RU2308264C2

RU2308264C2 - Method for preventing and/or treating asthma due to applying pbpb

Info

Publication number: RU2308264C2
Application number: RU2005120739/14A
Authority: RU
Inventors: Арджун РАМ (IN); Арджун РАМ; Баларам ГОШ (IN); Баларам ГОШ; Шарад Вишванат ГАНГАЛ (IN); Шарад Вишванат ГАНГАЛ
Original assignee: Каунсел Оф Сайнтифик Энд Индастриал Рисерч
Priority date: 2002-12-02
Filing date: 2002-12-02
Publication date: 2007-10-20
Also published as: RU2005120739A

Abstract

FIELD: medicine, pulmonology, allergology.

SUBSTANCE: the present innovation deals with treating asthma due to introducing parabrominephenacyl bromide (PBPB) at the dosages ranged 0.1-10 mg/kg body weight. Therapeutic course lasts about 1 wk. The innovation in question provides efficient therapy due to inhibiting phospholipase A2 with PBPB in the dosages and the mode mentioned.

EFFECT: higher efficiency of prophylaxis and therapy.

36 cl, 8 dwg, 8 ex, 1 tbl

Description

Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION

Настоящее изобретение относится к способу профилактики и/или лечения астмы у субъектов, включающему стадию введения субъекту фармакологически эффективного количества парабромфенацилбромида (РВРВ), способу модуляции уровня биомолекул для достижения того же.The present invention relates to a method for preventing and / or treating asthma in subjects, comprising the step of administering to the subject a pharmacologically effective amount of parabromophenacyl bromide (PBPB), a method for modulating the level of biomolecules to achieve the same.

Уровень техникиState of the art

Астма представляет собой воспалительное нарушение дыхательных путей, которое характеризуется обратимой обструкцией дыхательных путей, гиперреактивностью дыхательных путей, высоким уровнем иммуноглобулина Е (IgE) в сыворотке крови и эозинофилов в дыхательных путях. Эта болезнь поражает миллионы людей по всему миру и достигает масштабов эпидемии (Cookson, 1999).Asthma is an inflammatory disorder of the airways that is characterized by reversible airway obstruction, airway hyperreactivity, high levels of immunoglobulin E (IgE) in the blood serum and eosinophils in the airways. This disease affects millions of people around the world and reaches epidemic proportions (Cookson, 1999).

С увеличением понимания молекулярных механизмов астмы сообщалось о многих терапевтических альтернативах ее лечения, таких как глюкокортикоиды, антагонисты медиаторов, модуляторы цитокинов, ингибиторы фосфодиэстеразы 4, соединения ряда хромонов и иммунотерапия (Barnes, 1999). Однако стероиды все еще являются главным средством в борьбе с астмой. Стероидная терапия имеет много побочных эффектов, таких как остеопороз, ожирение, нарушение заживления ран, увеличенный риск инфекции, подавление гипоталамо-гипофизарно-адреналовой оси, миопатия, гипертония и так далее (States et al., 1997), и нельзя избежать этих нежелательных побочных эффектов. Таким образом, существует необходимость поиска нестероидных антиастматических агентов с очень небольшими или пренебрежимо малыми побочными эффектами.With an increasing understanding of the molecular mechanisms of asthma, many therapeutic alternatives have been reported for its treatment, such as glucocorticoids, mediator antagonists, cytokine modulators, phosphodiesterase 4 inhibitors, a number of chromon compounds, and immunotherapy (Barnes, 1999). However, steroids are still the main cure for asthma. Steroid therapy has many side effects, such as osteoporosis, obesity, impaired wound healing, increased risk of infection, suppression of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis, myopathy, hypertension, and so on (States et al., 1997), and these unwanted side effects cannot be avoided. effects. Thus, there is a need to search for non-steroidal anti-asthma agents with very few or negligible side effects.

Фосфолипаза А2 (PL А₂) является ключевым ферментом в генерации различных метаболитов арахидоновой кислоты, таких как лейкотриены и простагландины, которые участвуют в патогенезе различных воспалительных заболеваний, включая астму (Bowdon et al, 1997, Chilton et al., 1996, Brazen et al., 1999). Было обнаружено, что РВРВ блокирует отек легких и миотоксичность (Melo and Ownby, 1999; Evans and Ownby, 1993).Phospholipase A2 (PL A ₂ ) is a key enzyme in the generation of various arachidonic acid metabolites, such as leukotrienes and prostaglandins, which are involved in the pathogenesis of various inflammatory diseases, including asthma (Bowdon et al, 1997, Chilton et al., 1996, Brazen et al ., 1999). PBRV has been found to block pulmonary edema and myotoxicity (Melo and Ownby, 1999; Evans and Ownby, 1993).

Недавно было показано, что он ингибирует несколько других стадий, вовлеченных в проявление воспаления. Tithof и сотрудники продемонстрировали, что РВРВ ингибирует индуцированное поливинилхлоридом высвобождение супероксида (O2) нейтрофилами (Tithof et al., 1996). Далее сообщалось, что это соединение ингибирует способность NF-кВ (Von Puijenbrock et al, 1996), важного транскрипционного фактора, вовлеченного в экспрессию воспалительных цитокинов, связываться с ДНК. Было также показано, что РВРВ уменьшает сократимость полосок паренхимы легких, индуцированную активирующим фактором тромбоцитов (PAF) или овальбумином. Многие из этих параметров, то есть увеличение активности PL A₂ (Bowton et al., Mehta et al, 1990), связывание NF-кВ с ДНК (Barnes, 1996), освобождение супероксида (Barnes, 1990) и адгезия клеток (Gundel et al., 1991), вовлечены в патогенез астмы. Однако до сих пор нет сообщений о прямых экспериментах in vivo, которые могли продемонстрировать эффект РВРВ на астматические симптомы либо на человеческой модели, либо на животных. Новизна изобретения заключается в первой демонстрации in vivo действия РВРВ, облегчающего характерные симптомы астмы, наблюдаемые на мышах, такие как аллергениндуцированный ранний ответ дыхательных путей (РОДП) и поздний ответ дыхательных путей (ПОДЛ).Recently it has been shown that it inhibits several other stages involved in the manifestation of inflammation. Tithof and coworkers have demonstrated that PBPB inhibits polyvinyl chloride-induced superoxide (O2) release by neutrophils (Tithof et al., 1996). It was further reported that this compound inhibits the ability of NF-kB (Von Puijenbrock et al, 1996), an important transcription factor involved in the expression of inflammatory cytokines, to bind to DNA. It has also been shown that PBPB reduces contractility of the pulmonary parenchyma strips induced by platelet activating factor (PAF) or ovalbumin. Many of these parameters, i.e. an increase in PL A ₂ activity (Bowton et al., Mehta et al, 1990), binding of NF-kB to DNA (Barnes, 1996), release of superoxide (Barnes, 1990), and cell adhesion (Gundel et al., 1991), are involved in the pathogenesis of asthma. However, there are still no reports of direct in vivo experiments that could demonstrate the effect of PBPB on asthmatic symptoms either in the human model or in animals. The novelty of the invention lies in the first demonstration in vivo of the action of PBRV, which alleviates the characteristic asthma symptoms observed in mice, such as allergen-induced early airway response (ROD) and late airway response (SAL).

Цели настоящего изобретенияObjectives of the present invention

Основная цель настоящего изобретения заключается в разработке способа профилактики и/или лечения астмы.The main objective of the present invention is to develop a method for the prevention and / or treatment of asthma.

Другая цель настоящего изобретения заключается в разработке способа для профилактики и/или лечения астмы у животных, включая человека, с использованием РВРВ.Another objective of the present invention is to develop a method for the prevention and / or treatment of asthma in animals, including humans, using PBPB.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение схемы дозирования РВРВ для профилактики и/или лечения астмы.Another objective of the present invention is to determine the dosage scheme of PBPB for the prevention and / or treatment of asthma.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение путей введения РВРВ для профилактики и/или лечения астмы.Another objective of the present invention is to determine the routes of administration of PBPB for the prevention and / or treatment of asthma.

Еще одной целью настоящего изобретения является разработка способа модуляции уровня биомолекул для помощи в профилактике и/или лечении астмы.Another objective of the present invention is to develop a method of modulating the level of biomolecules to help in the prevention and / or treatment of asthma.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение эффекта РВРВ на уровень IFN-гамма.Another objective of the present invention is to determine the effect of PBPB on the level of IFN-gamma.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение эффекта РВРВ на уровни IL-4, IL-5, IL-13.Another objective of the present invention is to determine the effect of PBPB on the levels of IL-4, IL-5, IL-13.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение эффекта РВРВ на уровень эозинофилов.Another objective of the present invention is to determine the effect of PBPB on the level of eosinophils.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение эффекта РВРВ на уровень IgE.Another objective of the present invention is to determine the effect of PBPB on IgE level.

Еще одной целью настоящего изобретения является определение эффекта РВРВ на сужение дыхательных путей (СДП).Another objective of the present invention is to determine the effect of PBRV on narrowing of the airways (PSD).

Еще одной целью настоящего изобретения является определение эффекта РВРВ на реактивность дыхательных путей.Another objective of the present invention is to determine the effect of PBRV on airway reactivity.

Другой главной целью настоящего изобретения является обеспечение образцовой молекулы для предотвращения развития симптомов астмы.Another main objective of the present invention is the provision of a model molecule to prevent the development of symptoms of asthma.

Еще другой целью настоящего изобретения является обеспечение образцовой молекулы для разработки терапевтического средства, которое может облегчить характерные симптомы астмы.Another objective of the present invention is to provide an exemplary molecule for the development of a therapeutic agent that can alleviate the characteristic symptoms of asthma.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Настоящее изобретения относится к способу профилактики и/или лечения астмы у субъектов, включающему стадию введения фармакологически эффективного количества парабромфенацилбромида (РВРВ) субъекту, а также способу модулирования уровня биомолекул для достижения того же.The present invention relates to a method for the prevention and / or treatment of asthma in subjects, comprising the step of administering a pharmacologically effective amount of parabromophenacyl bromide (PBPB) to a subject, as well as a method for modulating the level of biomolecules to achieve the same.

Осуществление изобретенияThe implementation of the invention

Соответственно, настоящее изобретение относится к способу профилактики и/или лечения астмы у субъекта, включающему стадию введения субъекту фармакологически эффективного количества парабромфенацилбромида (РВРВ), а также способу модуляции уровня биомолекул для достижения того же.Accordingly, the present invention relates to a method for preventing and / or treating asthma in a subject, comprising the step of administering to the subject a pharmacologically effective amount of parabromfenacyl bromide (PBPB), as well as a method for modulating the level of biomolecules to achieve the same.

В воплощении настоящего изобретения, относящегося к способу профилактики и/или лечения астмы у субъекта, способ включает стадию введения субъекту фармакологически эффективного количества парабромфенацилбромида (РВРВ).In an embodiment of the present invention relating to a method for preventing and / or treating asthma in a subject, the method includes the step of administering to the subject a pharmacologically effective amount of parabromfenacyl bromide (PBPB).

В другом воплощении настоящего изобретения субъектом может быть животное, включая человека.In another embodiment of the present invention, the subject may be an animal, including a human.

В другом воплощении настоящего изобретения концентрация РВРВ изменяется между 0,1 и 10 мг/кг веса тела.In another embodiment of the present invention, the concentration of PBPB varies between 0.1 and 10 mg / kg body weight.

В другом воплощении настоящего изобретения концентрация РВРВ составляет около 1 мг/кг веса тела.In another embodiment of the present invention, the concentration of PBPB is about 1 mg / kg body weight.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ вводится в течение примерно одной недели.And in yet another embodiment of the present invention, the PBPB is administered for about one week.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ не дает побочных эффектов.In yet another embodiment of the present invention, PBPB has no side effects.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ вводится путями, выбранными из группы, включающей внутриперитонеальный и оральный путь.In yet another embodiment of the present invention, PBPB is administered by pathways selected from the group consisting of the intraperitoneal and oral pathways.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения, относящемся к способу модуляции уровня биомолекул, который помогает предотвратить и/или лечить астму, способ включает стадию введения субъекту фармакологически эффективного количества парабромфенацилбромида (РВРВ) и определения вариаций в уровнях биомолекул.And in another embodiment of the present invention related to a method for modulating biomolecule levels that helps to prevent and / or treat asthma, the method includes the step of administering to the subject a pharmacologically effective amount of parabromophenacyl bromide (PBPB) and determining variations in the levels of the biomolecules.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает поддерживать уровень INF-гамма.In yet another embodiment of the present invention, PBPB helps maintain the level of INF gamma.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает снизить уровни IL-4, IL-5, IL-13.And in yet another embodiment of the present invention, PBPB helps lower levels of IL-4, IL-5, IL-13.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ предотвращает повышение уровня IL-4, IL-5, IL-13.In yet another embodiment of the present invention, PBPB prevents an increase in the level of IL-4, IL-5, IL-13.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает снизить уровень эозинофилов.And in yet another embodiment of the present invention, PBPB helps lower eosinophil levels.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ предотвращает повышение уровня эозинофилов.In yet another embodiment of the present invention, PBPB prevents an increase in eosinophil levels.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает снизить уровень IgE на примерно 50%.In yet another embodiment of the present invention, PBPB helps reduce IgE levels by about 50%.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ предотвращает повышение уровня IgE.In yet another embodiment of the present invention, PBPB prevents an increase in IgE level.

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает предотвратить сужение дыхательных путей (СДП).And in yet another embodiment of the present invention, PBRV helps prevent airway constriction (TDS).

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает восстановить до 96% базального уровня сужения дыхательных путей (СДП).In yet another embodiment of the present invention, PBRV helps to restore up to 96% of the basal level of airway narrowing (TDS).

И еще в другом воплощении настоящего изобретения РВРВ помогает предотвратить развитие реактивности дыхательный путей.In yet another embodiment of the present invention, PBPB helps prevent the development of airway reactivity.

Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings

Фигура 1 показывает протокол исследования профилактического и лечебного действия РВРВ.Figure 1 shows the research protocol of the preventive and therapeutic effects of PBRV.

Фигура 2 показывает определение диаметра дыхательных путей с использованием мыши в качестве модельной системы.Figure 2 shows the determination of the diameter of the airways using the mouse as a model system.

Фигура 3 показывает вариации в уровне специфической проводимости дыхательных путей до и после аэрозольного ударного воздействия овальбумина на контрольных и обработанных РВРВ мышах.Figure 3 shows the variations in the level of specific airway conductivity before and after the aerosol impact of ovalbumin on control and treated PBMV mice.

Фигура 4 показывает обращение СДП, отражающее лечебный эффект РВРВ на мышах, подвергнутых аэрозольному воздействию овальбумина.Figure 4 shows the treatment of PSD, reflecting the therapeutic effect of PBPV in mice subjected to aerosol exposure to ovalbumin.

Фигура 5 показывает вариации в уровнях специфической проводимости дыхательных путей до и после воздействия метахолина (MX) на контрольных и обработанных РВРВ мышах.Figure 5 shows the variations in the levels of specific airway conductivity before and after exposure to methacholine (MX) in control and treated PBRV mice.

Фигура 6 показывает обращение СДП, отражающее лечебный эффект РВРВ на мышах, подвергнутых ударному воздействию MX.Figure 6 shows the treatment of SDPs reflecting the therapeutic effect of PBPB in mice exposed to MX shock.

Фигура 7 показывает понижающий эффект РВРВ на уровень сывороточного IgE.Figure 7 shows the decreasing effect of PBPB on serum IgE level.

Фигура 8 показывает ингибирующий эффект РВРВ на уровень эозинофилов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ).Figure 8 shows the inhibitory effect of PBPB on the level of eosinophils in the fluid of bronchoalveolar lavage (BAL).

В другом воплощении настоящего изобретения, где существующие антиастматические агенты, в частности стероиды, имеют множество побочных эффектов, имеется настоятельная потребность в разработке нестероидных антиастматических препаратов. В этом контексте парабромфенацилбромид (РВРВ), нестероидное противовоспалительное соединение, было тестировано на антиастматическую активность с использованием мышиной модели астмы. Введение фармакологически эффективной дозы РВРВ мышам во время сенситизации предотвращало развитие обоих астматических компонентов (РОДП и ПОДП). Это открытие показывает также, что РВРВ, будучи введенным орально животным с симптомами нарушения дыхательных путей, облегчает существующие симптомы нарушения. Было обнаружено, что РВРВ снижает уровни IFN-γ и понижает уровни IL-4, IL-5 и эозинофилов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ). Уровень аллергеноспецифичного IgE в сыворотке крови также значительно снижается.In another embodiment of the present invention, where existing anti-asthma agents, in particular steroids, have many side effects, there is an urgent need to develop non-steroidal anti-asthma drugs. In this context, parabromfenacyl bromide (PBRV), a non-steroidal anti-inflammatory compound, has been tested for anti-asthma activity using a mouse model of asthma. Administration of a pharmacologically effective dose of PBPB to mice during sensitization prevented the development of both asthmatic components (RODP and PODP). This finding also shows that PBRV, when administered orally to animals with symptoms of respiratory problems, alleviates existing symptoms of the disorder. It was found that PBPB reduces the levels of IFN-γ and lowers the levels of IL-4, IL-5 and eosinophils in the fluid of bronchoalveolar lavage (BAL). The level of allergen-specific IgE in the blood serum is also significantly reduced.

В другом воплощении настоящего изобретения, в котором, соответственно, настоящее изобретение имеет отношение к новому применению пара-бромфенацилбромида как антиастматического агента, способ применения включает:In another embodiment of the present invention, in which, accordingly, the present invention relates to a new use of para-bromophenacyl bromide as an anti-asthma agent, the method of use includes:

а) сенситизацию животных IgE-генным белком, чтобы индуцировать характерные симптомы астмы,a) sensitization of animals with an IgE gene protein to induce characteristic symptoms of asthma,

б) оценку астматических симптомов до, во время и после сенситизации животных,b) assessment of asthmatic symptoms before, during and after sensitization of animals,

в) введение фармакологически активных концентраций раствора РВРВ здоровым животным во время и после сенситизации,c) the introduction of pharmacologically active concentrations of the PBPB solution in healthy animals during and after sensitization,

г) определение иммунологических характеристик у умерщвленных животных после стадии (б) и (в).g) determination of immunological characteristics in euthanized animals after stage (b) and (c).

В другом воплощении настоящего изобретения используемая модель может быть выбрана из balb/c мышей, кроликов и морских свинок.In another embodiment of the present invention, the model used may be selected from balb / c mice, rabbits and guinea pigs.

В другом воплощении настоящего изобретения белок для сенситизации животных может быть введен путем внутриперитонеальной инъекции или аэрозольной ингаляции.In another embodiment of the present invention, an animal sensitization protein may be administered by intraperitoneal injection or aerosol inhalation.

В еще другом воплощении настоящего изобретения раствор белка в нормальном солевом растворе, использованный для сенситизации, может быть выбран из овальбумина, бычьего сывороточного альбумина и любого другого IgE-генного белка в концентрации, варьирующей между 10-100 нг на инъекцию или 1-5% для ингаляции в виде аэрозоля в нормальном солевом растворе.In yet another embodiment of the present invention, the normal saline protein solution used for sensitization may be selected from ovalbumin, bovine serum albumin and any other IgE gene protein in a concentration ranging between 10-100 ng per injection or 1-5% for aerosol inhalation in normal saline.

В еще другом воплощении настоящего изобретения РВРВ может быть введен орально животным в концентрации, варьирующей от 0,1 до 10 мг/кг веса тела.In yet another embodiment of the present invention, PBPB can be administered orally to animals at a concentration ranging from 0.1 to 10 mg / kg body weight.

В еще другом воплощении настоящего изобретения астматические симптомы могут быть оценены известным способом определения специфической проводимости дыхательных путей или специфического сопротивления дыхательных путей.In yet another embodiment of the present invention, asthmatic symptoms can be assessed by a known method for determining specific airway conductivity or specific airway resistance.

В еще другом воплощении настоящего изобретения иммунологические характеристики могут быть определены путем оценки уровней IgE, INF-гамма, IL-4, IL-5 и эозинофилов известными методами.In yet another embodiment of the present invention, immunological characteristics can be determined by evaluating the levels of IgE, INF-gamma, IL-4, IL-5 and eosinophils by known methods.

В еще другом воплощении настоящего изобретения астма является воспалительным заболеванием дыхательных путей, которое затрагивает миллионы людей по всему миру. Болезнь достигает размеров эпидемии (Cookson, 1999) и непродуктивно оплачивается юными жизнями. Астма характеризуется обструкцией дыхательных путей, гиперреактивностью дыхательных путей, высоким уровнем IgE в сыворотке крови и наличием эозинофилов в дыхательных путях. Развитие этого заболевания опосредовано провоспалительными цитокинами IL-4, IL-3, IL-5, секретируемыми Th2 клетками. С другой стороны, цитокин интерферон-гамма (IFN-γ), секретируемый Th1 клетками, ингибирует Тh2-цитокины. Астматический ответ может быть разделен на раннюю и позднюю фазу реакции. Ранняя фаза начинается немедленно после вторичного экспонирования аллергену и обусловлена гистамином и другими липидными медиаторами, которые приводят к воспалению и сужению дыхательных путей. Поздняя фаза реакции имеет место через 8-24 часа после экспозиции и приводит к инфильтрации воспалительных клеток, например эозинофилов, нейтрофилов и так далее, в альвеолы. Эти клетки освобождают токсические гранулярные белки, которые повреждают эпителий, а также вырабатывают разнообразные медиаторы, включая липидные медиаторы (Barnes et al, 1998).In yet another embodiment of the present invention, asthma is an inflammatory disease of the respiratory tract that affects millions of people around the world. The disease reaches the size of an epidemic (Cookson, 1999) and is unproductively paid for by young lives. Asthma is characterized by airway obstruction, airway hyperreactivity, high serum IgE levels and the presence of eosinophils in the airways. The development of this disease is mediated by the pro-inflammatory cytokines IL-4, IL-3, IL-5 secreted by Th2 cells. On the other hand, the interferon-gamma cytokine (IFN-γ) secreted by Th1 cells inhibits Th2 cytokines. The asthmatic response can be divided into the early and late phase of the reaction. The early phase begins immediately after secondary exposure to the allergen and is due to histamine and other lipid mediators, which lead to inflammation and narrowing of the airways. The late phase of the reaction takes place 8-24 hours after exposure and leads to the infiltration of inflammatory cells, such as eosinophils, neutrophils and so on, into the alveoli. These cells release toxic granular proteins that damage the epithelium and also produce a variety of mediators, including lipid mediators (Barnes et al, 1998).

В другом воплощении настоящего изобретения при растущем понимании молекулярных механизмов астмы сообщалось о многих терапевтических возможностях (Bames, 1999). Однако после более чем 40 лет применения стероидов до сих пор отсутствует замена и стероиды по-прежнему остаются лекарственным средством наряду с агонистами бета 2-адренорецепторов для лечения астмы. Отсутствует возможность избежать их побочных вредных эффектов. Таким образом, существует потребность в поиске нестероидных антиастматических средств с очень малыми или пренебрежимыми побочными эффектами.In another embodiment of the present invention, with a growing understanding of the molecular mechanisms of asthma, many therapeutic possibilities have been reported (Bames, 1999). However, after more than 40 years of using steroids, there is still no replacement and steroids are still a drug along with beta 2 -adrenoreceptor agonists for asthma. There is no way to avoid their adverse effects. Thus, there is a need for the search for non-steroidal anti-asthma drugs with very few or negligible side effects.

В другом воплощении настоящего изобретения РВРВ в этом контексте был тестирован с использованием мышиной модели астмы. Мыши были сенситизированы внутриперитонеально и путем аэрозольной ингаляции овальбумина, для того чтобы развились характерные симптомы астмы, такие как индуцированный аллергеном ранний ответ дыхательных путей (РОДП) и поздний ответ дыхательных путей (ПОДП). Эти астматические симптомы были охарактеризованы путем определения калибра дыхательных путей в терминах специфической проводимости дыхательных путей (СПДП) с использованием неинвазивной техники, двухкамерной плетизмографии всего тела. После развития характерных астматических симптомов (РОДП и ПОДП) орально давали РВРВ во время всего периода сенситизации для тестирования профилактического эффекта на развитие астматических симптомов. Для проверки терапевтического эффекта РВРВ на астматические симптомы РВРВ скармливали мышам в течение одной недели после сенситизации и подтверждения астматических симптомов.In another embodiment of the present invention, PBPB in this context has been tested using a mouse model of asthma. Mice were sensitized intraperitoneally and by aerosol inhalation of ovalbumin in order to develop characteristic symptoms of asthma, such as allergen-induced early airway response (ROD) and late airway response (AML). These asthmatic symptoms were characterized by determining the caliber of the airways in terms of specific airway conductivity (SPDS) using a non-invasive technique, two-chamber plethysmography of the whole body. After the development of characteristic asthmatic symptoms (RODP and PODP) orally gave PBRV during the entire period of sensitization to test the prophylactic effect on the development of asthmatic symptoms. To test the therapeutic effect of PBRV on asthmatic symptoms, PBRV was fed to mice for one week after sensitization and confirmation of asthmatic symptoms.

В другом воплощении настоящего изобретения после тестирования соединения на профилактическую и терапевтическую ценность в интактных здоровых мышах, мышей забивали и собирали кровь и жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) для определения уровня IgE, цитокинов IL-4, IL-5, IFN-γ и гомофилии. Уровень специфического по отношению к IgE овальбумина в сыворотке крови и уровни цитокинов IL-4, IL-5, IFN-γ в БАЛ были измерены с использованием наборов для ELISA. Преобладание эозинофилов в БАЛ было определено с использованием проточной цитофлуориметрии.In another embodiment of the present invention, after testing the compound for prophylactic and therapeutic value in intact healthy mice, mice were sacrificed and blood and bronchoalveolar lavage fluid (BAL) were collected and measured to determine the level of IgE, IL-4, IL-5, IFN-γ, and homophilia cytokines. Serum IgE-specific ovalbumin level and cytokine levels of IL-4, IL-5, IFN-γ in BAL were measured using ELISA kits. The predominance of eosinophils in BAL was determined using flow cytometry.

В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает эффективное соединение для профилактики развития характерных симптомов астмы у животных, например предотвращается развитие сужения дыхательных путей и реактивности дыхательных путей у мышей, получавших РВРВ орально во время десенситизации.In another embodiment, the present invention provides an effective compound for preventing the development of characteristic asthma symptoms in animals, for example, the development of narrowing of the airways and airway reactivity in mice treated with PBPB orally during desensitization is prevented.

В другом воплощении настоящее изобретение также демонстрирует, что РВРВ является эффективным, даже если он дан мышам после сенситизации, то есть после развития гиперреактивности дыхательный путей. РВРВ, вводимый орально в течение одной недели животным с гиперреактивностью дыхательных путей, ингибировал индуцированное аллергеном сужение дыхательных путей и их гиперреактивность по отношению к метахолину. Это показывало терапевтический потенциал этого соединения.In another embodiment, the present invention also demonstrates that PBPB is effective even if given to mice after sensitization, that is, after the development of airway hyperresponsiveness. PBRV, administered orally for one week to animals with airway hyperreactivity, inhibited allergen-induced airway constriction and their hyperreactivity to methacholine. This showed the therapeutic potential of this compound.

В другом воплощении настоящее изобретение также показывает, что РВРВ редуцирует сенситизацию, как свидетельствует пониженный уровень IgE в сыворотке, и сохраняет уровень IFN-γ в жидкости БАЛ.In another embodiment, the present invention also shows that PBPB reduces sensitization, as evidenced by a reduced level of IgE in serum, and retains the level of IFN-γ in BAL fluid.

В другом воплощении настоящего изобретения введение РВРВ мышам как во время, так и после сенситизации значительно уменьшает преобладание эозинофилов в жидкости БАЛ. Эти данные позволяют предполагать, что РВРВ ингибирует воспаление при введении его фармакологически активной дозы. Было обнаружено, что эффективной дозой является 1 мг/кг веса тела.In another embodiment of the present invention, administration of PBPB to mice both during and after sensitization significantly reduces the predominance of eosinophils in BAL fluid. These data suggest that PBPB inhibits inflammation when administered with its pharmacologically active dose. An effective dose has been found to be 1 mg / kg body weight.

Настоящее изобретение обеспечивает эффективное средство, пара-бромфенацилбромид (РВРВ), который предотвращает развитие характерных симптомов астмы, таких как индуцированный аллергеном РОДП, так и ПОДП на животной модели, путем введения фармакологически эффективной дозы указанному животному. Изобретение также обеспечивает, что РВРВ может ослаблять уже развившийся РОДП и ПОДП у указанного животного при введении его фармакологически эффективной дозы после сенситизации. Это демонстрирует терапевтический эффект этого соединения. Настоящее изобретение также демонстрирует, что РВРВ ослабляет изменение определенных иммунологических параметров, т.е. эозинофолов, IgE, IL-4, IL-5 и IFN-γ, ассоциированных с астмой. Таким образом, РВРВ, будучи нестероидным соединением, может использоваться как образцовая молекула в разработке антиастматических лекарственных средств. Настоящее изобретение относится к новому применению пара-бромфенацилбромида как средства против астмы. Здесь показано, что пара-бромфенацилбромид (РВРВ) имеет потенциал как образцовая молекула для разработки антиастматических лекарственных средств для лечения клинической астмы. С целью иллюстрации различных воплощений изобретений даны следующие примеры, и они никаким образом не предназначены для ограничения настоящего изобретения.The present invention provides an effective agent, para-bromophenacyl bromide (PBRV), which prevents the development of characteristic symptoms of asthma, such as allergen-induced RODP and PODP in an animal model, by administering a pharmacologically effective dose to said animal. The invention also provides that PBRV can weaken the already developed RODP and POD in the specified animal with the introduction of its pharmacologically effective dose after sensitization. This demonstrates the therapeutic effect of this compound. The present invention also demonstrates that PBPB attenuates a change in certain immunological parameters, i.e. eosinophols, IgE, IL-4, IL-5 and IFN-γ associated with asthma. Thus, PBPB, being a non-steroidal compound, can be used as a model molecule in the development of anti-asthma drugs. The present invention relates to a new use of para-bromophenacyl bromide as an anti-asthma agent. It is shown here that para-bromophenacyl bromide (PBRV) has the potential as a model molecule for the development of anti-asthma drugs for treating clinical asthma. The following examples are given to illustrate various embodiments of the inventions, and are in no way intended to limit the present invention.

Пример 1 - сенситизация животныхExample 1 - sensitization of animals

Самцы мышей линии balb/c в возрасте восемь-десять недель и весом 18-22 г были акклиматизированы в течение одной недели в лабораторных условиях. Мыши были сенситизированы путем интралеритонеальной инъекции 0,2 мл солевого раствора 10 мкг овальбумина (ova) (Сигма, США,) адсобированного на геле гидроксида алюминия в 0, 7 и 14 дни после аэрозольной ингаляции в течение 5 следующих дней с дня 19 по 23 с 2% овальбумина (в солевом растворе, вес/объем) в течение 30 минут ежедневно. Аэрозольная обработка была выполнена путем помещения мышей в камеру из плексигласа (20×20×10 см²), и овальбумин или один солевой раствор были распылены с использованием распылителя (Devilbiss, модель 645, США) со скоростью потока воздуха 7 л/минуту. Ложносенситизированные мыши получали 0,7 мл солевого раствора, содержащего только 2 мг Al(ОН)₃, в 0, 7, 14 дни после ингаляции солевого аэрозоля без овальбумина в течение 5 следующих дней.Male balb / c mice aged eight to ten weeks and weighing 18-22 g were acclimated for one week in the laboratory. The mice were sensitized by an intraleritoneal injection of 0.2 ml of saline 10 μg ovalbumin (ova) (Sigma, USA), gel-adsorbed aluminum hydroxide on days 0, 7 and 14 after aerosol inhalation for the next 5 days from day 19 to 23 sec 2% ovalbumin (in saline, weight / volume) for 30 minutes daily. Aerosol treatment was performed by placing mice in a plexiglass chamber (20 × 20 × 10 cm ² ), and ovalbumin or one saline solution was sprayed using a nebulizer (Devilbiss, model 645, USA) with an air flow rate of 7 l / min. False-sensitized mice received 0.7 ml of saline containing only 2 mg of Al (OH) ₃ , at 0, 7, 14 days after inhalation of saline aerosol without ovalbumin for the next 5 days.

Пример 2 - обработка мышей РВРВExample 2 - treatment of mice PBRV

Соединение РВРВ (Сигма, США) было растворено в абсолютном спирте (10 мг/мл), РВРВ (объем 20 мкл) вводили каждой мыши перорально. Для оценки эффекта РВРВ на сенситизацию и развитие нарушений чувствительности дыхательных путей (профилактический эффект, фигура 1а) было использованы мыши, пять групп (по шесть мышей в каждой). Одна группа была ложносенситизированным контролем, а другую держали как сенситизированный контроль. Оставшимся трем группам мышей давали перорально три различных концентрации РВРВ (0, 1 и 10 мг/кг веса тела) ежедневно, начиная с первого и по последний день сенситизации. Ложносенситизированным и сенситизированным контрольным мышам был дан только носитель (20 мкл спирта) подобным же образом. Были проведены начальные определения специфической проводимости дыхательных путей и реактивности дыхательных путей у всех животных до начала экспериментов. Овальбумин индуцировал сужение дыхательных путей, и реактивность дыхательных путей была определена после окончания протокола сенситизации. Измерения были выполнены, как описано ниже (пример 3, 4 и 5).Compound PBPB (Sigma, USA) was dissolved in absolute alcohol (10 mg / ml), PBPB (volume 20 μl) was administered orally to each mouse. To assess the effect of PBRV on the sensitization and development of disorders of the sensitivity of the respiratory tract (prophylactic effect, Figure 1a), mice were used, five groups (six mice each). One group was a false-sensitized control, and the other was held as a sensitized control. The remaining three groups of mice were given orally three different concentrations of PBPB (0, 1, and 10 mg / kg body weight) daily, starting from the first to the last day of sensitization. False-sensitized and sensitized control mice were given only vehicle (20 μl of alcohol) in a similar manner. Initial determinations of the specific conductivity of the airways and the reactivity of the airways in all animals were carried out before the experiments. Ovalbumin induced narrowing of the airways, and airway reactivity was determined after the end of the sensitization protocol. Measurements were performed as described below (example 3, 4 and 5).

Для проверки терапевтического эффекта РВРВ на сенситизированных мышах (терапевтический эффект, фигура 16) мыши были сенситизированы до обработки РВРВ, и сужение дыхательных путей в ответ на овальбумин и их реактивность в ответ на метахолин были определены, как описано ниже. Для этого исследования были отобраны животные, показавшие по крайней мере 40% падение проводимости дыхательных путей в ответ на обработку аэрозолем овальбумина. Сенситизированные мыши были в случайном порядке разделены на 4 группы по 6 мышей в каждой группе. Трем группам мышей давали ежедневно три различные концентрации РВРВ в 20 мкл спирта, доведенного до содержания РВРВ в дозе 0,1, 1 и 10 мг/кг веса тела соответственно в течение недели. Четвертой группе скармливали только 20 мкл спирта в течение одной недели, чтобы использовать как сенситизированный контроль. После этого было определены сужение и реактивность воздушных путей.To test the therapeutic effect of PBPB on sensitized mice (therapeutic effect, Figure 16), the mice were sensitized prior to treatment with PBPB, and airway narrowing in response to ovalbumin and their reactivity in response to methacholine were determined as described below. For this study, animals were selected that showed at least a 40% drop in airway conductivity in response to ovalbumin aerosol treatment. Sensitized mice were randomly divided into 4 groups of 6 mice in each group. Three different groups of mice were given daily three different concentrations of PBPB in 20 μl of alcohol, adjusted to the content of PBPB at a dose of 0.1, 1 and 10 mg / kg body weight, respectively, for a week. The fourth group was fed only 20 μl of alcohol for one week to use as a sensitized control. After that, narrowing and reactivity of the airways were determined.

Пример 3 - определение калибра дыхательных путейExample 3 - determination of the caliber of the airways

Калибр (диаметр) дыхательных путей был определен в терминах специфической проводимости (СПД). СПД является мерой калибра дыхательных путей и был определен с использованием двухкамерной плетизмографии всего тела (Agrawal, 1981.) Двухкамерный плетизмограф всего тела был создан в нашей лаборатории, для того чтобы подходить к размеру мыши (фиг.2). Изменение давления в камере в ответ на дыхание помещенной туда мыши было определено при помощи датчика (Validyne mp 45 + 2cmh20) и усилителем несущей частоты (модель Validyne CD 15 carrier demodulator), который был связан с х-каналом осциллографа Tektronix, модель 6116, США. Пневмотахограф, прикрепленный к передней камере плетизмографа, был использован для того, чтобы детектировать поток воздуха от ноздрей мыши. Этот сигнал был усилен другим набором того же типа датчика и усилителя, которые в свою очередь были связаны с у-каналом осциллоскопа. Эти два канала (х-у) давления в камере против потока воздуха были соединены и отображались как петля на экране осциллографа. Наклон (тангенс θ) раннего вдыхательного плеча х-у петли обеспечивал данные для расчета СПД. СПД является отношением изменения потока воздуха к связанному с потоком изменению давления в камере во время перехода от выдоха к вдоху дышащей мыши, которое после решения становится:The gauge (diameter) of the airways was defined in terms of specific conductivity (SPD). SPD is a measure of the caliber of the airways and was determined using two-chamber plethysmography of the whole body (Agrawal, 1981.) A two-chamber plethysmograph of the whole body was created in our laboratory in order to fit the size of the mouse (figure 2). The pressure change in the chamber in response to the respiration of the mouse placed there was determined using a sensor (Validyne mp 45 + 2cmh20) and a carrier frequency amplifier (model Validyne CD 15 carrier demodulator), which was connected to the x-channel of the Tektronix oscilloscope, model 6116, USA . A pneumotachograph attached to the front plethysmograph chamber was used to detect the air flow from the nostrils of the mouse. This signal was amplified by another set of the same type of sensor and amplifier, which in turn were connected to the y-channel of the oscilloscope. These two channels (xy) of pressure in the chamber against the air flow were connected and displayed as a loop on the oscilloscope screen. The slope (tangent θ) of the early respiratory arm of the x-loop provided data for calculating the SPD. SPD is the ratio of the change in air flow to the change in pressure in the chamber associated with the flow during the transition from exhalation to inhalation of a breathing mouse, which after solution becomes:

Животные были акклиматизированы в камере в начале исследования и во время регистрации петли каждая индивидуальная мышь находилась в камере около 10 минут, для того чтобы получить базальную петлю корректно. Значения наклонов были зарегистрированы путем получения по крайней мере трех сходных петель. Несколько петель было проверено до выбора похожих трех петель для регистрации значения. Написанная выше формула была использована для расчета значений СПД (Agrawal, 1981).Animals were acclimatized in the chamber at the beginning of the study and during registration of the loop, each individual mouse was in the chamber for about 10 minutes in order to get the basal loop correctly. Slope values were recorded by obtaining at least three similar loops. Several loops were checked before selecting three similar loops to register the value. The above formula was used to calculate the SPD values (Agrawal, 1981).

Пример 4 - РВРОВ ингибирует острое индуцированное овальбумином сужение дыхательных путейExample 4 - PBBR Inhibits Acute Ovalbumin-Induced Airway Contraction

Сокращение дыхательных путей мышей было определено в терминах падения СПД, обусловленного аэрозольным введением овальбумина, как описано в примере 3. Для изучения профилактического эффекта РВРВ на сужение дыхательных путей, вызванное сенситизацией, мышам давали РВРВ в дозе 0,1, 1, 10 мг/кг веса тела) во время периода сенситизации. Уровни СПД были определены до и после вдыхания аэрозоля у всей группы (фигура 3). Ложносенситизированные мыши не демонстрировали никакого значительного уменьшения базального уровня СПД после вдыхания овальбумина. Сенситизированные мыши показывали 48% падение от базального уровня СПД в ответ на введение овальбумина. Оральное введение мышам различных доз РВРВ во время периода сенситизации предотвращало падение уровней СПД в ответ на введение альбумина в сравнении с сенситизированными мышами зависимым от дозы образом. Мыши, получавшие 0,1 мг РВРВ /кг веса тела, показали падение уровня СПД только на 17%, в то время как животные, получавшие 1 мг РВРВ /кг веса тела, имели только 4% падение СПД от их базального уровня. Дальнейшее увеличение дозы РВРВ до 10 мг/кг веса тела не показывало никакого дополнительного эффекта.The airway contraction of mice was determined in terms of the fall in LDS due to aerosol administration of ovalbumin, as described in Example 3. To study the prophylactic effect of PBRV on airway constriction caused by sensitization, mice were given PBRV at a dose of 0.1, 1, 10 mg / kg body weight) during the period of sensitization. SPD levels were determined before and after inhalation of the aerosol in the entire group (Figure 3). False-sensitized mice did not show any significant decrease in basal SPD levels after inhalation of ovalbumin. Sensitized mice showed a 48% drop from basal SPD in response to ovalbumin administration. Oral administration of various doses of PBPB to mice during the sensitization period prevented a drop in SPD levels in response to albumin administration compared to sensitized mice in a dose-dependent manner. Mice treated with 0.1 mg PBBB / kg body weight showed a drop in LDS by only 17%, while animals treated with 1 mg PBBB / kg body weight had only a 4% drop in LPS from their basal level. A further increase in the dose of PBPB to 10 mg / kg body weight showed no additional effect.

Для того чтобы изучить терапевтический эффект РВРВ (0, 1, 10 мг/кг веса тела) вводили в течение одной недели уже сенситизированным животным. На фигуре 4 показано обращение (лечебный эффект) под действием СПД дозозависимым образом. Доза 1 мг/кг веса тела восстанавливает уровень СПД до 86% от нормального базального уровня, а доза 10 мг РВРВ/кг веса тела почти полностью (96%) восстанавливает уровень СПД до базальному уровня (фигура 4).In order to study the therapeutic effect of PBPB (0, 1, 10 mg / kg body weight) was introduced within one week already sensitized animals. The figure 4 shows the treatment (therapeutic effect) under the action of SPD dose-dependent manner. A dose of 1 mg / kg of body weight restores the level of SPD to 86% of the normal basal level, and a dose of 10 mg of PBPB / kg of body weight almost completely (96%) restores the level of SPD to the basal level (figure 4).

Пример 5 - РВРВ снижает реактивность дыхательных путей по отношению к MXExample 5 - PBRV reduces airway reactivity to MX

Реактивность дыхательных путей в ответ на ацетил-бета-метахолин (Сигма, США) была определена через 24 часа после последней ингаляции аэрозоля овальбумина. Аэрозоль с различными концентрациями метахолина (3,1, 6,25, 12,5, 50 и 100 мг/мл) давали в течение 60 с. Значения PD₃₅ были определены у ложносенситизированных, сенситизированных и получавших РВРВ мышей во время сенситизации и после, как показано на фигуре 5. Не было обнаружено изменений в значениях PD₃₅ для MX у ложносенситизированных до и после введения овальбумина, в то время как было существенное падение в значении PD₃₅ для MX (86%) у сенситизированных мышей через 24 ч после введения овальбумина по сравнению с его начальным значением (р<0,005). Снижение PD₃₅ дыхательных путей в отношении MX у сенситизированных мышей ясно показывало их увеличенную гиперреактивность по отношению к MX, как также наблюдалось в терминах падения уровней СПД. Введение мышам РВРВ во время сенситизации значительно снижало значения PD₃₅ для MX по отношению к базальному уровню. Степень снижения PD₃₅ для MX зависела от дозы, и восстановление до 93% от начального уровня наблюдалось при введении дозы 1 мг/кг веса тела. Доза РВРВ 10 мг/кг веса тела давала еще лучший ответ, увеличивая СПД (115%) от начальных значений PD₃₅ для MX (фигура 5). Кроме того, когда сенситизированные животные, уже имевшие гиперреактивность дыхательных путей (PD₃₅ для MX 5,5±0,06 до 8,7±2,2), получали перорально различные концентрации РВРВ, значения PD₃₅ для MX также восстанавливались зависимым от дозы образом (фигура 6). Значения восстанавливались до более чем 81% от базального уровня при дозе 1 мг/кг веса тела (фигура 6) и при дозе 10 мг/кг веса тела восстановление достигало 94% от базального значение PD₃₅ для MX. У ложносенситизированных мышей аэрозольное воздействие различных доз MX не демонстрировало никаких изменений в значениях PD₃₅ для MX по сравнению с их начальными значениями после введения овальбумина.Airway reactivity in response to acetyl-beta-methacholine (Sigma, USA) was determined 24 hours after the last inhalation of ovalbumin aerosol. Aerosol with various concentrations of methacholine (3.1, 6.25, 12.5, 50 and 100 mg / ml) was given for 60 s. PD ₃₅ values were determined in mock-sensitized, sensitized and PBPB mice during and after sensitization, as shown in Figure 5. No changes were found in the PD ₃₅ values for MX in mock-sensitized before and after ovalbumin administration, while there was a significant drop in the value of PD ₃₅ for MX (86%) in sensitized mice 24 hours after administration of ovalbumin compared to its initial value (p <0.005). The decrease in PD _{35 of the} respiratory tract with respect to MX in sensitized mice clearly showed their increased hyperreactivity with respect to MX, as was also observed in terms of falling levels of SPD. The administration of PBMB to mice during sensitization significantly reduced the PD ₃₅ values for MX relative to the basal level. The degree of reduction in PD ₃₅ for MX was dose-dependent, and recovery to 93% of the initial level was observed with a dose of 1 mg / kg body weight. A dose of PBPB of 10 mg / kg body weight gave an even better response, increasing SPD (115%) from the initial PD ₃₅ values for MX (Figure 5). In addition, when sensitized animals that already had airway hyperreactivity (PD ₃₅ for MX 5.5 ± 0.06 to 8.7 ± 2.2) received orally different concentrations of PBPB, PD ₃₅ values for MX were also restored dose-dependent way (figure 6). The values were restored to more than 81% of the basal level at a dose of 1 mg / kg of body weight (Figure 6) and at a dose of 10 mg / kg of body weight, the recovery reached 94% of the basal value of PD ₃₅ for MX. In mock-sensitized mice, aerosol exposure to different doses of MX did not show any change in PD ₃₅ values for MX compared to their initial values after administration of ovalbumin.

Пример 6 - введение РВРВ во время и после сенситизации снижает уровень IgEExample 6 - the introduction of PBRV during and after sensitization reduces the level of IgE

Были определены уровни сывороточного IgE во всех группах мышей с помощью ELISA (фигура 7). Специфические уровни IgE были определены методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Уровень IgE существенно увеличивался (384±22,8 нг/мл) у сенситизированных мышей по сравнению с ложносенситизированной группой (30 ± нг/мл) (фигура 7). Интересно, что оральное введение РВРВ мышам, претерпевающим сенситизацию, предотвращало повышение уровня сывороточного IgE дозозависимым образом. Средний уровень сывороточного IgE у мышей, получавших РВРВ (1 мг/кг веса тела), был значительно ниже (40%) по сравнению с таковым у сенситизированных животных. Однако обработка 10 мг РВРВ/кг веса тела не оказывала добавочного эффекта на уровень IgE. Итак, когда РВРВ (1 мг/кг веса тела) давали в течение 1 недели уже сенситизированным животным, наблюдалось значительное падение (р<0,05) в уровне IgE в сыворотке (47%) по сравнению с таковым у сенситизированных мышей, которым вводили растворитель (фигура 7).Serum IgE levels were determined in all groups of mice using ELISA (Figure 7). Specific IgE levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). IgE levels increased significantly (384 ± 22.8 ng / ml) in sensitized mice compared to the false-sensitized group (30 ± ng / ml) (Figure 7). Interestingly, oral administration of PBPB to mice undergoing sensitization prevented an increase in serum IgE in a dose-dependent manner. The average serum IgE level in mice treated with PBPB (1 mg / kg body weight) was significantly lower (40%) compared to that in sensitized animals. However, treatment with 10 mg PBPB / kg body weight did not have an additional effect on IgE level. So, when PBPB (1 mg / kg body weight) was given to already sensitized animals for 1 week, a significant drop (p <0.05) in serum IgE level (47%) was observed compared to that in sensitized mice that were injected solvent (figure 7).

Пример 7 - РВРВ снижает уровень эозинофилов в жидкости БАЛExample 7 - PBRV reduces the level of eosinophils in BAL fluid

Уровень эозинофилов в жидкости БАЛ детектировали с помощью проточного цитометра (facs Vantage, Becton, США) с использованием метода, описанного Bedner et al. (1999). Клетки отбирались на основе размера и флуоресценции (FSC против FL1) и процент отобранных клеток был определен с помощью программы клеточного поиска. Данные представлены как средние значения для шести мышей. Как показано на фигуре 8, уровни эозинофилов в БАЛ были значительно повышены у сенситизированных овальбумином мышей по сравнению с ложно-сенситизированными мышами. Пероральное введение РВРВ (1 мг/кг веса тела) во время сенситизации предотвращало повышение уровня эозинофилов. У уже сенситизированных мышей введение РВРВ (1 мг/кг веса тела) также значительно снижало уровень эозинофилов (р<0,01) по сравнению с таковым у сенситизированных мышей, получавших только спирт.The level of eosinophils in BAL fluid was detected using a flow cytometer (facs Vantage, Becton, USA) using the method described by Bedner et al. (1999). Cells were selected based on size and fluorescence (FSC vs. FL1) and the percentage of cells selected was determined using a cell search program. Data are presented as mean values for six mice. As shown in FIG. 8, eosinophil levels in BALs were significantly increased in ovalbumin-sensitized mice compared to mock-sensitized mice. Oral administration of PBPB (1 mg / kg body weight) during sensitization prevented an increase in eosinophil levels. In already sensitized mice, administration of PBPB (1 mg / kg body weight) also significantly reduced the level of eosinophils (p <0.01) compared to that in sensitized mice that received only alcohol.

Пример 8 - РВРВ увеличивает IFN-гамма и уменьшает IL-4 и IL-5 в жидкости БАЛExample 8 - PBPB increases IFN-gamma and reduces IL-4 and IL-5 in BAL fluid

Цитокины INF-гамма, IL-4, IL-5 были определены в БАЛ с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) (BD Pharmingen, США) в соответствии с протоколом производителя.The cytokines INF-gamma, IL-4, IL-5 were determined in BAL using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits (BD Pharmingen, USA) in accordance with the manufacturer's protocol.

Мыши были обработаны РВРВ (1 мг/кг веса тела) во время сенситизации и после сенситизации. Уровни цитокинов в жидкости БАЛ были измерены после сенситизации и обработки РВРВ. Данные выражены как среднее ± стандартная ошибка (n=4 в каждой группе).Mice were treated with PBPB (1 mg / kg body weight) during sensitization and after sensitization. Cytokine levels in BAL fluid were measured after sensitization and treatment with PBPB. Data are expressed as mean ± standard error (n = 4 in each group).

ТаблицаTable ОбработкаTreatment ЦитокиныCytokines INF-γ (пг/мл)INF-γ (pg / ml) IL-4 (пг/мл)IL-4 (pg / ml) INF-γ:IL-4 (пг/мл)INF-γ: IL-4 (pg / ml) IL-5 (пг/мл)IL-5 (pg / ml) ЛожносенситизированныеFalsely sensitized 495,0±152,5495.0 ± 152.5 77,0±14,977.0 ± 14.9 6,46.4 104,8±15,2104.8 ± 15.2 СенситизированныеSensitized 162,0±45,2162.0 ± 45.2 143,0±3,0143.0 ± 3.0 1,11,1 158,7±22,5158.7 ± 22.5 РВРВ во время сенситизацииPBRV during sensitization 402±14,4*402 ± 14.4 * 91,0±13,2*91.0 ± 13.2 * 4,44.4 75,1±7,4*75.1 ± 7.4 * РВРВ после сенситизацииPBRV after sensitization 425,1±54,0*425.1 ± 54.0 * 42,4±4,9*42.4 ± 4.9 * 10,010.0 53,4±2,2*53.4 ± 2.2 * * Достоверное отличие от группы сенситизированных мышей (р<0,05)* Significant difference from the group of sensitized mice (p <0.05)

Результаты представлены в пг/мл каждого образца. Результаты (таблица) показали, что РВРВ влияет на уровень цитокинов. Уровни IL-4 (143±3,0 пг/мл) и IL-5(158,7±22,5) у сенситизированных мышей увеличивались по сравнению с таковым у ложносенситизированных (77,0±14,9 пг/мл и 104,8±15,2 пг/мл соответственно). Введение РВРВ во время процедуры сенситизации или после сенситизации достоверно снижало (р<0,05) по сравнению с сенситизированными мышами. С другой стороны, РВРВ удерживало уровень IFN-γ на уровне ложносенситизированных мышей. В обеих группах мышей, получавших РВРВ во время сенситизации и после сенситизации, наблюдалось увеличение соотношения INF-γ:IL-4 (4,4 и 10 соответственно) по сравнению с таковым у контрольных сенситизированных мышей (1,1).The results are presented in PG / ml of each sample. The results (table) showed that PBRV affects the level of cytokines. The levels of IL-4 (143 ± 3.0 pg / ml) and IL-5 (158.7 ± 22.5) in sensitized mice increased compared to those in mock-sensitized (77.0 ± 14.9 pg / ml and 104 , 8 ± 15.2 pg / ml, respectively). The introduction of PBRV during the sensitization procedure or after sensitization significantly decreased (p <0.05) compared with sensitized mice. On the other hand, PBPB kept the level of IFN-γ at the level of false-sensitized mice. In both groups of mice treated with PBPB during sensitization and after sensitization, an increase in the ratio of INF-γ: IL-4 (4.4 and 10, respectively) was observed compared to that in control sensitized mice (1,1).

Основные преимущества настоящего изобретения:The main advantages of the present invention:

1. Это первая демонстрация того, что РВРВ ингибирует характерные симптомы астмы, полученные на животной модели, и она может быть использована для разработки эффективного препарата для терапии астмы.1. This is the first demonstration that PBRV inhibits the characteristic asthma symptoms obtained in an animal model and can be used to develop an effective asthma medication.

2. РВРВ, будучи нестероидным соединением, может иметь меньше побочных эффектов, чем существующие терапевтические стероиды.2. PBRV, being a non-steroidal compound, can have fewer side effects than existing therapeutic steroids.

3. Это соединение недорого и легко доступно.3. This compound is inexpensive and readily available.

4. Использование РВРВ может не быть ограниченным только созданием антиастматических препаратов, но использоваться в других условиях воспаления, где повышение уровня IgE, снижение уровня IL-4, IL-5 и эозинофилов может играть значительную роль.4. The use of PBPB may not be limited only to the creation of anti-asthma drugs, but used in other conditions of inflammation, where an increase in the level of IgE, a decrease in the level of IL-4, IL-5 and eosinophils can play a significant role.

Claims

1. A method of preventing and / or treating asthma in a subject that needs it, comprising the step of administering a pharmacologically effective amount of para-bromophenacyl bromide (PBPB) to the subject.

2. The method according to claim 1, in which the subject may be an animal, including humans.

3. The method according to claim 1, in which the concentration of PBPB varies between 0.1 and 10 mg / kg of body weight.

4. The method according to claim 1, in which the concentration of PBPB is 1 mg / kg of body weight.

5. The method according to claim 1, in which PBRV is administered for about 1 week.

6. The method according to claim 1, in which PBRV does not have side effects.

7. The method according to claim 1, in which PBRV is administered by a route selected from the group comprising the intraperitoneal and oral route.

8. A method for modulating levels of biomolecules, such as IL-4, IL-5, IL-13, IFN-γ, and IgE, in order to help prevent and / or treat asthma, including the steps of administering a pharmacologically effective amount of parabromfenacyl bromide (PBPB) to a subject and determination of variations in the level of biomolecules.

9. The method of claim 8, in which PBRV helps maintain the level of IFN-γ.

10. The method of claim 8, in which PBRV helps to reduce the level of IL-4, IL-5 HIL-13.

11. The method of claim 8, in which PBRV prevents an increase in the level of IL-4, IL-5 and IL-13.

12. The method of claim 8, in which PBRV helps to reduce the level of eosinophils.

13. The method of claim 8, in which PBRV prevents an increase in the level of eosinophils.

14. The method of claim 8, wherein the PBPB helps lower the IgE level by about 50%.

15. The method of claim 8, wherein the PBPB prevents an increase in IgE level.

16. The method according to claim 8, in which PBRV helps prevent narrowing of the airways (PSD).

17. The method according to claim 8, in which PBRV helps to restore to approximately 96% of the basal level of narrowing of the airways (SDP).

18. The method according to claim 8, in which PBRV helps prevent the development of reactivity of the respiratory tract.

19. The use of parabromfenacyl bromide (PBPB) for the prevention and / or treatment of asthma in a subject, comprising the step of administering a pharmacologically effective amount of parabromfenacyl bromide (PBPB) to the subject.

20. The use according to claim 19, in which the subject may be an animal, including humans.

21. The use according to claim 19, in which the concentration of PBPB varies between 0.1 and 10 mg / kg of body weight.

22. The use according to claim 19, in which the concentration of PBPB is approximately 1 mg / kg of body weight.

23. The use according to claim 19, in which RVRV administered for about 1 week.

24. The use according to claim 19, in which PBRV does not have side effects.

25. The use according to claim 19, in which PBRV is administered by methods selected from the group including the intraperitoneal and oral route.

26. The use of parabromophenacyl bromide (PBPB) to modulate levels of biomolecules such as IL-4, IL-5, IL-13, IFN-γ and IgE, in order to help prevent and / or treat asthma, including the steps of administering a pharmacologically effective amount of parabromfenacyl bromide (PBRV) to the subject and determining the variations in the level of biomolecules.

27. The application of claim 26, wherein the PBPB helps maintain an INF-γ level.

28. The use of claim 26, wherein the PBPB helps lower IL-4, IL-5, and IL-13 levels.

29. The use of claim 26, wherein the PBPB prevents an increase in IL-4, IL-5, and IL-13 levels.

30. The application of claim 26, wherein the PBPB helps lower eosinophil levels.

31. The application of claim 26, wherein the PBPB prevents an increase in eosinophil levels.

32. The use of claim 26, wherein the PBPB helps reduce IgE levels by about 50%.

33. The use of claim 26, wherein the PBPB prevents an increase in IgE level.

34. The use according to p. 26, in which PBRV helps prevent narrowing of the airways.

35. The use according to p. 26, in which PBRV helps to restore to approximately 96% of the basal level of narrowing of the airways (PSD).

36. The use of Claim 26, wherein the PBRV helps prevent airway reactivity.