RU2336830C2 - Method for jaw bone structure recovery - Google Patents

Method for jaw bone structure recovery Download PDF

Info

Publication number
RU2336830C2
RU2336830C2 RU2006118793/14A RU2006118793A RU2336830C2 RU 2336830 C2 RU2336830 C2 RU 2336830C2 RU 2006118793/14 A RU2006118793/14 A RU 2006118793/14A RU 2006118793 A RU2006118793 A RU 2006118793A RU 2336830 C2 RU2336830 C2 RU 2336830C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
fibroblasts
bone
cells
culture
jaw
Prior art date
Application number
RU2006118793/14A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2006118793A (en
Inventor
Владимир Павлович Туманов (RU)
Владимир Павлович Туманов
Галина Сергеевна Рунова (RU)
Галина Сергеевна Рунова
Елена Леонидовна Туманова (RU)
Елена Леонидовна Туманова
Original Assignee
Владимир Павлович Туманов
Галина Сергеевна Рунова
Елена Леонидовна Туманова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Владимир Павлович Туманов, Галина Сергеевна Рунова, Елена Леонидовна Туманова filed Critical Владимир Павлович Туманов
Priority to RU2006118793/14A priority Critical patent/RU2336830C2/en
Publication of RU2006118793A publication Critical patent/RU2006118793A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2336830C2 publication Critical patent/RU2336830C2/en

Links

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: primary culture of fibroblast is obtained from the skin fragments received from autografting. The fibroblasts are incubated in solution for 6-8 days. Then fetal pachymeninx with human fibroblasts incubated this way is placed to a damaged part of the bone.
EFFECT: accelerating of jaw defect building process.
3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть применено как способ восстановления костных структур челюсти.The invention relates to medicine, namely to dentistry, and can be applied as a way to restore bone structures of the jaw.

Известен способ частичного восстановления челюсти, принятый за аналог (1 - пат. док. РФ 2269955.). Согласно способу моделируют трансплантат для формирования нижней челюсти путем спиральной компьютерной томографии малой берцовой кости и лицевого скелета с последующим определением локализации питательного отверстия малой берцовой кости, нижнечелюстного и подбородочного угла и длины тела нижней челюсти по контрлатеральной стороне; кроме того, измеряют ширину латеральной поверхности малой берцовой кости выше питательного отверстия и проксимальной поверхности малой берцовой кости на уровне воспроизводимой дистальной границы тела нижней челюсти; в заключение рассчитывают ширину основания иссекаемых клиньев с использованием показателей: ширина основания клина, ширина латеральной или проксимальной поверхностей малой берцовой кости в месте клиновидного иссечения, величина угла иссекаемого клина, равная 180° минус величина нижнечелюстного угла или подбородочного изгиба. Достоинством способа является возможность предотвратить изгиб и укорочение сосудистой ножки трансплантата.A known method of partial restoration of the jaw, adopted as an analogue (1 - US Pat. Doc. RF 2269955.). According to the method, a transplant is simulated for the formation of the lower jaw by means of spiral computed tomography of the tibia and facial skeleton, followed by localization of the nutritional opening of the tibia, mandibular and chin angle and length of the body of the lower jaw along the contralateral side; in addition, measure the width of the lateral surface of the tibia above the nutrient hole and the proximal surface of the tibia at the level of the reproduced distal border of the body of the lower jaw; in conclusion, the width of the base of the dissected wedges is calculated using indicators: the width of the base of the wedge, the width of the lateral or proximal surfaces of the tibia in the place of the wedge-shaped excision, the angle of the excised wedge, equal to 180 ° minus the magnitude of the mandibular angle or chin. The advantage of this method is the ability to prevent bending and shortening of the vascular pedicle of the graft.

Известен способ восстановления костных структур челюсти, принятый за прототип (2 - пат. США 4975526). Согласно способу-прототипу, используют бинарные или поликомпонентные смеси, содержащие широкий спектр макро- и микроэлементов в комплексе со структурирующими твердеющими гелями природных полимеров - протеин-хондроитин-сульфат, хитин, гиалуроновая кислота.A known method of restoring bone structures of the jaw, adopted as a prototype (2 - US Pat. US 4975526). According to the prototype method, binary or multicomponent mixtures are used containing a wide range of macro- and microelements in combination with structural hardening gels of natural polymers — protein-chondroitin-sulfate, chitin, hyaluronic acid.

Однако известный способ не позволяет достичь термоизоляции, сохранения влаги в ране, что приводит к снижению эксплуатационной надежности трансплантата.However, the known method does not allow to achieve thermal insulation, moisture preservation in the wound, which leads to a decrease in the operational reliability of the graft.

Целью настоящего изобретения является повышение эксплуатационной надежности за счет обеспечения дифференцировки остеобластов и образования грубоволокнистого костного материала трансплантата.The aim of the present invention is to increase operational reliability by ensuring the differentiation of osteoblasts and the formation of coarse-grained bone graft material.

Технический результат достигается тем, что трансплантат изготовливают из плодной твердой мозговой оболочки, а остеогенез альвеолярных отростков осуществляют с использованием культур фибробластов в растворе в течение 6-8 суток.The technical result is achieved by the fact that the transplant is made from the fetal dura mater, and the osteogenesis of the alveolar processes is carried out using fibroblast cultures in solution for 6-8 days.

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

При поступлении больной предъявляет жалобы на кровотечение десен, болезненность при пережевывании пищи. При осмотре ротовой полости отмечают гингивит, пастозность десен с явлениями застойной гиперемии и наличием пародонтальных карманов. Отмечается подвижность зубов, а между зубами образуются свободные промежутки. Подвижные зубы травмируют окружающие ткани и усиливают воспаление.Upon admission, the patient complains of bleeding gums, soreness when chewing food. When examining the oral cavity, gingivitis, gum pasteiness with symptoms of congestive hyperemia and the presence of periodontal pockets are noted. The mobility of the teeth is noted, and free spaces are formed between the teeth. Moving teeth injure surrounding tissue and increase inflammation.

Трансплантат изготавливают из фрагментов плодной твердой мозговой оболочки, остеогенез альвеолярных отростков осуществляют с использованием культур фибробластов в растворе в течение 6-8 суток.The graft is made from fragments of the fetal dura mater, osteogenesis of the alveolar processes is carried out using fibroblast cultures in solution for 6-8 days.

Первичную культуру фибробластов получали методом органного культивирования из фрагментов кожи, полученных при аутодермопластике. Плотность посева клеток при получении субкультур фибробластов человека составляет 10-35 тыс. на квадратный см поверхности и поддерживают постоянной на всех этапах способа.The primary fibroblast culture was obtained by organ culture from skin fragments obtained by autodermoplasty. The cell seeding density when receiving subcultures of human fibroblasts is 10-35 thousand per square cm of surface and keep constant at all stages of the method.

Во время хирургической операции на поврежденный участок кости альвеолярных отростков челюсти в виде восьмерки укладывают плодную твердую мозговую оболочку с культивированными фибробластами человека.During a surgical operation, a fetal dura mater with cultured human fibroblasts is placed in the form of a figure eight on the damaged bone section of the alveolar bone of the jaw.

Осуществляли контроль эффективности способа оценивая влияния фибробластов и их экскреторных белков на пролиферацию и дифференцировку остеобластов. Для этого анализировали особенности морфологии и пролиферации этих клеток на субстратах коллагена I, III типа и фибронектина (Sigma, США) в совместной культуре с фибробластами человека, подвергнутыми предварительной 10 минутной фиксации этиловым спиртом. Для сравнения с заявляемым способом остеобласты человека получали из фрагментов гребешка тазовой кости, взятой во время диагностической пункции. Плотность посева остеобластов составляла 50000 на квадратный см.The effectiveness of the method was monitored by evaluating the effects of fibroblasts and their excretory proteins on the proliferation and differentiation of osteoblasts. For this, we analyzed the morphological and proliferation features of these cells on substrates of collagen type I, type III and fibronectin (Sigma, USA) in a joint culture with human fibroblasts subjected to preliminary 10-minute fixation with ethyl alcohol. For comparison with the claimed method, human osteoblasts were obtained from fragments of the scallop of the pelvic bone taken during diagnostic puncture. The sowing density of osteoblasts was 50,000 per square cm.

Часть культуры клеток фиксировали 10% раствором нейтрального формалина или 1% раствором глутарового альдегида через 2, 24 часа 3 и 6 суток от начала культивирования. Культуры клеток окрашивались толуидиновым синим, гематоксилином и эозином. С целью верификации синтетической активности фибробластов культур, последние окрашивались альциановым синим с постановкой соответствующих контролей по методу Ван-Гизон.Part of the cell culture was fixed with 10% neutral formalin solution or 1% glutaraldehyde solution after 2, 24 hours, 3 and 6 days from the start of cultivation. Cell cultures were stained with toluidine blue, hematoxylin and eosin. In order to verify the synthetic activity of the fibroblasts of the cultures, the latter were stained with Alcian blue with the corresponding controls according to the Van Gieson method.

Установлено, что клеточному составу монослойных культур фибробластов и формируемому ими экстрацеллюлярному матриксу присуща положительная динамика, выражающаяся в смене структурно-функциональных типов фибробластов, изменению их пролиферативной активности, вариабельности синтезе глюкозаминогликанов, коллагена, фибронектина.It was established that the cellular composition of monolayer fibroblast cultures and the extracellular matrix formed by them are characterized by positive dynamics, expressed in a change in the structural and functional types of fibroblasts, a change in their proliferative activity, variability in the synthesis of glucosaminoglycans, collagen, fibronectin.

Большинство клеток к исходу первых суток наблюдения интенсивно включали меченный тритием уридин, что свидетельствовало об интенсивном синтезе в них РНК. Одновременно регистрировалось большое количество клеток, в ядро которых включался радиоактивный предшественник ДНК - тимидин, меченный тритием.Most of the cells by the end of the first day of observation intensively included tritium-labeled uridine, which indicated intensive RNA synthesis in them. At the same time, a large number of cells were recorded, the nucleus of which included the radioactive DNA precursor, thymidine, labeled with tritium.

Число клеток, включавших тимидин, меченный тритием, к исходу третьих суток по сравнению с предыдущим сроком исследования достоверно не изменялось и составило 11,3±2,48%. Окраска клеточных структур альциановым синим позволила установить прогрессирующее накопление в культуре гликозаминогликанов. Результаты применения иммунопероксидазного метода на этом этапе наблюдения позволили констатировать высокий уровень накопления в цитоплазме клеток фибронектина.The number of cells, including tritium-labeled thymidine, by the end of the third day compared with the previous study period did not significantly change and amounted to 11.3 ± 2.48%. Staining of cell structures with Alcian blue made it possible to establish progressive accumulation of glycosaminoglycans in the culture. The results of the immunoperoxidase method at this stage of the observation made it possible to ascertain a high level of fibronectin cell accumulation in the cytoplasm.

К исходу третьих суток клетки культуры формировали богатый экстрацеллюлярный матрикс: в межклеточном пространстве наряду с хлопьевидным материалом и микрофибриллами коллагена определялись фибриллы с поперечной исчерченностью. К шестым-восьмым суткам развития культуры наблюдалось формирование плотного монослоя клеток. Число клеток, включивших после часовой инкубации с изотопом - тимидин, меченный тритием, достоверно уменьшилось по сравнению с предыдущим наблюдением и составило 1,93±0,83%. Содержание фибронектина в цитоплазме фибробластов заметно снижалось. Он определялся преимущественно вне клеток в виде переплетающихся волокнистых структур.By the end of the third day, culture cells formed a rich extracellular matrix: in the intercellular space, along with flocculent material and collagen microfibrils, fibrils with transverse striation were determined. By the sixth-eighth days of the development of culture, the formation of a dense monolayer of cells was observed. The number of cells that included, after hourly incubation with an isotope, tritium-labeled thymidine significantly decreased compared to the previous observation and amounted to 1.93 ± 0.83%. The content of fibronectin in the cytoplasm of fibroblasts markedly decreased. It was determined primarily outside the cells in the form of interwoven fibrous structures.

Такая динамика структурно-функциональной организации фибробластов монослойной культуры с учетом важной роли гликозаминогликанов, фибронектина и коллагена в процессах регенерации позволила определить 6-8 суток в качестве оптимального режима заявляемого способа, характеризующегося использованием культур фибробластов для изготовления трансплантатов на плодной твердой мозговой оболочке.Such dynamics of the structural and functional organization of fibroblasts of a monolayer culture, taking into account the important role of glycosaminoglycans, fibronectin and collagen in the regeneration processes, allowed us to determine 6-8 days as the optimal mode of the proposed method, characterized by the use of fibroblast cultures for the manufacture of transplants on the membranous dura mater.

Результаты контроля эффективности заявляемого способа показали, что фибробласты способны оказывать выраженное стимулирующее влияние на процессы остеогенеза; стимуляция процесса остеогенеза альвеолярных отростков сопровождается более высоким уровнем синтеза ДНК и значительно более высоким уровнем пролиферации фибробластов; данные электронно-микроскопического исследования свидетельствуют о том, что присутствие фибробластов и сформированного им экстрацеллюлярного матрикса является необходимым фактором формирования фибриллярного аппарата, межклеточных связей и, в конечном счете, дифференцировки остеобластов и образованию грубоволокнистого костного материала.The results of monitoring the effectiveness of the proposed method showed that fibroblasts are able to exert a pronounced stimulating effect on the processes of osteogenesis; stimulation of the process of osteogenesis of the alveolar processes is accompanied by a higher level of DNA synthesis and a significantly higher level of fibroblast proliferation; electron microscopy data indicate that the presence of fibroblasts and the extracellular matrix formed by them is a necessary factor in the formation of the fibrillar apparatus, intercellular connections and, ultimately, the differentiation of osteoblasts and the formation of coarse-fibrous bone material.

Таким образом, заявляемый способ позволяет повысить эксплуатационную надежность за счет обеспечения влияния фибробластов на пролиферацию и дифференцировку остеобластов и образования грубоволокнистого костного материала трансплантата, что в целом обеспечивает активную регенерацию тканей пародонта.Thus, the claimed method allows to increase operational reliability by ensuring the influence of fibroblasts on the proliferation and differentiation of osteoblasts and the formation of coarse-grained bone graft material, which generally provides for the active regeneration of periodontal tissues.

Заявляемый способ далее поясняют примеры его реализацииThe inventive method further explain examples of its implementation

Пример 1.Example 1

Больной 3. 44 лет предъявляет жалобы на кровотечение десен, болезненность при пережевывании пищи, неприятный запах изо рта. При осмотре ротовой полости отмечают гингивит, пастозность десен с явлениями застойной гиперемии и наличием пародонтальных карманов. Отмечается подвижность зубов, а между зубами образуются свободные промежутки.Patient 3. 44 years old complains of bleeding gums, soreness when chewing food, bad breath. When examining the oral cavity, gingivitis, gum pasteiness with symptoms of congestive hyperemia and the presence of periodontal pockets are noted. The mobility of the teeth is noted, and free spaces are formed between the teeth.

Рентгенологически: остеопороз и деструкцию коркового вещества вершин межальвеолярных перегородок.Radiological: osteoporosis and destruction of the cortical substance of the vertices of the interalveolar septa.

Зубная формула пародонтоза у данного больногоThe dental formula of periodontal disease in this patient 0005432100054321 12345000.12345000. 0065432100654321 12345600.12345600.

Трансплантат изготавливают из плодной твердой мозговой оболочки, остеогенез альвеолярных отростков осуществляют с использованием культур фибробластов в растворе в течение 6 суток.The graft is made from the fetal dura mater, osteogenesis of the alveolar processes is carried out using fibroblast cultures in solution for 6 days.

Первичную культуру фибробластов получали методом органного культивирования из фрагментов кожи, полученных при аутодермопластике. Плотность посева клеток при получении субкультур фибробластов человека составляет 10 тыс. на см2 поверхности и оставалась постоянной на всех этапах способа.The primary fibroblast culture was obtained by organ culture from skin fragments obtained by autodermoplasty. The cell seeding density when receiving subcultures of human fibroblasts is 10 thousand per cm 2 surface and remained constant at all stages of the method.

Во время хирургической операции на поврежденный участок кости альвеолярных отростков челюсти в виде восьмерки укладывают плодную твердую мозговую оболочку с культивированными фибробластами человека.During a surgical operation, a fetal dura mater with cultured human fibroblasts is placed in the form of a figure eight on the damaged bone section of the alveolar bone of the jaw.

Осуществляют контроль эффективности способа оценивая влияния фибробластов и их экскреторных белков на пролиферацию и дифференцировку остеобластов. Для этого анализировали особенности морфологии и пролиферации этих клеток на субстратах коллагена I, III типа и фибронектина в совместной культуре с фибробластами человека, подвергнутыми предварительной 10 минутной фиксации этиловым спиртом. Остеобласты человека получали из фрагментов гребешка тазовой кости, взятой во время диагностической пункции. Плотность посева остеобластов составляла 50000 на см2.The effectiveness of the method is monitored by evaluating the effects of fibroblasts and their excretory proteins on the proliferation and differentiation of osteoblasts. To do this, we analyzed the morphological and proliferation of these cells on the substrates of collagen type I, III and fibronectin in a joint culture with human fibroblasts subjected to a preliminary 10 minute fixation with ethyl alcohol. Human osteoblasts were obtained from fragments of the scallop of the pelvic bone taken during diagnostic puncture. The sowing density of osteoblasts was 50,000 per cm 2 .

Часть культуры клеток фиксировали 10% раствором нейтрального формалина через 2, 24 часа 3 и 6 суток от начала культивирования. Культуры клеток окрашивались толуидиновым синим. Верификацию синтетической активности фибробластов культур осуществляли окрашиванием альциановым синим с постановкой соответствующих контролей по методу Ван-Гизон.Part of the cell culture was fixed with a 10% solution of neutral formalin after 2, 24 hours 3 and 6 days from the start of cultivation. Cell cultures were stained with toluidine blue. The synthetic activity of the fibroblasts of cultures was verified by staining with Alcian blue with the corresponding controls according to the Van Gieson method.

Установлено, что в монослойных культурах фибробластов и формируемому ими экстрацеллюлярному матриксу наблюдается смена структурно-функциональных типов фибробластов, изменение их пролиферативной активности, вариабельность синтеза глюкозаминогликанов, коллагена, фибронектина.It was established that in monolayer cultures of fibroblasts and the extracellular matrix formed by them, a change in the structural and functional types of fibroblasts, a change in their proliferative activity, and variability in the synthesis of glucosaminoglycans, collagen, fibronectin are observed.

Большинство клеток к исходу первых суток наблюдения интенсивно включали меченный тритием уридин, что свидетельствовало об интенсивном синтезе в них РНК. Одновременно регистрировалось большое количество клеток, в ядро которых включался радиоактивный предшественник ДНК-тимидин, меченный тритием.Most of the cells by the end of the first day of observation intensively included tritium-labeled uridine, which indicated intensive RNA synthesis in them. At the same time, a large number of cells were recorded, the core of which included the radioactive precursor DNA-thymidine labeled with tritium.

Число клеток, включавших тимидин, меченный тритием, к исходу третьих суток по сравнению с предыдущим сроком исследования достоверно не изменялось и составило 8,8%. Окраска клеточных структур альциановым синим позволила установить прогрессирующее накопление в культуре гликозаминогликанов. Результаты применения иммунопероксидазного метода на этом этапе наблюдения позволили констатировать высокий уровень накопления в цитоплазме клеток фибронектина.The number of cells, including tritium labeled thymidine, by the end of the third day compared with the previous study period did not significantly change and amounted to 8.8%. Staining of cell structures with Alcian blue made it possible to establish progressive accumulation of glycosaminoglycans in the culture. The results of the immunoperoxidase method at this stage of the observation made it possible to ascertain a high level of fibronectin cell accumulation in the cytoplasm.

К исходу третьих суток клетки культуры формировали богатый экстрацеллюлярный матрикс: в межклеточном пространстве наряду с хлопьевидным материалом и микрофибриллами коллагена определялись фибриллы с поперечной исчерченностью. К шестым суткам развития культуры наблюдалось формирование плотного монослоя клеток. Число клеток, включивших после часовой инкубации с изотопом - тимидин, меченный тритием, достоверно уменьшилось по сравнению с предыдущим наблюдением и составило 1,1%. Содержание фибронектина в цитоплазме фибробластов заметно снижалось. Он определялся преимущественно вне клеток в виде переплетающихся волокнистых структур.By the end of the third day, culture cells formed a rich extracellular matrix: in the intercellular space, along with flocculent material and collagen microfibrils, fibrils with transverse striation were determined. By the sixth day of culture development, the formation of a dense monolayer of cells was observed. The number of cells that included, after hourly incubation with the isotope, tritium-labeled thymidine, significantly decreased compared to the previous observation and amounted to 1.1%. The content of fibronectin in the cytoplasm of fibroblasts markedly decreased. It was determined primarily outside the cells in the form of interwoven fibrous structures.

Последующее катамнестическое наблюдение подтвердило прочность костных структур челюсти.Subsequent follow-up observation confirmed the strength of the bone structures of the jaw.

Пример 2.Example 2

Больной К. 36 лет, при поступлении жалуется на кровотечение десен, болезненность при пережевывании пищи. При осмотре ротовой полости отмечают пастозность десен с явлениями застойной гиперемии и наличием пародонтальных карманов. Отмечается подвижность зубов, а между зубами образуются свободные промежутки. Подвижные зубы травмируют окружающие ткани и усиливают воспаление.Patient K., 36 years old, upon admission complains of bleeding gums, soreness when chewing food. When examining the oral cavity, the gums are pasty with symptoms of congestive hyperemia and the presence of periodontal pockets. The mobility of the teeth is noted, and free spaces are formed between the teeth. Moving teeth injure surrounding tissue and increase inflammation.

Рентгенологически отмечается резорбция костной ткани, образование костных карманов и отложение поддесневого зубного камня.Radiological bone resorption, the formation of bone pockets and the deposition of subgingival calculus are noted.

Зубная формула пародонтоза у данного больногоThe dental formula of periodontal disease in this patient 0005032100050321 1204500012045000 0065430100654301 12305600.12305600.

Трансплантат изготавливают из плодной твердой мозговой оболочки, остеогенез альвеолярных отростков осуществляют с использованием культур фибробластов в растворе в течение 7 суток.The graft is made from the fetal dura mater, the osteogenesis of the alveolar processes is carried out using fibroblast cultures in solution for 7 days.

Первичную культуру фибробластов получали методом органного культивирования из фрагментов кожи, полученных при аутодермопластике. Плотность посева клеток при получении субкультур фибробластов человека составляет 25 тыс. на см2 поверхности.The primary fibroblast culture was obtained by organ culture from skin fragments obtained by autodermoplasty. The cell seeding density upon receipt of subcultures of human fibroblasts is 25 thousand per cm 2 surface.

Во время хирургической операции на поврежденный участок кости альвеолярных отростков челюсти в виде восьмерки укладывают плодную твердую мозговую оболочку с культивированными фибробластами человека.During a surgical operation, a fetal dura mater with cultured human fibroblasts is placed in the form of a figure eight on the damaged bone section of the alveolar bone of the jaw.

Установлено, что клеточному составу монослойных культур фибробластов и формируемому ими экстрацеллюлярному матриксу присуща положительная динамика, выражающаяся в смене структурно-функциональных типов фибробластов, изменению их пролиферативной активности, вариабельности синтезе глюкозаминогликанов, коллагена, фибронектина.It was established that the cellular composition of monolayer fibroblast cultures and the extracellular matrix formed by them are characterized by positive dynamics, expressed in a change in the structural and functional types of fibroblasts, a change in their proliferative activity, variability in the synthesis of glucosaminoglycans, collagen, fibronectin.

Большинство клеток к исходу первых суток наблюдения интенсивно включали меченный тритием уридин, что свидетельствовало об интенсивном синтезе в них РНК. Одновременно регистрировалось большое количество клеток, в ядро которых включался радиоактивный предшественник ДНК - тимидин, меченный тритием.Most of the cells by the end of the first day of observation intensively included tritium-labeled uridine, which indicated intensive RNA synthesis in them. At the same time, a large number of cells were recorded, the nucleus of which included the radioactive DNA precursor, thymidine, labeled with tritium.

Число клеток, включавших тимидин, меченный тритием, к исходу третьих суток по сравнению с предыдущим сроком исследования достоверно не изменялось и составило 10,9%. Окраска клеточных структур альциановым синим позволила установить прогрессирующее накопление в культуре гликозаминогликанов.The number of cells, including tritium-labeled thymidine, by the end of the third day compared with the previous study period did not significantly change and amounted to 10.9%. Staining of cell structures with Alcian blue made it possible to establish progressive accumulation of glycosaminoglycans in the culture.

К исходу третьих суток клетки культуры формировали богатый экстрацеллюлярный матрикс: в межклеточном пространстве наряду с хлопьевидным материалом и микрофибриллами коллагена определялись фибриллы с поперечной исчерченностью. К седьмым суткам развития культуры наблюдалось формирование плотного монослоя клеток. Число клеток, включивших после часовой инкубации с изотопом - тимидин, меченный тритием, достоверно уменьшилось по сравнению с предыдущим наблюдением и составило 1,93±0,83%. Содержание фибронектина в цитоплазме фибробластов заметно снижалось. Он определялся преимущественно вне клеток в виде переплетающихся волокнистых структур.By the end of the third day, culture cells formed a rich extracellular matrix: in the intercellular space, along with flocculent material and collagen microfibrils, fibrils with transverse striation were determined. By the seventh day of the development of culture, the formation of a dense monolayer of cells was observed. The number of cells that included, after hourly incubation with an isotope, tritium-labeled thymidine significantly decreased compared to the previous observation and amounted to 1.93 ± 0.83%. The content of fibronectin in the cytoplasm of fibroblasts markedly decreased. It was determined primarily outside the cells in the form of interwoven fibrous structures.

Таким образом, заявляемый способ позволяет повысить эксплуатационную надежность за счет обеспечения влияния фибробластов на пролиферацию и дифференцировку остеобластов и образования грубоволокнистого костного материала трансплантата.Thus, the inventive method can improve operational reliability by ensuring the influence of fibroblasts on the proliferation and differentiation of osteoblasts and the formation of coarse-grained bone material of the graft.

Пример 3.Example 3

Больной Д. 55 лет при поступлении предъявляет жалобы на болезненность при пережевывании пищи, кровоточивость десен. При осмотре ротовой полости отмечают гингивит, пастозность десен с явлениями застойной гиперемии и наличием пародонтальных карманов. Отмечается подвижность зубов, а между зубами имеются свободные промежутки.Patient D. 55 years old upon admission complains of soreness when chewing food, bleeding gums. When examining the oral cavity, gingivitis, gum pasteiness with symptoms of congestive hyperemia and the presence of periodontal pockets are noted. There is tooth mobility, and there are free spaces between the teeth.

Рентгенологически - обнаруживают остеопороз, образование костных карманов и отложение поддесневого зубного камня.X-ray - detect osteoporosis, the formation of bone pockets and deposition of subgingival calculus.

Зубная формула пародонтоза у данного больногоThe dental formula of periodontal disease in this patient 0005430100054301 1204000012040000 0060032100600321 12300600.12300600.

Трансплантат изготавливают из плодной твердой мозговой оболочки, остеогенез альвеолярных отростков осуществляют с использованием культур фибробластов в растворе в течение 8 суток.The transplant is made from the fetal dura mater, osteogenesis of the alveolar processes is carried out using fibroblast cultures in solution for 8 days.

Первичную культуру фибробластов получали методом органного культивирования из фрагментов кожи, полученных при аутодермопластике. Плотность посева клеток при получении субкультур фибробластов человека составляет 35 тыс. на см2 поверхности.The primary fibroblast culture was obtained by organ culture from skin fragments obtained by autodermoplasty. The cell seeding density upon receipt of subcultures of human fibroblasts is 35 thousand per cm 2 surface.

Во время хирургической операции на поврежденный участок кости альвеолярных отростков челюсти в виде восьмерки укладывают плодную твердую мозговую оболочку с культивированными фибробластами человека.During a surgical operation, a fetal dura mater with cultured human fibroblasts is placed in the form of a figure eight on the damaged bone section of the alveolar bone of the jaw.

Осуществляли контроль эффективности способа, оценивая влияние фибробластов и их экскреторных белков на пролиферацию и дифференцировку остеобластов.The effectiveness of the method was monitored by evaluating the effect of fibroblasts and their excretory proteins on the proliferation and differentiation of osteoblasts.

Результаты катамнестического наблюдения, выполненного через 1 год после операции, подтвердили прочность и хорошие потребительские качества полученного протеза.The results of follow-up observation performed 1 year after the operation confirmed the strength and good consumer qualities of the obtained prosthesis.

Заявляемый способ был осуществлен на 16 больных. Катамнестические наблюдения показали, что заявляемый способ позволяет повысить эксплуатационную надежность за счет обеспечения влияния фибробластов на пролиферацию и дифференцировку остеобластов и образования грубоволокнистого костного материала трансплантата.The inventive method was carried out on 16 patients. Follow-up observations showed that the inventive method improves operational reliability by ensuring the influence of fibroblasts on the proliferation and differentiation of osteoblasts and the formation of coarse-grained bone graft material.

Claims (1)

Способ восстановления костных структур челюсти с помощью трансплантата, содержащего фибробласты, отличающийся тем, что на поврежденный участок кости укладывают плодную твердую мозговую оболочку с культивированными фибробластами человека, при этом первичную культуру фибробластов получают из фрагментов кожи, полученных при аутодермопластике, а культивирование фибробластов осуществляют в растворе в течение 6-8 сут.A method of restoring bone structures of the jaw using a graft containing fibroblasts, characterized in that the fetal dura mater with cultured human fibroblasts is placed on the damaged area of the bone, while the primary fibroblast culture is obtained from skin fragments obtained by autodermoplasty, and fibroblasts are cultured in solution within 6-8 days.
RU2006118793/14A 2006-05-31 2006-05-31 Method for jaw bone structure recovery RU2336830C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006118793/14A RU2336830C2 (en) 2006-05-31 2006-05-31 Method for jaw bone structure recovery

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006118793/14A RU2336830C2 (en) 2006-05-31 2006-05-31 Method for jaw bone structure recovery

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2006118793A RU2006118793A (en) 2007-12-10
RU2336830C2 true RU2336830C2 (en) 2008-10-27

Family

ID=38903598

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006118793/14A RU2336830C2 (en) 2006-05-31 2006-05-31 Method for jaw bone structure recovery

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2336830C2 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
UNSAL B. Evaluation of initial attachment of human gingival fibroblast cells to biodegradable membranes in vitro by light and scanning electron microscopy. J Oral Sci. 1999 Jun; 41(2): 57-60 (Abstract). SHAFFER J.J. Келоидные рубцы: обзор литературы, критический анализ доступных подходов к лечению. Патологическая физиология. [ON-LINE], 18.04.2006, найдено в Интернет, найдено 21.06.2007, http://www.dermatix.com.ua/specialist/references/article_03.html. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2006118793A (en) 2007-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gottlow et al. New attachment formation as the result of controlled tissue regeneration
Vignoletti et al. Soft tissue wound healing at teeth, dental implants and the edentulous ridge when using barrier membranes, growth and differentiation factors and soft tissue substitutes
JP6246467B2 (en) Method of preparing mechano-structured pearl layer by mechanosynthesis, mechano-structured pearl layer thus obtained and use thereof
Wong et al. A quantitative assessment of the healing of intramembranous and endochondral autogenous bone grafts
Vanden Bogaerde Treatment of infrabony periodontal defects with esterified hyaluronic acid: clinical report of 19 consecutive lesions.
WO2011027850A1 (en) Bone regeneration agent including gelatin
BRPI0906972B1 (en) METHODS FOR THE PRODUCTION OF EXTRACELLULAR MATRIX COMPOSITIONS AND FOR THE PRODUCTION OF A WNT PROTEIN AND A VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR
CN113318275B (en) Degradable hydrogels for pulp dentin regeneration
US20100203481A1 (en) Method and kit for delivering endodontic regenerative treatment
EP1289574B1 (en) Cartilage replacement and methods for the production thereof
US20190015551A1 (en) Construct for preventing immunological rejection generated when used in transplants, and method for using collagen in a gel state, in the form of dry lyophilised spongy mouldings and 3d matrices
EP2268254A1 (en) Method and kit for delivering regenerative endodontic treatment
EP0820774A2 (en) Bio-hybrid dental implant
JP2010500335A (en) How to treat skin wounds
US20170165299A1 (en) Compositions and methods relating to treatments of the oral cavity
Zeng et al. The progress of decellularized scaffold in stomatology
RU2336830C2 (en) Method for jaw bone structure recovery
US20130166040A1 (en) Reagents and methods for preparing teeth for implantation
Dominiak et al. Use of primary culture of human fibroblasts in gingiva augmentation procedure
RU2320285C2 (en) Method for restoring alveolar jaw bone crest and periodontium tissues having reduced recovery potential
De Oliveira et al. Acellular dermal matrix allograft used alone and in combination with enamel matrix protein in gingival recession: histologic study in dogs.
Gupta et al. Mucosal substitutes for periodontal soft tissue regeneration
RU2277423C1 (en) Method for repairing structural and functional changes in connective tissue
Keyhan et al. Tissue engineering applications in maxillofacial surgery
Kaur et al. Tissue engineering and its future perspective in therapeutic medicine-A brief review

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20071211

FZ9A Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal)

Effective date: 20071211

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20080726

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20100910

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20120601