RU2329056C1

RU2329056C1 - Hepatoprotector

Info

Publication number: RU2329056C1
Application number: RU2007115490/15A
Authority: RU
Inventors: Владимир Геннадьевич Спрыгин (RU); Владимир Геннадьевич Спрыгин; Наталь Федоровна Кушнерова (RU); Наталья Федоровна Кушнерова
Priority date: 2007-04-24
Filing date: 2007-04-24
Publication date: 2008-07-20

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: hepatoprotective agent is medical product containing certain amount of polyphenolic compounds, ethanol extracted from Manchurian aralia crests Aralia mandshurica Rupr. et Maxim, aralia family - Araliaceae.

EFFECT: product specified above provides improved hepatoprotective action.

4 tbl

Description

Изобретение относится к биологическим составам на основе экстрактов растительного происхождения и может быть использовано в качестве гепатопротектора, а также средства, повышающего сопротивляемость организма к воздействию химических веществ техногенного происхождения, стрессовым ситуациям, алкогольным и лекарственным отравлениям.The invention relates to biological compositions based on extracts of plant origin and can be used as a hepatoprotector, as well as a means of increasing the body's resistance to the effects of industrial chemicals, stressful situations, alcohol and drug poisoning.

В связи с прогрессирующим ухудшением экологической обстановки человек все более активно подвергается воздействию различных веществ техногенного происхождения. В нашей стране гигиеническое регламентирование охватывает в настоящее время около 2 тыс. вредных химических веществ, для которых установлено более 3 тыс. гигиенических нормативов предельно допустимого содержания в различных объектах окружающей среды. Влияние стрессовых ситуаций (гипо- и гипертермия, высокая физическая нагрузка, дыхание гипоксическими смесями, нахождение в зоне техногенных катастроф и др.), несбалансированное питание, алкоголизм настоятельно требуют поиска нетрадиционных подходов к фармакопрофилактике возникающих нарушений в организме. Известно, что основным барьером, нейтрализующим токсические загрязнения в организме человека и животных, является печень. Заболевания печени и билиарной системы составляют 40% в группе нозологических форм, относящихся к патологии пищеварительной системы.In connection with the progressive deterioration of the environmental situation, a person is more and more actively exposed to various substances of technogenic origin. In our country, hygiene regulation currently covers about 2 thousand harmful chemicals, for which more than 3 thousand hygienic standards have been established for the maximum permissible content in various environmental objects. The influence of stressful situations (hypo- and hyperthermia, high physical exertion, breathing in hypoxic mixtures, being in the area of technological disasters, etc.), unbalanced nutrition, alcoholism urgently require the search for unconventional approaches to pharmacoprophylaxis of emerging disorders in the body. It is known that the main barrier to neutralizing toxic pollution in humans and animals is the liver. Diseases of the liver and biliary system make up 40% in the group of nosological forms related to the pathology of the digestive system.

В настоящее время ведется активный поиск средств, повышающих устойчивость печени к патологическим воздействиям, усиливающих ее обезвреживающие функции путем повышения активности ферментной системы, а также способствующих восстановлению ее функций при различных повреждениях, в том числе при алкогольной интоксикации.Currently, an active search is underway for agents that increase the resistance of the liver to pathological effects, enhance its neutralizing functions by increasing the activity of the enzyme system, and also help restore its functions in various injuries, including alcohol intoxication.

В качестве средства, повышающего общую устойчивость организма, известен экстракт гребней винограда (а.с. №1473139, опубл. 10.09.1998).As a means of increasing the overall stability of the body, known is the extract of the crests of grapes (and.with. No. 1473139, publ. 09/10/1998).

Известно средство, обладающее антиалкогольным действием, полученное путем экстракции спиртом предварительно высушенных и измельченных гребней винограда (а.с. №1072309, опубл. 10.09.1998).Known tool with anti-alcohol action obtained by extraction with alcohol of pre-dried and crushed crests of grapes (and.with. No. 1072309, publ. 10.09.1998).

Известны также препараты, обладающие гепатопротекторным действием, в которых активным началом является группа флавоноидов, относящихся к классу растительных полифенольных соединений, выделенная из экстракта плодов расторопши пятнистой (Sylybum marianum L). На ее основе разработан ряд лекарственных препаратов, близких по составу и действию, которые производятся в разных странах под различными названиями: "Силимарин", "Силибор", "Силибинин", "Карсил" и др.Also known are drugs with a hepatoprotective effect in which the active principle is a group of flavonoids belonging to the class of plant polyphenolic compounds isolated from the extract of the fruit of milk thistle (Sylybum marianum L). On its basis, a number of drugs have been developed that are similar in composition and action, which are produced in different countries under various names: "Silymarin", "Silibor", "Silibinin", "Karsil", etc.

В качестве средств, обладающих гепатопротекторным эффектом за счет содержащихся в их составе флавоноидов, известны также экстракты из гребней калины (п. РФ №2177330, опубл. 27.12.2001 г.), лимонника китайского (п. РФ №2179031, опубл. 10.02.2002 г.) и экстракт биомассы Maackia amurensis Rupr.et Maxim (п. РФ №2244553, опубл. 20.01.2005).As means having a hepatoprotective effect due to the flavonoids contained in their composition, extracts from the crests of viburnum (Cl. RF No. 2177330, publ. 12/27/2001), Schisandra chinensis (Cl. RF No. 2179031, publ. 10.02. 2002) and an extract of biomass Maackia amurensis Rupr.et Maxim (p. RF No. 2244553, publ. 01.20.2005).

Наиболее близким к заявляемому средству является известный, широко применяемый в медицине препарат "Легалон", содержащий в своем составе в качестве активного агента группу флавоноидов, выделенных из плодов расторопши пятнистой. Препарат «Легалон» (далее легалон) является эталонным гепатопротектором, который рекомендован официальными изданиями Фармакопейного комитета в качестве препарата сравнения при испытании новых средств, обладающих гепатопротекторными свойствами растительной природы (Венгеровский А.И., Маркова И.В. и др., Методические указания по изучению гепатозащитной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва. 2000. С.228-231). Препарат выпускается в виде драже, капсул и суспензий.Closest to the claimed agent is the well-known drug "Legalon" widely used in medicine, which contains as its active agent a group of flavonoids isolated from the fruits of milk thistle. The drug "Legalon" (hereinafter legalon) is a reference hepatoprotector, which is recommended by the official editions of the Pharmacopoeia Committee as a comparison drug when testing new drugs with hepatoprotective properties of plant nature (Vengerovsky A.I., Markova I.V. et al., Methodological instructions for the study of hepatoprotective activity of pharmacological substances // Guide to the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. Moscow. 2000. S.228-231). The drug is available in the form of dragees, capsules and suspensions.

Легалон обладает гепатопротекторным и антитоксическим действием. Механизм действия связан с ингибированием перекисного окисления липидов, вследствие чего происходит предотвращение разрушения клеточных мембран. В поврежденных гепатоцитах препарат стимулирует синтез белков и фосфолипидов, в результате чего происходит стабилизация клеточных мембран, предотвращается потеря компонентов клетки, например трансаминаз. Препарат препятствует проникновению в клетку некоторых гепатотоксических веществ. (Лекарственные препараты зарубежных фирм в России, М. - Астрафармсервис, 1993, с.350).Legalon has hepatoprotective and antitoxic effects. The mechanism of action is associated with the inhibition of lipid peroxidation, as a result of which the destruction of cell membranes is prevented. In damaged hepatocytes, the drug stimulates the synthesis of proteins and phospholipids, as a result of which stabilization of cell membranes occurs, and the loss of cell components, such as transaminases, is prevented. The drug prevents the penetration of certain hepatotoxic substances into the cell. (Medicines of foreign firms in Russia, M. - Astrafarmservis, 1993, p. 350).

Задачей изобретения является расширение ассортимента гепатопротекторных средств.The objective of the invention is to expand the range of hepatoprotective agents.

Поставленная задача решается средством, обладающим гепатопротекторным действием, на основе продукта экстракции этанолом гребней аралии маньчжурской - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim., семейства аралиевых - Araliaceae, содержащего до 50% полифенольных соединений.The problem is solved by means with hepatoprotective action, based on the product of ethanol extraction of the crests of Aralia Manchurian - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim., Araliaceae family - Araliaceae, containing up to 50% polyphenolic compounds.

Технический результат заключается в проявлении выраженного гепатопротекторного эффекта экстракта гребней аралии маньчжурской - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim., семейства аралиевых - Araliaceae.The technical result consists in the manifestation of a pronounced hepatoprotective effect of the extract of the crests of Aralia Manchurian - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim., Araliaceae family - Araliaceae.

В качестве сырья для получения средства используют гребни маньчжурской аралии. По мнению авторов использование гребней связано с тем, что они являются той частью растения, которая, находясь между основным стеблем и плодами, содержащими наследственный материал, содержит наиболее высокие концентрации антиоксидантов, способных предохранять плоды от факторов неблагоприятного воздействия как со стороны материнского растения, так и со стороны окружающей среды.As raw materials for obtaining funds, the crests of the Manchu Aralia are used. According to the authors, the use of ridges is due to the fact that they are the part of the plant, which, located between the main stem and fruits containing hereditary material, contains the highest concentrations of antioxidants that can protect the fruits from adverse factors both from the mother plant and from the environment.

Экстракт получают способом, обычным для приготовления экстрактов из растительного сырья (Муравьев И.А. Технология лекарств: Учебник в 2-х томах. Москва. Медицина. 1980. С.704). Для этого гребни аралии высушивают при температуре, не превышающей 40°С, и измельчают для ускорения и улучшения процесса экстракции. Измельченное сырье экстрагируют, как правило, 40% этанолом при соотношении сырья к экстрагенту 1:5.The extract is obtained by the method usual for the preparation of extracts from plant materials (IA Muravyov. Drug Technology: A Textbook in 2 volumes. Moscow. Medicine. 1980. P.704). To do this, the aralia ridges are dried at a temperature not exceeding 40 ° C, and crushed to accelerate and improve the extraction process. The crushed raw materials are extracted, as a rule, with 40% ethanol with a ratio of raw materials to extractant 1: 5.

Такие соотношения являются оптимальными, но не единственно возможными, поскольку экстракцию можно осуществлять этанолом с другой процентной концентрацией и при других соотношениях экстрагента и сырья, получая тот же качественный набор экстрактивных веществ, который и определяет гепатопротекторное действие средства. Сама же гепатопротекторная активность средства, в свою очередь, является суммарным действием как полифенольных соединений, так и других компонент, образующихся при экстракции заявляемого растительного сырья. Данное соотношение определяет только количество перешедших в экстракт активных компонент сырья.Such ratios are optimal, but not the only possible ones, since extraction can be carried out with ethanol with a different percentage concentration and at different ratios of extractant and raw material, obtaining the same high-quality set of extractives that determines the hepatoprotective effect of the agent. The hepatoprotective activity of the drug itself, in turn, is the combined effect of both polyphenolic compounds and other components formed during the extraction of the inventive plant materials. This ratio determines only the number of active components of the raw materials transferred to the extract.

Сухой остаток полученного экстракта по данным колориметрического метода с использованием реактива Фолина-Дениса содержит до 50% полифенольных соединений.The dry residue of the obtained extract according to the colorimetric method using Folin-Denis reagent contains up to 50% polyphenolic compounds.

Готовое средство обладает низкой токсичностью (ЛД₅₀ составляет 18 мл/кг) и не оказывает вредного действия при длительных введениях в желудок и парэнтерально, что позволяет провести экспериментальные исследования, показавшие выраженное гепатопротекторное действие экстракта на модели алкогольной интоксикации.The finished product has low toxicity (LD ₅₀ is 18 ml / kg) and does not have a harmful effect during prolonged injections into the stomach and parenterally, which allows experimental studies to show the pronounced hepatoprotective effect of the extract on the model of alcohol intoxication.

Эксперимент проводили по схеме, приведенной в работе Gajdos А. с соавторами ("Effet curatif de la(+)-catechine sur les troubles biochimigues du foie de rat intoxique par l'ethanol", C.R.Seances Soc. Biol.Fil, v.166, No.2, p.277-279), а в качестве препарата сравнения использовали легалон.The experiment was carried out according to the scheme given by A. Gajdos et al. ("Effet curatif de la (+) - catechine sur les troubles biochimigues du foie de rat intoxique par l'ethanol", CRSeances Soc. Biol.Fil, v.166 , No.2, p.277-279), and legalon was used as a comparison drug.

Эксперимент проводили на крысах-самцах Вистар массой тела 130-180 г, содержавшихся на стандартном рационе питания. Экстракт из гребней аралии животным вводили перорально после последнего дня введения этанола в дозе 0,2 мл на 100 г массы ежедневно в течение 7 дней. Для исключения влияния этанола исходный экстракт гребней аралии упаривали в вакуумном испарителе при температуре не выше 37°С до 2/3 объема, а затем доводили дистиллированной водой до первоначального объема. Обработанный таким способом экстракт гребней аралии использовали в эксперименте. Легалон вводили по этой же схеме в виде взвеси в 1% крахмальном клейстере в дозе 100 мг/кг массы тела. Выбор дозы для препарата сравнения осуществляли на основе литературных данных (Венгеровский А.И., Марков И.В. и др., Доклиническое изучение гепатозащитных средств/ Ведомости Формкомитета. 1999. №2, С.9-12). Этанол вводили внутрибрюшинно 2 раза в сутки в дозе 7,5 мл на 1 кг массы тела животного в течение 7 дней. Животные были разделены на следующие группы: 1-я - контрольная (интактные); 2-я - введение 33% этанола; 3-я - введение 33% этанола в течение 7 дней с последующей отменой (депривация) в течение 7 дней; 4-я - ведение легалона после 7-дневной алкоголизации; 5-я - введение экстракта из гребней аралии после 7-дневной алкоголизации. Через 14 дней после начала эксперимента крыс выводили из эксперимента декапитацией и определяли биохимические показатели в печени и плазме крови.The experiment was conducted on male Wistar rats weighing 130-180 g, contained in a standard diet. The extract from the crests of aralia animals was administered orally after the last day of ethanol at a dose of 0.2 ml per 100 g of mass daily for 7 days. To exclude the influence of ethanol, the initial extract of Aralia crests was evaporated in a vacuum evaporator at a temperature not exceeding 37 ° C to 2/3 of the volume, and then brought to the original volume with distilled water. Aralia crest extract treated in this way was used in the experiment. Legalon was administered according to the same scheme as a suspension in 1% starch paste at a dose of 100 mg / kg body weight. The dose selection for the comparison drug was carried out on the basis of literature data (Vengerovsky A.I., Markov I.V. et al., Preclinical study of hepatoprotective drugs / Vedomosti Formcommittee. 1999. No. 2, S.9-12). Ethanol was administered intraperitoneally 2 times a day at a dose of 7.5 ml per 1 kg of animal body weight for 7 days. Animals were divided into the following groups: 1st — control (intact); 2nd - the introduction of 33% ethanol; 3rd — the introduction of 33% ethanol for 7 days, followed by cancellation (deprivation) within 7 days; 4th — maintaining the legalon after 7 days of alcoholization; 5th - the introduction of the extract from the crests of the Aralia after 7 days of alcoholization. 14 days after the start of the experiment, rats were removed from the experiment by decapitation and biochemical parameters in the liver and blood plasma were determined.

Анализ полученных данных по воздействию этилового спирта на биохимические параметры печени крыс показывает, что в содержании фракций нейтральных липидов отмечется достоверное увеличение триацетилглицерина (ТАГ) на 4,0% (20,50±0,23% против 19,69±0,24% в контроле, Р<0,05) и свободных жирных кислот (СЖК) на 15% (17,25±0,27% против 14,67±0,34% в контроле, Р<0,001) (табл.1).Analysis of the data on the effect of ethyl alcohol on the biochemical parameters of rat liver shows that a significant increase in triacetylglycerol (TAG) by 4.0% (20.50 ± 0.23% versus 19.69 ± 0.24%) is observed in the content of neutral lipid fractions in the control, P <0.05) and free fatty acids (FFA) by 15% (17.25 ± 0.27% versus 14.67 ± 0.34% in the control, P <0.001) (Table 1).

Эти изменения обусловлены усилением периферического липолиза (стрессовая реакция на этанол), в результате которого происходит поступление жирных кислот и глицерина в печень из жировой ткани, с последующей их реэтерификацией в ТАГ, при одновременном снижении способности синтеза фосфолипидов. Подтверждением этого является уменьшение содержания общих фосфолипидов на 24% (52,46±2,00% против 68,70±2,17 в контроле, Р<0,001), что в дальнейшем может приводить к жировому перерождению печени (Lieber С.S.Metabolism of Alcohol/ Clinics in liver disease. 2005. Vol.9, N 1, P.1-35). Увеличение холестерина (ХС) на 13% (18,01±0,23% против 15,99±0,42% в контроле, Р<0,001) связано с усилением его синтеза из ацетил-КоА, образовавшегося при окислении этанола. Уменьшение количества эфиров холестерина (ЭХС) на 14% (16,75±0,89% против 19,42±0,61% в контроле, Р<0,05) обусловлено специфическим ингибированием этанолом активности ацил-КоА: холестерин-ацилтрансферазы (АХАТ) (Carrasco M.P., Segovia J.L., Marco С.Incorporation of exogenous precursors into neutral lipids and phospholipids in rat hepatocytes: effect ofethanol in vitro/ Biochem Pharmacol. 1998. Vol.56, N 12, P.1639-1644).These changes are due to increased peripheral lipolysis (a stressful reaction to ethanol), as a result of which fatty acids and glycerin enter the liver from adipose tissue, followed by their reesterification in TAG, while reducing the ability of phospholipid synthesis. Confirmation of this is a decrease in the content of total phospholipids by 24% (52.46 ± 2.00% versus 68.70 ± 2.17 in the control, P <0.001), which in the future can lead to fatty degeneration of the liver (Lieber C.S. Metabolism of Alcohol / Clinics in liver disease. 2005. Vol. 9, No. 1, P.1-35). An increase in cholesterol (cholesterol) by 13% (18.01 ± 0.23% versus 15.99 ± 0.42% in the control, P <0.001) is associated with an increase in its synthesis from acetyl-CoA formed during the oxidation of ethanol. The decrease in the number of cholesterol esters (ECS) by 14% (16.75 ± 0.89% versus 19.42 ± 0.61% in the control, P <0.05) is due to the specific inhibition of the activity of acyl-CoA: cholesterol acyltransferase ( AHAT) (Carrasco MP, Segovia JL, Marco C. Incorporation of exogenous precursors into neutral lipids and phospholipids in rat hepatocytes: effect ofethanol in vitro / Biochem Pharmacol. 1998. Vol.56, N 12, P.1639-1644).

Анализ фракционного состава фосфолипидов показывает достоверное уменьшение основных структурных компонентов мембран фосфатидилхолина (ФХ) - на 11% (43,70±1,25% против 48,46±0,58% в контроле, Р<0,01) и фосфатидилэтаноламина (ФЭ) на 13% (22,92±1,34% против 26,36±0,86% в контроле, Р<0,05) при одновременном увеличении содержания соответствующих лизофракций фосфолипидов (ЛФХ) - на 80% (4,55±0,16% против 2,53±0,13% в контроле, Р<0,001) и лизофосфотидилэтаноламинов (ЛФЭ) на 67% (4,51±0,25 против 2,70±0,20 в контроле, Р<0,001). Это обусловлено активированием фосфолипазы A₂ под действием этанола (Zheng Z., Barkai A.I. et al., Effects of ethanol on the incorporation of free fatty acids into cerebral membrane phospholipids/ Neurochem Int. 1996. Vol.28, N 5-6, P.551-555). При этом возросло количество сфингомиелина (СМ) на 54% (8,94±0,61% против 5,82±0,46% в контроле, Р<0,01), что является защитной реакцией организма на флюидизацию мембран этанолом (Ridgway, 2000). Отмечались изменения в содержании метаболически активных фракций. Так, количество ФИ увеличилось на 28% (5,70±0,23% против 4,44±0,33% в контроле, Р<0,01), а ФС, наоборот, уменьшилось на 19% (3,08±0,19% против 3,81±0,26% в контроле, Р<0,05). Содержание дифосфатидилглицерола (ДФГ) увеличилось на 19% (5,03±0,27% против 4,24±0,22% в контроле, Р<0,05), что по нашему мнению обусловлено, с одной стороны, увеличением содержания глицерина, который необходим для синтеза ДФГ, а с другой увеличением размеров митохондрий под действием этанола (Wakabayashi Т. Megamitochondria formation - physiology and pathology/ J.Cell.Mol.Med. 2002. Vol.6, N 4, P.497-538).The analysis of the fractional composition of phospholipids shows a significant decrease in the main structural components of the membranes of phosphatidylcholine (FC) - by 11% (43.70 ± 1.25% versus 48.46 ± 0.58% in the control, P <0.01) and phosphatidylethanolamine (PV) ) by 13% (22.92 ± 1.34% against 26.36 ± 0.86% in the control, P <0.05) with a simultaneous increase in the content of the corresponding lysofractions of phospholipids (LPC) - by 80% (4.55 ± 0.16% versus 2.53 ± 0.13% in the control, P <0.001) and lysophosphotidylethanolamines (LFE) by 67% (4.51 ± 0.25 versus 2.70 ± 0.20 in the control, P <0.001 ) This is due to the activation of phospholipase A ₂ under the action of ethanol (Zheng Z., Barkai AI et al., Effects of ethanol on the incorporation of free fatty acids into cerebral membrane phospholipids / Neurochem Int. 1996. Vol. 28, N 5-6, P .551-555). At the same time, the amount of sphingomyelin (SM) increased by 54% (8.94 ± 0.61% versus 5.82 ± 0.46% in the control, P <0.01), which is a protective reaction of the body to fluidization of membranes with ethanol (Ridgway , 2000). Changes in the content of metabolically active fractions were noted. Thus, the number of FIs increased by 28% (5.70 ± 0.23% versus 4.44 ± 0.33% in the control, P <0.01), and FS, on the contrary, decreased by 19% (3.08 ± 0.19% versus 3.81 ± 0.26% in the control, P <0.05). The content of diphosphatidylglycerol (DGF) increased by 19% (5.03 ± 0.27% versus 4.24 ± 0.22% in the control, P <0.05), which in our opinion is due, on the one hand, to an increase in glycerol content , which is necessary for the synthesis of DPH, and with another increase in the size of mitochondria under the influence of ethanol (Wakabayashi T. Megamitochondria formation - physiology and pathology / J. Cell. Mol. Med. 2002. Vol.6, N 4, P.497-538) .

Такая разбалансировка в липидном составе печени крыс обусловливает увеличение проницаемости мембран и изменение активности мембраносвязанных ферментов (Zerouga M., Beauge F. Rat synaptic membrane fluidity parameters after intermittent exposures to ethanol in vivo/ Alcohol. 1992. Vol.9, N 4, P.311-315). Подтверждением этого вывода является увеличение в плазме крови активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) на 75% (Р<0,001) (табл.2), являющегося показателем цитолиза гепатоцитов.This imbalance in the lipid composition of rat liver causes an increase in membrane permeability and a change in the activity of membrane-bound enzymes (Zerouga M., Beauge F. Rat synaptic membrane fluidity parameters after intermittent exposures to ethanol in vivo / Alcohol. 1992. Vol.9, N 4, P. 311-315). Confirmation of this conclusion is an increase in blood plasma activity of alanine aminotransferase (AlAT) by 75% (P <0.001) (Table 2), which is an indicator of hepatocyte cytolysis.

Мембраноповреждающее действие этанола распространялось и на субклеточные мембраны, что сопровождалось достоверным снижением активности мембраносвязанной лизосомальной β-глюкозидазы на 18% (Р<0,05). Увеличение активности цитозольной β-галактозидазы на 13% (Р<0,05) обусловлено увеличением проницаемости мембран лизосом и выходом матричного фермента. В биохимическом механизме подобной ферментной дезорганизации и модификации мембранных фосфолипидов немаловажное значение имеет и инициируемое этанолом перекисное окисление липидов (ПОЛ) (Rouach H., Fataccioli V. et al., Gentil M., French S.W., Morimoto M., Nordmann R.Effect of chronic ethanol feeding on lipid peroxidation and protein oxidation in relation to liver pathology/ Hepatology. 1997. Vol.25, N 2, P. p351-355). Количество малонового альдегида (МДА) возросло на 35% (Р<0,001), которое составило 92,9±1,4 нмоль/г (в контроле 68,9±1,7 нмоль/г, Р<0,001). Образование супероксиданионов в результате активации микросомальных фрементов монооксигензаной системы (Albano E., French S.W. et al., Hydroxyethyl radicals in ethanol hepatotoxicity/ Front Biosci. 1999. Vol.15, N 4, P.D533-D540) при интоксикации этанолом способствовало увеличению активности супероксиддисмутазы (СОД) до 344,9±13,0 ед/мг белка (108,5±11,0 ед/мг белка в контроле). При этом, достоверно снизилось содержание восстановленного глутатиона (Г-SH) на 18% (Р<0,001) и активность глутатионредуктазы (ГР) на 60% (Р<0,001). Полученные результаты свидетельствуют о рассогласовании системы антиоксидантной защиты (АОЗ), а также антирадикальной защиты (образование гидроксиэтильных свободных радикалов), на что указывает снижение общего показателя потенциала антиокислительной системы печени - антирадикальной активности (АРА) на 64%, которая составляла 227±15 ед/мг белка (в контроле 373±33 ед/мг белка; Р<0,01).The membrane-damaging effect of ethanol extended to subcellular membranes, which was accompanied by a significant decrease in the activity of membrane-bound lysosomal β-glucosidase by 18% (P <0.05). An increase in the activity of cytosolic β-galactosidase by 13% (P <0.05) is due to an increase in the permeability of lysosome membranes and the release of the matrix enzyme. In the biochemical mechanism of such enzymatic disorganization and modification of membrane phospholipids, lipid peroxidation (POL) initiated by ethanol is also of no small importance (Rouach H., Fataccioli V. et al., Gentil M., French SW, Morimoto M., Nordmann R. Effect of chronic ethanol feeding on lipid peroxidation and protein oxidation in relation to liver pathology / Hepatology. 1997. Vol.25, No. 2, P. p351-355). The amount of malonic aldehyde (MDA) increased by 35% (P <0.001), which amounted to 92.9 ± 1.4 nmol / g (in the control, 68.9 ± 1.7 nmol / g, P <0.001). The formation of superoxidanions as a result of the activation of microsomal frams of the monoxygenated system (Albano E., French SW et al., Hydroxyethyl radicals in ethanol hepatotoxicity / Front Biosci. 1999. Vol.15, No. 4, P. D533-D540) during ethanol intoxication contributed to an increase in activity superoxide dismutase (SOD) up to 344.9 ± 13.0 units / mg protein (108.5 ± 11.0 units / mg protein in the control). At the same time, the content of reduced glutathione (G-SH) significantly decreased by 18% (P <0.001) and the activity of glutathione reductase (GR) by 60% (P <0.001). The results indicate a mismatch of the antioxidant defense system (AOD), as well as antiradical protection (the formation of hydroxyethyl free radicals), as indicated by a 64% decrease in the total potential of the liver antioxidant system - antiradical activity (ARA), which amounted to 227 ± 15 units / mg protein (in the control 373 ± 33 units / mg protein; P <0.01).

Известно, что острая алкогольная интоксикация сопровождается активацией челночных механизмов внемитохондриального окисления восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДН) в в окисленный никотинамидадениндинуклеотид (НАД⁺) (Lieber C.S., Role ofoxidative stress and antioxidant therapy in alcoholic and nonalcoholic liver diseases/ Adv Pharmacol. 1997. Vol.38, N, P.601-628). Полученные нами данные по содержанию НАД⁺в печени (снижение на 49%; Р<0,001) полностью совпадают с известными в литературе. Снижение пула НАД⁺сопровождалось ростом лактата (увеличение на 42%; Р<0,001), что является компенсаторной реакцией (пируват-лактатный челночный цикл) для реокисления НАДН в НАД⁺.Acute alcohol intoxication is known to be accompanied by activation of shuttle mechanisms of extra-mitochondrial oxidation of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) into oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD ⁺ ) (Lieber CS, Role ofoxidative stress and antioxidant therapy in alcoholic and nonalcoholic liver disease / 3. 1997. , N, P.601-628). Our data on the content of NAD ⁺ in the liver (a decrease of 49%; P <0.001) completely coincide with those known in the literature. A decrease in the NAD ⁺ pool was accompanied by an increase in lactate (an increase of 42%; P <0.001), which is a compensatory reaction (pyruvate-lactate shuttle cycle) for reoxidation of NADH to NAD ⁺ .

Таким образом, экспериментальные данные свидетельствуют о том, что при интоксикации этиловым спиртом развивается выраженный гепатотоксический эффект, который проявляется в виде существенных сдвигов в липидном и углеводном обмене, в разбалансировке ферментных систем, а также нарушении антиоксидантного и антирадикального статуса организма.Thus, experimental data indicate that ethanol intoxication develops a pronounced hepatotoxic effect, which manifests itself in the form of significant changes in lipid and carbohydrate metabolism, in the imbalance of enzyme systems, as well as in violation of the antioxidant and antiradical status of the body.

Через 7 дней после отмены этанола (3-я группа, период депривации) большинство биохимических параметров к норме не возвращается. На уровне показателя 2-й группы остается содержание ТАГ (20,60±0,34% против 19,69±0,24% в контроле, Р<0,05). Еще больше выросло содержание СЖК, которое превышает контрольные показатели на 34% (19,63±1,10% против 14,67±0,34% в контроле. Р<0,001), что свидетельствует о том, что жировая инфильтрация не устраняется (табл.1). Количество общих фосфолипидов (ФЛ) оставалось сниженным на 13% (60,28±2,19%, Р<0,05). Уменьшение количества ХС до 15,69±0,93% (на 23% меньше, чем во 2-й группе) обусловлено отсутствием избытка ацетил-КоА, который образуется при окислении этанола. В то же время количество ЭХС снизилось до 14,44±1,42% (на 14% меньше, чем во 2-й группе), то есть активность АХАТ при отмене этанола в течение 7 дней не восстановилась.7 days after the cancellation of ethanol (3rd group, the period of deprivation), most of the biochemical parameters do not return to normal. The level of TAG remains at the level of the indicator of the 2nd group (20.60 ± 0.34% versus 19.69 ± 0.24% in the control, P <0.05). The content of FFA increased even more, which exceeds the control indicators by 34% (19.63 ± 1.10% versus 14.67 ± 0.34% in the control. P <0.001), which indicates that fatty infiltration is not eliminated ( table 1). The amount of total phospholipids (PL) remained reduced by 13% (60.28 ± 2.19%, P <0.05). A decrease in the amount of cholesterol to 15.69 ± 0.93% (23% less than in the 2nd group) is due to the absence of excess acetyl-CoA, which is formed during the oxidation of ethanol. At the same time, the amount of ECS decreased to 14.44 ± 1.42% (14% less than in the 2nd group), that is, the activity of AChAT after ethanol withdrawal within 7 days did not recover.

Анализ фракционного состава фосфолипидов в период отмены этанола показывает, что содержание ЛФХ остается все еще выше контрольного уровня на 41% (3,57±0,15% против 2,53±% в контроле, Р<0,01) (табл.3), что свидетельствует о сохранении высокой фосфолипазной активности. Еще меньше стало количество ФС (2,74±0,33%), что составляет 72% (Р<0,05) от контрольного уровня. Обращает на себя внимание резкое снижение на 19% (3,42±0,14% против 4,24±% в контроле, Р<0,01) количества ДФГ по сравнению с контролем (во 2-й группе его количество было выше контроля на 19%).The analysis of the fractional composition of phospholipids during the period of ethanol withdrawal shows that the LPC content is still higher than the control level by 41% (3.57 ± 0.15% versus 2.53 ±% in the control, P <0.01) (Table 3 ), which indicates the preservation of high phospholipase activity. The amount of PS (2.74 ± 0.33%) became even less, which is 72% (P <0.05) of the control level. A sharp decrease by 19% (3.42 ± 0.14% versus 4.24 ±% in the control, P <0.01) of the amount of DPH compared with the control (in the 2nd group, its amount was higher than the control is noteworthy) 19%).

Следует отметить факт еще большего снижения активности мембраносвязанной β-глюкозидазы до 0,12±0,013 ммоль/г/мин по сравнению с контролем (Р<0,01), что свидетельствует о нарушении структурной целостности лизосомальных мембран и их проницаемости. Проницаемость мембран гепатоцитов также не восстанавливалась в период депривации, о чем свидетельствует повышенная на 42% (1,15±0,05 мкмоль/мл/час против контроля 0,81±0,03 мкмоль/мл/час; Р<0,001) активность АлАТ в плазме крови.It should be noted that the activity of membrane-bound β-glucosidase is even lower to 0.12 ± 0.013 mmol / g / min compared with the control (P <0.01), which indicates a violation of the structural integrity of lysosomal membranes and their permeability. The permeability of hepatocyte membranes also did not recover during the deprivation period, as evidenced by an increase of 42% (1.15 ± 0.05 μmol / ml / hr against the control of 0.81 ± 0.03 μmol / ml / hr; P <0.001) ALAT in plasma.

В период депривации сохранялось рассогласование ферментов антиоксидантной защиты. Так, активность СОД оставалась на уровне показателей 2-й группы (в 3 раза выше контрольного уровня) (табл.2). Пул восстановленного глутатиона стал еще меньше и был на 28% (Р<0,001) ниже контрольных величин. Это обусловлено более низкой активностью основного фермента его обмена ГР на 55% (Р<0,01) по отношению к контролю. Количество МДА было выше на 23% (84,9±1,9 нмоль/г против 68,9±1,7 нмоль/г в контроле; Р<0,001), чем у интактных животных, что обусловлено сохранением высокой активности ПОЛ. Все эти факторы являются результатом низкого антиоксидантного статуса организма, в пользу чего свидетельствует низкий уровень АРА в печени, который был на 35% ниже (Р<0,01) по сравнению с контрольными величинами.During the deprivation period, the mismatch of antioxidant defense enzymes continued. So, the activity of SOD remained at the level of indicators of the 2nd group (3 times higher than the control level) (Table 2). The pool of reduced glutathione became even smaller and was 28% (P <0.001) lower than the control values. This is due to the lower activity of the main enzyme of its exchange of GR by 55% (P <0.01) in relation to the control. The amount of MDA was 23% higher (84.9 ± 1.9 nmol / g versus 68.9 ± 1.7 nmol / g in the control; P <0.001) than in intact animals, which was due to the preservation of high LPO activity. All these factors are the result of a low antioxidant status of the body, which is supported by a low level of ARA in the liver, which was 35% lower (P <0.01) compared to control values.

Таким образом, отмена этанола в течение 7 дней сопровождается неполным восстановлением функционального состояния печени крыс. По мнению авторов, период отмены токсического агента является стрессом для организма, так как возросли величины изменений некоторых изученных биохимических показателей, которые были отмечены в период интоксикации этанолом.Thus, the abolition of ethanol within 7 days is accompanied by an incomplete restoration of the functional state of the rat liver. According to the authors, the period of withdrawal of a toxic agent is stressful for the body, since the magnitude of the changes in some of the studied biochemical parameters that were noted during the period of intoxication with ethanol increased.

При введении животным экстракта из гребней аралии, а также гепатопротектора легалона в период отмены этанола отмечается нормализация исследуемых биохимических показателей в печени. Было выявлено, что полученный биологический эффект влияния исследуемых препаратов, в общем, идентичен, но, в ряде случаев, имеет разную степень выраженности.When animals are injected with extract from Aralia crests, as well as hepatoprotector legalon during the period of ethanol withdrawal, normalization of the studied biochemical parameters in the liver is noted. It was found that the resulting biological effect of the studied drugs is, in general, identical, but, in some cases, has a different degree of severity.

При сравнении фракционного состава нейтральных липидов (НЛ) в печени 4-5 групп с таковыми величинами в 3-й группе (депривация) отмечалось снижение количества ТАГ, в среднем, на 15-27% (Р<0,01-0,001), что составляло 17,5±1,21% (аралия) и 15,04±0,95% (легалон) против 20,6±0,34% при депривации (табл.1). Аналогичная направленность изменений прослеживалась в содержании СЖК, величина которых была снижена в печени крыс 4-5 групп, в среднем на 21-24% (Р<0,05-0,001). Так, в группе крыс, получавших экстракт из гребней аралии, количество СЖК - 15,03±0,71%, а при введении легалона - 15,11±0,59%, по сравнению с 19,63±1,10% при депривации. То есть как легалон, так и заявляемое средство, вводимые животным в период отмены этанола, снимают состояние стресса, что обусловливает торможение липолиза в жировой ткани и препятствует накоплению ТАГ в печени.When comparing the fractional composition of neutral lipids (NL) in the liver of groups 4-5 with those in the 3rd group (deprivation), the number of TAGs decreased by an average of 15-27% (P <0.01-0.001), which amounted to 17.5 ± 1.21% (aralia) and 15.04 ± 0.95% (legalon) versus 20.6 ± 0.34% upon deprivation (Table 1). A similar direction of changes was observed in the content of FFA, the value of which was reduced in the liver of rats of groups 4-5, by an average of 21-24% (P <0.05-0.001). So, in the group of rats receiving extract from the aralia crests, the amount of FFA is 15.03 ± 0.71%, and with the introduction of legalon - 15.11 ± 0.59%, compared with 19.63 ± 1.10% with deprivation. That is, both legalon and the claimed drug, administered to animals during the period of ethanol withdrawal, relieve stress, which causes inhibition of lipolysis in adipose tissue and prevents the accumulation of TAG in the liver.

Таким образом, оба растительных препарата - и легалон, и экстракт гребней аралии, дают выраженный гепатопротекторный эффект, проявляющийся в снятии жирового перерождения печени.Thus, both herbal preparations - both legalon and extract of Aralia crests, give a pronounced hepatoprotective effect, manifested in the removal of fatty degeneration of the liver.

Введение экстракта гребней аралии способствовало увеличению содержания ЭХС, которое возросло на 53% (Р<0,001) по сравнению с 3-й группой. Легален также способствовал увеличению содержания ЭХС на 52% (Р<0,01) по сравнению с группой депривации (табл 1). Содержание ЭХС в печени животных, получавшей экстракт из гребней аралии, на 14% (Р<0,01-0,05) превышал таковой уровень в группе интактных животных. Повышение уровня ЭХС свидетельствует о восстановлении этерифицирующей функции печени под действием полифенольного комплекса исследуемых препаратов.The introduction of the extract of Aralia crests contributed to an increase in the content of ECS, which increased by 53% (P <0.001) compared with the 3rd group. Legal also contributed to an increase in ECS content by 52% (P <0.01) compared with the deprivation group (Table 1). The content of ECS in the liver of animals that received the extract from Aralia crests was 14% (P <0.01-0.05) higher than that in the group of intact animals. An increase in the level of ECS indicates the restoration of the esterifying function of the liver under the action of the polyphenolic complex of the studied drugs.

Оба препарата способствовали восстановлению до уровня интактного контроля содержания основных структурных компонентов мембран (ФХ и ФЭ) при одновременной нормализации содержания соответствующих лизофракций (ЛФХ и ЛФЭ). При сравнении величин ЛФХ и ЛФЭ в печени крыс 4-5 групп с таковыми в 3-й группе (депривация), выявлено их достоверное снижение на 28-40% (Р<0,05) для ЛФХ и на 15-18% (Р<0,05) для ЛФЭ (табл.3). Известно (Lindahl М, Tagesson С Flavonoids as phospholipase A2 inhibitors: importance of their structure for selective inhibition of group II phospholipase A2/ Inflammation. 1997. Vol.21, N 3, P.347-356), что флавоноиды ингибируют фосфолипазу А и тем самым перпятствуют разрушению фосфолипидов.Both drugs contributed to the restoration to the level of intact control of the content of the main structural components of the membranes (PF and PE) while normalizing the content of the corresponding lysofractions (LPC and LFE). When comparing the values of LPC and LFE in the liver of rats of 4-5 groups with those in the 3rd group (deprivation), their significant decrease by 28-40% (P <0.05) for LPC and by 15-18% (P <0.05) for LFE (Table 3). It is known (Lindahl M, Tagesson C Flavonoids as phospholipase A2 inhibitors: importance of their structure for selective inhibition of group II phospholipase A2 / Inflammation. 1997. Vol.21, No. 3, P.347-356) that flavonoids inhibit phospholipase A and thereby inhibiting the destruction of phospholipids.

В обеих группах, получавших препараты, на уровне интактных величин сохранялось содержание метаболически активных фракций фосфолипидов (ФЛ) - дифосфатидилглицерола (ДФГ) и фосфатидилсерина (ФС).In both groups treated with drugs, the content of metabolically active fractions of phospholipids (PL) - diphosphatidylglycerol (DPG) and phosphatidylserine (FS) remained at the level of intact values.

Обращает на себя внимание факт повышения концентрации фосфатидной кислоты (ФК) и фосфатидилиноситола (ФИ) по отношению к контролю на 20-28% (Р<0,05) в группе, получавшей экстракт из гребней аралии. Этот феномен обусловлен синтезом фосфолипидов из ТАГ для восстановления структуры мембран, нарушенных этанолом. Усиление синтеза метаболически активной ФК может быть вполне допустимо. В пользу данного факта свидетельствует и увеличение содержания ОФЛ в среднем на 16% (Р<0,01) по сравнению с 3-й группой (депривация). В 4-й группе (легалон) содержание ФК было ниже на 38% (Р<0,01), чем в 3-й группе и у интактных животных. Данный феномен, наряду с фактом недостоверного увеличения количества ОФЛ на 8% (65,53±2,36%), указывает на использование ФК для их биосинтеза, который активируется под действием полифенолов легалона, без увеличения биосинтеза самой ФК.It is noteworthy that the concentration of phosphatidic acid (FC) and phosphatidylinositol (PI) increased in relation to the control by 20-28% (P <0.05) in the group receiving extract from aralia ridges. This phenomenon is due to the synthesis of phospholipids from TAG to restore the structure of membranes disrupted by ethanol. Enhanced synthesis of metabolically active FC can be quite acceptable. This fact is also supported by an increase in the content of OFL by an average of 16% (P <0.01) compared with the 3rd group (deprivation). In the 4th group (legalon), the FC content was 38% lower (P <0.01) than in the 3rd group and in intact animals. This phenomenon, along with the fact of an unreliable increase in the amount of AFL by 8% (65.53 ± 2.36%), indicates the use of PK for their biosynthesis, which is activated under the action of legal polyphenols, without increasing the biosynthesis of FC itself.

Таким образом, как экстракт из гребней аралии, так и легалон, вводимые животным в период отмены этанола, способствуют активации биосинтетических реакций фосфолипидов из триацилглицерина, что в свою очередь приводит к ликвидации жировой инфильтрации печени, обусловленной его накоплением. Кроме того, восстановление метаболических реакций синтеза фосфолипидных фракций и поддержание их соотношения определяет мембранопротекторный эффект исследуемых растительных препаратов. Подтверждением этого является восстановление до контрольного уровня активности β-глюкозидазы, прочно связанной с мембраной лизосом и β-галактозидазы, локализованной в матриксе лизосом, во всех группах, получавших гепатопротекторы (табл.2). Отмечается снижение до уровня контроля активности АлАТ, что также указывает на нормализацию проницаемости мембран гепатоцитов, увеличенной под действием этанола.Thus, both the extract from the Aralia ridges and the legalon introduced to the animals during the period of ethanol withdrawal contribute to the activation of biosynthetic reactions of phospholipids from triacylglycerol, which in turn leads to the elimination of fatty liver infiltration due to its accumulation. In addition, the restoration of metabolic reactions in the synthesis of phospholipid fractions and maintaining their ratio determines the membrane-protective effect of the studied herbal preparations. Confirmation of this is the restoration to a control level of β-glucosidase activity, tightly bound to the lysosome membrane and β-galactosidase, localized in the lysosome matrix, in all groups treated with hepatoprotectors (Table 2). There is a decrease to the level of control of ALAT activity, which also indicates the normalization of the permeability of hepatocyte membranes, increased under the influence of ethanol.

Исследование биохимических параметров системы АОЗ печени животных 4-й- 5-й групп показало, что оба препарата одинаково эффективно препятствовали накоплению в печени МДА (снижение на 18%, Р<0,001) по сравнению с таковым показателем в 3-й группе, что свидетельствовало о нормализации уровня ПОЛ. Это обусловлено тем, что растительные полифенолы являются ловушками свободных радикалов (Rice-Evans C.A., and Miller N.J. Antioxidant activities of flavonoids as bioactive components of food/ Biochem Soc Trans. 1996. Vol.24, N 3, P.829-835), чем способствуют снижению активности СОД, которая в печени животных 5-й группы достоверно не отличалась от контрольных показателей. При этом в группе, получавшей легалон, активность СОД оставалась на 50% выше контрольной величины (табл.2).A study of the biochemical parameters of the AOD system in the liver of animals of the 4th-5th groups showed that both drugs equally effectively prevented the accumulation of MDA in the liver (an 18% decrease, P <0.001) compared with that in the 3rd group, which indicated about normalizing the level of LP. This is because plant polyphenols are free radical traps (Rice-Evans CA, and Miller NJ Antioxidant activities of flavonoids as bioactive components of food / Biochem Soc Trans. 1996. Vol.24, N 3, P.829-835), what contribute to a decrease in the activity of SOD, which in the liver of animals of the 5th group did not significantly differ from the control indicators. Moreover, in the group receiving legalon, the activity of SOD remained 50% higher than the control value (Table 2).

При определении активности ГР наблюдали сходную картину. Так, в 5-й группе активность ГР достоверно не отличалась от контрольного значения, превышая при этом таковую в 3-й группе в 2 раза (Р<0,001), тогда как в 4-й группе (легалон), она хотя и была выше, чем в группе «чистой» депривации, но составляла 65% (Р<0,05) от контрольного значения. Величина восстановленного глутатиона превышала соответствующий показатель у животных 3-й группы на 36% (Р<0,001). Более низкая активность ГР в 4-й группе, очевидно, послужила причиной менее эффективного восстановления пула восстановленного глутатиона, содержание которого хотя и превышало на 29% (Р<0,001) таковое в 3-й группе, но тем не менее оставалось на 9% (Р<0,05) ниже контрольного показателя. Все это определило более высокие значения АРА печени у животных 5-й группы. Этот показатель восстановился до уровня контроля, превышая таковой в 3-й группе на 54% (Р<0,001). В печени крыс, получавших легалон, АРА оставалась на уровне величины у животных 2-й группы, что на 65% ниже контрольного значения (Р<0,01). При этом АРА при введении легалона оставалась на уровне 2-й группы, но на 40% (Р<0,01) ниже контрольной величины.When determining the activity of GR, a similar picture was observed. So, in the 5th group, the activity of GR did not significantly differ from the control value, while exceeding that in the 3rd group by 2 times (P <0.001), while in the 4th group (legalon), although it was higher than in the “pure” deprivation group, but it was 65% (P <0.05) of the control value. The value of reduced glutathione exceeded the corresponding indicator in animals of the 3rd group by 36% (P <0.001). The lower GR activity in the 4th group, obviously, caused the less efficient recovery of the pool of reduced glutathione, the content of which, although by 29% (P <0.001) exceeded that in the 3rd group, but nonetheless remained by 9% ( P <0.05) below the control indicator. All this determined higher values of liver ARA in animals of the 5th group. This indicator recovered to the control level, exceeding that in the 3rd group by 54% (P <0.001). In the liver of rats treated with legalon, ARA remained at the level in animals of the 2nd group, which is 65% lower than the control value (P <0.01). In this case, with the introduction of the legalon, the ARA remained at the level of the 2nd group, but 40% (P <0.01) below the control value.

Введение легалона и экстракта из гребней аралии сопровождалось увеличением пула окисленной формы НАД+ по сравнению с показателями 3-й группы (депривация). При этом следует отметить факт повышенного на 19% (Р<0,05), по сравнению с контролем, содержания НАД+ в печени животных, получавших экстракт из гребней аралии. При введении легалона эта величина соответствовала контрольному уровню.The introduction of legalon and extract from the ridges of aralia was accompanied by an increase in the pool of the oxidized form of NAD + compared with the indicators of the 3rd group (deprivation). It should be noted that the fact is increased by 19% (P <0.05), compared with the control, the content of NAD + in the liver of animals that received extract from aralia crests. With the introduction of legalon, this value corresponded to the control level.

В печени животных 5-й группы концентрация молочной кислоты соответствовала контрольным значениям, но была ниже, в среднем, на 22% (Р<0,001) таковой величины в 3-й группе. При введении легалона эта величина достоверно не отличалась от таковой в 3-й группе и была на 17% (Р<0,05) выше, чем у интактных животных, что указывает на протекание процессов анаэробного гликолиза и сохраняющееся состояние тканевой гипоксии.In the liver of animals of the 5th group, the concentration of lactic acid corresponded to control values, but was lower, on average, by 22% (P <0.001) of that value in the 3rd group. With the introduction of legalon, this value did not significantly differ from that in the 3rd group and was 17% (P <0.05) higher than in intact animals, which indicates the occurrence of anaerobic glycolysis processes and the continuing state of tissue hypoxia.

Факт восстановления уровня антирадикальной активности печени, пула восстановленного глутатиона, концентрации лактата и более высокого содержания НАД+ свидетельствует о регуляции окислительно-восстановительного баланса в организме под действием полифенолов гребней аралии, которые эффективно инактивируют свободные радикалы. Благодаря этому увеличивается уровень НАД+. Поскольку полифенолы обладают и протонофорными свойствами, у исследуемого препарата возникает возможность формирования пула восстановленного глутатиона.The fact of the restoration of the level of antiradical activity of the liver, the pool of reduced glutathione, the concentration of lactate and a higher NAD + content indicates the regulation of the redox balance in the body under the action of polyphenols of the aralia ridges, which effectively inactivate free radicals. Due to this, the level of NAD + increases. Since polyphenols also have protonophore properties, the studied drug makes it possible to form a pool of reduced glutathione.

Полученные нами экспериментальные результаты свидетельствуют о том, что экстракт из гребней аралии, содержащий полифенольный комплекс, проявляет выраженное антитоксическое действие при поражении этиловым спиртом. Они способствуют ускоренному восстановлению каскадов метаболических реакций, обеспечивая нормализацию биохимических показателей углеводного и липидного обмена, а также системы антиоксидантной защиты.Our experimental results indicate that the extract from the crests of the Aralia containing the polyphenolic complex exhibits a pronounced antitoxic effect when affected by ethyl alcohol. They contribute to the accelerated restoration of cascades of metabolic reactions, ensuring the normalization of biochemical parameters of carbohydrate and lipid metabolism, as well as the antioxidant defense system.

Механизм терапевтического действия заявляемого средства обусловлен благоприятным влиянием полифенолов на нарушение токсикантом метаболизма и функций печени, что выражается в ингибировании свободнорадикальных реакций и уменьшении образования токсических продуктов липопероксидации; поддержании уровня восстановленного глутатиона и антирадикальной активности печени; восстановлении пула НАД+, снижении ацидоза и тканевой гипоксии; стабилизации мембран лизосом и гепатоцитов за счет регуляции синтеза холестерина, его этерификации и включения в структуру мембран; нормализации этерифицирующей функции печени.The therapeutic effect of the claimed drug is due to the beneficial effect of polyphenols on the toxicant's metabolic and liver dysfunction, which is expressed in the inhibition of free radical reactions and a decrease in the formation of toxic lipoperoxidation products; maintaining the level of restored glutathione and antiradical activity of the liver; restoration of the NAD + pool, reduction of acidosis and tissue hypoxia; stabilization of lysosome and hepatocyte membranes by regulating cholesterol synthesis, its esterification and incorporation into the membrane structure; normalization of the esterifying function of the liver.

При этом следует отметить, что заявляемого средства превосходит эталонный гепатопротектор легалон по способности восстанавливать биосинтетические процессы фосфолипидного обмена, увеличивать антирадикальную активность печени, образование НАД+ и нормализации пула восстановленного глутатиона.It should be noted that the claimed drug exceeds the reference hepatoprotector legalon in its ability to restore the biosynthetic processes of phospholipid metabolism, increase the antiradical activity of the liver, the formation of NAD + and normalization of the pool of reduced glutathione.

В качестве факторов химической природы был избран, помимо этилового спирта, тиопенталовый наркоз. Тиопентал вводили крысам внутрибрюшинно в дозе 60 мг на кг массы тела через 2 часа после внутрижелудочного введения легалона (100 мг на кг массы тела) или экстракта из гребней аралии (0,2 мл на 100 г массы). В контрольной группе погибла 1 крыса. Во 2-й и 3-й группах гибели не было. Как видно из таблицы 4, предварительное введение препаратов сопровождается снижением времени бокового положения, что указывает на активацию монооксигеназной системы, осуществляющей биотрансформацию ксенобиотиков. Действие экстракта из гребней аралии и легалона было идентичным.In addition to ethyl alcohol, thiopental anesthesia was chosen as factors of a chemical nature. Thiopental was administered to rats intraperitoneally at a dose of 60 mg per kg of body weight 2 hours after intragastric administration of legalon (100 mg per kg of body weight) or extract from aralia crests (0.2 ml per 100 g of body weight). In the control group, 1 rat died. In the 2nd and 3rd groups there was no death. As can be seen from table 4, the preliminary introduction of drugs is accompanied by a decrease in the lateral position time, which indicates the activation of the monooxygenase system, which carries out the biotransformation of xenobiotics. The action of the extract from the crests of aralia and legalon was identical.

Таким образом, исходя из полученных экспериментальных данных, следует:Thus, based on the obtained experimental data, it follows:

1. Экстракт из гребней аралии обладает выраженным гепатопротекторным действием как при алкогольном поражении печени, так и при введении тиопентала.1. The extract from the crests of aralia has a pronounced hepatoprotective effect both with alcoholic liver damage and with the introduction of thiopental.

2. Механизм терапевтического действия экстракта из гребней аралии обусловлен его благоприятным влиянием на нарушения метаболизма и функцию печени под действием токсиканта:2. The mechanism of therapeutic action of the extract from the ridges of aralia is due to its beneficial effect on metabolic disorders and liver function under the influence of a toxicant:

- ингибирует свободнорадикальные реакции, повышает интегральную антирадикальную активность печени и уменьшает образование токсических продуктов липопероксидации;- inhibits free radical reactions, increases the integral anti-radical activity of the liver and reduces the formation of toxic lipoperoxidation products;

- стабилизирует мембраны лизосом и тормозит выход в цитоплазму гепатоцитов мембранотропных гидролаз;- stabilizes lysosome membranes and inhibits the release of membranotropic hydrolases into the hepatocyte cytoplasm;

- нормализует структуру гепатоцитов за счет регуляции синтеза холестерина, его этерификации и включения в структуру мембран;- normalizes the structure of hepatocytes due to the regulation of cholesterol synthesis, its esterification and inclusion in the structure of membranes;

- нормализует этерифицирующую функцию печени, характеризующуюся синтезом фосфолипидов из триацилглицерина;- normalizes the esterifying function of the liver, characterized by the synthesis of phospholipids from triacylglycerol;

- восстанавливает пул окисленного НАД⁺, снижая ацидоз и повышая активность процессов энергообеспечения за счет активации аэробного гликолиза.- restores the pool of oxidized NAD ⁺ , reducing acidosis and increasing the activity of energy supply processes due to the activation of aerobic glycolysis.

- обеспечивает необходимую концентрацию восстановленного глутатиона в системе антиоксидантной защиты печени, за счет протонофорных свойств- provides the necessary concentration of reduced glutathione in the antioxidant defense system of the liver, due to the protonophore properties

3. Исследованный экстракт из гребней аралии превосходит эталонный гепатопротектор легален по способности восстанавливать биосинтетические процессы фосфолипидного обмена, увеличивать образование НАД+ и нормализации пула восстановленного глутатиона, а также увеличивать антирадикальную активность печени.3. The studied extract from the Aralia ridges exceeds the reference hepatoprotector is legal in its ability to restore the biosynthetic processes of phospholipid metabolism, increase the formation of NAD + and normalize the pool of reduced glutathione, as well as increase the antiradical activity of the liver.

Таким образом, заявляемое средство позволяет расширить ассортимент гепатопротекторных средств, при этом находят применение новые источники полифенольных соединений, в частности, дикорастущие виды растений непищевого назначения Дальнего Востока.Thus, the claimed tool allows you to expand the range of hepatoprotective agents, while finding new sources of polyphenolic compounds, in particular, wild plant species of non-food purposes of the Far East.

Таблица 1.Table 1. Влияние растительных препаратов на содержание общих фосфолипидов (в % от общих липидов) и нейтральных липидов (в % от суммы фракций) в печени крыс при поражении этиловым спиртом. (М±м).The effect of herbal preparations on the content of total phospholipids (in% of total lipids) and neutral lipids (in% of the total fractions) in the liver of rats affected by ethyl alcohol. (M ± m). Биохимические параметрыBiochemical parameters 1 группа -Контроль (интактные)Group 1 - Control (intact) 2 группа Этанол2 group Ethanol 3 группа Депривация3 group deprivation 4 группа Депривация + легален4 group Deprivation + legal 5-я группа Депривация + эк ст. аралии5th group Deprivation + eq. aralia Общие фосфолипидыCommon phospholipids 68,70±2,1768.70 ± 2.17 52,46±2,00***52.46 ± 2.00 *** 60,28±2,19*60.28 ± 2.19 * 65,53±2,3665.53 ± 2.36 ^l)67,95±2,15 ^l) 67.95 ± 2.15 ТриацилглицериныTriacylglycerols 19,69±0,2419.69 ± 0.24 20,5±10,23*20.5 ± 10.23 * 20,60±0,34*20.60 ± 0.34 * ³⁾15,0,4±0,95*** ³⁾ 15.0.4 ± 0.95 *** ²⁾17,5±1,11* ²⁾ 17.5 ± 1.11 * Свободные жирные кислотыFree fatty acids 14,67±0,3414.67 ± 0.34 17,25±0,27***17.25 ± 0.27 *** 19,63±1,10***19.63 ± 1.10 *** ³⁾15,11±0,59 ³⁾ 15.11 ± 0.59 ²⁾15,03±0,71 ²⁾ 15.03 ± 0.71 Эфиры жирных кислотFatty acid esters 16,82±1,6216.82 ± 1.62 16,30±1,1116.30 ± 1.11 16,18±1,5616.18 ± 1.56 17,56±1,9017.56 ± 1.90 16,45±1,3116.45 ± 1.31 ХолестеринCholesterol 15,99±0,4215.99 ± 0.42 18,01±0,23***18.01 ± 0.23 *** 15,69±0,9315.69 ± 0.93 16,79±0,7416.79 ± 0.74 16,26±0,7016.26 ± 0.70 Эфиры холестеринаEsters of cholesterol 19,42±0,6119.42 ± 0.61 16,75±0,89*16.75 ± 0.89 * 14,44±1,42**14.44 ± 1.42 ** ²⁾22,00±1,29 ²⁾ 22.00 ± 1.29 ³⁾22,15±1,10* ³⁾ 22.15 ± 1.10 * Остаточная фракцияResidual fraction 13,41±0,6713.41 ± 0.67 11,19±0,2911.19 ± 0.29 13,46±0,4713.46 ± 0.47 13,50±0,9613.50 ± 0.96 12,61±0,8812.61 ± 0.88 Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001; с 3-й группой ¹⁾- Р<0,05; ²⁾- Р<0,01; ³⁾ - Р<0,001.Note. Significant differences with control: * - P <0.05; ** - P <0.01; *** - P <0.001; with the 3rd group ¹⁾ - P <0.05; ²⁾ - P <0.01; ³⁾ - P <0.001.

Таблица 2.Table 2. Влияние растительных препаратов на биохимические показатели печени крыс при поражении этиловым
спиртом (М+м).The effect of herbal preparations on the biochemical parameters of rat liver with ethyl damage
alcohol (M + m). Биохимические параметрыBiochemical parameters 1 группа Контроль (интактные)Group 1 Control (intact) 2 группа Этанол2 group Ethanol 3 группа Депривация3 group deprivation 4 группа Депривация + легалон4 group Deprivation + legalon 7 группа Депривация + экстракт гребней аралии7 group Deprivation + Aralia crest extract МДА (нмоль/г)MDA (nmol / g) 68,9±1,768.9 ± 1.7 92,9±1,4***92.9 ± 1.4 *** 84,9±1,9***84.9 ± 1.9 *** ³⁾69,7±1,2 ³⁾ 69.7 ± 1.2 ³⁾68,7±1,2 ³⁾ 68.7 ± 1.2 Г-SH (мкМ/г)G-SH (μM / g) 7,1±0,157.1 ± 0.15 5,8±0,09***5.8 ± 0.09 *** 5,1±0,16***5.1 ± 0.16 *** ³⁾6,6±0,16* ³⁾ 6.6 ± 0.16 * ³⁾6,94±0,25 ³⁾ 6.94 ± 0.25 АА (ед/мг белка)AA (u / mg protein) 373±33373 ± 33 227±15**227 ± 15 ** 244±25**244 ± 25 ** 227±20**227 ± 20 ** ³⁾375±19 ³⁾ 375 ± 19 β-глюкозидаза (мкмоль/г/мин)β-glucosidase (μmol / g / min) 0,17±0,010.17 ± 0.01 0,14±0,01*0.14 ± 0.01 * 0,12±0,013**0.12 ± 0.013 ** ²⁾0,18±0,01 ²⁾ 0.18 ± 0.01 ²⁾0,17±0,01 ²⁾ 0.17 ± 0.01 β-галактозидаза (мкмоль/г/мин)β-galactosidase (μmol / g / min) 0,395±0,020.395 ± 0.02 0,446±0,01*0.446 ± 0.01 * 0,420±0,010.420 ± 0.01 ²⁾0,340±0,02 ²⁾ 0.340 ± 0.02 ²⁾350±0,02 ²⁾ 350 ± 0.02 СОД (ед/мг белка)SOD (u / mg protein) 108,5±11,0108.5 ± 11.0 344,9±13,0***344.9 ± 13.0 *** 314,5±12,3***314.5 ± 12.3 *** ³⁾162,6±11,8** ³⁾ 162.6 ± 11.8 ** ³⁾125±9,6 ³⁾ 125 ± 9.6 ГР (нмоль/мин/мг белка)GR (nmol / min / mg protein) 1,31±0,151.31 ± 0.15 0,51±0,08***0.51 ± 0.08 *** 0,59±0,09**0.59 ± 0.09 ** 0,86±0,13*0.86 ± 0.13 * ³⁾1,25±0,05 ³⁾ 1.25 ± 0.05 АлАТ мкмоль/мл/часAlAT μmol / ml / hour 0,81±0,030.81 ± 0.03 1,42±0,02***1.42 ± 0.02 *** 1,15±0,05***1.15 ± 0.05 *** ³⁾0,83±0,01 ³⁾ 0.83 ± 0.01 ³⁾0,80±0,02 ³⁾ 0.80 ± 0.02 НАД⁺(мкмоль/г)NAD ⁺ (μmol / g) 0,51±0,040.51 ± 0.04 0,26±0,03***0.26 ± 0.03 *** 0,28±0,04**0.28 ± 0.04 ** ³⁾0,52±0,03 ³⁾ 0.52 ± 0.03 ³⁾0,61±0,02* ³⁾ 0.61 ± 0.02 * Лактат (мкмоль/г)Lactate (μmol / g) 6,45±0,096.45 ± 0.09 9,13±0,35***9.13 ± 0.35 *** 8,03±0,36***8.03 ± 0.36 *** 7,55±0,44*7.55 ± 0.44 * ³⁾6,25±0,21 ³⁾ 6.25 ± 0.21 Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001; с3 3-й группой ¹⁾- Р<0,05; ²⁾- Р<0,01; ³⁾ - Р<0,001..Note. Significant differences with control: * - P <0.05; ** - P <0.01; *** - P <0.001; c3 3rd group ¹⁾ - P <0.05; ²⁾ - P <0.01; ³⁾ - P <0.001 ..

Таблица 3.Table 3. Влияние растительных препаратов на фосфолипидный состав печени крыс при поражении этиловым спиртом (в % от суммы всех фракций (М±м).The effect of herbal preparations on the phospholipid composition of rat liver when affected by ethanol (in% of the sum of all fractions (M ± m). Фракции фосфолипидовPhospholipid fractions 1 группа Контроль (интактные)Group 1 Control (intact) 2 группа Этанол2 group Ethanol 3 группа Депривация3 group deprivation 4 группа Депривация + легалон4 group Deprivation + legalon 5 группа Депривация + экстракт гребней аралии5 group Deprivation + Aralia crest extract ФосфатидилхолинPhosphatidylcholine 48,46±0,5848.46 ± 0.58 43,70±1,25**43.70 ± 1.25 ** 47,83±1,9047.83 ± 1.90 47,90±1,0547.90 ± 1.05 48,15±1,0248.15 ± 1.02 ЛизофосфатидилхолинLysophosphatidylcholine 2,53±0,132.53 ± 0.13 4,55±0,16***4.55 ± 0.16 *** 3,57±0,15**3.57 ± 0.15 ** ³⁾2,14±0,21 ³⁾ 2.14 ± 0.21 ³⁾2,5±0,16 ³⁾ 2.5 ± 0.16 СфингомиелинSphingomyelin 5,82±0,465.82 ± 0.46 8,94±0,61**8.94 ± 0.61 ** 5,60±0,135.60 ± 0.13 5,56±0,385.56 ± 0.38 5,50±0,225.50 ± 0.22 ФосфатидилэтаноламинPhosphatidylethanolamine 26,36±0,8626.36 ± 0.86 22,92±1,34*22.92 ± 1.34 * 27,86±2,2027.86 ± 2.20 27,70±1,0127.70 ± 1.01 26,08±,8926.08 ± 89 ЛизофосфатидилэтаноламинLysophosphatidylethanolamine 2,70±0,202.70 ± 0.20 4,51±0,25***4.51 ± 0.25 *** 2,90±0,112.90 ± 0.11 2,75±0,15**2.75 ± 0.15 ** 2,65±0,13***2.65 ± 0.13 *** ФосфатидилсеринPhosphatidylserine 3,81±0,263.81 ± 0.26 3,08±0,19*3.08 ± 0.19 * 2,74±0,33*2.74 ± 0.33 * ¹⁾3,95±0,28 ¹⁾ 3.95 ± 0.28 ¹⁾3,68±0,16 ¹⁾ 3.68 ± 0.16 ФосфатидилинозитPhosphatidylinositol 4,44±0,334.44 ± 0.33 5,70±0,23**5.70 ± 0.23 ** 4,40±0,134.40 ± 0.13 ³⁾5,80±0,23** ³⁾ 5.80 ± 0.23 ** ³⁾5,65±0,19** ³⁾ 5.65 ± 0.19 ** Фосфатидная кислотаPhosphatidic acid 1,64±0,141.64 ± 0.14 1,57±0,181.57 ± 0.18 1,68±0,191.68 ± 0.19 2)1,05±0,07**2) 1.05 ± 0.07 ** 1,98±0,07*1.98 ± 0.07 * ДифосфатидилглицеринDiphosphatidylglycerol 4,24±0,224.24 ± 0.22 5,03±0,575.03 ± 0.57 3,42±0,14**3.42 ± 0.14 ** 4,15±0,394.15 ± 0.39 ¹⁾4,75±0,28 ¹⁾ 4.75 ± 0.28 Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001; с 3-й группой ¹⁾- Р<0,05; ²⁾- Р<0,01; ³⁾ - Р<0,001.Note. Significant differences with control: * - P <0.05; ** - P <0.01; *** - P <0.001; with the 3rd group ¹⁾ - P <0.05; ²⁾ - P <0.01; ³⁾ - P <0.001.

Таблица 4.Table 4. Влияние растительных препаратов на величину времени тиопенталового наркоза (мин; М±м).The effect of herbal preparations on the time of thiopental anesthesia (min; M ± m). 1-я (контроль)1st (control) 2-я (легален)2nd (legal) 3-я (экстракт из гребней аралии)3rd (extract from Aralia crests) 54,1±2,2854.1 ± 2.28 43,2±2,44*43.2 ± 2.44 * 42,5±2,57*42.5 ± 2.57 * Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05;Note. Significant differences with control: * - P <0.05;

Claims

An agent with a hepatoprotective effect based on an extract of plant origin, characterized in that the agent is an ethanol extraction product containing up to 50% polyphenolic compounds, Aralia mandshurica Rupr. et Maxim, the Araliaceae family - Araliaceae.