RU2367449C1 - Method for recovering and purifying trophoblastic beta-1-glycoprotein - Google Patents
Method for recovering and purifying trophoblastic beta-1-glycoprotein Download PDFInfo
- Publication number
- RU2367449C1 RU2367449C1 RU2008106727/15A RU2008106727A RU2367449C1 RU 2367449 C1 RU2367449 C1 RU 2367449C1 RU 2008106727/15 A RU2008106727/15 A RU 2008106727/15A RU 2008106727 A RU2008106727 A RU 2008106727A RU 2367449 C1 RU2367449 C1 RU 2367449C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium chloride
- tbg
- triton
- centrifugation
- ammonium sulfate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в медицине, биотехнологии для получения препарата трофобластического β-1-гликопротеина (ТБГ), используемого в качестве компонента диагностических систем и средства для лечения онкологических, аутоиммунных и аллергических заболеваний. Способ позволяет увеличить выход и чистоту целевого продукта.The invention relates to the pharmaceutical industry and can be used in medicine, biotechnology to obtain a trophoblastic β-1-glycoprotein (TBH) preparation used as a component of diagnostic systems and a means for treating oncological, autoimmune and allergic diseases. The method allows to increase the yield and purity of the target product.
Известно, что ТБГ, являясь специфическим маркером беременности, синтезируется клетками синцитиотрофобласта и выделяется в кровоток матери. По мнению большинства авторов ТБГ является гликопротеином, содержащим до 28% углеводов и имеющим молекулярную массу от 90000 Да (Bohn Н., 1974) до 113000 Да (Татаринов Ю.С. и др., 1974). Однако в литературе присутствуют данные о том, что ТБГ образует семейство, состоящее из 4 белков с молекулярной массой 72, 64, 62 и 54 кДа (Plouzek С.А., Chou J.Y., 1991). Другие же авторы полагают, что ТБГ является гетерогенным белком, гетерогенность которого обусловлена наличием двух вариантов ТБГ - альфа и бета (Pola A. et al., 1992). При этом молекулярный вес ТБГ-альфа равен 110 кД, а ТБГ-бета - 75 кД (Ito M. et al., 1981). Отсутствие достоверно подтвержденных данных о молекулярной гетерогенности ТБГ и точного описания структуры молекулы в значительной степени является причиной отсутствия эффективной системы его выделения и очистки. Источником для получения ТБГ является ретроплацентарная кровь.It is known that TBH, being a specific marker of pregnancy, is synthesized by syncytiotrophoblast cells and secreted into the mother's bloodstream. According to most authors, TBH is a glycoprotein containing up to 28% carbohydrates and having a molecular weight of 90,000 Da (Bohn N., 1974) to 113,000 Da (Tatarinov Yu.S. et al., 1974). However, there is evidence in the literature that TBH forms a family of 4 proteins with a molecular weight of 72, 64, 62, and 54 kDa (Plouzek S.A., Chou J.Y., 1991). Other authors believe that TBH is a heterogeneous protein, the heterogeneity of which is due to the presence of two variants of TBH - alpha and beta (Pola A. et al., 1992). The molecular weight of TBH-alpha is 110 kD, and TBH-beta is 75 kD (Ito M. et al., 1981). The absence of reliably confirmed data on the molecular heterogeneity of TBH and an accurate description of the structure of the molecule is largely the reason for the lack of an effective system for its isolation and purification. The source for receiving TBH is retroplacental blood.
Известен многоэтапный способ выделения ТБГ из ретроплацентарной крови человека [1]. Сыворотку, полученную из ретроплацентарной крови, фракционировали последовательно риванолом и сульфатом аммония, после чего подвергали гель-фильтрации на сефадексе G-25. Полученный материал подвергали ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. Фракции, содержащие ТБГ, объединяли, фракционировали сульфатом аммония и проводили гель-фильтрацию на сефадексе G-200. После очередного сульфатаммонийного фракционирования и диализа проводили хроматографию на колонке с гидросилапатитом и следом после осветления центрифугированием ионообменную хроматографию на микрогранулярной целлюлозе КМ-32. Завершающим этапом очистки являлось препаративное изоэлектрофокусирование на амфолинах с диапазоном 3,0-10,0. Результатом всей процедуры очистки являлось получение препарата ТБГ со степенью очистки 93%. Выход составлял 1,1%.Known multi-stage method for the allocation of TBH from human retroplacental blood [1]. Serum obtained from retro-placental blood was successively fractionated with rivanol and ammonium sulfate, and then subjected to gel filtration on Sephadex G-25. The resulting material was subjected to ion exchange chromatography on DEAE cellulose. The fractions containing TBH were combined, fractionated with ammonium sulfate and gel filtration was performed on Sephadex G-200. After the next ammonium sulfate fractionation and dialysis, chromatography was performed on a hydrosilapatite column and, after clarification by centrifugation, ion-exchange chromatography on KM-32 microgranular cellulose. The final stage of purification was preparative isoelectric focusing on ampholines with a range of 3.0-10.0. The result of the entire cleaning procedure was the preparation of TBH with a degree of purification of 93%. The yield was 1.1%.
Процедура очистки, позволившая получить 1,8 мг относительно чистого искомого белка из пробы, содержащей 160 мг, предусматривает две процедуры гель-фильтрационной, две ионообменной, одну гидрофобной хроматографий, три процедуры сульфатаммонийного фракционирования и изоэлектрофокусирование.The purification procedure, which made it possible to obtain 1.8 mg of the relatively pure desired protein from a sample containing 160 mg, involves two gel filtration procedures, two ion exchange, one hydrophobic chromatography, three ammonium sulfate fractionation procedures, and isoelectric focusing.
Таким образом, явными недостатками описанного метода являются чрезвычайная громоздкость и трудоемкость, очень высокая затратность, особенно с учетом чрезвычайно низкого выхода целевого продукта, равного 1,1%.Thus, the obvious drawbacks of the described method are the extreme bulkiness and complexity, very high cost, especially given the extremely low yield of the target product, equal to 1.1%.
Известен способ выделения ТБГ из отходов производства гаммаглобулина из ретроплацентарной крови [2], предусматривающий суспендирование твердого осадка, содержащего ТБГ в воде, центрифугирование и последующее сульфатаммонийное фракционирование. После 4-суточного диализа и центрифугирования полученный супернатант обрабатывают гидроксилапатитом и, проинкубировав 30-60 минут, вновь центрифугируют. Супернатант подвергают концентрированию на ультрафильтрах и двухсуточному диализу, после чего центрифугируют и лиофилизируют. Лиофилизированный препарат растворяют в фосфатном буфере и подвергают колоночной хроматографии на гидроксилапатите. Элюат диализуют в течение 36 часов и лиофилизируют. Выход составляет 35,5%, чистота препарата - 95%. Описанный способ превосходит предыдущий и по чистоте получаемого препарата, и по выходу, однако также весьма трудоемок, занимает существенное время и приводит к неоправданным потерям за счет многочисленных процедур диализа.A known method for the separation of TBH from waste products of gammaglobulin from retro-placental blood [2], involving the suspension of a solid precipitate containing TBG in water, centrifugation and subsequent sulfonammonium fractionation. After 4-day dialysis and centrifugation, the resulting supernatant is treated with hydroxylapatite and, after incubation for 30-60 minutes, centrifuged again. The supernatant is subjected to concentration on ultrafilters and two-day dialysis, after which it is centrifuged and lyophilized. The lyophilized preparation is dissolved in phosphate buffer and subjected to hydroxylapatite column chromatography. The eluate is dialyzed for 36 hours and lyophilized. The yield is 35.5%, the purity of the drug is 95%. The described method is superior to the previous one both in the purity of the obtained preparation and in the yield, however, it is also very laborious, it takes considerable time and leads to unjustified losses due to numerous dialysis procedures.
Теми же проблемами отягощены методы, предложенные И.И.Коптевой с соавт. [4] и Ю.А.Калинина с соавт. [5], которые при той же чистоте целевого продукта (95%) сопровождаются существенно меньшими выходами (20%).The same problems are weighed down by the methods proposed by I.I. Kopteva et al. [4] and Yu.A. Kalinin et al. [5], which at the same purity of the target product (95%) are accompanied by significantly lower yields (20%).
Известен способ получения ТБГ из сыворотки ретроплацентарной крови или осадка, полученного при производстве гамма-глобулина из сыворотки ретроплацентарной крови [3], предусматривающий сульфатаммонийное фракционирование с последующим диализом в течение 4-х суток. После центрифугирования супернатант подвергают ионообменной хроматографии. Элюат концентрируют и диализуют в течение 72 часов. Отдиализованный препарат центрифугируют и пропускают через сорбент, содержащий лектин (конканавалин А). Элюированную фракцию, содержащую ТБГ, диализуют и лиофилизируют. Выход препарата при чистоте 96% составляет 20%.A known method of producing TBG from serum of retro-placental blood or sediment obtained in the production of gamma globulin from serum of retro-placental blood [3], involving ammonium sulfate fractionation, followed by dialysis for 4 days. After centrifugation, the supernatant is subjected to ion exchange chromatography. The eluate is concentrated and dialyzed for 72 hours. The dialyzed preparation is centrifuged and passed through a sorbent containing lectin (concanavalin A). The eluted fraction containing TBH is dialyzed and lyophilized. The yield of the drug with a purity of 96% is 20%.
В самой процедуре так называемого байч варианта описанной ионообменной хроматографии на гексилсефарозе заложены высокие количественные потери белка. Длительность осуществления способа, а также низкий выход целевого продукта не позволяют рассматривать описанный способ как решение проблемы выделения и очистки такого сложного белка как трофобластический бета-1-гликопротеин.The procedure of the so-called bich variant of the described ion-exchange chromatography on hexyl sepharose contains high quantitative losses of protein. The duration of the method and the low yield of the target product do not allow us to consider the described method as a solution to the problem of isolation and purification of such a complex protein as trophoblastic beta-1-glycoprotein.
Ближайшим аналогом может быть рассмотрен способ, предложенный Ю.А.Калининой с соавт. [5]. Авторы использовали в качестве исходного материала ретроплацентарную кровь или осадок, полученный при производстве гамма-глобулина. С целью сокращения времени процедуры, авторы получали сульфатаммонийный осадок, который подвергали последовательно гель-фильтрационной хроматографии на сефадексе Г-100, ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе и хроматографии на сефарозе с иммобилизованным цибакрон-синим красителем. В завершение процесса, полученный продукт вновь подвергался гель-фильтрации на сефадексе Г-200. При этом авторы опрометчиво называют хроматографию на цибакрон-сефарозе аффинной, в то время как имеет место гидрофобная процедура. Многоэтапность процедуры выделения определяет ее трудоемкость и низкий выход целевого продукта (около 25%) при неплохих показателях чистоты (не менее 96%).The closest analogue can be considered the method proposed by Yu.A. Kalinina et al. [5]. The authors used retroplacental blood or sediment obtained from the production of gamma globulin as starting material. In order to reduce the time of the procedure, the authors obtained a sulfate ammonium precipitate, which was sequentially subjected to gel filtration chromatography on Sephadex G-100, ion exchange chromatography on DEAE cellulose and chromatography on sepharose with immobilized cybacron blue dye. At the end of the process, the resulting product was again subjected to gel filtration on Sephadex G-200. At the same time, the authors recklessly call chromatography on cybacron-sepharose affinity, while there is a hydrophobic procedure. The multi-stage isolation procedure determines its complexity and low yield of the target product (about 25%) with good purity (not less than 96%).
Технической задачей изобретения является увеличение выхода и чистоты выделяемого ТБГ. Поставленная задача достигается следующим образом.An object of the invention is to increase the yield and purity of released TBH. The task is achieved as follows.
Проверенную на отсутствие вируса гепатита В, антител к ВИЧ, гепатиту С ретроплацентарную кровь центрифугируют, добавляют в нее натрия хлорид (0,1-1,0 моль/л) и тритон Х-100 (0,01-0,1%) для блокирования неспецифической сорбции и инактивации вирусов, вновь центрифугируют. Подготовленную таким образом сыворотку насыщают сульфатом аммония до 30%, инкубируют в течение ночи при +4°С и перемешивании и центрифугируют. Осадок трижды отмывают 30% сульфатом аммония, суспендируют в 0,15 М фосфатно-солевом буферном растворе рН 7,0-7,5, содержащем 0,5 М хлорида натрия, и диализуют в ультрафильтрационной ячейке, пропуская 10-кратный объем буфера. Полученный препарат разводят в 5 раз 0,15 М фосфатно-солевым буферным раствором рН 7,0-7,5, содержащим 0,5 М хлорида натрия и 0,05% тритон Х-100, и подвергают ультрафильтрации в ультрафильтрационной ячейке с фильтром с пределом исключения 100000 Да. Полученный пермиат наносят на аффинный сорбент с иммобилизованными моноклональными антителами к ТБГ. Неспецифически сорбировавшиеся компоненты сыворотки вымывают с сорбента последовательно 4-5 объемами 0,15 М фосфатно-солевого буферного раствора рН 7,0-7,5, содержащего 0,5 М хлорида натрия, и таким же объемом 0,15 М раствора хлорида натрия. Аффинно-связанный ТБГ элюируют 0,1 М глицин-HCl буферным раствором.Tested for the absence of hepatitis B virus, antibodies to HIV, hepatitis C, retroplacental blood is centrifuged, sodium chloride (0.1-1.0 mol / L) and triton X-100 (0.01-0.1%) are added to it blocking non-specific sorption and inactivation of viruses, centrifuged again. Serum thus prepared is saturated with ammonium sulfate to 30%, incubated overnight at + 4 ° C and stirring and centrifuged. The precipitate is washed three times with 30% ammonium sulfate, suspended in 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride, and dialyzed in an ultrafiltration cell, passing a 10-fold volume of buffer. The resulting preparation was diluted 5 times with 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride and 0.05% Triton X-100, and was subjected to ultrafiltration in an ultrafiltration cell with a filter with exclusion limit of 100,000 Yes. The resulting permeate is applied to an affinity sorbent with immobilized monoclonal antibodies to TBH. Non-specifically adsorbed serum components are washed from the sorbent sequentially with 4-5 volumes of 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride and the same volume of 0.15 M sodium chloride solution. Affinity-bound TBH is eluted with 0.1 M glycine-HCl buffer solution.
Элюат быстро нейтрализуют до рН 6,5-7,5, диализуют против физраствора и лиофилизируют.The eluate is quickly neutralized to a pH of 6.5-7.5, dialyzed against saline and lyophilized.
Определяющим преимуществом предлагаемого способа является возможность получения препарата ТБГ с высокой степенью чистоты и эффективным выходом целевого продукта.The determining advantage of the proposed method is the possibility of obtaining a TBH preparation with a high degree of purity and an effective yield of the target product.
Способ иллюстрируется следующими примерами.The method is illustrated by the following examples.
Пример 1. Все процедуры проводят при +4°С. 200 мл ретроплацентарной крови центрифугируют со скоростью 10000 об/мин в течение 1 часа, осадок отбрасывают, а к супернатанту добавляют натрия хлорид до конечной концентрации 0,5 М и тритон Х-100 до конечной концентрации 0,05%. Центрифугирование повторяют. Сыворотку, содержащую 31 мг ТБГ, подготовленную таким образом, насыщают сульфатом аммония до 30% насыщения, инкубируют в течение ночи при перемешивании и центрифугируют со скоростью 10000 об/мин в течение 1 часа. Осадок трижды отмывают 30% сульфатом аммония, суспендируют в 0,15 М фосфатно-солевом буферном растворе рН 7,0-7,5, содержащем 0,5 М хлорида натрия и 0,05% тритон Х-100, диализуют в ультрафильтрационной ячейке, пропуская 10-кратный объем буфера. К полученному препарату добавляют 4 объема 0,15 М фосфатно-солевого буферного раствора рН 7,0-7,5, содержащего 0,5 М хлорида натрия и 0,05% тритон Х-100 и подвергают ультрафильтрации в ультрафильтрационной ячейке с использованием фильтра с пределом исключения 100000 Да до полного прохождения раствора через фильтр. Полученный пермеат объединяют с 40 мл сефарозы CL-6B, с «пришитыми» моноклональными антителами к ТБГ. Инкубацию осуществляют в течение 12 ч при постоянном перемешивании на орбитальном шейкере.Example 1. All procedures are carried out at + 4 ° C. 200 ml of retro-placental blood is centrifuged at a speed of 10,000 rpm for 1 hour, the precipitate is discarded, and sodium chloride is added to the supernatant to a final concentration of 0.5 M and Triton X-100 to a final concentration of 0.05%. Centrifugation is repeated. Serum containing 31 mg of TBH, thus prepared, is saturated with ammonium sulfate to 30% saturation, incubated overnight with stirring, and centrifuged at 10,000 rpm for 1 hour. The precipitate is washed three times with 30% ammonium sulfate, suspended in 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride and 0.05% Triton X-100, dialyzed in an ultrafiltration cell, skipping a 10x buffer volume. 4 volumes of 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride and 0.05% Triton X-100 are added to the resulting preparation and ultrafiltered in an ultrafiltration cell using a filter with an exclusion limit of 100,000 Yes until the solution completely passes through the filter. The resulting permeate is combined with 40 ml of CL-6B Sepharose, with "sewn" monoclonal antibodies to TBH. Incubation is carried out for 12 hours with constant stirring on an orbital shaker.
Неспецифически сорбировавшиеся компоненты сыворотки вымывают с сорбента последовательно 4-5 объемами фосфатно-солевого буферного раствора, содержащего 0,5 М натрия хлорида и таким же количеством 0,15 М раствора натрия хлорида. Сорбент помещают в хроматографическую колонку 2,5×8,5 см. После отмывки сорбента раствором натрия хлорида проводят элюцию 0,1 М глицин-НСl буферным раствором с рН 2,55 со скоростью 80 мл/ч, контролируя процесс по оптической плотности при длине волны 280 нм. Элюцию проводят до достижения нулевых значений оптической плотности. Фракцию, содержащую целевой продукт, немедленно нейтрализуют до рН 6,5-7,5, концентрируют, диализуют в ультрафильтрационной ячейке относительно физиологического раствора и лиофилизируют.Non-specifically adsorbed serum components are washed out from the sorbent sequentially with 4-5 volumes of phosphate-saline buffer solution containing 0.5 M sodium chloride and the same amount of 0.15 M sodium chloride solution. The sorbent is placed in a chromatographic column 2.5 × 8.5 cm. After washing the sorbent with a sodium chloride solution, an elution with 0.1 M glycine-HCl buffer solution with a pH of 2.55 at a speed of 80 ml / h is carried out, controlling the process by optical density at a length of waves of 280 nm. Elution is carried out until zero optical density is reached. The fraction containing the target product is immediately neutralized to a pH of 6.5-7.5, concentrated, dialyzed in an ultrafiltration cell relative to physiological saline and lyophilized.
Чистота полученного препарата, анализируемая методом электрофореза в градиенте плотности полиакриламидного геля, составляет 98%. Выход препарата по данным иммуноферментного анализа составляет 23,3 мг (75%). Полученный препарат тестируют на отсутствие антител к ВИЧ, вируса гепатита В и антител к вирусу гепатита С.The purity of the obtained preparation, analyzed by electrophoresis in a density gradient of polyacrylamide gel, is 98%. The output of the drug according to enzyme immunoassay is 23.3 mg (75%). The resulting preparation is tested for the absence of antibodies to HIV, hepatitis B virus and antibodies to hepatitis C.
Пример 2. Все процедуры проводят при +4°С. 200 мл ретроплацентарной крови центрифугируют со скоростью 10000 об/мин в течение 1 часа, осадок отбрасывают, а к супернатанту добавляют натрия хлорид до конечной концентрации 0,5 М и тритон Х-100 до конечной концентрации 0,05%. Центрифугирование повторяют. Сыворотку, содержащую 31 мг ТБГ, подготовленную таким образом, насыщают сульфатом аммония до 30% насыщения, инкубируют в течение ночи при перемешивании и центрифугируют со скоростью 10000 об/мин в течение 1 часа. Осадок трижды отмывают 30% сульфатом аммония, суспендируют в 0,15 М фосфатно-солевом буферном растворе рН 7,0-7,5, содержащем 0,5 М хлорида натрия и 0,05% тритон Х-100, диализуют в ультрафильтрационной ячейке, пропуская 10-кратный объем буфера. К полученному препарату добавляют 4 объема 0,15 М фосфатно-солевого буферного раствора рН 7,0-7,5, содержащего 0,5 М хлорида натрия и 0,05% тритон Х-100, и подвергают ультрафильтрации в ультрафильтрационной ячейке с использованием фильтра с пределом исключения 100000 Да до полного прохождения раствора через фильтр. Пермеат наносят на хроматографическую колонку 2,5×8,5, заполненную 40 мл сефарозы CL-6B, с «пришитыми» моноклональными антителами к ТБГ, эквилибрированную фосфатно-солевым буферным раствором. Скорость нанесения 40 мл/ч. Нанесение осуществляют трехкратным прохождением наносимого объема через колонку.Example 2. All procedures are carried out at + 4 ° C. 200 ml of retro-placental blood is centrifuged at a speed of 10,000 rpm for 1 hour, the precipitate is discarded, and sodium chloride is added to the supernatant to a final concentration of 0.5 M and Triton X-100 to a final concentration of 0.05%. Centrifugation is repeated. Serum containing 31 mg of TBH, thus prepared, is saturated with ammonium sulfate to 30% saturation, incubated overnight with stirring, and centrifuged at 10,000 rpm for 1 hour. The precipitate is washed three times with 30% ammonium sulfate, suspended in 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride and 0.05% Triton X-100, dialyzed in an ultrafiltration cell, skipping a 10x buffer volume. 4 volumes of 0.15 M phosphate-buffered saline pH 7.0-7.5 containing 0.5 M sodium chloride and 0.05% Triton X-100 are added to the resulting preparation and ultrafiltered in an ultrafiltration cell using a filter with an exclusion limit of 100,000 Yes until the solution has completely passed through the filter. The permeate is applied to a chromatographic column 2.5 × 8.5, filled with 40 ml of CL-6B Sepharose, with "sewn" monoclonal antibodies to TBH, equilibrated with phosphate-buffered saline. Application rate 40 ml / h. Application is carried out by triple passage of the applied volume through the column.
Неспецифически сорбировавшиеся компоненты крови вымывают с сорбента последовательно фосфатно-солевым буферным раствором, содержащим 0,5 М натрия хлорида, и 0,15 М раствором натрия хлорида со скоростью 80 мл/ч до достижения нулевых значений оптической плотности.Non-specifically sorbed blood components are washed out of the sorbent sequentially with a phosphate-saline buffer solution containing 0.5 M sodium chloride and 0.15 M sodium chloride solution at a rate of 80 ml / h until the optical density reaches zero.
После отмывки сорбента проводят элюцию 0,1 М глицин-HCl буферным раствором с рН 2,55 и скоростью 40 мл/ч. Процесс элюции контролируют по оптической плотности при длине волны 280 нм. Элюция проводится до достижения нулевых значений оптической плотности. Фракцию, содержащую целевой продукт, немедленно нейтрализуют до рН 6,5-7,5, концентрируют, диализуют в ультрафильтрационной ячейке относительно физиологического раствора и лиофилизируют.After washing the sorbent, an elution with 0.1 M glycine-HCl buffer solution with a pH of 2.55 and a speed of 40 ml / h is carried out. The elution process is controlled by optical density at a wavelength of 280 nm. Elution is performed until the optical density reaches zero. The fraction containing the target product is immediately neutralized to a pH of 6.5-7.5, concentrated, dialyzed in an ultrafiltration cell relative to physiological saline and lyophilized.
Чистота полученного препарата, анализируемая методом электрофореза в градиенте плотности полиакриламидного геля, составляет 98%. Выход препарата по данным иммуноферментного анализа составляет 25,1 мг (81%). Полученный препарат тестируют на отсутствие антител к ВИЧ, вируса гепатита В и антител к вирусу гепатита С.The purity of the obtained preparation, analyzed by electrophoresis in a density gradient of polyacrylamide gel, is 98%. The output of the drug according to enzyme immunoassay is 25.1 mg (81%). The resulting preparation is tested for the absence of antibodies to HIV, hepatitis B virus and antibodies to hepatitis C.
Использование предлагаемого способа позволяет получать целевой продукт с высокой степенью чистоты (не менее 98%) и высоким: 75-81% выходом. Постадийная характеристика процедуры выделения и очистки приведена в таблице 1.Using the proposed method allows to obtain the target product with a high degree of purity (not less than 98%) and high: 75-81% yield. The step-by-step characterization of the isolation and purification procedures is given in table 1.
Источники информацииInformation sources
1. А.В.Соколов, Г.А.Козляев, Н.В.Меснянкин, Ю.С.Татаринов. Выделение и очистка специфичного β1-г-глобулина. «Вопросы медицинской химии», 1978, №24, с.240-244.1. A.V. Sokolov, G.A. Kozlyaev, N.V. Mesnyankin, and Yu.S. Tatarinov. Isolation and purification of specific β1-g-globulin. "Questions of medical chemistry", 1978, No. 24, p.240-244.
2. С.В.Мороз, С.К.Кривоносов, А.Ф.Павленко, Ю.С.Оводов, Ю.С.Татаринов. Способ получения трофобластического бета-1-гликопротеина из отходов ретроплацентарной крови при производстве гамма-глобулина. А.с. №1341736, приоритет 28.03.85.2. S.V. Moroz, S.K. Krivonosov, A.F. Pavlenko, Yu.S. Ovodov, Yu.S. Tatarinov. A method of obtaining trophoblastic beta-1-glycoprotein from waste retroplacental blood in the production of gamma globulin. A.S. No. 1341736, priority 03/28/85.
3. С.К.Кривоносов, А.А.Терентьев, И.И.Коптева, И.В.Москвичева, П.П.Хохлов, А.К.Барсуков, Ю.С.Татаринов Способ получения трофобластического бета1-гликопротеина. А.с. №1783644, приоритет 04.12.89.3. S.K. Krivonosov, A.A. Terentyev, I.I. Kopteva, I.V. Moskvicheva, P.P. Khokhlov, A.K. Barsukov, Yu.S. Tatarinov Method for producing trophoblastic beta 1- glycoprotein . A.S. No. 1783644, priority 04.12.89.
4. И.И.Коптева, С.К.Кривоносов, Ю.С.Татаринов. Сравнительная физико-химическая характеристика препаратов трофобластического β1-гликопротеина, выделенных из ретроплацентарной крови. Ж. «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины», 1990, №9, с.265-267.4. I.I. Kopteva, S.K. Krivonosov, Yu.S. Tatarinov. Comparative physico-chemical characteristics of trophoblastic β 1 -glycoprotein preparations isolated from retroplacental blood. J. "Bulletin of experimental biology and medicine", 1990, No. 9, p.265-267.
5. Ю.А.Калинин, А.А.Терентьев, Ю.С.Татаринов. «Способ получения трофобластического бета1-гликопротеина». А.с. №1836957, приоритет 25.03.90.5. Yu.A. Kalinin, A.A. Terentyev, Yu.S. Tatarinov. "A method for producing trophoblastic beta 1 -glycoprotein." A.S. No. 1836957, priority 03.25.90.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008106727/15A RU2367449C1 (en) | 2008-02-21 | 2008-02-21 | Method for recovering and purifying trophoblastic beta-1-glycoprotein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008106727/15A RU2367449C1 (en) | 2008-02-21 | 2008-02-21 | Method for recovering and purifying trophoblastic beta-1-glycoprotein |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2367449C1 true RU2367449C1 (en) | 2009-09-20 |
Family
ID=41167776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008106727/15A RU2367449C1 (en) | 2008-02-21 | 2008-02-21 | Method for recovering and purifying trophoblastic beta-1-glycoprotein |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2367449C1 (en) |
-
2008
- 2008-02-21 RU RU2008106727/15A patent/RU2367449C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Коптева И.И. и др. Сравнительная физико-химическая характеристика препаратов трофобластического гликопротеина, выделенных из ретроплацентарной крови // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - М.: Медицина, 1990, т. СХ, №9, с.265-267. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1188612A (en) | Recovery | |
| US5118796A (en) | Efficient large-scale purification of immunoglobulins and derivatives | |
| JPS58131918A (en) | Preparation of factor viii coagulative protein and immunoadsorbent | |
| EP0011032B1 (en) | Method for isolation of hbsag | |
| US4558005A (en) | Monoclonal anti-erythropoietin | |
| Björling | I. Plasma fractionation methods used in Sweden | |
| JPH0386900A (en) | Novel thrombin-combining substance and production its | |
| CN107964044B (en) | Method for purifying anti-CD 20 monoclonal antibody from milk sample | |
| US4264449A (en) | Antibody-specific solid phase immunoadsorbent, preparation thereof, and antibody purification therewith | |
| US4232004A (en) | Antibody-specific solid phase immunoadsorbent, preparation thereof, and antibody purification therewith | |
| RU2367449C1 (en) | Method for recovering and purifying trophoblastic beta-1-glycoprotein | |
| JPS6034916A (en) | High purity purification of ix factor and other vitamin k dependent proteins | |
| JP2566919B2 (en) | Method for producing α-interferon | |
| RU2325171C1 (en) | Method of trophoblastic beta-1-glycoprotein release and purification | |
| Miribel et al. | The use of dye-ligand affinity chromatography for the purification of non-enzymatic human plasma proteins | |
| US5391713A (en) | Interferon purification process | |
| RU2283131C1 (en) | Method for preparing preparation dry alpha-fetoprotein | |
| US5478738A (en) | Purification of αN-acetylgalactosaminidase | |
| Glass et al. | Properties of nerve growth factor from the venom of Bothrops atrox | |
| Scherberich et al. | Isolation of kidney brush border gamma-glutamyl transpeptidase from urine by specific antibody gel chromatography | |
| RU2792819C1 (en) | Method for obtaining homologous immunoglobulin against covid-19 | |
| RU2145610C1 (en) | Method of purification of human recombinant erythropoietin | |
| JPH0459797A (en) | Purification of antibody | |
| RU2769201C2 (en) | Method for producing a highly purified recombinant human c1-esterase inhibitor for application in medicine | |
| RU2302424C1 (en) | Alpha-fetoprotein isolation and purification method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180222 |