RU2315998C2 - Method for determining compound influence upon mitochondrial permeability and mitochondrial membrane potential - Google Patents
Method for determining compound influence upon mitochondrial permeability and mitochondrial membrane potential Download PDFInfo
- Publication number
- RU2315998C2 RU2315998C2 RU2005138847/15A RU2005138847A RU2315998C2 RU 2315998 C2 RU2315998 C2 RU 2315998C2 RU 2005138847/15 A RU2005138847/15 A RU 2005138847/15A RU 2005138847 A RU2005138847 A RU 2005138847A RU 2315998 C2 RU2315998 C2 RU 2315998C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mitochondria
- mitochondrial
- jump
- light absorption
- membrane potential
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для определения соединений, обладающих как цитопротекторным, так и цитостатическим эффектом, что необходимо при поиске лекарственных средств, применяемых, в частности, для лечения нейродегенеративных, кардио- и онкозаболеваний.The invention relates to experimental medicine and can be used to determine compounds that have both a cytoprotective and cytostatic effect, which is necessary when searching for drugs used, in particular, for the treatment of neurodegenerative, cardio and cancer diseases.
В настоящем описании изобретения под термином скачок митохондриальной проницаемости (МРТ - mitochondrial permeability transition) подразумевается такое состояние митохондриальной мембраны, при котором мембрана митохондрий становится проницаемой для веществ с молекулярным весом менее 1500 дальтон и наблюдается изменение формы митохондрий - "набухание" митохондрий.In the present description of the invention, the term “mitochondrial permeability transition” (MRI) means a state of the mitochondrial membrane in which the mitochondrial membrane becomes permeable to substances with a molecular weight of less than 1,500 daltons and a change in the shape of mitochondria - “swelling” of mitochondria is observed.
Мембранный потенциал митохондрий характеризует функциональную активность митохондрий, в основном функционирование их дыхательной цепи, и может определяться различными методами - спектрофотометрическими, флуорометрическими, с помощью электродов.The membrane potential of mitochondria characterizes the functional activity of mitochondria, mainly the functioning of their respiratory chain, and can be determined by various methods - spectrophotometric, fluorometric, using electrodes.
Под термином "энергизация митохондрий" подразумевается процесс запуска работы дыхательной цепи митохондрий путем добавления субстратов окислительного фосфорилирования, результатом которого является увеличение мембранного потенциала митохондрий.The term "mitochondrial energization" means the process of starting the work of the respiratory chain of mitochondria by adding substrates of oxidative phosphorylation, the result of which is an increase in the membrane potential of mitochondria.
Под термином " индукция МРТ" подразумевается процесс запуска скачка митохондриальной проницаемости путем добавления известных (или новых) веществ, которые вызывают появление проницаемости внутренней мембраны митохондрий и ее деполяризацию, что может быть предотвращено предварительным добавлением специфического ингибитора МРТ циклоспорина А. Известен способ определения влияния соединений на процесс скачка митохондриальной проницаемости и мембранный потенциал митохондрий, который включает получение суспензии митохондрий из различных органов, приготовление плашек с исследуемыми веществами, добавление в них суспензии митохондрий в среде с потенциал-зависимым красителем, в качестве которого используют метиловый эфир тетраметилродамина (ТМРМ). После чего измеряют кинетику изменения флуоресценции и светопоглощения проб, при этом индукцию МРТ проводят последовательным добавлением CaCl2 и (NH4)2HPO4. Затем строят графики зависимости светопоглощения от времени и зависимости флуоресценции от времени. После чего, по наличию изменения величины (скачкообразного снижения) светопоглощения под влиянием исследуемых веществ судят об изменении формы ("набухании") митохондрий, в том числе после добавления индукторов это изменение характеризует МРТ, а по изменению флюоресценции, определяемой в той же пробе, судят об изменении мембранного потенциала (Blattner J.R., Lihua He, Lemasters J.J. Screening assays for the mitochondrial permeability transition using a fluorescence multiwell plate reader. Analytical Biochemistry, 295, 220-226, 2001).The term "induction of MRI" means the process of triggering a jump in mitochondrial permeability by adding known (or new) substances that cause the permeability of the inner membrane of mitochondria and its depolarization, which can be prevented by the preliminary addition of a specific inhibitor of MRI cyclosporin A. A known method for determining the effect of compounds on the process of a jump in mitochondrial permeability and the membrane potential of mitochondria, which includes obtaining a suspension of mitochondria from various organs, the preparation of plates with the studied substances, the addition of a suspension of mitochondria in a medium with a voltage-dependent dye, which is used as tetramethylrodamine methyl ester (TMPM). Then measure the kinetics of changes in fluorescence and light absorption of the samples, while the induction of MRI is carried out by the sequential addition of CaCl 2 and (NH 4 ) 2 HPO 4 . Then, graphs of the dependence of light absorption on time and the dependence of fluorescence on time are built. Then, by the presence of a change in the magnitude (abrupt decrease) in light absorption under the influence of the studied substances, a change in the shape ("swelling") of mitochondria is judged, including after the addition of inductors, this change characterizes MRI, and by the change in fluorescence determined in the same sample, they are judged on membrane potential changes (Blattner JR, Lihua He, Lemasters JJ Screening assays for the mitochondrial permeability transition using a fluorescence multiwell plate reader. Analytical Biochemistry, 295, 220-226, 2001).
Однако для осуществления этого способа требуется использование не только дорогого реактива ТМРМ, а также достаточно дорогого и сложного оборудования, в том числе, флюоресцентного плашечного ридера, дающего возможность одновременной регистрации светопоглощения и флуоресценции.However, the implementation of this method requires the use of not only the expensive TMRM reagent, but also quite expensive and sophisticated equipment, including a fluorescent spot reader, which makes it possible to simultaneously register light absorption and fluorescence.
Известен принятый за прототип способ определения влияния соединений на процесс скачка митохондриальной проницаемости и мембранный потенциал митохондрий, который включает выделение митохондрий из различных органов, приготовление суспенции митохондрий в буфере, в который для энергизации митохондрий дополнительно добавляют субстраты дыхания (5 мМ глутамат натрия +5 мМ малат натрия), приготовление плашек с исследуемыми веществами, добавление в них суспензии митохондрий с последующим измерением кинетики изменения светопоглощения при 535 нм в течение 28 мин во время которого индукцию МРТ проводят добавленим CaCl2 и (NH4)2HPO4. После чего строят график зависимости светопоглощения суспензии митохондрий с исследуемым веществом при 535 нм от времени и по наличию скачкообразного снижения светопоглощения под влиянием исследуемых веществ судят об изменении формы ("набухании") митохондрий, т.е. определяют МРТ. Затем в плашки, приготовленные аналогично описанному выше, дополнительно добавляют потенциал-зависимый краситель Сафранин А в концентрации - 15 мкМ и регистрируют начальное значение флуоресценции (потенциал покоя) как в контрольных пробах, так и в присутствии производных исследуемых веществ. Одинаковые значения флуоресценции в контрольных и опытных пробах свидетельствует об отсутствии влияния исследуемых соединений на мембранный потенциал митохондрий. Снижение флуоресценции сафранина А отображает снижение мембранного потенциала в опытных пробах по сравнению с контрольными и свидетельствует о наличии влияния исследуемых соединений на мембранный потенциал митохондрий. Затем добавляют в качестве индукторов МРТ CaCl2 и (NH4)2HPO4 (как и при измерении "набухания" митохондрий). В конце эксперимента добавляют для контроля полной деполяризации митохондрий (нулевая величина потенциала) известный разобщитель окислительного фосфорилирования - FCCP [carbonyl cyanide p-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone] - в концентрации, вызывающей полное изчезновение мембранного потенциала митохондрий. (Waldmeier P.C., Feldtrauer J.J., Ting Qian, Lemasters J.J. Inhibition of the mitochondrial permeability transition by the nonimmunosuppressive Cyclosporin derivative NIM811. Molecular Pharmacology, 62, 22-29, 2002).A known method adopted for the prototype is the determination of the effect of compounds on the process of mitochondrial permeability jump and the mitochondrial membrane potential, which includes the isolation of mitochondria from various organs, the preparation of a suspension of mitochondria in a buffer, in which breathing substrates are additionally added to energize mitochondria (5 mM sodium glutamate + 5 mM malate sodium), preparation of dies with the studied substances, the addition of a suspension of mitochondria in them, followed by measurement of the kinetics of changes in light absorption at 535 m for 28 min during which induction MRI carried out by adding CaCl 2 and (NH 4) 2 HPO 4. After that, a graph is plotted of the light absorption of a suspension of mitochondria with a test substance at 535 nm versus time and the presence of an abrupt decrease in light absorption under the influence of the test substances is used to judge the change in the shape (“swelling”) of mitochondria, i.e. determine the MRI. Then, the potential-dependent dye Safranin A at a concentration of 15 μM is additionally added to the plates prepared as described above, and the initial fluorescence value (resting potential) is recorded both in control samples and in the presence of derivatives of the studied substances. The same fluorescence values in the control and experimental samples indicate the absence of the influence of the studied compounds on the membrane potential of mitochondria. The decrease in safranin A fluorescence reflects a decrease in the membrane potential in the experimental samples compared with the control ones and indicates the presence of the studied compounds on the membrane potential of mitochondria. Then, CaCl 2 and (NH 4 ) 2 HPO 4 are added as inducers of MRI (as in the measurement of mitochondrial swelling). At the end of the experiment, a well-known oxidative phosphorylation uncoupler, FCCP [carbonyl cyanide p- (trifluoromethoxy) phenylhydrazone], is added to control the complete mitochondrial depolarization (at zero potential value) in a concentration that causes the complete disappearance of the mitochondrial membrane potential. (Waldmeier PC, Feldtrauer JJ, Ting Qian, Lemasters JJ Inhibition of the mitochondrial permeability transition by the nonimmunosuppressive Cyclosporin derivative NIM811. Molecular Pharmacology, 62, 22-29, 2002).
Однако этот способ трудоемок и требует значительного времени проведения испытаний.However, this method is time-consuming and requires significant testing time.
Задачей предлагаемого изобретения является повышение производительности с одновременным удешевлением способа определения влияния соединений на процесс МРТ и мембранный потенциал митохондрий, за счет одновременного определения влияния исследуемого вещества на оба этих параметра.The objective of the invention is to increase productivity while reducing the cost of the method for determining the effect of compounds on the MRI process and membrane potential of mitochondria, by simultaneously determining the effect of the test substance on both of these parameters.
Поставленная задача достигается способом определения влияния соединений на процесс скачка митохондриальной проницаемости и мембранный потенциал митохондрий, путем выделения митохондрий из различных органов, приготовления суспензии митохондрий в буфере, приготовления плашек с исследуемыми веществами, добавления в них суспензии митохондрий с последующим измерением изменения светопоглощения во времени при энергизации митохондрий и после индукции скачка митохондриальной проницаемости, при этом о наличии скачка митохондриальной проницаемости судят по наличию скачкообразного снижения светопоглощения под влиянием исследуемых веществ после проведения индукции скачка митохондриальной проницаемости, а влияние соединений на мембранный потенциал митохондрий определяют в присутствии потенциал-зависимого красителя Сафранин А при энергизации митохондрий. Новизна предлагаемого способа заключается в том, что измерение скачка митохондриальной проницаемости и мембранного потенциала проводят в одной пробе, при этом Сафранин А добавляют непосредственно при приготовлении суспензии митохондрий, причем концентрация его составляет 4,5-5,5 мкМ, а измерение изменения светопоглощения во времени проводят при длинах волн 554 нм и 524 нм, после чего о наличии скачка митохондриальной проницаемости судят по наличию скачкообразного снижения светопоглощения при 554 нм, а о влиянии соединений на мембранный потенциал митохондрий по изменению величины разности светопоглощений при длинах волн 554 нм и 524 нм потенциал-зависимого красителя сафранина А в суспензии митохондрий под влиянием исследуемых веществ.The problem is achieved by determining the effect of compounds on the process of mitochondrial permeability jump and the membrane potential of mitochondria, by isolating mitochondria from various organs, preparing a suspension of mitochondria in a buffer, preparing plates with the studied substances, adding mitochondria suspension to them, followed by measuring the change in light absorption over time during energy mitochondria and after induction of a jump in mitochondrial permeability, with the presence of a jump in mitochondrial the decrease in light absorption is judged by the presence of an abrupt decrease in light absorption under the influence of the studied substances after the induction of a jump in mitochondrial permeability, and the effect of compounds on the membrane potential of mitochondria is determined in the presence of a potential-dependent dye Safranin A during mitochondrial energy. The novelty of the proposed method lies in the fact that the measurement of the jump in mitochondrial permeability and membrane potential is carried out in one sample, while Safranin A is added directly in the preparation of a suspension of mitochondria, its concentration being 4.5-5.5 μM, and the measurement of the change in light absorption over time carried out at wavelengths of 554 nm and 524 nm, after which the presence of a jump in mitochondrial permeability is judged by the presence of an abrupt decrease in light absorption at 554 nm, and the effect of the compounds on membrane sweat tial mitochondria for changing magnitude of the difference in light absorption at wavelengths 554 nm and 524 nm potential-dependent dye Safranin A slurry of mitochondria under the influence of the test substances.
Экспериментально было установлено, что концентрациия Сафранина А, равная 4,5-5,5 мкМ, является достаточной для измерений изменений мембранного потенциала, но не влияет на характеристики митохондрий, а величина разности его светопоглощения при длинах волн 554 нм и 524 нм (А554-А524) в суспензии митохондрий характеризует мембранный потенциал митохондрий. Первоначальное увеличение абсолютной величины разницы А554-А524 при энергизации митохондрий после добавления субстратов дыхания отражает появление мембранного потенциала митохондрий, а уменьшение этой разности после добавления исследуемых веществ свидетельствует о влиянии на него этих веществ.It was experimentally established that the concentration of Safranin A, equal to 4.5-5.5 μM, is sufficient for measuring changes in the membrane potential, but does not affect the characteristics of mitochondria, and the difference in its light absorption at wavelengths of 554 nm and 524 nm (A554- A524) in a suspension of mitochondria characterizes the membrane potential of mitochondria. The initial increase in the absolute value of the difference A554-A524 during the mitochondrial energization after the addition of respiration substrates reflects the appearance of the mitochondrial membrane potential, and a decrease in this difference after the addition of the studied substances indicates the influence of these substances on it.
Техническим результатом, который может быть получен при осуществлении изобретения, является возможность одновременно в условиях высокопроизводительного скрининга (в 24-, 48-, 96- и т.д. - ячеечных планшетах) охарактеризовать влияние вещества и на МРТ, и на изменение мембранного потенциала митохондрий.The technical result that can be obtained by carrying out the invention is the ability to simultaneously characterize the effect of the substance on MRI and on the change in the membrane potential of mitochondria under high-throughput screening conditions (in 24-, 48-, 96-, etc. - cell plates). .
Возможность осуществления изобретения с реализацией заявляемого назначения и получением технического результата подтверждается, но не исчерпывается следующим примером.The possibility of carrying out the invention with the implementation of the claimed purpose and obtaining a technical result is confirmed, but not limited to the following example.
Пример. Скрининг аналогов димебона с целью выяснения вероятности наличия у них влияния на процесс скачка митохондриальной проницаемости и мембранный потенциал митохондрий.Example. Screening of dimebon analogues to determine the likelihood of their influence on the process of jump in mitochondrial permeability and membrane potential of mitochondria.
Митохондрий из печени крыс выделяют стандартным методом дифференциального центрифугирования. Концентрацию белка в полученном препарате митохондрий определяют стандартным биуретовым методом. Препарат митохондрий разводят в среде А (состав: маннитол - 225 мМ, сахароза - 75 мМ, HEPES - 10 мМ, ЭГТА - 20 мкМ) из расчета 0,9 мг белка в 1 мл среды А и непосредственно перед началом измерения в суспензию добавляют сафранин А в конечной концентрации 5 мкМ. Для 24-ячеечного планшета одновременно готовят 4 разведения 2 исследуемых веществ (100 мкМ - 10 мМ) и 10 мкл каждого разведения веществ вносят в опытные ячейки планшета (колонки 2-5 планшета). Ряды А и В одинаковы и содержат вещество 1, ряды С и D одинаковы и содержат вещество 2. В шестую колонку добавляют по 10 мкл максимальной концентрации вещества данного ряда. Затем в каждую ячейку 1-5 колонки планшета вносят по 0,98 мл суспензии митохондрий с сафранином. В ячейки шестого ряда планшета добавлют по 0,98 мл среды А с сафранином, не содержащей митохондрий. После этого планшет помещают в плашечный ридер и записывают светопоглощение при 524 и 554 нм. Через 2,5 мин от начала записи проводят энергизацию митохондрий, добавляя во все пробы по 10 мкл субстратов дыхания (0,5 М раствор глутамата калия и 0,5 М раствор малата калия). Через 5 мин от начала записи проводят индукцию МРТ, добавляя во все пробы планшета по 10 мкл 0,5 М раствора хлористого кальция. Запись светопоглощения продолжают в течение 30 минут. Анализ полученных данных проводят с помощью графика зависимости разности изменения светопоглощения при 524 и 554 нМ от времени. Скачкообразное снижение величины светопоглощения суспензии митохондрий при 554 нм отражает наличие МРТ, т.е. изменение формы митохондрий - "набухание" (см. фиг.1а и 2а).Mitochondria from rat liver are isolated by standard differential centrifugation. The protein concentration in the obtained mitochondrial preparation is determined by the standard biuret method. The mitochondrial preparation is diluted in medium A (composition: mannitol - 225 mm, sucrose - 75 mm, HEPES - 10 mm, EGTA - 20 μM) at the rate of 0.9 mg of protein in 1 ml of medium A and safranin is added to the suspension immediately before measurement And in a final concentration of 5 μM. For a 24-cell tablet, 4 dilutions of 2 test substances (100 μM - 10 mM) are simultaneously prepared and 10 μl of each dilution of the substances is added to the test cells of the tablet (columns 2-5 of the tablet). Rows A and B are the same and contain the substance 1, rows C and D are the same and contain the substance 2. To the sixth column add 10 μl of the maximum concentration of the substance of this row. Then, 0.98 ml of a suspension of mitochondria with safranin is added to each cell of a 1-5 column tablet. In cells of the sixth row of the tablet, 0.98 ml of medium A with mitochondria-free safranin are added. After that, the tablet is placed in a plate reader and light absorption is recorded at 524 and 554 nm. After 2.5 minutes from the start of recording, mitochondria are energized by adding 10 μl of respiration substrates (0.5 M potassium glutamate solution and 0.5 M potassium malate solution) to all samples. 5 minutes after the start of recording, MRI induction is carried out by adding 10 μl of a 0.5 M solution of calcium chloride to all samples of the tablet. The light absorption recording is continued for 30 minutes. Analysis of the obtained data is carried out using a graph of the dependence of the difference in light absorption at 524 and 554 nm from time to time. An abrupt decrease in the light absorption of a suspension of mitochondria at 554 nm reflects the presence of MRI, i.e. a change in the shape of mitochondria - "swelling" (see figa and 2A).
Уменьшение абсолютного значения величины разности светопоглощения Сафранина А при длинах волн 554 нм и 524 нм (А554-А524) в суспензии митохондрий после добавления субстратов дыхания характеризует увеличение мембранного потенциала митохондрий, а отсутствие различий между контрольными пробами и опытными до добавления индукторов МРТ свидетельствует об отсутствии влияния димебона на мембранный потенциал митохондрий (см. фиг.1б). Большее по сравнению с контролем абсолютное значение величины разности светопоглощения Сафранина А при длинах волн 554 нм и 524 нм (А554-А524) в суспензии митохондрий после добавления субстратов дыхания свидетельствует о влиянии, в данном случае, снижении мембранного потенциала митохондрий аналогом димебона - веществом IP9205 (фиг.2б).A decrease in the absolute value of the difference in light absorption of Safranin A at wavelengths of 554 nm and 524 nm (A554-A524) in a suspension of mitochondria after adding breathing substrates characterizes an increase in the membrane potential of mitochondria, and the absence of differences between control samples and experimental samples before adding MRI inducers indicates no effect dimebon on the membrane potential of mitochondria (see fig.1b). A greater absolute value of the difference between the absorption of Safranin A at wavelengths of 554 nm and 524 nm (A554-A524) in a suspension of mitochondria after adding substrates of respiration, compared with the control, indicates the effect, in this case, of a decrease in the membrane potential of mitochondria by the IP9205 analogue of dimebon ( figb).
Проведение исследований по способу-прототипу показало наличие тех же характеристик для исследуемых веществ, что и предлагаемый нами способ, в то же время проведения анализа снизилось примерно в 2 раза, кроме того аналогичное число анализов требует вдвое меньшего расхода животных и реактивов.Conducting research on the prototype method showed the presence of the same characteristics for the studied substances as our proposed method, at the same time, the analysis decreased by about 2 times, in addition, a similar number of analyzes requires half the consumption of animals and reagents.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет оценить действие различных соединений на процесс "набухания" митохондрий, характеризующий связанный с индукцией клеточной гибели процесс МРТ с одновременной оценкой влияния веществ на мембранный потенциал митохондрий. Это дает возможность проводить определение соединений, обладающих как цитопротекторным, так и цитостатическим эффектом, что необходимо при поиске лекарственных средств, применяемых, в частности, для лечения нейродегенеративных, кардио- и онкозаболеваний.Thus, the proposed method allows to evaluate the effect of various compounds on the process of "swelling" of mitochondria, which characterizes the process of MRI associated with the induction of cell death, while assessing the effect of substances on the membrane potential of mitochondria. This makes it possible to determine compounds with both a cytoprotective and a cytostatic effect, which is necessary when searching for drugs used, in particular, for the treatment of neurodegenerative, cardio and cancer diseases.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005138847/15A RU2315998C2 (en) | 2005-12-14 | 2005-12-14 | Method for determining compound influence upon mitochondrial permeability and mitochondrial membrane potential |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005138847/15A RU2315998C2 (en) | 2005-12-14 | 2005-12-14 | Method for determining compound influence upon mitochondrial permeability and mitochondrial membrane potential |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005138847A RU2005138847A (en) | 2007-06-20 |
| RU2315998C2 true RU2315998C2 (en) | 2008-01-27 |
Family
ID=38314057
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005138847/15A RU2315998C2 (en) | 2005-12-14 | 2005-12-14 | Method for determining compound influence upon mitochondrial permeability and mitochondrial membrane potential |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2315998C2 (en) |
-
2005
- 2005-12-14 RU RU2005138847/15A patent/RU2315998C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| VERCESI A.E. et al. J. Biol. Chem. 1991, Aug. 5, 266(22):14431-4. * |
| WALDMEIER P.C. et al. Molecular Pharmacology. 62, 22-29, 1002. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005138847A (en) | 2007-06-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liang et al. | eIF5A hypusination, boosted by dietary spermidine, protects from premature brain aging and mitochondrial dysfunction | |
| Buhner et al. | Activation of human enteric neurons by supernatants of colonic biopsy specimens from patients with irritable bowel syndrome | |
| Liao et al. | Proteomic characterization of postmortem amyloid plaques isolated by laser capture microdissection | |
| Skoumalova et al. | The role of free radicals in canine counterpart of senile dementia of the Alzheimer type | |
| Lee et al. | Diversity-oriented fluorescence library approach for the discovery of sensors and probes | |
| Cremo et al. | Interaction of myosin subfragment 1 with fluorescent ribose-modified nucleotides. a comparison of vanadate trapping and SH1-SH2 crosslinking | |
| WO2001050134A3 (en) | Methods of detection of amyloidogenic proteins | |
| Ke et al. | A near-infrared naphthalimide fluorescent probe for targeting the lysosomes of liver cancer cells and specifically selecting HSA | |
| JPH03172196A (en) | Fluorescent substrate and detection of proteolytic enzyme using same | |
| US20090227043A1 (en) | Fluorescence Resonance Energy Transfer Assay Based on Modified Solid Surface | |
| JP6106264B2 (en) | Genetically encoded probes for lactate quantification and methods for quantification of metabolic rate and lactate transport | |
| JP2009544954A (en) | Method for detecting amyloid-β oligomers in body fluids | |
| Yang et al. | Fluorescent probe for Cu 2+ and the secondary application of the resultant complex to detect cysteine | |
| McKeague et al. | Development of a DNA aptamer for direct and selective homocysteine detection in human serum | |
| Bagert et al. | Time-resolved proteomic analysis of quorum sensing in Vibrio harveyi | |
| MXPA96004183A (en) | Method of examination to identify paraprotein ligands objet | |
| Senisterra et al. | Application of high-throughput isothermal denaturation to assess protein stability and screen for ligands | |
| Huang et al. | Versatile Probes for the Selective Detection of Vicinal‐Dithiol‐Containing Proteins: Design, Synthesis, and Application in Living Cells | |
| EP2612147B1 (en) | Automatic immunoassay for biogenic amines | |
| CA2541059C (en) | Fluorescent probes for use in protein kinase inhibitor binding assay | |
| JP7054690B2 (en) | Compositions and Methods for Measuring Ion Channel Activity in Cells | |
| Koltun et al. | Measuring mRNA translation in neuronal processes and somata by tRNA-FRET | |
| RU2315998C2 (en) | Method for determining compound influence upon mitochondrial permeability and mitochondrial membrane potential | |
| Lv et al. | Novel D–π-A type near-infrared fluorescent probes for the detection of Aβ 40 aggregates | |
| JP4665165B2 (en) | Analysis method of biogenic amines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QA4A | Patent open for licensing |
Effective date: 20160405 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181215 |