RU2323742C1 - Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine - Google Patents

Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine Download PDF

Info

Publication number
RU2323742C1
RU2323742C1 RU2007105684/15A RU2007105684A RU2323742C1 RU 2323742 C1 RU2323742 C1 RU 2323742C1 RU 2007105684/15 A RU2007105684/15 A RU 2007105684/15A RU 2007105684 A RU2007105684 A RU 2007105684A RU 2323742 C1 RU2323742 C1 RU 2323742C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
chitosan
vaccine
inactivated
chitosonium
molecular weight
Prior art date
Application number
RU2007105684/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Юрий Захарович Гендон (RU)
Юрий Захарович Гендон
Станислав Георгиевич Маркушин (RU)
Станислав Георгиевич Маркушин
Георгий Георгиевич Кривцов (RU)
Георгий Георгиевич Кривцов
Ирина Ивановна Акопова (RU)
Ирина Ивановна Акопова
Виталий Васильевич Зверев (RU)
Виталий Васильевич Зверев
Владимир Михайлович Колышкин (RU)
Владимир Михайлович Колышкин
Original Assignee
Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова) filed Critical Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова)
Priority to RU2007105684/15A priority Critical patent/RU2323742C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2323742C1 publication Critical patent/RU2323742C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, pharmacology.
SUBSTANCE: mixture of chitosonium glutamate obtained from high molecular chitosan with molecular mass 100-500 kD, and restrictedly depolymerised low polymeric chitosan with molecular mass 0.5-20 kD, is added to the inactivated flue vaccine as an adjuvant; the molecules of chitosan and chitosonium glutamate have free aldehydic groups at one of their free end, and have the deacetylation degree within 60-90%; the concentration of high molecular chitosan is brought to 0.5%, and low polymeric chitosan - to 0.05%, and the parenteral vaccination is performed.
EFFECT: method increases the immunogenicity of inactivated flue accine.
4 dwg, 4 ex

Description

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производства вирусных вакцин, в частности инактивированной гриппозной вакцины.The invention relates to the medical industry and relates to the production of viral vaccines, in particular inactivated influenza vaccine.

Существующие инактивированные гриппозные вакцины обладают относительно низкой иммуногенностью и профилактической эффективностью для лиц пожилого возраста и детей до 5-ти лет и не способны защищать от дрейфовых вариантов вируса гриппа, изменяющих антигенность, которые появляются практически в каждый новый эпидемический сезон. При однократном парентеральном введении существующих инактивированных гриппозных вакцин непраймированным лицам (т.е. лицам, не болевшим гриппом и невакцинированным) защищается от заболевания гриппом не более 5-10% вакцинированных, что осложняет борьбу с гриппом, особенно в случае пандемии (Гендон Ю.З., 2004; 2006).Existing inactivated influenza vaccines have relatively low immunogenicity and prophylactic efficacy for the elderly and children under 5 years of age and are not able to protect against drift variants of the influenza virus that change antigenicity, which appear in almost every new epidemic season. With a single parenteral administration of existing inactivated influenza vaccines to unprimed individuals (i.e., people who have not had the flu and are not vaccinated), no more than 5-10% of those vaccinated are protected from the flu, which complicates the fight against the flu, especially in the case of a pandemic (Gendon Yu.Z. ., 2004; 2006).

Известен способ (US 6534065) получения интраназальной мукозальной вакцины при использовании в качестве мукозо-адгезивного адъюванта хитозана деацетилированного на 80-90%) с молекулярным весом от 10000 до 100000 Da и при концентрации хитозана в вакцине до 5%. Использовали соли хитозана со следующими карбоновыми кислотами: молочной, яблочной, малеиновой, янтарной, фумаровой, глютаминовой и аспарагиновой. Однако интраназальное применение инактивированной гриппозной вакцины с мукозо-адгезивным адъювантом приводило к серьезным осложнениям в виде паралича некоторых лицевых мышц, в связи с чем применение такой вакцины было прекращено (Mutsch et al., 2004).A known method (US 6534065) for producing an intranasal mucosal vaccine when using chitosan deacetylated by 80-90% as a mucoso-adhesive adjuvant) with a molecular weight of from 10,000 to 100,000 Da and with a chitosan concentration in the vaccine of up to 5%. Chitosan salts with the following carboxylic acids were used: lactic, malic, maleic, succinic, fumaric, glutamic and aspartic. However, the intranasal use of an inactivated influenza vaccine with a mucoso-adhesive adjuvant led to serious complications in the form of paralysis of some facial muscles, and therefore the use of such a vaccine was discontinued (Mutsch et al., 2004).

Техническим результатом заявленного изобретения является создание инактивированной гриппозной вакцины, вводимой парентерально, обладающей повышенной иммуногенностью. Для достижения указанного технического результата способ приготовления инактивированных гриппозных вакцин (цельновирионных, расщепленных, субъединичных и др.), вводимых парентерально, характеризуется тем, что при приготовлении инактивированной вакцины к ней одновременно добавляют препараты высокополимерного хитозана и ограниченно деполимеризованного низкополимерного хитозана, молекулы которого несут на одном из своих концов свободные альдегидные группы, при этом добавляемые препараты хитозана имеют степень деацетилирования в пределах 60-90% и молекулярную массу в пределах 100-500 кБа (высокополимерный хитозан) и 0,5-20 кВа (низкополимерный хитозан).The technical result of the claimed invention is the creation of an inactivated influenza vaccine, administered parenterally, with increased immunogenicity. To achieve the technical result indicated, a method for preparing parenteral inactivated influenza vaccines (whole, split, subunit, etc.) is characterized in that, when preparing an inactivated vaccine, high-polymer chitosan and limited-depolymerized low-polymer chitosan are simultaneously added to it, the molecules of which are carried on one free aldehyde groups from their ends, while the added chitosan preparations have a degree of deacetylation in at 60–90% and a molecular weight in the range of 100–500 kBa (high polymer chitosan) and 0.5–20 kVA (low polymer chitosan).

Известно, что препараты высокополимерного хитозана растворимы только при рН ниже 6,5 (рК протонирования свободных аминогрупп хитозана). В этом случае они представляют собой поликатионы, легко образующие ионные комплексы с биополимерами различного происхождения. В подкожной и мышечной тканях человека и животных в норме поддерживается рН не ниже 7,0, поэтому в месте инъекции комплекс хитозан-компоненты вакцины выпадает в виде геля. Большинство низкомолекулярных фрагментов хитозана, полученных ограниченной деполимеризацией с использованием азотистой кислоты, на одном своем конце несут остаток ангидроманнозы, имеющей свободную альдегидную группу. При рН выше 7,0 алифатические альдегидные группы образуют с первичными аминогруппами слабые ковалентные азометиновые связи, т.е. получаются так называемые Шиффовы основания. Поэтому низкополимерный хитозан оказывается также иммобилизованным в месте инъекции.It is known that preparations of high-polymer chitosan are soluble only at pH below 6.5 (pK protonation of free amino groups of chitosan). In this case, they are polycations that easily form ionic complexes with biopolymers of various origins. In the subcutaneous and muscle tissues of humans and animals, a pH of at least 7.0 is normally maintained, so at the injection site, the complex of chitosan components of the vaccine drops out in the form of a gel. Most low molecular weight fragments of chitosan obtained by limited depolymerization using nitrous acid, at one end, carry an anhydromanose residue having a free aldehyde group. At pH above 7.0, aliphatic aldehyde groups form weak covalent azomethine bonds with primary amino groups, i.e. the so-called Schiff bases are obtained. Therefore, the low polymer chitosan is also immobilized at the injection site.

Вследствие медленной деполимеризации молекул хитозана под действием лизоцима и некоторых других гидролитических ферментов, присутствующих в месте инъекции, комплекс медленно рассасывается и фрагменты хитозана и вирусные антигены постепенно освобождаются из геля. Это влечет за собой замедленное и постепенное поступление компонентов вакцины в кровоток, что и приводит к усилению иммунного ответа.Due to the slow depolymerization of chitosan molecules under the action of lysozyme and some other hydrolytic enzymes present at the injection site, the complex slowly dissolves and chitosan fragments and viral antigens are gradually released from the gel. This entails a slow and gradual flow of vaccine components into the bloodstream, which leads to an increase in the immune response.

Принимая во внимание опубликованные в научной литературе сведения, что хитозан с молекулярной массой в пределах 0,6-15 кДа стимулирует систему клеточного иммунитета, мы проводили ограниченную деполимеризацию хитозана азотистой кислотой и последующее фракционирование так, чтобы получить фракцию молекул с массой 2-20 кДа (низкомолекулярный хитозан - НПХ). Данная фракция обладает также бактериостатическим и/или бактерицидным действием, что должно содействовать консервации вакцины при хранении.Taking into account the information published in the scientific literature that chitosan with a molecular mass in the range of 0.6-15 kDa stimulates the cellular immunity system, we carried out limited depolymerization of chitosan with nitrous acid and subsequent fractionation so as to obtain a fraction of molecules with a mass of 2-20 kDa ( low molecular weight chitosan - NPH). This fraction also has a bacteriostatic and / or bactericidal effect, which should contribute to the preservation of the vaccine during storage.

Примеры осуществления способаExamples of the method

Пример 1. Получение хитозанового адъювантаExample 1. Obtaining chitosan adjuvant

Препарат высокополимерного хитозана (ВПХ) (фирма Сонат, РФ, Москва), имеющий среднюю молекулярную массу 300 кДа, степень деацитилирования 85% и содержащий лишь следовые количества тяжелых металлов (Pb, Hg, Cu, Cd)-4ppm, золы - менее 0,01%, белка - менее 0,02%, подвергали ограниченной деполимеризации с использованием методики, приведенной в патенте США №5312908. Процесс проводили в течение 4-х часов при температуре 5°С. Реакцию останавливали, добавляя водный раствор NaOH до конечного рН 9,0, что приводило к выпадению фрагментов хитозана в осадок. Для полного удаления низкомолекулярных продуктов реакции проводили три цикла растворения препарата подкислением до рН 4 с последующим щелочным осаждением. Затем раствор НПХ в минимальном количестве 0,05 м уксусной кислоты диализовали 2 раза против 0,05 м АсОН и 1 раз против деионизованной воды, используя ультрафильтрационную мембрану фирмы "Sigma" (США), пропускающую молекулы только менее 0,5 кДа. Затем препарат подвергали истощающему диализу, используя целлюлозную диализную мембрану, задерживающую молекулы с массой более 20 кДа. Раствор, содержащий молекулы, прошедшие сквозь мембрану, подвергали сублимационной сушке - получали сухой препарат НПХ (фиг.1).High-polymer chitosan (VPH) preparation (Sonat company, Russian Federation, Moscow), having an average molecular weight of 300 kDa, a deacylation degree of 85% and containing only trace amounts of heavy metals (Pb, Hg, Cu, Cd) -4ppm, ash - less than 0, 01%, protein less than 0.02%, was subjected to limited depolymerization using the methodology described in US patent No. 5312908. The process was carried out for 4 hours at a temperature of 5 ° C. The reaction was stopped by adding an aqueous solution of NaOH to a final pH of 9.0, which led to the precipitation of fragments of chitosan in the sediment. To completely remove the low molecular weight reaction products, three cycles of drug dissolution were carried out by acidification to pH 4, followed by alkaline precipitation. Then the NPH solution in a minimum amount of 0.05 m acetic acid was dialyzed 2 times against 0.05 m AcOH and 1 time against deionized water using an Sigma ultrafiltration membrane (USA), which allowed molecules to pass only less than 0.5 kDa. Subsequently, the preparation was subjected to exhaustive dialysis using a cellulose dialysis membrane retaining molecules with a mass of more than 20 kDa. The solution containing the molecules passing through the membrane was freeze-dried to obtain a dry NPH preparation (Fig. 1).

Для приготовления концентрата адъюванта ВПХ/НПХ навеску сухого препарата ВПХ смешивали с навеской кристаллической глутаминовой кислоты в соотношении 0,99 моль кислоты на 1 моль аминогрупп хитозана. Затем при постоянном перемешивании добавляли деионизованную воду в количестве, необходимом для получения 2% раствора глутамата хитозония. По достижении максимального растворения раствор отфильтровывали от следовых количеств нерастворенного хитозана и подвергали сублимационной сушке. После растворения необходимой навески глутамата хитозония в деионизованной воде (рН полученного раствора = 6,1-6,4) раствор стерилизовали автоклавированием. К полученному раствору (после его охлаждения) добавляли предварительно простерилизованный фильтрованием через мембрану с порами 0,2 мкм раствор НПХ в деионизованной воде и стерильный раствор 3 моль/литр хлорида натрия так, чтобы получить 1% ВПХ, содержащий 0,1% НПХ и 0,15 моль/литр NaCl (концентрат ВПХ/НПХ). Таким образом, препарат ВПХ/НПХ представляет собой смесь двух солей хитозония: 90% глютамата и 10% ацетата.To prepare the VPH / NPH adjuvant concentrate, a weighed portion of the dry VPH preparation was mixed with a weighed portion of crystalline glutamic acid in a ratio of 0.99 mol of acid per 1 mol of chitosan amino groups. Then, with constant stirring, deionized water was added in the amount necessary to obtain a 2% solution of chitosonium glutamate. Upon reaching maximum dissolution, the solution was filtered off from trace amounts of undissolved chitosan and freeze-dried. After dissolution of the necessary sample of chitosonium glutamate in deionized water (pH of the resulting solution = 6.1-6.4), the solution was sterilized by autoclaving. To the resulting solution (after cooling), a 0.2 μm NPH solution in deionized water and a sterile solution of 3 mol / liter sodium chloride, pre-sterilized by filtration through a pore membrane, were added so as to obtain 1% VPH containing 0.1% NPH and 0 15 mol / liter NaCl (VPH / NPH concentrate). Thus, the VPH / NPH preparation is a mixture of two chitosonium salts: 90% glutamate and 10% acetate.

Пример 2Example 2

К расщепленным или субъединичным инактивированным гриппозным вакцинам добавляли концентрат ВПХ/НПХ, разведенный в стерильном растворе хлорида натрия так, чтобы получить конечную концентрацию соли хитозония с глютаминовой кислотой - ВПХ = 0,5%, НПХ = 0,05%, хлорида натрия = 0,9% и 3 мкг вакцины в общем объеме = 0,2 мл. Мышей вакцинировали двукратно, вводя внутримышечно по 3 мкг вакцины с хитозаном или без него. Наблюдалось увеличение образования антител, задерживающих гемагглютинацию, для вируса гриппа серотипа А/Н1 в 4-16 раз, серотипа А/Н3 - в 4-8 раз и серотипа В - в 4-8 раз, а нейтрализующих антител к серотипу А/Н1 - в 8-32 раза, серотипу А/Н3 - в 8-16 раз и серотипу В - в 8-32 раза. Этот эффект проявляется как при иммунизации расщепленной, так и субъединичной, инактивированной вакцинами (фиг.2).An integrated VPH / NPH concentrate diluted in a sterile sodium chloride solution was added to split or subunit inactivated influenza vaccines to obtain a final concentration of chitosonium salt with glutamic acid - VPH = 0.5%, NPH = 0.05%, sodium chloride = 0, 9% and 3 μg of the vaccine in total = 0.2 ml. Mice were vaccinated twice by intramuscular injection of 3 μg of the vaccine with or without chitosan. There was an increase in the formation of antibodies that delay hemagglutination, for the influenza virus serotype A / H1 by 4-16 times, serotype A / H3 - 4-8 times and serotype B - 4-8 times, and neutralizing antibodies to serotype A / H1 - 8-32 times, serotype A / H3 - 8-16 times and serotype B - 8-32 times. This effect is manifested both in immunization with split and subunit inactivated vaccines (figure 2).

Пример 3Example 3

К инактивированным гриппозным вакцинам добавляли препараты соли хитозония с глютаминовой кислотой (ВПХ) + НПХ (как описано в примере 1) и двукратно вакцинировали мышей, вводя по 3 мкг вакцины внутримышечно. В контрольных опытах мышей вакцинировали без хитозана. Наличие антител в сыворотках исследовали в реакции задержки гемагглютинации и в реакции нейтрализации со штаммами вируса гриппа, содержащимися в вакцине, а также с дрейфовыми антигенными вариантами вирусов серотипов А и В. В сыворотках мышей, вакцинированных без хитозана, титр антител к дрейфовым вариантам вируса был в 2-4 раза ниже чем к вакцинным штаммам. При вакцинации препаратами, содержащими ВПХ/НПХ, наблюдалось не только существенное увеличение титров антител к штаммам вирусов, содержащихся в вакцинах, но также значительное образование антител, ингибирующих гемагглютинацию, а также нейтрализующих антител к дрейфовым вариантам вируса гриппа серотипов А и В, которые превосходили титры антител, ингибирующих гемагглютинацию, и нейтрализующих антител для штаммов А/Н3 в 2-8 раз, и для штаммов вируса гриппа В в 2-4 раза в сравнении с соответствующими титрами антител к дрейфовым вариантам, индуцируемых вакцинами без хитозана, и были равны или превышали титры антител, индуцируемых вакцинами без хитозана к вирусам, содержащимся в вакцинах (фиг.3).Chitosonium glutamic acid (HPV) + NPH salt preparations (as described in Example 1) were added to inactivated influenza vaccines and mice were vaccinated twice, injecting 3 μg of the vaccine intramuscularly. In control experiments, mice were vaccinated without chitosan. The presence of antibodies in sera was investigated in the hemagglutination inhibition reaction and in the neutralization reaction with influenza virus strains contained in the vaccine, as well as with drift antigenic variants of serotypes A and B. In the sera of mice vaccinated without chitosan, the titer of antibodies to drift variants of the virus was 2-4 times lower than for vaccine strains. When vaccinated with drugs containing HPV / NPH, there was not only a significant increase in antibody titers to strains of viruses contained in vaccines, but also a significant formation of antibodies that inhibit hemagglutination, as well as neutralizing antibodies to drift variants of the influenza virus of serotypes A and B that exceeded the titers antibodies that inhibit hemagglutination and neutralizing antibodies for strains A / H3 2-8 times, and for strains of influenza B virus 2-4 times in comparison with the corresponding titers of antibodies to drift variants, iruemyh vaccines without chitosan and were equal to or higher than titers induced by vaccines without chitosan to viruses contained in the vaccines (Figure 3).

Пример 4Example 4

К инактивированной гриппозной вакцине (расщепленной) добавляли соли хитозония с глютаминовой кислотой (ВПХ) до 0,5% и НПХ до 0,05% и двукратно вакцинировали внутримышечно различными дозами вакцины (3,0 мкг, 1,5 мкг и 0,75 мкг) с препаратом хитозана и без него. Хитозан способен увеличивать титры антител в 4 раза даже при значительном снижении дозы антигена. В сравнении с вакцинацией без хитозана титры антител при вакцинации с хитозаном при дозе вакцины 3 мкг увеличиваются в 4-5 раз, при 1,5 мкг в 3-5 раз и при 0,75 мкг в 3-5 раз в зависимости от серотипа вируса (фиг.4).Chitosonium salts with glutamic acid (HPV) up to 0.5% and NPH up to 0.05% were added to the inactivated influenza vaccine (split) and twice vaccinated intramuscularly with different doses of the vaccine (3.0 μg, 1.5 μg and 0.75 μg ) with and without chitosan. Chitosan is able to increase antibody titers by 4 times, even with a significant reduction in the dose of antigen. Compared to vaccination without chitosan, antibody titers when vaccinated with chitosan at a dose of 3 μg vaccine increase by 4-5 times, with 1.5 μg 3-5 times and at 0.75 μg 3-5 times, depending on the serotype of the virus (figure 4).

Подписи к чертежамDrawing captions

Фиг.1. Схема деполимеризации хитозана нитритом натрия при рН 3,0-4,0:Figure 1. The depolymerization scheme of chitosan with sodium nitrite at a pH of 3.0-4.0:

А - препарат высокополимерного хитозана, растворенного в разбавленной уксусной кислоте (ацетат хитозония);A - a preparation of high-polymer chitosan dissolved in diluted acetic acid (chitosonium acetate);

GlcN - остаток глюкозамина;GlcN — glucosamine residue;

GlcNAc - остаток ацетилглюкозамина;GlcNAc - acetylglucosamine residue;

Б - продукт деполимеризации ацетата хитозония с помощью азотистой кислоты.B - the product of the depolymerization of chitosonium acetate with nitrous acid.

Фиг.2. Влияние хитозана на образование антител к трем серотипам вируса гриппа. Мышей иммунизировали двукратно субъединичными и расщепленной инактивированными трехвалентными вакцинами с хитозаном или без него. Анализ титров антител проводили со штаммами вируса, соответствующими содержащимся в вакцинах:Figure 2. The effect of chitosan on the formation of antibodies to the three serotypes of the influenza virus. Mice were immunized twice with subunit and cleaved with inactivated trivalent vaccines with or without chitosan. Analysis of antibody titers was performed with virus strains corresponding to those contained in the vaccines:

А - титры антител, ингибирующих гемагглютинацию; В - титры нейтрализующих антител;A - titers of antibodies that inhibit hemagglutination; B - neutralizing antibody titers;

H1, Н3, В - серотипы вируса гриппа; Х - титры при раздельном введении вакцины и хитозана;H1, H3, B - serotypes of influenza virus; X - titers with the separate introduction of the vaccine and chitosan;

а - субъединичная вакцина MG; b - вакцина Vaxigrip; с - субъединичная вакцина Influvac.a - subunit vaccine MG; b - Vaxigrip vaccine; c - Influvac subunit vaccine.

Figure 00000001
- вакцина без хитозана,
Figure 00000002
- вакцина с хитозаном.
Figure 00000001
- vaccine without chitosan,
Figure 00000002
- vaccine with chitosan.

По оси ординат - разведения сывороток.The ordinate axis is the dilution of serums.

Все наблюдавшиеся различия между титрами антител, индуцированных вакцинами с хитозаном и без него, были статистически значимыми (Р<0,01).All observed differences between antibody titers induced by vaccines with and without chitosan were statistically significant (P <0.01).

Фиг.3. Образование антител к дрейфовым вариантам вируса гриппа при вакцинации вакцинами с хитозаном.Figure 3. The formation of antibodies to drift variants of the influenza virus during vaccination with chitosan vaccines.

Мышей иммунизировали двукратно вакцинами Vaxigrip на эпидсезон 2004/05 и на эпидсезон 2005/06 с хитозаном или без него. Анализ титров антител проводили со штаммами вирусов, содержащихся в вакцинах, и с дрейфовыми вариантами вирусов гриппа A/H3N2 и В;Mice were immunized twice with Vaxigrip vaccines for the 2004/05 epidemic season and for the 2005/06 epidemic season with or without chitosan. Analysis of antibody titers was performed with strains of viruses contained in vaccines, and with drift variants of influenza viruses A / H3N2 and B;

А - титры антител, ингибирующих гемагглютинацию, В - титры нейтрализующих антител;A - titers of antibodies that inhibit hemagglutination, B - titers of neutralizing antibodies;

а - штамм A/H3N2, соответствующий вакцинному штамму на эпидсезон 2004/05, b - дрейфовый вариант A/H3N2 для вакцины эпидсезона 2004/05, рекомендованный на эпидсезон 2005/06, с - дрейфовый вариант A/H3N2 для вакцины эпидсезона 2004/05, рекомендованный на эпидсезон 2003/2004, d - штамм В, соответствующий вакцинному штамму на эпидсезон 2004/05, е - дрейфовый вариант вируса В для вакцины эпидсезона 2004/05, рекомендованный на эпидсезон 2003/04, f - штамм A/H3N2, соответствующий вакцинному штамму на эпидсезон 2005/06, g - дрейфовый вариант A/H3N2 для вакцины эпидсезона 2005/06, рекомендованный на эпидсезон 2004/05, h - дрейфовый вариант A/H3N2 для вакцины эпидсезона 2005/06, рекомендованный на эпидсезон 2003/04, i - штамм В, соответствующий вакцинному штамму на эпидсезон 2005/06, j - дрейфовый вариант вируса В для вакцины эпидсезона 2005/06, рекомендованный на эпидсезон 2003/04;a - A / H3N2 strain corresponding to the vaccine strain for the 2004/05 epidemic season, b - A / H3N2 drift variant for the 2004/05 epidemic vaccine, recommended for 2005/06 epidemic season, c - A / H3N2 drift variant for the 2004/05 epidemic vaccine recommended for epidemiological season 2003/2004, d - strain B, corresponding to the vaccine strain for epidemic season 2004/05, e - drift variant of virus B for the vaccine epidemic season 2004/05, recommended for epidemic season 2003/04, f - strain A / H3N2, corresponding vaccine strain for the 2005/06 epidemic season, g - A / H3N2 drift variant for the 2005/06 epidemic vaccine recommended for epidemic Zones 2004/05, h - drift variant A / H3N2 for the epidemiological vaccine 2005/06, recommended for the epidemic season 2003/04, i - strain B corresponding to the vaccine strain for the epidemic season 2005/06, j - drift variant of virus B for the vaccine epidemic season 2005 / 06, recommended for the epidemic season 2003/04;

Figure 00000001
- вакцина без хитозана;
Figure 00000002
- вакцина с хитозаном.
Figure 00000001
- vaccine without chitosan;
Figure 00000002
- vaccine with chitosan.

По оси ординат - разведения сывороток.The ordinate axis is the dilution of serums.

Все наблюдаемые различия между титрами антител к дрейфовым вариантам вирусов при вакцинации с хитозаном и без него были статистически значимыми (Р<0,05-0,01).All observed differences between antibody titers to drift variants of viruses during vaccination with chitosan and without it were statistically significant (P <0.05-0.01).

Фиг.4. Влияние хитозана на образование антител, ингибирующих гемагглютинацию при снижении дозы антигена.Figure 4. The effect of chitosan on the formation of antibodies that inhibit hemagglutination with a decrease in the dose of antigen.

Мышей иммунизировали двукратно расщепленной вакциной Vaxigrip, вводя внутримышечно 3,0, 1,5 и 0,75 мкг антигена с хитозаном или без него:Mice were immunized with a double-split Vaxigrip vaccine, injecting intramuscularly with 3.0, 1.5 and 0.75 μg of antigen with or without chitosan:

I - вакцина без хитозана, II - вакцина с хитозаном;I - vaccine without chitosan, II - vaccine with chitosan;

а - 3,0 мкг антигена, b - 1,5 мкг антигена, с - 0,75 мкг антигена. a - 3.0 μg of antigen, b - 1.5 μg of antigen, c - 0.75 μg of antigen.

ЛитератураLiterature

1.Гендон Ю.З. Преимущества и недостатки инактивированной и живой вакцин против гриппа. Вопр. вирусол. 2004, 49, №4, стр 4-12.1.Gendon Yu.Z. Advantages and disadvantages of inactivated and live flu vaccines. Q. virusol. 2004, 49, No. 4, pp. 4-12.

2.Гендон Ю.З. Проблемы профилактики гриппа у маленьких детей. Вопр. вирусол. 2006, 51, №2, стр.4-10.2.Gendon Yu.Z. Problems of influenza prevention in young children. Q. virusol. 2006, 51, No. 2, pp. 4-10.

3.Mutsch M., Zhou W., Rhodes P. at al. Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell's - Palsy in Switzerland. N.Engl. G.Med. 2004, 350, p.896-903.3.Mutsch M., Zhou W., Rhodes P. at al. Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell's - Palsy in Switzerland. N. Engl. G.Med. 2004, 350, p. 896-903.

4.US 6534065 - Influenza vaccine composition with chitosan adjuvant.4.US 6534065 - Influenza vaccine composition with chitosan adjuvant.

Claims (1)

Способ повышения иммуногенности инактивированной гриппозной вакцины, включающий добавление к вакцине в качестве адъюванта высокополимерного глутамата хитозония, отличающийся тем, что в качестве адъюванта используют смесь глутамата хитозония, полученного из высокомолекулярного хитозана с молекулярной массой 100-500 кДа и ограниченно деполимеризованного низкополимерного хитозана с молекулярной массой 0,5-20 кДа; при этом молекулы хитозана и глутамата хитозония несут на одном из своих концов свободные альдегидные группы и имеют степень деацетилирования в пределах 60-90%; концентрацию высокомолекулярного хитозана в вакцине доводят до 0,5% и низкополимерного хитозана до 0,05%, а вакцинацию осуществляют парентеральным способом.A method of increasing the immunogenicity of an inactivated influenza vaccine, comprising adding chitosonium high polymer glutamate to the vaccine as an adjuvant, characterized in that a mixture of chitosonium glutamate obtained from high molecular weight chitosan with a molecular weight of 100-500 kDa and a limited depolymerized low copolymer low molecular weight is used as adjuvant 5-20 kDa; while the molecules of chitosan and chitosonium glutamate carry free aldehyde groups at one of their ends and have a degree of deacetylation in the range of 60-90%; the concentration of high molecular weight chitosan in the vaccine is adjusted to 0.5% and low polymer chitosan to 0.05%, and vaccination is carried out by the parenteral method.
RU2007105684/15A 2007-02-15 2007-02-15 Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine RU2323742C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007105684/15A RU2323742C1 (en) 2007-02-15 2007-02-15 Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007105684/15A RU2323742C1 (en) 2007-02-15 2007-02-15 Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2323742C1 true RU2323742C1 (en) 2008-05-10

Family

ID=39799876

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007105684/15A RU2323742C1 (en) 2007-02-15 2007-02-15 Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2323742C1 (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2583886C2 (en) * 2014-02-28 2016-05-10 Пётр Евгеньевич Игнатов Multipotent vaccine for prevention and treatment of primarily invasive and infectious diseases, method of use
RU2589702C1 (en) * 2015-04-29 2016-07-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН) Oligohitozane derivatives as adjuvants for vaccines
RU2661408C2 (en) * 2012-12-17 2018-07-16 Юросайн Вэксинз Аб Vaccine composition for use in immuno-compromised populations
RU2697527C1 (en) * 2018-06-06 2019-08-15 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФГУ ФИЦ Биотехнологии РАН) Immunoadjuvant composition for vaccines for infectious agents of viral and bacterial nature

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BACON A. et al. Carbohydrate Biopolymers Enhance Antibody Responses to Mucosally Delivered Vaccine Antigens. Infection and Immunity. 2000, v. 68, №10, pp.5764-5770. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2661408C2 (en) * 2012-12-17 2018-07-16 Юросайн Вэксинз Аб Vaccine composition for use in immuno-compromised populations
RU2583886C2 (en) * 2014-02-28 2016-05-10 Пётр Евгеньевич Игнатов Multipotent vaccine for prevention and treatment of primarily invasive and infectious diseases, method of use
RU2589702C1 (en) * 2015-04-29 2016-07-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова Российской академии наук (ИНЭОС РАН) Oligohitozane derivatives as adjuvants for vaccines
RU2697527C1 (en) * 2018-06-06 2019-08-15 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФГУ ФИЦ Биотехнологии РАН) Immunoadjuvant composition for vaccines for infectious agents of viral and bacterial nature

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2008293504B2 (en) Immunogenic compositions and methods
KR101342641B1 (en) Composition for Adjuvant Comprising Poly-Gamma-Glutamic Acid-Chitosan Nanoparticle
JP2003522802A (en) Proteosome influenza vaccine
WO2013044203A2 (en) Novel influenza hemagglutinin protein-based vaccines
Hagenaars et al. Physicochemical and immunological characterization of N, N, N-trimethyl chitosan-coated whole inactivated influenza virus vaccine for intranasal administration
RU2522219C2 (en) Compositions and methods of immunisation with application of cd1d ligands
CN104906574B (en) Chitosan oligosaccharide is preparing the purposes in vaccine adjuvant and vaccine composition
Spinner et al. Methylglycol chitosan and a synthetic TLR4 agonist enhance immune responses to influenza vaccine administered sublingually
RU2323742C1 (en) Method to increase immunogenicity of inactivated flue vaccine
JP6494233B2 (en) Mucosal vaccine composition
JP7568746B2 (en) Methods for improving the immunogenicity of protein/peptide antigens
US9243047B2 (en) Influenza nucleoprotein vaccines
CN105342982B (en) Influenza vaccines immune formulation of nose administration and preparation method thereof
CN102497879A (en) Single-time vaccines
US20240139312A1 (en) Universal adjuvant for nasal, oral, and intramuscular delivery of vaccines
CN107050446B (en) Modified seasonal influenza-RSV combination vaccine and method of making same
CN107200788B (en) Quaternary phosphonium chitosan and application thereof as vaccine immunologic adjuvant
WO2015050180A1 (en) Mucosal vaccine composition
Noh et al. Programming of influenza vaccine broadness and persistence by mucoadhesive polymer-based adjuvant systems
RU2804948C2 (en) Pentavalent subunit vaccine against respiratory infections and method of its preparation
WO2022053016A1 (en) Method for improving immunogenicity by using glyco-coronavirus rbd antigen conjugate
CN106075420A (en) Multivalent pneumococcal Type B hemophilus influenza combined vaccine
CN106075430A (en) Multivalent pneumococcal ACYW135 meningococcus combined vaccine
KR20050008257A (en) Preparation and Immunogenicity of the combined vaccine composed of the polysaccharide capsule of Salmonella typhi and Japanese encephalitis virus
WO2016127262A1 (en) Multimerized orthomyxovirus nucleoprotein and uses thereof