RU2392947C1 - Method for preparing cell transplantation material in myelosuppression - Google Patents
Method for preparing cell transplantation material in myelosuppression Download PDFInfo
- Publication number
- RU2392947C1 RU2392947C1 RU2008143939/14A RU2008143939A RU2392947C1 RU 2392947 C1 RU2392947 C1 RU 2392947C1 RU 2008143939/14 A RU2008143939/14 A RU 2008143939/14A RU 2008143939 A RU2008143939 A RU 2008143939A RU 2392947 C1 RU2392947 C1 RU 2392947C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- day
- hyaluronidase
- days
- peripheral blood
- csf
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, конкретно, к экспериментальной гематологии и клеточным технологиям, и касается способа получения клеточного материала для трансплантации.The invention relates to medicine, specifically to experimental hematology and cellular technologies, and relates to a method for producing cellular material for transplantation.
Одним из самых распространенных способов получения клеточного материала, содержащего стволовые клетки (СК), для трансплантации при экспериментальной терапии различных заболеваний [1], а также для клинического использования в онкологии (при лечении осложнений, связанных с нарушением кроветворения при проведении химио- и лучевой терапии), является способ получения фракции мононуклеаров периферической крови после назначения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) [2, 3, 4].One of the most common methods for producing cellular material containing stem cells (SC) for transplantation during experimental therapy of various diseases [1], as well as for clinical use in oncology (in the treatment of complications associated with impaired blood formation during chemo- and radiation therapy ), is a method of obtaining a fraction of peripheral blood mononuclear cells after the appointment of granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) [2, 3, 4].
Данный способ является наиболее близким к заявляемому по механизму действия и техническому результату и выбран в качестве прототипа.This method is the closest to the claimed by the mechanism of action and technical result and is selected as a prototype.
Недостатком способа является недостаточная терапевтическая активность получаемого клеточного материала.The disadvantage of this method is the lack of therapeutic activity of the resulting cellular material.
Задачей, решаемой данным изобретением, является увеличение терапевтической активности получаемого клеточного материала.The problem solved by this invention is to increase the therapeutic activity of the resulting cellular material.
Поставленная задача достигается техническим решением, представляющим собой способ получения клеточного материала для терапии миелосупрессий, заключающийся в получении фракции мононуклеаров периферической крови после подкожного введения препарата гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сут в течение 3 дней и внутрибрюшинного введения препарата гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сут в течение 2 дней, с последующей инкубацией фракции мононуклеаров в сбалансированной питательной среде, содержащей 10-8 моль/мл D-глюкуроновой кислоты, в течение 2 часов.The problem is achieved by a technical solution, which is a method of obtaining cellular material for the treatment of myelosuppression, which consists in obtaining a fraction of peripheral blood mononuclear cells after subcutaneous administration of a granulocyte colony stimulating factor drug at a dose of 125 μg / kg 1 time per day for 3 days and intraperitoneal administration of a hyaluronidase preparation dose of 1000 UE / kg 1 time per day for 2 days, followed by incubation of the mononuclear fraction in a balanced nutrient medium containing 10 -8 mol b / ml D-glucuronic acid, within 2 hours.
Новым в предлагаемом изобретении является дополнительное введение гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сут в течение 2 дней и инкубация фракции мононуклеаров в среде, содержащей 5 мкг/мл D-глюкуроновой кислоты, в течение 2 часов.New in the invention is the additional introduction of hyaluronidase at a dose of 1000 UE / kg once a day for 2 days and the incubation of the mononuclear fraction in a medium containing 5 μg / ml D-glucuronic acid for 2 hours.
В настоящее время весьма перспективными для лечения различных заболеваний выглядят способы клеточной терапии [1]. В онкологической практике при получении трансплантанта, для лечения гематологических осложнений после проведения лучевой - и химиотерапии широко используют способ-прототип - получение фракции мононуклеаров периферической крови, обогащенной прогенеторными элементами за счет способности Г-КСФ вызывать выход СК, в том числе гемопоэтических, в циркуляцию [2, 3, 4].Currently, cell therapy methods are very promising for the treatment of various diseases [1]. In oncological practice, when receiving a transplant, for the treatment of hematological complications after radiation and chemotherapy, the prototype method is widely used - obtaining a fraction of peripheral blood mononuclear cells enriched with progenitor elements due to the ability of G-CSF to cause the release of SC, including hematopoietic, into the circulation [ 2, 3, 4].
Известна возможность увеличения доли содержания прогениторных элементов в клеточном материале из периферической крови, получаемом с помощью Г-КСФ, путем дополнительного назначения гиалуронидазы [5] - фермента, участвующего в метаболизме гиалуроновой кислоты (ГК). Однако, согласно данных литературы [6], а также собственных наблюдений применение данного фермента приводит к нарушению способности прогениторных клеток, полученных из периферической крови доноров, к их энграфтингу («оседанию» и «приживлению»). Данный феномен, очевидно, связан с тем, что ГК является не только одним из основных компонентов межклеточного матрикса тканей организма, в том числе и гемопоэтической ткани [7, 8], но и входит в состав гликокаликса клеток, их рецепторов к биологически активным веществам [7, 9], а также содержится во внуткиклеточных структурах (цитоплазме, ядре, ядрышках) [7]. Указанные обстоятельства определяют модифицирующее влияние данного фермента на структуру клеточной стенки, в том числе прогениторных элементов, уровни экспрессии рецепторов, а также активности их взаимодействия с лигандами, что в целом нарушает реализацию ростового потенциала СК материала, обработанного гиалуронидазой, при его трансплантации. В то же время известно, что одним из составных компонентов мономера ГК является D-глюкуроновая кислота, а также высокая скорость метаболизма данного гликозаминогликана [7]. В частности, период полураспада ГК в сыворотки крови составляет 2-5 минут [7]. Тем не менее, на сегодняшний день не известна возможность восстановления функциональной полноценности прогениторных клеток, подверженных воздействию гиалуронидазы, путем их инкубации перед трансплантацией в среде, содержащей D-глюкуроновую кислоту.There is a known possibility of increasing the proportion of the content of progenitor elements in the cellular material from peripheral blood obtained using G-CSF by the additional administration of hyaluronidase [5], an enzyme involved in the metabolism of hyaluronic acid (HA). However, according to the literature [6], as well as our own observations, the use of this enzyme disrupts the ability of progenitor cells obtained from the peripheral blood of donors to their engrafting (“subsidence” and “engraftment”). This phenomenon is obviously associated with the fact that HA is not only one of the main components of the intercellular matrix of body tissues, including hematopoietic tissue [7, 8], but also is a part of the glycocalyx of cells, their receptors for biologically active substances [ 7, 9], and is also found in intracellular structures (cytoplasm, nucleus, nucleoli) [7]. These circumstances determine the modifying effect of this enzyme on the structure of the cell wall, including progenitor elements, expression levels of receptors, as well as the activity of their interaction with ligands, which generally disrupts the realization of the growth potential of SC material treated with hyaluronidase during its transplantation. At the same time, it is known that one of the constituent components of HA monomer is D-glucuronic acid, as well as a high metabolic rate of this glycosaminoglycan [7]. In particular, the half-life of HA in serum is 2-5 minutes [7]. However, to date, the possibility of restoring the functional usefulness of progenitor cells exposed to hyaluronidase by incubating them before transplantation in a medium containing D-glucuronic acid is not known.
Факт дополнительного использования гиалуронидазы с дальнейшей инкубацией клеточного материала в среде, содержащей D-глюкуроновую кислоту, с целью повышения терапевтической активности получаемого трансплантанта для терапии миелосупрессии для специалиста не является очевидным и не вытекает явным образом из уровня техники в данной области. Новые признаки позволяют повысить терапевтическую активность трансплантанта. Предлагаемое изобретение может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине с выходом в практическое здравоохранение для создания новых эффективных способов клеточной терапии. Идентичной совокупности признаков при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе не обнаружено.The fact of the additional use of hyaluronidase with further incubation of cellular material in a medium containing D-glucuronic acid in order to increase the therapeutic activity of the obtained transplant for the treatment of myelosuppression for a specialist is not obvious and does not follow explicitly from the prior art in this field. New signs can increase the therapeutic activity of the transplant. The present invention can be used in experimental biology and medicine with access to practical health care to create new effective methods of cell therapy. An identical set of features was not found in the study of the state of the art in patent and medical literature.
Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed technical solution should be considered relevant criteria: "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".
Способ осуществляют следующим образом:The method is as follows:
Лабораторному интактному животному-донору (мыши) начинают одновременно вводить внутрибрюшинно препарат гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сутки в течение 2-х дней и подкожно препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сут в течение 3 дней. На 3-и сут после начала введения препаратов в стерильных условиях периферическую кровь животных собирают, гепаринизируют до конечной концентрации гепарина 40 Ед/мл. Затем с помощью специального раствора с плотностью 1077 кг/м3 путем центрифугирования и разделения клеток крови на разные фракции собирают фракцию мононуклеаров периферической крови. Клеточный материал разводят сбалансированной питательной средой, содержащей 10-8 моль/мл D-глюкуроновой кислоты, до концентрации 10-30 млн. клеток/мл и инкубируют в течение 2 часов.A laboratory intact donor animal (mouse) begins to be simultaneously administered intraperitoneally with a dose of 1000 UE / kg of hyaluronidase once a day for 2 days and subcutaneously with a granulocyte colony stimulating factor dose of 125 μg / kg once a day for 3 days . On the 3rd day after the start of drug administration under sterile conditions, the peripheral blood of animals is collected, heparinized to a final concentration of heparin of 40 Units / ml. Then, using a special solution with a density of 1077 kg / m 3 , a fraction of peripheral blood mononuclear cells is collected by centrifugation and separation of blood cells into different fractions. Cellular material is diluted with a balanced nutrient medium containing 10 -8 mol / ml D-glucuronic acid to a concentration of 10-30 million cells / ml and incubated for 2 hours.
Заявляемая доза и режим введения гиалуронидазы и Г-КСФ подобраны опытным путем и являются оптимальными для получения заявленного технического результата. Повышение дозы и кратности введения гиалуронидазы отменяют получение заявленного технического результата. Уменьшение дозы гиалуронидазы и/или однократное введение препарата значительно снижают эффективность способа. Повышение дозы и кратности введения Г-КСФ (сопровождаемое увеличением ксенобиотической нагрузки на организм и развитием ряда побочных эффектов и осложнений) не приводит к возрастанию эффективности способа, а снижение указанных показателей режима введения Г-КСФ снижает его эффективность. Концентрация D-глюкуроновой кислоты в питательной среде и длительность инкубации также определены опытным путем и являются оптимальными. Опытным путем также показано, что инкубация трансплантанта, полученного с помощью только Г-КСФ, до использования в растворе, содержащем D-глюкуроновую кислоту, не влияет на его терапевтическую активность.The claimed dose and mode of administration of hyaluronidase and G-CSF are selected empirically and are optimal for obtaining the claimed technical result. Increasing the dose and frequency of administration of hyaluronidase cancels the receipt of the claimed technical result. Reducing the dose of hyaluronidase and / or a single injection of the drug significantly reduces the effectiveness of the method. An increase in the dose and frequency of administration of G-CSF (accompanied by an increase in xenobiotic load on the body and the development of a number of side effects and complications) does not increase the effectiveness of the method, and a decrease in these indicators of the regimen of G-CSF administration reduces its effectiveness. The concentration of D-glucuronic acid in the nutrient medium and the incubation duration are also determined empirically and are optimal. It has also been experimentally shown that incubation of a graft obtained using only G-CSF before use in a solution containing D-glucuronic acid does not affect its therapeutic activity.
Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на мышах линии CBA/CaLac в количестве 250 штук, массой 18-20 г. Мыши 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).The proposed method was studied in experiments on CBA / CaLac mice in the amount of 250 pieces, weighing 18-20 g. Category 1 mice (conventional linear mice) were obtained from the nursery of the experimental biomedical modeling department of the Research Institute of Pharmacology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences (certificate is available).
Оценку эффективности предлагаемого способа осуществляли по сравнению терапевтической активности трансплантантируемого материала, полученного по заявляемому способу и способу прототипу, при моделировании миелосупрессии. Миелосупресссию у животных-реципиентов моделировали путем однократного внутрибрюшинного введения 5-фторурацила в дозе 1/2 от максимально переносимой дозы (МПД). Через сутки после введения цитостатика опытным животным однократно внутривенно вводили по 1,5 млн мононуклеаров. В одном случае, мононуклеары были получены по заявленному способу, в другом - по способу-прототипу. Контрольным животным в эквивалентном объеме вводили питательную среду.Evaluation of the effectiveness of the proposed method was carried out by comparing the therapeutic activity of the transplanted material obtained by the present method and the prototype method, when modeling myelosuppression. Myelosuppression in animal recipients was modeled by a single intraperitoneal administration of 5-fluorouracil at a dose of 1/2 of the maximum tolerated dose (MTD). One day after the administration of the cytostatic agent, 1.5 million mononuclear cells were administered intravenously once to the experimental animals. In one case, the mononuclear cells were obtained by the claimed method, in another - by the prototype method. Control animals were injected with an equivalent volume of nutrient medium.
На 5, 7 и 12-е сут после введения цитостатика с помощью автоматического гематологического анализатора ABACUS (Diatron, Австрия) и стандартных гематологических методов определяли количество эритроцитов, тромбоцитов, ретикулоцитов, общее количество лейкоцитов и их различных морфологических форм в периферической крови и показатели костномозгового кроветворения [10]. Кроме того, изучали число эритроидных (КОЕ-Э), грануломоноцитарных (КОЕ-ГМ) и фибробластных (КОЕ-Ф) клеток-предшественников в костном мозге, а также пролиферативную активность и скорость дифференцировки кроветворных прекурсоров [11]. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.On the 5th, 7th and 12th days after the administration of the cytostatic agent, the number of red blood cells, platelets, reticulocytes, the total number of leukocytes and their various morphological forms in the peripheral blood, and indicators of bone marrow hematopoiesis were determined using an ABACUS automatic hematology analyzer (Diatron, Austria) and standard hematological methods [10]. In addition, the number of erythroid (CFU-E), granulomonocytic (CFU-GM) and fibroblast (CFU-F) progenitor cells in the bone marrow, as well as proliferative activity and differentiation rate of hematopoietic precursors were studied [11]. The results were processed by the method of variation statistics using Student's t-test and non-parametric Wilcoxon-Mann-Whitney U-test.
Пример 1.Example 1
Опытным мышам вводили внутрибрюшинно препарат гиалуронидазы («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ) в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сутки в течение 2-х дней и подкожно препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора («Нейпоген», «Hoffman-la Roche», Швейцария) в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сут в течение 3 дней. Контрольным животным по соответствующей схеме (по способу-прототипу) подкожно вводили препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора («Нейпоген», «Hoffman-la Roche», Швейцария).Experimental mice were injected intraperitoneally with a hyaluronidase preparation (Lidaza, FSUE NPO Microgen of the Ministry of Health of the Russian Federation) at a dose of 1000 UE / kg once a day for 2 days and subcutaneously with a granulocyte colony stimulating factor (Neupogen, Hoffman-la Roche ", Switzerland) at a dose of 125 mcg / kg 1 time per day for 3 days. Control animals were injected subcutaneously with a granulocyte colony-stimulating factor preparation (Neupogen, Hoffman-la Roche, Switzerland) subcutaneously according to the appropriate scheme (according to the prototype method).
На 3-и сут после начала введения препаратов периферическую кровь животных обеих групп брали в стерильных условиях из шейных сосудов после частичной декапитации животного с помощью ножниц. Шерсть на шеи мышей предварительно выстригалась, и область будущего разреза обрабатывалась 70% спиртом. Кровь собирали в центрифужную пробирку с воронкой, гепариназировали (до 40 ЕД/мл гепарина ("Biochemie", Австрия)) и использовали для получения лейкоконцентрата (фракции мононуклеаров). Для этого гепаринизированную кровь наслаивали на 3 мл раствора «Histo-paque-1077» ("Sigma", США) и центрифугировали в течение 15 мин при 3000 об/мин. При необходимости процедуру повторяли. После центрифугирования в пробирке над фракцией эритроцитов образовывалось «опалисцирующее кольцо», состоящее из мононуклеаров периферической крови, которые с помощью микропипетки собирали и переносили в препаровочную среду (95% RPMI-1640, 5% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) ("Sigma", США)). Полученный материал дважды отмывали центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5-10 мин. Затем клетки помещали в среду следующего состава: 90% RPMI-1640 ("Sigma", США), 10% инактивированной ЭТС ("Sigma", США), 280 мг/л L-глутамина ("Sigma", США), 50 мг/л гентамицина ("Serva", ФРГ), 40 Ед/мл гепарина ("Biochemie", Австрия), суспендировали, с помощью раствора трипанового синего подсчитывали количество жизнеспособных клеток. Клеточный материал разводили до концентрации 15 млн. клеток/мл в среде, содержащей 10-8 моль/мл D-глюкуроновой кислоты. После чего клеточную взвесь инкубировали в CO2 инкубаторе ("Jouan", Франция) при 37°C, 5% CO2 и 100% влажности воздуха, в течение 2-х часов.On the 3rd day after the start of drug administration, the peripheral blood of animals of both groups was taken under sterile conditions from cervical vessels after partial decapitation of the animal with scissors. The wool on the neck of the mice was pre-trimmed, and the area of the future incision was treated with 70% alcohol. Blood was collected in a centrifuge tube with a funnel, heparinized (up to 40 IU / ml heparin (Biochemie, Austria)) and used to obtain a leukoconcentrate (mononuclear fraction). For this, heparinized blood was layered on 3 ml of Histo-paque-1077 solution (Sigma, USA) and centrifuged for 15 min at 3000 rpm. If necessary, the procedure was repeated. After centrifugation in a test tube over the erythrocyte fraction, an “opalizing ring” was formed consisting of peripheral blood mononuclear cells, which were collected and transferred using a micropipette into a preparation medium (95% RPMI-1640, 5% fetal calf serum (ETS) (Sigma, USA) )). The resulting material was washed twice by centrifugation at 1500 rpm for 5-10 minutes. Then the cells were placed in the medium of the following composition: 90% RPMI-1640 (Sigma, USA), 10% inactivated ETS (Sigma, USA), 280 mg / L L-glutamine (Sigma, USA), 50 mg / l gentamicin (Serva, West Germany), 40 U / ml heparin (Biochemie, Austria) were suspended, and the number of viable cells was counted with a trypan blue solution. Cellular material was diluted to a concentration of 15 million cells / ml in a medium containing 10 -8 mol / ml D-glucuronic acid. After that, the cell suspension was incubated in a CO 2 incubator (Jouan, France) at 37 ° C, 5% CO 2 and 100% air humidity, for 2 hours.
Изучение эффективности предлагаемого способа осуществляли по сравнению с терапевтической активностью трансплантанта, полученного по заявляемому способу и способу-прототипу при моделировании миелосупрессии. Миелосупресссию у животных-реципиентов моделировали путем однократного внутрибрюшинного введения «5-фторурацил-Эбеве» (Эбеве Фарма ГмбХ, (Австрия)) в дозе 1/2 МПД (114 мг/кг).The study of the effectiveness of the proposed method was carried out in comparison with the therapeutic activity of the transplant obtained by the present method and the prototype method in modeling myelosuppression. Myelosuppression in animal recipients was modeled by a single intraperitoneal administration of 5-fluorouracil-Ebeve (Ebeve Pharma GmbH, Austria) at a dose of 1/2 MPD (114 mg / kg).
Через сутки после введения цитостатика животным внутривенно однократно вводили 1,5 млн мононуклеаров. Контрольным мышам вводили клеточный материал, полученный по способу-прототипу, а опытным животным - по заявленному способу. Мышам цитостатического контроля в эквивалентном объеме (0,1 мл) внутривенно вводили культуральную среду (90% RPMI-1640 ("Sigma", США), 10% инактивированной ЭТС ("Sigma", США), 280 мкг/мл L-глутамина ("Sigma", США), 40 Ед/мл гепарина ("Biochemie", Австрия), 10-8 моль/мл D-глюкуроновой кислоты ("Sigma", США).One day after administration of the cytostatic agent, 1.5 million mononuclear cells were intravenously administered once to the animals. The control mice were injected with cellular material obtained by the prototype method, and experimental animals - by the claimed method. An equivalent volume (0.1 ml) of the cytostatic control mice was injected intravenously with culture medium (90% RPMI-1640 (Sigma, USA), 10% inactivated ETS (Sigma, USA), 280 μg / ml L-glutamine ( Sigma, USA), 40 U / ml heparin (Biochemie, Austria), 10-8 mol / ml D-glucuronic acid (Sigma, USA).
Введение мононуклеаров периферической крови животным после моделирования миелосупрессии приводило к значительному ускорению регенерации кроветворной ткани. В обеих опытных группах наблюдалось значительное увеличение количества ретикулоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, а также общего количества лейкоцитов, палочко- и сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови. При этом существенно более выраженными изменения были в группе мышей, которым вводили клеточный материал, полученный после совместного использования Г-КСФ и гиалуронидазы (табл.1, 2).The introduction of peripheral blood mononuclear cells to animals after modeling myelosuppression led to a significant acceleration of hematopoietic tissue regeneration. In both experimental groups there was a significant increase in the number of reticulocytes, red blood cells, platelets, as well as the total number of leukocytes, stab and segmented neutrophils in the peripheral blood. Moreover, significantly more pronounced changes were in the group of mice that were injected with cellular material obtained after the combined use of G-CSF and hyaluronidase (Tables 1, 2).
Указанные изменения явились закономерным отражением костномозгового кроветворения. Клеточная терапия сопровождалась значительным возрастанием количества незрелых (ННГ) и зрелых (ЗНГ) нейтрофильных гранулоцитов, а также эритрокариоцитов в костном мозге мышей с подавленным цитостатиком кроветворением (табл.3). При этом число данных клеточных элементов в опытной группе достоверно превышало аналогичные показатели у контрольных животных. Максимальная разница регистрировалась: в отношении количества ННГ на 44,2% на 7-е сут, ЗНГ на 50,0% на 5-е сут, и содержания эритрокариоцитов на 45,3% на 7-е сут опыта.These changes were a natural reflection of bone marrow hematopoiesis. Cell therapy was accompanied by a significant increase in the number of immature (NIS) and mature (ZNG) neutrophilic granulocytes, as well as erythrokaryocytes in the bone marrow of mice with suppressed hematopoiesis cytostatic (table 3). Moreover, the number of these cellular elements in the experimental group significantly exceeded the similar indices in control animals. The maximum difference was recorded: in relation to the number of NIS by 44.2% on the 7th day, GNG by 50.0% on the 5th day, and the content of erythrokaryocytes by 45.3% on the 7th day of the experiment.
Изучение механизмов ускорения регенерации кроветворной ткани выявило определяющую роль повышения содержания эритроидных и грануломоноцитарных клеток-предшественников в костном мозге, их пролиферативной активности и скорости созревания. Причем во всех случаях существенно более значимыми изменения были у животных опытной группы (табл.4). В частности, количество КОЕ-Э и КОЕ-ГМ на 7-е сут в опытной группе было выше, чем в контроле, на 90,9% и 61,5% соответственно. Кроме того, трансплантация мононуклеаров, содержащих СК [3, 4, 5], приводила к увеличению КОЕ-Ф в гемопоэтической ткани. Причем наиболее значительными данные изменения имели место при введении клеточных элементов животных, получавших оба препарата. Учитывая важную роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения (ГИМ) [1], указанные изменения позволяют говорить о значительном участии стромальных клеточных элементов в восстановлении подавленного цитостатиком кроветворения. Особенно существенным представляется роль данного механизма компенсации при введении антиметаболита (5-фторурацила), который значительно нарушает функционирование элементов ГИМ и их кооперацию с кроветворными клетками, тем самым замедляя регенерацию гемопоэтической ткани при цитостатическом воздействии [12].The study of the mechanisms of accelerating the regeneration of hematopoietic tissue revealed the decisive role of increasing the content of erythroid and granulomonocytic progenitor cells in the bone marrow, their proliferative activity and maturation rate. Moreover, in all cases, the changes in the animals of the experimental group were significantly more significant (Table 4). In particular, the number of CFU-E and CFU-GM on the 7th day in the experimental group was higher than in the control by 90.9% and 61.5%, respectively. In addition, transplantation of mononuclear cells containing SC [3, 4, 5] led to an increase in CFU-F in hematopoietic tissue. Moreover, the most significant data changes occurred with the introduction of cellular elements of animals treated with both drugs. Given the important role of the hematopoietic-inducing microenvironment (GIM) [1], these changes suggest a significant participation of stromal cellular elements in the restoration of hematopoiesis suppressed by the cytostatic. Particularly significant is the role of this compensation mechanism in the administration of antimetabolite (5-fluorouracil), which significantly disrupts the functioning of GIM elements and their cooperation with hematopoietic cells, thereby slowing down the regeneration of hematopoietic tissue under cytostatic effects [12].
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о существенном повышении эффективности проведения клеточной терапии миелосупрессии трансплантатом, полученным из периферической крови при совместном использовании гиалуронидазы и Г-КСФ и обработанным D-глюкуроновой кислотой, чем при применении клеточного материала только после Г-КСФ.Thus, the results obtained indicate a significant increase in the effectiveness of cell therapy for myelosuppression with a graft obtained from peripheral blood when using hyaluronidase and G-CSF and treated with D-glucuronic acid, than when using cellular material only after G-CSF.
Предлагаемый способ позволяет значительно повысить терапевтическую активность клеточного материала.The proposed method can significantly increase the therapeutic activity of cellular material.
ЛитератураLiterature
1. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Гипоксия и система крови. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2006. - С.79-105.1. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zyuzkov G.N. Hypoxia and the blood system. - Tomsk: Publishing house Tom. University, 2006 .-- S.79-105.
2. Lionne-Huyghe P., Kuhnowski F., Coiteux V., Bauters F., Morschhauser F. Indications of G-CSF administration in hematologic disorders // Bull. Cancer. - 2006 - Vol.93. - N 5. - P.453-462.2. Lionne-Huyghe P., Kuhnowski F., Coiteux V., Bauters F., Morschhauser F. Indications of G-CSF administration in hematologic disorders // Bull. Cancer - 2006 - Vol. 93. - N 5. - P.453-462.
3. Husebekk A., Kolstad A., Dahl I.M., Skogen В.. Decentralized high-dose cytostatic treatment with autologous stem cell support // Tidsskr. Nor. Laegeforen. - 1998. - Vol.118. - N 18. - P.2777-2780.3. Husebekk A., Kolstad A., Dahl I.M., Skogen B. .. Decentralized high-dose cytostatic treatment with autologous stem cell support // Tidsskr. Nor. Laegeforen. - 1998 .-- Vol.118. - N 18. - P.2777-2780.
4. Borota R., Borota J., Belić A., Gebauer E., Stefanović N. Clinical use of granulocyte colony stimulating-factors (GM-CSF and G-CSF) // Med. Pregl. - 1997. - Vol.50. - N(3-4). - P.87-93.4. Borota R., Borota J., Belić A., Gebauer E., Stefanović N. Clinical use of granulocyte colony stimulating-factors (GM-CSF and G-CSF) // Med. Pregl. - 1997. - Vol.50. - N (3-4). - P.87-93.
5. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. и др. Роль гиалуронидазы в регуляции функций мезенхимальных клеток-предшественников // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. - №2. - С.115-119.5. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zyuzkov G.N. et al. The role of hyaluronidase in the regulation of the functions of mesenchymal progenitor cells // Cellular Technologies in Biology and Medicine. - 2007. - No. 2. - S.115-119.
6. Hui Zhu, Noboru Mitsuhashi, Andrew Klein e.a. The Role of the Hyaluronan Receptor CD44 in Mesenchymal Stem Cell Migration in the Extracellular Matrix // Stem Cells. 2006 - Vol.24. - N.4. - P.928-935.6. Hui Zhu, Noboru Mitsuhashi, Andrew Klein e.a. The Role of the Hyaluronan Receptor CD44 in Mesenchymal Stem Cell Migration in the Extracellular Matrix // Stem Cells. 2006 - Vol.24. - N.4. - P.928-935.
7. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? // Gly-cobiology. - 2003. - Vol.13. - №12. - P.105-115.7. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? // Gly-cobiology. - 2003. - Vol.13. - No. 12. - P.105-115.
8. Noble P.W. Hyaluronan and its catabolic products in tissue injury and repair // Matrix Biol. - 2002. - №21. - P.25-29.8. Noble P.W. Hyaluronan and its catabolic products in tissue injury and repair // Matrix Biol. - 2002. - No. 21. - P.25-29.
9. Henry C.B., Duling, B.R. Permeation of the luminal capillary glycocalyx is determined by hyaluronan // Am. J. Physiol. - 1999. - №277. - P.508-514.9. Henry C. B., Duling, B. R. Permeation of the luminal capillary glycocalyx is determined by hyaluronan // Am. J. Physiol. - 1999. - No. 277. - P.508-514.
10. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В.Меньшикова, М. - 1987. - 152 с.10. Laboratory research methods in the clinic: Handbook / Ed. V.V. Menshikova, M. - 1987. - 152 p.
11. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск: Изд-во ТГУ, 1992. - С.130-145.11. Goldberg E.D., Dygay A.M., Shakhov V.P. Methods of tissue culture in hematology. - Tomsk: Publishing house of TSU, 1992. - S.130-145.
12. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения при цитостатических миелосупрессиях. - Томск, 1999. - 114 с.12. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zhdanov V.V. The role of hematopoiesis-inducing microenvironment in cytostatic myelosuppression. - Tomsk, 1999 .-- 114 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008143939/14A RU2392947C1 (en) | 2008-11-05 | 2008-11-05 | Method for preparing cell transplantation material in myelosuppression |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008143939/14A RU2392947C1 (en) | 2008-11-05 | 2008-11-05 | Method for preparing cell transplantation material in myelosuppression |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008143939A RU2008143939A (en) | 2010-05-10 |
| RU2392947C1 true RU2392947C1 (en) | 2010-06-27 |
Family
ID=42673567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008143939/14A RU2392947C1 (en) | 2008-11-05 | 2008-11-05 | Method for preparing cell transplantation material in myelosuppression |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2392947C1 (en) |
-
2008
- 2008-11-05 RU RU2008143939/14A patent/RU2392947C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ГОЛЬДБЕРГ Е.Д. и др. Роль гиалуронидазы в регуляции функций мезенхимальных клеток-предшественников. Клеточные технологии в биологии и медицине, 2007, № 2, с.115-119. KUSMINSKY G. et al. "Allogenic hematopoietic transplantation with stem cells extracted from peripheral blood". Medicina 2000; 60(2): 179-87, реферат, найдено 25.06.2009 из PubMed PMID: 10962806. * |
| ГОЛЬДБЕРГ Е.Д. и др. Фармакологическая регуляция эндогенных стволовых клеток. Материалы конференции «Стволовые клетки и перспективы их использования в здравоохранении». - М., 30-31 мая 2007, найдено 25.06.2009 из Интернет на: rsmu.ru//fileadmin/rsmu/documents/conference/2007_year/book_tezisi_2007.doc. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008143939A (en) | 2010-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2004242091B9 (en) | Administration of hyaluronic acid to enhance the function of transplanted stem cells | |
| JP5543778B2 (en) | Methods for producing cell populations | |
| Kikuta et al. | Mobilization of hematopoietic primitive and committed progenitor cells into blood in mice by anti-vascular adhesion molecule-1 antibody alone or in combination with granulocyte colony-stimulating factor | |
| Matrosova et al. | Hyaluronic acid facilitates the recovery of hematopoiesis following 5‐fluorouracil administration | |
| US8569060B2 (en) | Method of producing a population of cells | |
| Dygai et al. | Effect of transplantation of peripheral blood mononuclears obtained using granulocytic colony-stimulating factor and hyaluronidase on regeneration of hemopoietic tissue during myelosuppression | |
| RU2392947C1 (en) | Method for preparing cell transplantation material in myelosuppression | |
| RU2360965C1 (en) | METHOD OF INCREASING NUMBER OF PATIENT'S HAEMOPOETIC UNDIFFERENTIATED STEM CELLS ex vivo | |
| Epstein et al. | Mechanisms of hepatoprotective effect of preparation containing superlow doses of antibodies to granulocytic colony-stimulating factor | |
| JPH05502667A (en) | Method for treating thrombocytopenia and pharmaceutical compositions useful therefor | |
| AU2001282436B8 (en) | Osteogenic growth oligopeptides as stimulants of hematopoiesis | |
| RU2620069C2 (en) | Materials and method for modulation of proliferation and differentiation of regulatory, stem and other somatic cells | |
| RU2811901C1 (en) | Agent for stimulating proliferative activity of bone marrow cells | |
| Arizkane | Impact of tyrosine kinase inhibitors and bone morphogenetic proteins on persistent leukemic stem cell dormancy in Chronic Myeloid Leukemia patients at remission | |
| Shatry et al. | Engraftment of splenic tissue as a method to investigate repopulation by hematopoietic cells from host and donor marrow | |
| RU2442589C1 (en) | Method for stimulating myelogenesis | |
| AU2001282436A1 (en) | Osteogenic growth oligopeptides as stimulants of hematopoiesis | |
| Lindsey et al. | The importance of physiologically inspired physicochemical parameters on hematopoietic stem-cell maintenance and lineage-specific differentiation in ex vivo cultures | |
| Lindsey et al. | Parameters on Hematopoietic Stem-Cell Maintenance and Lineage-Specific Differentiation in Ex Vivo Cultures | |
| Da Prato et al. | Differential activity of glycosaminoglycans on colony-forming cells from cord blood. Preliminary results | |
| Rasmusson et al. | Human mesenchymal stem cells affect IgG production induced by lipopolysaccharide, cytomegalovirus and varicella zoster virus in human spleen cells | |
| JPH02502066A (en) | Promotion of stem cell proliferation by bryostatin | |
| Lindsey et al. | The Importance of Physiologically Inspired Physicochemical | |
| Poulsen | Cellular Structure and Function | |
| Banu et al. | Neuronal, mesenchymal and hematopoietic cell derived from CD34− lin− cell from adult bone marrow |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101106 |