребовало применения антибиотиков. Участники исследования являлись в стоматологическую клинику для стоматологического обследования и анализа медицинского анамнеза. Всем приемлемым участникам проводили профилактику (чистку зубов) и начинали недельное вымывание средством для полоскания ротовой полости Colgate Great Regular. Во время фазы обработки клинического исследования участники являлись в стоматологическую клинику в назначенное им для явки утро. Им проводилось полное удаление зубного камня и профилактика для удаления всего зубного камня и зубного налета. Во время процедуры использовали выявляющий раствор для верификации полного удаления всего зубного налета и камня. Затем участники использовали 1,5 г назначенного средства для чистки зубов и затем чистили зубы щеткой в течение 60 с с последующим споласкиванием в течение 5 с 10 мл воды. Затем их инструктировали воздерживаться от всей гигиены ротовой полости в течение 24 час, и в конце этого периода они возвращались в стоматологическую клинику, споласкивали ротовую полость выявляющим раствором, и их зубному налету давали балльную оценку. После завершения балльной оценки зубного налета пациенты возобновляли обычную гигиену полости рта (чистку щеткой всей ротовой полости 2 раза/день), используя продукт вымывания. Результаты показаны ниже.This clinical study included 15 employees of the institution. 14 participants completed this three-week study. One participant dropped out of the study due to a mild illness that required antibiotics. The study participants came to the dental clinic for a dental examination and medical history analysis. All eligible participants received prophylaxis (brushing) and began weekly flushing with Colgate Great Regular oral rinse. During the clinical trial processing phase, participants arrived at the dental clinic on the morning of their appointment. He carried out a complete removal of tartar and prophylaxis to remove all tartar and plaque. During the procedure, a detecting solution was used to verify the complete removal of all plaque and stone. Participants then used 1.5 g of the prescribed dentifrice and then brushed their teeth for 60 s, followed by rinsing for 5 s with 10 ml of water. Then they were instructed to abstain from all oral hygiene for 24 hours, and at the end of this period they returned to the dental clinic, rinsed the oral cavity with a revealing solution, and their plaque was given a mark. After scoring of plaque was completed, patients resumed normal oral hygiene (brushing the entire oral cavity 2 times / day) using a washout product. The results are shown below.

Балльная оценка зубного налета (MGMPI)Dental Plaque Score (MGMPI) Ферментная зубная паста (0,226% фицин)Enzymatic Toothpaste (0.226% Ficin) Сравнительная зубная паста с плацебоComparative Toothpaste with Placebo Средняя балльная оценка через 24 часAverage score after 24 hours 14,55±8,50*14.55 ± 8.50 * 30,38±17,9930.38 ± 17.99 * Статистически значимое отличие (p<0,05) от плацебо.* Statistically significant difference (p <0.05) from placebo.

Для определения существующих различий между продуктами (p<0,05) использовали t-тест. Ферментная зубная паста (0,226% фицин) статистически отличается от сравнительной зубной пасты с плацебо. Содержащая фицин зубная паста проявила клинический эффект уменьшения образования зубного налета за счет антиадгезионного типа действия.To determine the existing differences between the products (p <0.05), a t-test was used. Enzymatic toothpaste (0.226% ficin) is statistically different from comparative toothpaste with placebo. Toothpaste containing ficin has shown a clinical effect of reducing plaque formation due to the release type of action.

В. Модифицированное определение показателя образования зубного налета у краев десен (MGMPI) - Испытуемые продукты 0,226% папаина и подобранный отрицательный контроль B. Modified determination of plaque formation at the gingival margins (MGMPI) - Test products 0.226% papain and selected negative control

Эта клиническая процедура была идентичной описанной выше для фицина за исключением того, что в это исследование были включены 14 участников, все из которых завершили исследование.This clinical procedure was identical to that described for ficin, except that 14 participants were included in this study, all of whom completed the study.

Балльная оценка зубного налета (MGMPI)Dental Plaque Score (MGMPI) Ферментная зубная паста (0,226% фицин)Enzymatic Toothpaste (0.226% Ficin) Сравнительная зубная паста с плацебоComparative Toothpaste with Placebo Средняя балльная оценка через 24 часAverage score after 24 hours 17,07±7,03*17.07 ± 7.03 * 30,38±17,9530.38 ± 17.95 * Статистически значимое отличие (p<0,05) от плацебо.* Statistically significant difference (p <0.05) from placebo.

Для определения существующих различий между продуктами (p<0,05) использовали t-тест. Ферментная зубная паста (0,226% папаин) статистически отличается от сравнительной зубной пасты с плацебо. Содержащая папаин зубная паста проявила клинический эффект уменьшения образования зубного налета за счет антиадгезионного типа действия. После сравнения результатов двух клинических исследований, кроме того, сделан вывод о том, что содержащая фицин зубная паста проявила направленно лучшую антиадгезионную эффективность, чем зубная паста, содержащая папаин.To determine the existing differences between the products (p <0.05), a t-test was used. Enzymatic toothpaste (0.226% papain) is statistically different from comparative toothpaste with placebo. Papain-containing toothpaste exerted the clinical effect of reducing plaque formation due to the release type of action. After comparing the results of two clinical trials, in addition, it was concluded that the ficin-containing toothpaste showed directionally better anti-adhesive efficacy than the papain-containing toothpaste.

Партии, полученные с соблюдений требований GMP, подвергали ускоренному старению в течение 6 недель при 49°С. Активность каждого из ферментов была почти неизменной по сравнению с величинами первоначальной активности.Batches obtained in compliance with GMP requirements were subjected to accelerated aging for 6 weeks at 49 ° C. The activity of each of the enzymes was almost unchanged compared to the values of the initial activity.

Пример IV: Препаративная форма средства для чистки зубов, содержащая антиадгезионный фермент и антибактериальное средство Example IV : A dentifrice formulation containing an anti-adhesion enzyme and an antibacterial agent

Повторяли процедуру примера 1 за исключением того, что количество воды уменьшали и замещали соответствующим количеством иллюстративного антибактериального средства СРС. Соответственно, количество воды уменьшили до 16,7 мас.% и СРС включали в количестве 0,3 мас.% для каждой из трех препаративных форм, как в таблице 1.The procedure of Example 1 was repeated except that the amount of water was reduced and replaced with an appropriate amount of an illustrative antibacterial agent CPC. Accordingly, the amount of water was reduced to 16.7 wt.% And CPC was included in an amount of 0.3 wt.% For each of the three formulations, as in table 1.

Claims

1. A composition for treating an oral cavity containing a release agent comprising ficin and an agent selected from papain and krillase, the release agent being present in an amount effective to reduce the interaction between the oral cavity of an individual and plaque forming material.

2. The composition according to claim 1, where, based on 100 parts by weight of the composition for treating the oral cavity, the release agent is present in an amount up to about 10 parts.

3. The composition according to claim 1, where the release agent is present in an amount by weight of at least 0.01 part per 100 parts of the composition.

4. The composition according to claim 3, where, based on 100 parts by weight of the composition for treating the oral cavity, the release agent is present in an amount of from about 0.01 parts to about 10 parts.

5. The composition according to claim 3, where, based on 100 parts by weight of the composition for treating the oral cavity, the release agent is present in an amount of at least about 0.05 parts.

6. The composition according to claim 3, where, based on 100 parts by weight of the composition for treating the oral cavity, the release agent is present in an amount of from about 0.03 to about 0.3 parts.

7. The composition according to claim 1, which further comprises at least one enzyme other than cysteine protease.

8. The composition according to claim 7, where the other enzyme is at least one enzyme selected from the group consisting of amylases, lipases, nucleases and other proteases.

9. A method of reducing plaque growth in an oral cavity of an individual, comprising contacting the oral cavity with an effective amount of a release agent including ficin and an agent selected from papain and krillase, thereby reducing the interaction between the oral cavity of the individual and the material forming plaque.

10. A composition for treating an oral cavity according to claim 1, further comprising an antibacterial agent.

11. The composition of claim 10, where the antibacterial agent includes a cationic antibacterial agent.

12. The composition of claim 10, wherein the antibacterial agent comprises a quaternary ammonium compound.

13. The composition of claim 10, where the antibacterial agent includes alkylpyridinium halide.

14. The composition according to claim 11, containing at least one antibacterial agent, including cetylpyridinium chloride.