RU2300380C2 - Tetracycline derivatives and methods for their using - Google Patents
Tetracycline derivatives and methods for their using Download PDFInfo
- Publication number
- RU2300380C2 RU2300380C2 RU2004109986/14A RU2004109986A RU2300380C2 RU 2300380 C2 RU2300380 C2 RU 2300380C2 RU 2004109986/14 A RU2004109986/14 A RU 2004109986/14A RU 2004109986 A RU2004109986 A RU 2004109986A RU 2300380 C2 RU2300380 C2 RU 2300380C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- product
- doxycycline
- tetracycline
- deoxy
- filtered
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 title abstract description 85
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 title abstract description 82
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 title abstract description 73
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 title abstract description 66
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 title abstract description 63
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 abstract description 3
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 abstract 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000003028 elevating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 abstract 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 164
- 239000000047 product Substances 0.000 description 134
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 108
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 93
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 80
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 58
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 44
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 35
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 34
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 24
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 20
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 20
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 20
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 19
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 19
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 19
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- -1 tetracycline compound Chemical class 0.000 description 19
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 13
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 13
- 229960004023 minocycline Drugs 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 11
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 11
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 11
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 11
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 11
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910004013 NO 2 Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 10
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 10
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 10
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- JQJPBYFTQAANLE-UHFFFAOYSA-N Butyl nitrite Chemical compound CCCCON=O JQJPBYFTQAANLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 7
- 101001013150 Homo sapiens Interstitial collagenase Proteins 0.000 description 7
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 7
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 229960004082 doxycycline hydrochloride Drugs 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- FFTVPQUHLQBXQZ-KVUCHLLUSA-N (4s,4as,5ar,12ar)-4,7-bis(dimethylamino)-1,10,11,12a-tetrahydroxy-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1C2=C(N(C)C)C=CC(O)=C2C(O)=C2[C@@H]1C[C@H]1[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]1(O)C2=O FFTVPQUHLQBXQZ-KVUCHLLUSA-N 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 6
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 6
- FZUJWWOKDIGOKH-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid hydrochloride Chemical compound Cl.OS(O)(=O)=O FZUJWWOKDIGOKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon Chemical compound CN1CCN(C)C1=O CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 5
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 5
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 5
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 5
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 101000990912 Homo sapiens Matrilysin Proteins 0.000 description 4
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 4
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 4
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- MTCQOMXDZUULRV-ADOAZJKMSA-N (4s,4as,5ar,12ar)-4-(dimethylamino)-1,10,11,12a-tetrahydroxy-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1C2=CC=CC(O)=C2C(O)=C2[C@@H]1C[C@H]1[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]1(O)C2=O MTCQOMXDZUULRV-ADOAZJKMSA-N 0.000 description 3
- IQIPCMYBFDOLBO-IRDJJEOVSA-N (4s,4as,5ar,12ar)-9-amino-4,7-bis(dimethylamino)-1,10,11,12a-tetrahydroxy-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1C2=C(N(C)C)C=C(N)C(O)=C2C(O)=C2[C@@H]1C[C@H]1[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]1(O)C2=O IQIPCMYBFDOLBO-IRDJJEOVSA-N 0.000 description 3
- PTNZGHXUZDHMIQ-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(C)C(C(O)C3C(C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O PTNZGHXUZDHMIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 3
- 101001011906 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-14 Proteins 0.000 description 3
- 101000990915 Homo sapiens Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100030216 Matrix metalloproteinase-14 Human genes 0.000 description 3
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 3
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 229950000614 sancycline Drugs 0.000 description 3
- XCCHQGIGHCRZOS-KBKZQPOHSA-N (4as,5as,6s,12ar)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4,4a,5,5a-tetrahydrotetracene-2-carboxamide Chemical class C1=CC=C2[C@@](C)(O)[C@@H](C[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C3)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O XCCHQGIGHCRZOS-KBKZQPOHSA-N 0.000 description 2
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 2
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical compound CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000010907 Cyclooxygenase 2 Human genes 0.000 description 2
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N Isopropylaldehyde Chemical compound CC(C)C=O AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- IRJKSAIGIYODAN-ISLYRVAYSA-N benzyl (ne)-n-phenylmethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)/N=N/C(=O)OCC1=CC=CC=C1 IRJKSAIGIYODAN-ISLYRVAYSA-N 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 230000001199 chemoinvasive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000011613 copenhagen rat Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- 125000004850 cyclobutylmethyl group Chemical group C1(CCC1)C* 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- JARKCYVAAOWBJS-UHFFFAOYSA-N hexanal Chemical compound CCCCCC=O JARKCYVAAOWBJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053148 human MMP1 Human genes 0.000 description 2
- 125000000717 hydrazino group Chemical group [H]N([*])N([H])[H] 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 description 2
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTJXVDPDEQKTCV-UHFFFAOYSA-N 4,7-bis(dimethylamino)-1,10,11,12a-tetrahydroxy-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1C2=C(N(C)C)C=CC(O)=C2C(O)=C2C1CC1C(N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)C1(O)C2=O WTJXVDPDEQKTCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBUNNMJLXWQQBY-UHFFFAOYSA-N 4-fluorophenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(F)C=C1 LBUNNMJLXWQQBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VFTOHJFKIJLYKN-UHFFFAOYSA-N 7-nitro-9h-fluoren-2-ol Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=C2C3=CC=C(O)C=C3CC2=C1 VFTOHJFKIJLYKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010053177 Epidermolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108010026132 Gelatinases Proteins 0.000 description 1
- 102000013382 Gelatinases Human genes 0.000 description 1
- 229940124761 MMP inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101150014058 MMP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108090000855 Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000422 Matrix Metalloproteinase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010016160 Matrix Metalloproteinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000001776 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- KIPLYOUQVMMOHB-MXWBXKMOSA-L [Ca++].CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O.CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O Chemical compound [Ca++].CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O.CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O KIPLYOUQVMMOHB-MXWBXKMOSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009635 antibiotic susceptibility testing Methods 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCCO KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000003846 cartilage breakdown Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 108700004333 collagenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- SHQSVMDWKBRBGB-UHFFFAOYSA-N cyclobutanone Chemical compound O=C1CCC1 SHQSVMDWKBRBGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical group P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 102000056609 human MMP3 Human genes 0.000 description 1
- 102000052074 human MMP7 Human genes 0.000 description 1
- 102000054439 human MMP9 Human genes 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000003475 metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 229960002421 minocycline hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000003544 oxime group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- LXNAVEXFUKBNMK-UHFFFAOYSA-N palladium(II) acetate Substances [Pd].CC(O)=O.CC(O)=O LXNAVEXFUKBNMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 108091007196 stromelysin Proteins 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940063650 terramycin Drugs 0.000 description 1
- IOGXOCVLYRDXLW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl nitrite Chemical compound CC(C)(C)ON=O IOGXOCVLYRDXLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012414 tert-butyl nitrite Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/65—Tetracyclines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
- C07C237/24—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
- C07C237/26—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton of a ring being part of a condensed ring system formed by at least four rings, e.g. tetracycline
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
- C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
- C07C2603/40—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing four condensed rings
- C07C2603/42—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing four condensed rings containing only six-membered rings
- C07C2603/44—Naphthacenes; Hydrogenated naphthacenes
- C07C2603/46—1,4,4a,5,5a,6,11,12a- Octahydronaphthacenes, e.g. tetracyclines
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИFIELD OF TECHNOLOGY
Настоящее изобретение касается новых производных тетрациклина, способов получения новых производных и способов применения этих производных.The present invention relates to new derivatives of tetracycline, methods for producing new derivatives and methods for using these derivatives.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION
Соединение тетрациклин имеет следующую общую структуру:The tetracycline compound has the following general structure:
Система нумерации циклических ядер представляет собой следующее:The cyclic nucleus numbering system is as follows:
Тетрациклин, а также его производные 5-ОН (террамицин) и 7-Cl (ауреомицин) существуют в природе и являются хорошо известными антибиотиками. Природный тетрациклин может быть модифицирован без потери его антибиотических свойств, хотя определенные элементы структуры должны сохраняться. Модификации, которые могут и не могут быть сделаны в основной тетрациклиновой структуре, были представлены в обзоре Mitscher в The Chemistry of Tetracyclines, Chapter 6, Marcel Dekker, Publishers, New York (1978). Согласно Mitscher, заместители в положениях 5-9 тетрациклиновой кольцевой системы могут быть модифицированы без полной потери антибиотических свойств. Однако изменения в основной кольцевой системе или замена заместителей в положениях 1-4 и 10-12 обычно приводят к образованию синтетических тетрациклинов со значительно меньшей антимикробной активностью или фактически неактивных. Некоторые примеры химически модифицированных неантимикробных тетрациклинов (в дальнейшем ХМТ) представляют собой 4-дедиметиламино-тетрациклин, 4-дедиметиламиносанциклин(6-деметил-6-дезокси-4-дедиметиламинотетрациклин), 4-дедиметиламиноминоциклин(7-диметиламино-4-дедиметиламинотетрациклин) и 4-дедиметиламинодоксициклин(5-гидрокси-6-дезокси-4-дедиметиламинотетрациклин).Tetracycline, as well as its derivatives 5-OH (terramycin) and 7-Cl (aureomycin) exist in nature and are well known antibiotics. Natural tetracycline can be modified without losing its antibiotic properties, although certain structural elements must be preserved. Modifications that may and may not be made in the basic tetracycline structure were presented in a review by Mitscher in The Chemistry of Tetracyclines, Chapter 6, Marcel Dekker, Publishers, New York (1978). According to Mitscher, substituents at positions 5-9 of the tetracycline ring system can be modified without completely losing antibiotic properties. However, changes in the main ring system or substitution of substituents at positions 1-4 and 10-12 usually result in the formation of synthetic tetracyclines with significantly lower antimicrobial activity or actually inactive. Some examples of chemically modified non-antimicrobial tetracyclines (hereinafter XMT) are 4-demethylamino-tetracycline, 4-demethylamino-tetracycline (6-demethyl-6-deoxy-4-demethylaminotetracycline), 4-demethylaminominocycline (7-dimethylamino-4-dimethylamino-aminocycline) -dimethylaminodoxycycline (5-hydroxy-6-deoxy-4-demethylaminotetracycline).
Некоторые производные 4-дедиметиламинотетрациклина раскрыты в Патентах US 3029284 и US 5122519. Они включают 6-деметил-6-дезокси-4-дедиметиламинотетрациклин и 5-гидрокси-6-дезокси-4-дедиметиламинотетрациклин с водородом и другими заместителями в С7- и С9-положениях в D-кольце. Эти заместители включают амино, нитро, ди-(низший алкил)амино и моно-(низший алкил)амино или галоген. Авторы упоминают, что производные 6-деметил-6-дезокси-4-дедиметиламинотетрациклина и производные 5-гидрокси-6-дезокси-4-дедиметиламинотетрациклина полезны в качестве антимикробных агентов.Some derivatives of 4-dedimethylaminotetracycline are disclosed in US Pat. positions in the D-ring. These substituents include amino, nitro, di- (lower alkyl) amino and mono (lower alkyl) amino or halogen. The authors mention that derivatives of 6-demethyl-6-deoxy-4-demethylaminotetracycline and derivatives of 5-hydroxy-6-deoxy-4-demethylaminotetracycline are useful as antimicrobial agents.
Другие производные 4-дедиметиламинотетрациклина с оксим-группой в С4-положении в А-кольце раскрыты в Патентах US 3622627 и US 3824285. Эти оксим-производные имеют водород и галоген в качестве заместителей в С7-положении и включают 7-галоген-6-деметил-6-дезокси-4-дедиметиламино-4-оксиминотетра-циклин и 7-галоген-5-гидрокси-6-дезокси-4-дедиметиламино-4-оксиминотетрациклин.Other derivatives of 4-dedimethylaminotetracycline with an oxime group at the C4 position in the A ring are disclosed in US Pat. Nos. 3,622,627 and US 3,824,285. These oxime derivatives have hydrogen and halogen as substituents at the C7 position and include 7-halogen-6-demethyl -6-deoxy-4-demethylamino-4-oxyminotetra-cyclin; and 7-halogen-5-hydroxy-6-deoxy-4-demethylamino-4-hydroxyminotetracycline.
Группы алкиламино (МН-алкил) и алкилгидразон (N-NH-алкил) были замещены в А-кольце в С4-положении 4-дедиметиламинотетрациклина. Эти соединения известны своими антимикробными свойствами. См. Патенты US 3345370, US 3609188, US 3622627, US 3502660, US 3509184, US 3502696, US 3515731, US 3265732, US 5122519, US 3849493, US 3772363 и US 3829453.The alkylamino (MH-alkyl) and alkylhydrazone (N-NH-alkyl) groups were substituted on the A-ring at the C4 position of 4-demethylaminotetracycline. These compounds are known for their antimicrobial properties. See Patents US 3345370, US 3609188, US 3622627, US 3502660, US 3509184, US 3502696, US 3515731, US 3265732, US 5122519, US 3849493, US 3772363 and US 3829453.
Было описано, что кроме антимикробных свойств тетрациклины имеют и некоторые другие применения. Например, известно также, что тетрациклины ингибируют активность ферментов, разрушающих коллаген, таких как матриксные металлопротеиназы (ММР), включая коллагеназы (ММР-1), желатиназу (ММР-2) и стромелизин (ММР-3) (Golub et al., J. Periodont. Res. 20:12-23 (1985); Golub et al. Crit. Revs. Oral Biol. Med. 2:297-322 (1991); Патенты US 4666897, US 4704383, US 4935411, US 4935412). Известно также, что тетрациклины ингибируют атрофию и деградацию белков в скелетных мышцах млекопитающих (Патент US 5045538) и увеличивают продукцию IL-10 в клетках млекопитающих.It has been described that, in addition to the antimicrobial properties, tetracyclines have some other uses. For example, it is also known that tetracyclines inhibit the activity of collagen-degrading enzymes such as matrix metalloproteinases (MMPs), including collagenases (MMP-1), gelatinase (MMP-2) and stromelysin (MMP-3) (Golub et al., J . Periodont. Res. 20: 12-23 (1985); Golub et al. Crit. Revs. Oral Biol. Med. 2: 297-322 (1991); Patents US 4666897, US 4704383, US 4935411, US 4935412). It is also known that tetracyclines inhibit protein atrophy and degradation in skeletal muscle of mammals (Patent US 5045538) and increase the production of IL-10 in mammalian cells.
Кроме того, сообщалось, что тетрациклины увеличивают белковый синтез в костях (Патент US Re. 34656) и уменьшают резорбцию кости в органной культуре (Патент US 4704383).In addition, tetracyclines have been reported to increase protein synthesis in bones (US Pat. Re. 34,656) and reduce bone resorption in organ culture (US Pat. No. 4,704,383).
Аналогично, Golub с соавт. в Патенте US 5532227 раскрывают, что тетрациклины могут воздействовать на избыточное гликозилирование белков. В частности, тетрациклины ингибируют избыточное перекрестное связывание коллагена, которое является результатом избыточного гликозилирования коллагена при диабете.Similarly, Golub et al. US Pat. No. 5,532,227 discloses that tetracyclines can affect excessive glycosylation of proteins. In particular, tetracyclines inhibit the excessive cross-linking of collagen, which is the result of excessive glycosylation of collagen in diabetes.
Известно, что тетрациклины ингибируют избыточную активность фосфолипазы А2, вовлеченной в воспалительные состояния, такие как псориаз, как раскрыто в Патенте US 5532227. Кроме того, также известно, что тетрациклины ингибируют циклооксигеназу-2 (СОХ-2), фактор некроза опухоли (TNF), окись азота и IL-1 (интерлейкин-1).Tetracyclines are known to inhibit the excessive activity of phospholipase A 2 involved in inflammatory conditions such as psoriasis, as disclosed in US Pat. No. 5,532,227. In addition, tetracyclines also inhibit cyclooxygenase-2 (COX-2), tumor necrosis factor (TNF). ), nitric oxide and IL-1 (interleukin-1).
Эти свойства делают тетрациклины полезными в лечении множества заболеваний. Например, существует множество предположений, что тетрациклины, включая неантимикробные тетрациклины, эффективны в лечении артрита. См, например, Greenwald et al. "Tetracyclines Suppress Metalloproteinase Activity in Adjuvant Arthritis and, in Combination with Flurbioprofen, Ameliorate Bone Damage," Journal of Rheumatology 19:927-938 (1992); Greenwald et al. "Treatment of Destructive Arthritic Disorders with MMP Inhibitors; Potential Role of Tetracyclines in Inhibition of Matrix Metalloproteinases: Therapeutic Potential", Annals of the New York Academy of Sciences 732:181-198 (1994); Kloppenburg et al. "Minocycline in Active Rheumatoid Arthritis," Arthritis Rheum 37:629-636 (1994); Ryan et al. "Potential of Tetracycline to Modify Cartilage Breakdown in Osteoarthritis", Current Opinion in Rheumatology 8:238-247 (1996); O'Dell et al. "Treatment of Early Rheumatoid Arthritis with Minocycline or Placebo," Arthritis Rheum 40:842-848 (1997).These properties make tetracyclines useful in the treatment of many diseases. For example, there are many suggestions that tetracyclines, including non-antimicrobial tetracyclines, are effective in treating arthritis. See, for example, Greenwald et al. "Tetracyclines Suppress Metalloproteinase Activity in Adjuvant Arthritis and, in Combination with Flurbioprofen, Ameliorate Bone Damage," Journal of Rheumatology 19: 927-938 (1992); Greenwald et al. "Treatment of Destructive Arthritic Disorders with MMP Inhibitors; Potential Role of Tetracyclines in Inhibition of Matrix Metalloproteinases: Therapeutic Potential", Annals of the New York Academy of Sciences 732: 181-198 (1994); Kloppenburg et al. "Minocycline in Active Rheumatoid Arthritis," Arthritis Rheum 37: 629-636 (1994); Ryan et al. "Potential of Tetracycline to Modify Cartilage Breakdown in Osteoarthritis", Current Opinion in Rheumatology 8: 238-247 (1996); O'Dell et al. "Treatment of Early Rheumatoid Arthritis with Minocycline or Placebo," Arthritis Rheum 40: 842-848 (1997).
Предположили, что тетрациклины могут быть использованы для лечения кожных заболеваний. Например, White с соавт. (Lancet, Apr. 29, р.966 (1989)) сообщают, что тетрациклин миноциклин эффективен в лечении дистрофического врожденного буллезного эпидермолиза, который является жезнеопасным кожным заболеванием, связанным, как полагают, с избытком коллагеназы.It has been suggested that tetracyclines can be used to treat skin diseases. For example, White et al. (Lancet, Apr. 29, p. 966 (1989)) report that tetracycline minocycline is effective in treating degenerative congenital bullous epidermolysis, which is a life-threatening skin disease associated with an excess of collagenase.
Кроме того, исследования также позволили предположить, что тетрациклины и ингибиторы металлопротеиназ ингибируют развитие опухоли (DeClerck et al., Annals N.Y. Acad. Sci, 732:222-232, 1994), резорбцию кости (Rifkin et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 732:165-180, 1994), ангиогенез (Maragoudakis et al., Br. J. Pharmacol, 111:894-902, (1994) и могут обладать противовоспалительными свойствами (Ramamurthy et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 732, 427-430, 1994).In addition, studies have also suggested that tetracyclines and metalloproteinase inhibitors inhibit tumor development (DeClerck et al., Annals NY Acad. Sci, 732: 222-232, 1994), bone resorption (Rifkin et al., Annals NY Acad. Sci ., 732: 165-180, 1994), angiogenesis (Maragoudakis et al., Br. J. Pharmacol, 111: 894-902, (1994) and may have anti-inflammatory properties (Ramamurthy et al., Annals NY Acad. Sci. 732, 427-430, 1994).
На основе вышесказанного можно сделать вывод, что тетрациклины эффективны в лечении многочисленных заболеваний и состояний. Поэтому существует потребность в новых и еще более полезных производных тетрациклина.Based on the foregoing, it can be concluded that tetracyclines are effective in the treatment of numerous diseases and conditions. Therefore, there is a need for new and even more useful tetracycline derivatives.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION
Соединения, раскрытые здесь, являются производными тетрациклина, которые проявляют антимикробную и/или противораковую активность.The compounds disclosed herein are tetracycline derivatives that exhibit antimicrobial and / or anticancer activity.
В предпочтительной форме осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, направленного на ингибирование микробного или опухолевого роста, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества тетрациклинового соединения или его соли общей формулы:In a preferred embodiment, the present invention relates to a method of treatment directed to inhibiting microbial or tumor growth, comprising administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a tetracycline compound or a salt thereof of the general formula:
в которой R выбран из СН2N(RаRb) или 
RaRb представляют собой С1-С6-алкил;R a R b are C 1 -C 6 alkyl;
Rc и Rd представляют собой (CH2)nCHRe, n означает 0 или 1, и Re представляет собой Н, С1-С6-алкил или NH2, и Х представляет собой NH, S или СН2;R c and R d are (CH 2 ) n CHR e , n is 0 or 1, and R e is H, C 1 -C 6 alkyl or NH 2 , and X is NH, S or CH 2 ;
R1 представляет собой Н или ОН;R 1 represents H or OH;
R2 представляет собой Н, ОН, =O или OCOR8, где R8 представляет собой С1-С6-алкил, или альтернативно, R2 представляет собой N(R9)2, где R9 представляет собой водород или С1-С6-низший алкил, или R9CO, при условии, что если R2 представляет собой кетогруппу или N(R9)2, то R2 и R4 представляют собой Н или СН3, и R3 и R4 не являются одновременно СН3 или Н;R 2 represents H, OH, = O or OCOR 8 , where R 8 represents C 1 -C 6 alkyl, or alternatively R 2 represents N (R 9 ) 2 , where R 9 represents hydrogen or C 1 —C 6 lower alkyl or R 9 CO, provided that if R 2 is a keto group or N (R 9 ) 2 , then R 2 and R 4 are H or CH 3 , and R 3 and R 4 are not are simultaneously CH 3 or H;
5а водород является α- или β-;5a, hydrogen is α or β;
R3 и R4 представляют собой Н, СН3 или F, при условии, что если R3 представляет собой СН3, то R4 представляет собой Н или F, и если R4 представляет собой СН3, то R3 представляет собой Н или F, и R4 и R5 не являются одновременно F;R 3 and R 4 are H, CH 3 or F, provided that if R 3 is CH 3 , then R 4 is H or F, and if R 4 is CH 3 , then R 3 is H or F, and R 4 and R 5 are not simultaneously F;
R5 и R7 представляют собой галоген, Н, NO2, N3, N2 +, C2H5OC(S)S-, CN, NR10R11, где R10 и R11 представляют собой Н, C1-С10-алкил и R12(CH2)nCO-, где n означает от 0 до 5, и R9 представляет собой Н, NH2, моно- или ди-замещенный амин, выбранный из прямой, разветвленной или циклической С1-С10-алкильной группы, при условии, что R10 и R11 не являются одновременно R12(СН2)nСО-;R 5 and R 7 are halogen, H, NO 2 , N 3 , N 2 + , C 2 H 5 OC (S) S-, CN, NR 10 R 11 , where R 10 and R 11 are H, C 1 -C 10 -alkyl and R 12 (CH 2 ) n CO—, where n is from 0 to 5, and R 9 is H, NH 2 , a mono- or di-substituted amine selected from a straight, branched or cyclic With a 1 -C 10 -alkyl group, provided that R 10 and R 11 are not simultaneously R 12 (CH 2 ) n CO—;
R7, альтернативно, представляет собой четвертичный бутил; иR 7 , alternatively, is quaternary butyl; and
R6 представляет собой галоген, ацетилен, R13-C6H5, где R13 представляет собой NO2, галоген, ацетиламино, амино, фенил, алкил или алкокси.R 6 represents halogen, acetylene, R 13 -C 6 H 5 , where R 13 represents NO 2 , halogen, acetylamino, amino, phenyl, alkyl or alkoxy.
В еще одной предпочтительной форме осуществления, настоящее изобретение относится к способу лечения, направленного на ингибирование микробного или опухолевого роста, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества тетрациклинового соединения или его соли общей формулы:In another preferred embodiment, the present invention relates to a method of treatment aimed at inhibiting microbial or tumor growth, comprising administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a tetracycline compound or a salt thereof of the general formula:
в которой R выбран из CH2N(RaRb) или 
где RaRb представляют собой C1-C6-алкил;where R a R b represent C 1 -C 6 -alkyl;
Rc и Rd представляют собой (CH2)nCHRe, n означает 0 или 1, и Re представляет собой Н, C1-С6-алкил или NH2, и Х представляет собой NH, S или СН2;R c and R d are (CH 2 ) n CHR e , n is 0 or 1, and R e is H, C 1 -C 6 alkyl or NH 2 , and X is NH, S or CH 2 ;
R1 представляет собой Н или ОН;R 1 represents H or OH;
R2 представляет собой Н или ОН;R 2 represents H or OH;
R3 представляет собой Н или СН3;R 3 represents H or CH 3 ;
R4 и R6 представляют собой галоген, Н, NO2, N3, N2 +, C2H5OC(S)S-, CN, NR7R8, где R7 и R8 представляют собой Н, C1-С10-алкил и R9(CH2)nCO-, где n означает от 0 до 5, и R9 представляет собой Н, NH2, моно- или дизамещенный амин, выбранный из прямого, разветвленного или циклического C1-С10-алкила, при условии, что R7 и R8 не являются одновременно R9(CH2)nCO-; иR 4 and R 6 are halogen, H, NO 2 , N 3 , N 2 + , C 2 H 5 OC (S) S-, CN, NR 7 R 8 , where R 7 and R 8 are H, C 1 -C 10 -alkyl and R 9 (CH 2 ) n CO—, where n is from 0 to 5, and R 9 is H, NH 2 , a mono- or disubstituted amine selected from straight, branched or cyclic C 1 —C 10 -alkyl, with the proviso that R 7 and R 8 are not simultaneously R 9 (CH 2 ) n CO—; and
R6 представляет собой Н или галоген, ацетилен, R10-C6H5, где R10 представляет собой NO2, галоген, ацетиламино, амино, фенил, алкил или алкокси.R 6 represents H or halogen, acetylene, R 10 -C 6 H 5 , where R 10 represents NO 2 , halogen, acetylamino, amino, phenyl, alkyl or alkoxy.
В еще одной предпочтительной форме осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, направленного на ингибирование микробного или опухолевого роста, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества тетрациклинового соединения или его соли общей формулы:In yet another preferred embodiment, the present invention relates to a method of treatment aimed at inhibiting microbial or tumor growth, comprising administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a tetracycline compound or a salt thereof of the general formula:
в которой R выбран из CH2N(RaRb) или
где RaRb представляют собой C1-C6-алкил;where R a R b represent C 1 -C 6 -alkyl;
Rc и Rd представляют собой (CH2)nCHRe, n означает 0 или 1, и Re представляет собой Н, C1-C6-алкил или NH2, и Х представляет собой NH, S или СН2;R c and R d are (CH 2 ) n CHR e , n is 0 or 1, and R e is H, C 1 -C 6 alkyl or NH 2 , and X is NH, S or CH 2 ;
R1 и R2 представляют собой Н или N(R9)2, где R9 представляет собой Н или С1-С6-алкил при условии, что R1 и R2 не являются одновременно N(R9)2, R1 и R2 представляют собой также N(R10)3l, где R10 представляет собой C1-С6-алкил, при условии, что R1 и R2 не являются одновременно N(R10)3l;R 1 and R 2 represent H or N (R 9 ) 2 , where R 9 represents H or C 1 -C 6 -alkyl provided that R 1 and R 2 are not simultaneously N (R 9 ) 2 , R 1 and R 2 are also N (R 10 ) 3 l, where R 10 is C 1 -C 6 alkyl, provided that R 1 and R 2 are not N (R 10 ) 3 l at the same time;
R3 представляет собой Н;R 3 represents H;
R4 и R5 представляют собой Н, СН3 или F, при условии, что если R4 представляет собой СН3, то R5 представляет собой Н или F, и если R5 представляет собой СН3, то R4 представляет собой Н или F, и R4 и R5 не являются одновременно F;R 4 and R 5 are H, CH 3 or F, provided that if R 4 is CH 3 , then R 5 is H or F, and if R 5 is CH 3 , then R 4 is H or F, and R 4 and R 5 are not simultaneously F;
R6 и R8 представляют собой галоген, Н, NO2, N3, N2 +, C2H5OC(S)S-, CN, NR11R12, где R11 и R12 представляют собой Н, C1-С10-алкил и R13(CH2)nCO-, где n означает от 0 до 5, и R13 представляет собой Н, NH2, моно- или дизамещенный амин, выбранный из прямых, разветвленных или циклических C1-С10-алкильных групп, при условии, что R10 и R11 не являются одновременно R12(СН2)nСО-; и R8 может быть также четвертичным бутилом, и R7 представляет собой Н или галоген.R 6 and R 8 are halogen, H, NO 2 , N 3 , N 2 + , C 2 H 5 OC (S) S-, CN, NR 11 R 12 , where R 11 and R 12 are H, C 1 -C 10 -alkyl and R 13 (CH 2 ) n CO—, where n is from 0 to 5, and R 13 is H, NH 2 , a mono- or disubstituted amine selected from straight, branched or cyclic C 1 —C 10 -alkyl groups, provided that R 10 and R 11 are not simultaneously R 12 (CH 2 ) n CO—; and R 8 may also be quaternary butyl, and R 7 represents H or halogen.
В дополнительной предпочтительной форме осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, направленного на ингибирование микробного или опухолевого роста, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества тетрациклинового соединения или его соли общей формулы:In a further preferred embodiment, the present invention relates to a method of treatment directed to inhibiting microbial or tumor growth, comprising administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a tetracycline compound or a salt thereof of the general formula:
в которой R выбран из CH2N(RaRb) или
RaRb представляют собой C1-C6;R a R b represent C 1 -C 6 ;
Rc и Rd представляют собой (СН2)nCHRе, n означает 0 или 1, Re представляет собой Н, алкил(C1-C6), NH2, и Х представляет собой NH, S или СН2;R c and R d are (CH 2 ) n CHR e , n is 0 or 1, R e is H, alkyl (C 1 -C 6 ), NH 2 , and X is NH, S or CH 2 ;
R1 и R2 представляют собой Н или N(R9)2, где R9 представляет собой водород или низший алкил (C1-C6), при условии, что R1 и R2 не могут одновременно представлять собой N(R9)2.R 1 and R 2 represent H or N (R 9 ) 2 , where R 9 represents hydrogen or lower alkyl (C 1 -C 6 ), provided that R 1 and R 2 cannot simultaneously represent N (R 9 ) 2 .
R3 представляет собой Н, ОН, =O, OCOR10, где R10 представляет собой C1-C6, или альтернативно, R3 представляет собой N(R9)2, где R9 представляет собой водород или C1-C6, при условии, что если R3 представляет собой =O или N(R9)2, то R4 и R5 представляют собой Н или СН3, и R4 и R5 не являются одновременно СН3 или Н;R 3 represents H, OH, = O, OCOR 10 , where R 10 represents C 1 -C 6 , or alternatively, R 3 represents N (R 9 ) 2 , where R 9 represents hydrogen or C 1 -C 6 , provided that if R 3 is = O or N (R 9 ) 2 , then R 4 and R 5 are H or CH 3 , and R 4 and R 5 are not simultaneously CH 3 or H;
5а водород является α- или β-;5a, hydrogen is α or β;
R4 и R5 представляют собой Н, СН3 или F, при условии, что если R4 представляет собой СН3, то R5 представляет собой Н или F, и если R5 представляет собой СН3, то R4 представляет собой Н или F, и R4 и R5 не являются одновременно F;R 4 and R 5 are H, CH 3 or F, provided that if R 4 is CH 3 , then R 5 is H or F, and if R 5 is CH 3 , then R 4 is H or F, and R 4 and R 5 are not simultaneously F;
R6 и R8 представляют собой галоген, Н, NO2, N3, N2 +, C2H5OC(S)S-, CN, NR10R11, где R10 и R11 представляют собой Н, алкил(C1-С10) и R12(СН2)nСО-, где n означает от 0 до 5, и R12 представляет собой Н, NH2, моно- или дизамещенный амин, выбранный из прямых, разветвленных или циклических C1-C10-групп, при условии, что R10 и R11 одновременно представляют собой R12(CH2)nCO-, или, альтернативно, R8 представляет собой четвертичный бутил;R 6 and R 8 are halogen, H, NO 2 , N 3 , N 2 + , C 2 H 5 OC (S) S-, CN, NR 10 R 11 , where R 10 and R 11 are H, alkyl (C 1 -C 10 ) and R 12 (CH 2 ) n CO—, where n is from 0 to 5, and R 12 is H, NH 2 , a mono- or disubstituted amine selected from straight, branched or cyclic C 1 -C 10 groups, with the proviso that R 10 and R 11 simultaneously represent R 12 (CH 2 ) n CO— or, alternatively, R 8 represents quaternary butyl;
R7 представляет собой Н или галоген, ацетилен, R12-C6H5, где R12 представляет собой NO2, галоген, ацетиламино, амино, фенил, алкил или алкокси.R 7 represents H or halogen, acetylene, R 12 -C 6 H 5 , where R 12 represents NO 2 , halogen, acetylamino, amino, phenyl, alkyl or alkoxy.
В еще одной предпочтительной форме осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, направленного на ингибирование микробного или опухолевого роста, который включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества тетрациклинового соединения или его соли общей формулы:In another preferred embodiment, the present invention relates to a method of treatment directed to inhibiting microbial or tumor growth, which comprises administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a tetracycline compound or a salt thereof of the general formula:
в которой R1 представляет собой Н или N(СН3)2; R2 представляет собой Н, СН3 или ОСОСН3; R3 представляет собой Н или СН3; R4 представляет собой Н; R5 представляет собой Н, N(CH3)2, NH2, N(C4H9)2, N(C6H13)2, N(3,3-диметилбутил)2, N3, N2 +, NO2, NHCOCH3, NH(н-пропил)2, NH-изобутил, NH-изобутилметил, NH(циклобутил), NH(циклобутилметил); и R6 представляет собой Н, NO2, NH2, (CH3)2CHNH, N3, NHCOCH3, N2 +, N3 или (СН3)3С.in which R 1 represents H or N (CH 3 ) 2 ; R 2 represents H, CH 3 or OCOCH 3 ; R 3 represents H or CH 3 ; R 4 represents H; R 5 represents H, N (CH 3 ) 2 , NH 2 , N (C 4 H 9 ) 2 , N (C 6 H 13 ) 2 , N (3,3-dimethylbutyl) 2 , N 3 , N 2 + , NO 2 , NHCOCH 3 , NH (n-propyl) 2 , NH-isobutyl, NH-isobutylmethyl, NH (cyclobutyl), NH (cyclobutylmethyl); and R 6 represents H, NO 2 , NH 2 , (CH 3 ) 2 CHNH, N 3 , NHCOCH 3 , N 2 + , N 3 or (CH 3 ) 3 C.
В еще одной предпочтительной форме осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, направленного на ингибирование микробного или опухолевого роста, который включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества тетрациклинового соединения или его соли общей формулы:In another preferred embodiment, the present invention relates to a method of treatment directed to inhibiting microbial or tumor growth, which comprises administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a tetracycline compound or a salt thereof of the general formula:
в которой R1 представляет собой Н или N(СН3)2; R2 представляет собой Н, ОН или ОСОСН3; R3 представляет собой Н или СН3; R4 представляет собой Н; R5 представляет собой Н, N(СН3)2; N(C4H9)2, N(C6H13)2, N(3,3-диметилбутил)2; N3, N2 +, NO2, NHCOCH3, NH(н-пропил)2, NH-изобутил, NH-изобутилметил, N(СН3СО)(изобутил), NH(циклобутил), NH(циклобутилметил) или NH2; и R6 представляет собой Н, NO3, NH2, (СН3)2CHNH, N3, NHCOCH3, N2 + или (СН3)3С.in which R 1 represents H or N (CH 3 ) 2 ; R 2 represents H, OH, or OOCCH 3 ; R 3 represents H or CH 3 ; R 4 represents H; R 5 represents H, N (CH 3 ) 2 ; N (C 4 H 9 ) 2 , N (C 6 H 13 ) 2 , N (3,3-dimethylbutyl) 2 ; N 3 , N 2 + , NO 2 , NHCOCH 3 , NH (n-propyl) 2 , NH-isobutyl, NH-isobutylmethyl, N (CH 3 CO) (isobutyl), NH (cyclobutyl), NH (cyclobutylmethyl) or NH 2 ; and R 6 represents H, NO 3 , NH 2 , (CH 3 ) 2 CHNH, N 3 , NHCOCH 3 , N 2 + or (CH 3 ) 3 C.
СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE EMBODIMENTS OF THE INVENTION
Следующие примеры описывают получение различных веществ согласно настоящему изобретению.The following examples describe the preparation of various substances according to the present invention.
ВЭЖХ-анализы выполняли на колонках C18-symmetry фирмы Waters с обращенными фазами, используя воду, содержащую 0,1% ТФУ, и ацетонитрил в качестве элюентов.HPLC analyzes were performed on reverse phase Waters C18-symmetry columns using water containing 0.1% TFA and acetonitrile as eluents.
Аналитические ЖХ/МС-измерения выполняли на жидкостном хроматографе Hewlett Packard Series 1100, снабженном детектором Series 1100 MSD, с ионизацией электрораспылением (ЭР) и УФ-детекцией при 270 нм, с использованием колонки размером 4,6×100 мм со скоростью протока 0,4 мл/мин. Препаративную ВЭЖХ выполняли на Gilson serial HPLC с УФ-детекцией при 270 нм, с использованием колонки размером 19×150 мм и скоростью потока 15 мл/мин. 1H-ЯМР регистрировали на спектрометре Bruker 300 МГц в дейтерированном метаноле.Analytical LC / MS measurements were performed on a Hewlett Packard Series 1100 liquid chromatograph equipped with a Series 1100 MSD detector, with electrospray ionization (ER) and UV detection at 270 nm, using a 4.6 × 100 mm column with a flow rate of 0, 4 ml / min. Preparative HPLC was performed on a Gilson serial HPLC with UV detection at 270 nm using a 19 × 150 mm column with a flow rate of 15 ml / min. 1 H-NMR was recorded on a Bruker 300 MHz spectrometer in deuterated methanol.
9-Нитро-доксициклина сульфат9-nitro-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору доксициклина гидрохлорида (1 г, 2,08 ммоль) в 30 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли нитрат калия (252 мг, 2,49 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С, затем вливали в 1,2 л холодного эфира при перемешивании. Твердое вещество, которое осаждалось, отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом, и получали 1,22 г продукта кремового цвета. При необходимости продукт очищали, растворяя в метаноле, фильтруя и вливая фильтрат в эфир. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали.To a stirred solution of doxycycline hydrochloride (1 g, 2.08 mmol) in 30 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added potassium nitrate (252 mg, 2.49 mmol). The resulting mixture was stirred for 20 minutes at 0 ° C, then poured into 1.2 L of cold ether with stirring. The solid that precipitated was filtered off, washed with cold ether and dried in vacuo to give 1.22 g of a cream-colored product. If necessary, the product was purified by dissolving in methanol, filtering and pouring the filtrate into ether. The solid that separated was filtered out and dried.
9-Амино-доксициклина сульфат9-amino-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 9-нитро-доксициклина сульфата (1 г, 1,7 ммоль) в 35 мл монометилового эфира этиленгликоля и 5 мл метанола добавляли 700 мг 10%-ного Pd/C. Реакционную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 6 ч. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали, затем добавляли по каплям к 800 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом, и получали 843 мг продукта кремового цвета.To a stirred solution of 9-nitro-doxycycline sulfate (1 g, 1.7 mmol) in 35 ml of ethylene glycol monomethyl ether and 5 ml of methanol was added 700 mg of 10% Pd / C. The reaction mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 6 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated, then 800 ml of cold ether were added dropwise with stirring. The solid that separated was filtered off, washed with cold ether and dried in vacuo to give 843 mg of a cream-colored product.
9-Изопропиламино-доксициклина сульфат9-Isopropylamino-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 9-амино-доксициклина сульфата (100 мг, 0,18 ммоль) в 10 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,05 мл концентрированной серной кислоты, 0,5 мл ацетона и 100 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 1 ч 15 мин, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали, затем вливали в 150 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом, и получали 109 мг продукта кремового цвета. Этот продукт очищали, растворяя в метаноле, фильтруя и вливая фильтрат в эфир. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали.To a stirred solution of 9-amino-doxycycline sulfate (100 mg, 0.18 mmol) in 10 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.05 ml of concentrated sulfuric acid, 0.5 ml of acetone and 100 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 1 h 15 min, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated, then poured into 150 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered off, washed with cold ether and dried in vacuo to give 109 mg of a cream-colored product. This product was purified by dissolving in methanol, filtering and pouring the filtrate into ether. The resulting solid was filtered and dried.
9-Ацетамидо-доксициклина сульфат9-Acetamido-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 9-амино-доксициклина сульфата (72 мг, 0,13 ммоль) в 1,5 мл 1,3-диметил-2-имидазолидинона добавляли 70 мг бикарбоната натрия, затем 0,05 мл ацетилхлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 92 мг продукта.To a stirred solution of 9-amino-doxycycline sulfate (72 mg, 0.13 mmol) in 1.5 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone was added 70 mg of sodium bicarbonate, followed by 0.05 ml of acetyl chloride. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour and then filtered. The filtrate was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 92 mg of product.
9-Диазоний-доксициклина сульфата гидрохлорид9-diazonium-doxycycline sulfate hydrochloride
К перемешиваемому раствору 9-амино-доксициклина сульфата (300 мг, 0,54 ммоль) в 9 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,3 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, затем вливали в 300 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 256 мг оранжево-коричневого продукта.To a stirred solution of 9-amino-doxycycline sulfate (300 mg, 0.54 mmol) in 9 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.3 ml of n-butyl nitrite. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes, then poured into 300 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 256 mg of an orange-brown product.
9-Азидо-доксициклина сульфат9-azido-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 9-диазоний-доксициклина сульфата гидрохлорида (80 мг, 0,14 ммоль) в 4,5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле добавляли 10 мг азида натрия. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 43 мг продукта.To a stirred solution of 9-diazonium-doxycycline sulfate hydrochloride (80 mg, 0.14 mmol) in 4.5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol was added 10 mg of sodium azide. The solution was stirred at room temperature for 2 hours, then poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 43 mg of product.
9-(4-фторфенил)доксициклин9- (4-fluorophenyl) doxycycline
К раствору 9-диазоний-доксициклина сульфата гидрохлорида (358 мг, 0,59 ммоль) и 4-фторфенилбороновой кислоты (107 мг, 0,76 ммоль) в 4 мл метанола добавляли 18 мг ацетата палладия(II) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Катализатор отфильтровывали и остаток концентрировали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Собранные после ВЭЖХ фракции концентрировали и вливали в 20 мл холодного эфира. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом и получали 32 мг продукта.To a solution of 9-diazonium-doxycycline hydrochloride sulfate (358 mg, 0.59 mmol) and 4-fluorophenylboronic acid (107 mg, 0.76 mmol) in 4 ml of methanol was added 18 mg of palladium (II) acetate and the resulting mixture was stirred at room temperature temperature for 16 hours. The catalyst was filtered off and the residue was concentrated and purified by preparative HPLC. The fractions collected after HPLC were concentrated and poured into 20 ml of cold ether. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 32 mg of product.
7-[1,2-бис(карбобензилокси)гидразино]доксициклин7- [1,2-bis (carbobenzyloxy) hydrazino] doxycycline
К перемешиваемому раствору доксициклина гидрохлорида (300 мг, 0,62 ммоль) в 2,5 мл ТГФ и 3,2 мл метансульфокислоты при 0°С добавляли 230 мг дибензилазодикарбоксилата. Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов, затем вливали в 400 мл холодного эфира. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 479 мг продукта не совсем белого цвета.To a stirred solution of doxycycline hydrochloride (300 mg, 0.62 mmol) in 2.5 ml of THF and 3.2 ml of methanesulfonic acid at 0 ° C was added 230 mg of dibenzyl azodicarboxylate. The resulting mixture was stirred at 0 ° C for 2 hours, then poured into 400 ml of cold ether. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 479 mg of an off-white product.
7-Амино-доксициклин7-amino-doxycycline
К раствору 7-[1,2-бис(карбобензилокси)гидразино]доксициклина (478 мг) в 30 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 200 мг 10%-ного Pd/C и полученную смесь гидрировали в течение 3 часов при комнатной температуре. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом, и фильтрат концентрировали и вливали в 500 мл холодного эфира. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 268 мг продукта.To a solution of 7- [1,2-bis (carbobenzyloxy) hydrazino] doxycycline (478 mg) in 30 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 200 mg of 10% Pd / C and the resulting mixture was hydrogenated for 3 hours at room temperature. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol, and the filtrate was concentrated and poured into 500 ml of cold ether. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 268 mg of product.
7-Диметиламино-доксициклина сульфат7-Dimethylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (100 мг) в 8 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 1 мл 37%-ного водного раствора формальдегида, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 100 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 6 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся очень липкое вещество с трудом отфильтровывали. Остаток сразу же снова растворяли в метаноле и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 89 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (100 mg) in 8 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 1 ml of a 37% aqueous formaldehyde solution, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 100 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 6 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The released very sticky substance was hardly filtered. The residue was immediately redissolved in methanol and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 89 mg of product.
7-Дипропил-доксициклина сульфат7-dipropyl-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (90 мг) в 8 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,5 мл пропионового альдегида, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 80 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 5 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 415 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (90 mg) in 8 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.5 ml of propionic aldehyde, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 80 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 5 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 415 mg of product was obtained.
7-Дибутиламино-доксициклина сульфат7-Dibutylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (100 мг, 0,2 ммоль) в 6 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,6 мл масляного альдегида, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 100 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 4 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 103 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (100 mg, 0.2 mmol) in 6 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.6 ml of butyric aldehyde, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 100 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 4 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 103 mg of product was obtained.
7-Ди-(3,3-диметил)бутиламино-доксициклина сульфат7-Di- (3,3-dimethyl) butylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (100 мг, 0,2 ммоль) в 6 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,5 мл 3,3-диметилмасляного альдегида, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 100 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 4 ч, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 122 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (100 mg, 0.2 mmol) in 6 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.5 ml of 3.3-dimethylbutyric aldehyde, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 100 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 4 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 122 mg of product.
7-Дигексиламино-доксициклина сульфат7-dihexylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (100 мг, 0,2 ммоль) в 6 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,6 мл гексаналя, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 100 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 4 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 129 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (100 mg, 0.2 mmol) in 6 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.6 ml of hexanal, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 100 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 4 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 129 mg of product.
7-Изопропиламино-доксициклина сульфат7-Isopropylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (90 мг, 0,2 ммоль) в 8 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,5 мл изомасляного альдегида, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 90 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 6 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 142 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (90 mg, 0.2 mmol) in 8 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.5 ml of isobutyric aldehyde, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 90 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 6 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 142 mg of product.
7-Метил-7-изопропиламино-доксициклина сульфат7-methyl-7-isopropylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-изопропиламино-доксициклина (60 мг) в 4 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,4 мл 37%-ного водного раствора формальдегида, 0,05 мл концентрированной серной кислоты и 50 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 2 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 80 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 52 мг продукта.To a solution of 7-isopropylamino-doxycycline (60 mg) in 4 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.4 ml of a 37% aqueous solution of formaldehyde, 0.05 ml of concentrated sulfuric acid and 50 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 2 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 80 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 52 mg of product was obtained.
7-Циклобутиламино-доксициклина сульфат7-cyclobutylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-амино-доксициклина (80 мг) в 7 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,3 мл циклобутанона, 0,04 мл концентрированной серной кислоты и 60 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 24 часов, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 85 мг продукта.To a solution of 7-amino-doxycycline (80 mg) in 7 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.3 ml of cyclobutanone, 0.04 ml of concentrated sulfuric acid and 60 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 24 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 85 mg of the product.
7-Метил-7-циклобутиламино-доксициклина сульфат7-methyl-7-cyclobutylamino-doxycycline sulfate
К раствору 7-циклобутиламино-доксициклина (40 мг) в 3,5 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,3 мл 37%-ного водного раствора формальдегида, 0,03 мл концентрированной серной кислоты и 40 мг 10%-ного Pd/C. Полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 6 ч, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали и вливали в 80 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 35 мг продукта.To a solution of 7-cyclobutylamino-doxycycline (40 mg) in 3.5 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.3 ml of a 37% aqueous formaldehyde solution, 0.03 ml of concentrated sulfuric acid and 40 mg of 10% Pd / C. The resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 6 hours, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated and poured into 80 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 35 mg of product was obtained.
7-Ацетамидо-доксициклина сульфат7-Acetamido-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-амино-доксициклина (200 мг) в 3 мл 1,3-диметил-2-имидазолидинона добавляли 200 мг бикарбоната натрия, затем 0,09 мл ацетилхлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и вливали в 200 мл холодного эфира при перемешивании. Продукт, который осаждался, отфильтровывали и высушивали под вакуумом. Получали 202 мг продукта.To a stirred solution of 7-amino-doxycycline (200 mg) in 3 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone was added 200 mg of sodium bicarbonate, followed by 0.09 ml of acetyl chloride. The mixture was stirred at room temperature for 1 h and then filtered. The filtrate was concentrated and poured into 200 ml of cold ether with stirring. The product that precipitated was filtered off and dried in vacuo. Received 202 mg of product.
7-Ацетамидо-7-изопропил-доксициклина сульфат7-Acetamido-7-isopropyl-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-изобутиламино-доксициклина (60 мг) в 1,5 мл 1,3-диметил-2-имидазолидинона добавляли 60 мг бикарбоната натрия, затем 0,05 мл ацетилхлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч 30 мин и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и вливали в 80 мл холодного эфира при перемешивании. Продукт, который осаждался, отфильтровывали и высушивали под вакуумом.To a stirred solution of 7-isobutylamino-doxycycline (60 mg) in 1.5 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone was added 60 mg of sodium bicarbonate, followed by 0.05 ml of acetyl chloride. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour 30 minutes and then filtered. The filtrate was concentrated and poured into 80 ml of cold ether with stirring. The product that precipitated was filtered off and dried in vacuo.
7-Диазоний-доксициклина гидрохлорид или тетрафторборат7-diazonium-doxycycline hydrochloride or tetrafluoroborate
К перемешиваемому раствору 7-амино-доксициклина (200 мг, 0,4 ммоль) в 4 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,2 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, затем вливали в 200 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 173 мг продукта. Диазоний-тетрафторборатную соль приготавливали с помощью тетрафторборной кислоты (54%-ный раствор в эфире) вместо соляной кислоты.To a stirred solution of 7-amino-doxycycline (200 mg, 0.4 mmol) in 4 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.2 ml of n-butyl nitrite. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes, then poured into 200 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 173 mg of product. The diazonium tetrafluoroborate salt was prepared using tetrafluoroboric acid (54% solution in ether) instead of hydrochloric acid.
7-Азидо-доксициклин7-azido-doxycycline
К перемешиваемому раствору 7-диазоний-доксициклина гидрохлорида (80 мг, 0,14 ммоль) в 4,5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 12 мг азида натрия. Раствор перемешивали при 0°С в течение 2 часов, затем вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 43 мг продукта.To a stirred solution of 7-diazonium-doxycycline hydrochloride (80 mg, 0.14 mmol) in 4.5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 12 mg of sodium azide. The solution was stirred at 0 ° C for 2 hours, then poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 43 mg of product.
7-Амино-9-нитро-доксициклина сульфат7-amino-9-nitro-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-амино-доксициклина (220 г, 0,44 ммоль) в 4 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли нитрат калия (52 мг, 0,51 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут при 0°С, затем вливали в 300 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом. Продукт снова растворяли в метаноле, фильтровали, и фильтрат вливали в эфир. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 222 г продукта.To a stirred solution of 7-amino-doxycycline (220 g, 0.44 mmol) in 4 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added potassium nitrate (52 mg, 0.51 mmol). The resulting mixture was stirred for 15 minutes at 0 ° C, then poured into 300 ml of cold ether with stirring. The separated solid was filtered off, washed with cold ether and dried under vacuum. The product was again dissolved in methanol, filtered, and the filtrate was poured into ether. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 222 g of product.
7-Диметиламино-9-нитро-доксициклина сульфат7-Dimethylamino-9-nitro-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-диметиламино-доксициклина (40 г, 0,07 ммоль) в 1,5 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли нитрат калия (12 мг, 0,12 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин при 0°С, затем вливали в 60 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом. ЖХ/МС демонстрирует, главным образом, один продукт, содержащий две нитрогруппы (возможно, азотный эфир желаемого продукта).To a stirred solution of 7-dimethylamino-doxycycline (40 g, 0.07 mmol) in 1.5 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added potassium nitrate (12 mg, 0.12 mmol). The resulting mixture was stirred for 30 min at 0 ° C, then poured into 60 ml of cold ether with stirring. The separated solid was filtered off, washed with cold ether and dried under vacuum. LC / MS shows mainly one product containing two nitro groups (possibly the nitrogen ester of the desired product).
7-Диметиламино-9-диазоний-доксициклина сульфата гидрохлорид7-Dimethylamino-9-diazonium-doxycycline sulfate hydrochloride
К перемешиваемому раствору 7-диметиламино-9-амино-доксициклина (50 мг) в 1,5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,05 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, затем вливали в 80 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 38 мг продукта.To a stirred solution of 7-dimethylamino-9-amino-doxycycline (50 mg) in 1.5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol cooled in an ice bath, 0.05 ml of n-butyl nitrite was added. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes, then poured into 80 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 38 mg of product was obtained.
7-Ацетамидо-9-нитро-доксициклина сульфат7-Acetamido-9-nitro-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-ацетамино-доксициклина (60 г, 0,095 ммоль) в 2 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли нитрат калия (11 мг, 0,11 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 5 минут при 0°С, затем вливали в 80 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом.To a stirred solution of 7-acetamino-doxycycline (60 g, 0.095 mmol) in 2 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added potassium nitrate (11 mg, 0.11 mmol). The resulting mixture was stirred for 5 minutes at 0 ° C, then poured into 80 ml of cold ether with stirring. The separated solid was filtered off, washed with cold ether and dried under vacuum.
7-Ацетамидо-9-амино-доксициклина сульфат7-Acetamido-9-amino-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-ацетамидо-9-нитро-доксициклина сульфата (77 мг, 0,12 ммоль) в 7 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 60 мг 10%-ного Pd/C. Реакционную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 7 часов. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали, затем добавляли по каплям к 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом, и получали 62 мг продукта.To a stirred solution of 7-acetamido-9-nitro-doxycycline sulfate (77 mg, 0.12 mmol) in 7 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 60 mg of 10% Pd / C. The reaction mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 7 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated, then was added dropwise to 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered off, washed with cold ether and dried in vacuo to give 62 mg of product.
7-Ацетамидо-9-диазоний-доксициклина сульфата гидрохлорид7-Acetamido-9-diazonium-doxycycline sulfate hydrochloride
К перемешиваемому раствору 7-ацетамидо-9-амино-доксициклина (100 мг) в 3 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,1 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, затем вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 92 мг продукта.To a stirred solution of 7-acetamido-9-amino-doxycycline (100 mg) in 3 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.1 ml of n-butyl nitrite. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes, then poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 92 mg of product.
7-Ацетамидо-9-азидо-доксициклина сульфат7-acetamido-9-azido-doxycycline sulfate
К перемешиваемому раствору 7-ацетамидо-9-диазоний-доксициклина (112 мг, 0,19 ммоль) в 6 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 14 мг (0,21 ммоль) азида натрия. Раствор перемешивали при 0°С в течение 35 минут, затем вливали в 150 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 94 мг продукта.To a stirred solution of 7-acetamido-9-diazonium-doxycycline (112 mg, 0.19 mmol) in 6 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 14 mg (0.21 mmol) of sodium azide. The solution was stirred at 0 ° C for 35 minutes, then poured into 150 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered off and dried under vacuum, and 94 mg of product was obtained.
Доксициклина метилиодидDoxycycline methyl iodide
Доксициклина свободное основание (315 мг) растворяли в 2 мл метанола и 10 мл ТГФ, затем добавляли 1 мл метилиодида. Реакционную смесь выдерживали в течение 5 дней; никакой кристаллизации продукта не наблюдалось. Реакционную смесь концентрировали и вливали в 300 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившийся продукт отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 269 мг; ЖХ/МС демонстрирует чистый продукт.Doxycycline free base (315 mg) was dissolved in 2 ml of methanol and 10 ml of THF, then 1 ml of methyl iodide was added. The reaction mixture was kept for 5 days; no crystallization of the product was observed. The reaction mixture was concentrated and poured into 300 ml of cold ether with stirring. The separated product was filtered off and dried in vacuo to give 269 mg; LC / MS shows a pure product.
5-Ацетокси-доксициклин5-Acetoxy-doxycycline
Раствор доксициклина (100 мг) в 3 мл 30%-ного раствора HBr в уксусной кислоте перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 дней; реакционную смесь затем вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании, и выделившийся продукт отфильтровывали. ЖХ/МС показала неполное превращение исходного материала, поэтому продукт (86 мг) снова подвергали реакционным условиям в течение 9 ч и затем выделяли тем же способом.A solution of doxycycline (100 mg) in 3 ml of a 30% solution of HBr in acetic acid was stirred at room temperature for 3.5 days; the reaction mixture was then poured into 100 ml of cold ether with stirring, and the separated product was filtered off. LC / MS showed incomplete conversion of the starting material, so the product (86 mg) was again subjected to reaction conditions for 9 hours and then isolated in the same manner.
9-трет-бутил-доксициклин9-tert-butyl-doxycycline
Раствор доксициклина (100 мг) в 2 мл трет-бутанола и 3 мл метансульфокислоты перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов, затем вливали в 100 мл холодной воды и экстрагировали н-бутанолом. Органические экстракты подщелачивали 1 н. раствором гидроксида натрия и рН быстро доводили до 6,5-7 концентрированной соляной кислотой. Твердое вещество, осажденное при фильтрации, затем растворяли в метаноле, концентрировали и добавляли по каплям к 30 мл холодного раствора эфир/петролейный эфир при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом.A solution of doxycycline (100 mg) in 2 ml of tert-butanol and 3 ml of methanesulfonic acid was stirred at room temperature for 18 hours, then poured into 100 ml of cold water and extracted with n-butanol. Organic extracts were alkalinized with 1 N. a solution of sodium hydroxide and pH was quickly adjusted to 6.5-7 with concentrated hydrochloric acid. The solid precipitated by filtration was then dissolved in methanol, concentrated and 30 ml of a cold ether / petroleum ether solution were added dropwise with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo.
9-трет-бутил-7-нитро-доксициклин9-tert-butyl-7-nitro-doxycycline
Раствор доксициклина гидрохлорида (2 г) в 10 мл трет-бутанола и 30 мл метансульфокислоты перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, затем добавляли 500 мг нитрата калия и полученную смесь перемешивали еще час. Реакционную смесь вливали в 100 мл холодной раствора воды, содержащей 23 г гидроксида натрия; по каплям добавляли более разбавленный раствор NaOH до тех пор, пока реакционная смесь не станет щелочной. рН быстро доводили до 6,5-7 концентрированной соляной кислотой. Выделившееся липкое темное вещество отфильтровывали. Водный фильтрат экстрагировали еще раз н-бутанолом для получения большего количества продукта. Неочищенный продукт растворяли в минимальном количестве метанола и очищали с помощью ВЭЖХ. Объединенные после ВЭЖХ фракции концентрировали досуха, растворяли в метаноле и добавляли по каплям к 50 мл смеси эфир/петролейный эфир (3:1). Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и получали 788 мг бледно-желтого продукта.A solution of doxycycline hydrochloride (2 g) in 10 ml of tert-butanol and 30 ml of methanesulfonic acid was stirred at room temperature for 3 hours, then 500 mg of potassium nitrate was added and the resulting mixture was stirred for another hour. The reaction mixture was poured into 100 ml of a cold solution of water containing 23 g of sodium hydroxide; A more dilute NaOH solution was added dropwise until the reaction mixture became alkaline. The pH was quickly adjusted to 6.5-7 with concentrated hydrochloric acid. The released sticky dark substance was filtered off. The aqueous filtrate was extracted again with n-butanol to obtain a larger amount of product. The crude product was dissolved in a minimum amount of methanol and purified by HPLC. The combined HPLC fractions were concentrated to dryness, dissolved in methanol and 50 ml of ether / petroleum ether (3: 1) was added dropwise. The solid that separated was filtered out and 788 mg of a pale yellow product was obtained.
9-трет-бутил-7-амино-доксициклин9-tert-butyl-7-amino-doxycycline
К раствору 9-трет-бутил-7-доксициклина (500 мг) в 25 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 350 мг 10%-ного Pd/C и полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 17 часов. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Остаток концентрировали, растворяли в ТГФ и добавляли по каплям к холодному раствору эфир/петролейный эфир (1:1) при перемешивании. Выпавший в осадок продукт отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 452 мг продукта.To a solution of 9-tert-butyl-7-doxycycline (500 mg) in 25 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 350 mg of 10% Pd / C, and the resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 17 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The residue was concentrated, dissolved in THF, and ether / petroleum ether (1: 1) was added dropwise to a cold solution with stirring. The precipitated product was filtered off and dried under vacuum, and 452 mg of product was obtained.
9-трет-бутил-7-диазоний-доксициклин9-tert-butyl-7-diazonium-doxycycline
К перемешиваемому раствору 9-трет-бутил-7-амино-доксициклина (93 мг, 0,18 ммоль) в 2,5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,1 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут и затем половину раствора вливали в 30 мл холодной смеси эфир/петролейный эфир (3:1) при перемешивании. Продукт приклеивался к дну лабораторного стакана в виде смолы. Его снова растворяли в метаноле и концентрировали, остаток вливали в 20 мл холодного эфира, и выделившееся твердое вещество сразу же отфильтровывали и высушивали под вакуумом; получали 42 мг продукта. Другую половину реакционной смеси использовали непосредственно для получения 9-трет-бутилового соединения, описанного ниже ниже.To a stirred solution of 9-tert-butyl-7-amino-doxycycline (93 mg, 0.18 mmol) in 2.5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.1 ml of n-butyl nitrite. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes and then half of the solution was poured into 30 ml of a cold mixture of ether / petroleum ether (3: 1) with stirring. The product adhered to the bottom of the beaker in the form of a resin. It was again dissolved in methanol and concentrated, the residue was poured into 20 ml of cold ether, and the separated solid was immediately filtered off and dried under vacuum; received 42 mg of product. The other half of the reaction mixture was used directly to prepare the 9-tert-butyl compound described below below.
9-трет-бутил-7-азидо-доксициклин9-tert-butyl-7-azido-doxycycline
К перемешиваемому раствору реакционной смеси 9-трет-бутил-7-диазоний-доксициклина (1,5 мл) при 0°С добавляли 8 мг (0,12 ммоль) азида натрия. Раствор перемешивали в течение 3 часов, позволяя нагреться до комнатной температуры. После концентрирования реакционной смеси остаток вливали в холодную смесь эфир/петролейный эфир (3:1) при перемешивании. Твердое вещество не выделялось, поэтому раствор концентрировали досуха с получением 35 мг продукта.To a stirred solution of the reaction mixture of 9-tert-butyl-7-diazonium-doxycycline (1.5 ml) at 0 ° C. was added 8 mg (0.12 mmol) of sodium azide. The solution was stirred for 3 hours, allowing to warm to room temperature. After concentrating the reaction mixture, the residue was poured into a cold ether / petroleum ether mixture (3: 1) with stirring. The solid did not stand out, so the solution was concentrated to dryness to give 35 mg of the product.
9-трет-бутил-7-диметиламино-доксициклин9-tert-butyl-7-dimethylamino-doxycycline
К перемешиваемой реакционной смеси из 9-трет-бутил-7-амино-доксициклина, содержащей 167 мг 9-трет-бутил-7-амино-доксициклина в 10 мл монометилового эфира этиленгликоля и 115 мг 10%-ного Pd/C, добавляли 1,2 мл 37%-ного водного раствора формальдегида. Полученную смесь гидрировали в течение 3,5 часов при атмосферном давлении, затем катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали и остаток вливали в 10 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом. ЖХ/МС показала ожидаемый продукт, но он был загрязнен основной примесью.To the stirred reaction mixture of 9-tert-butyl-7-amino-doxycycline containing 167 mg of 9-tert-butyl-7-amino-doxycycline in 10 ml of ethylene glycol monomethyl ether and 115 mg of 10% Pd / C, 1 was added , 2 ml of a 37% aqueous formaldehyde solution. The resulting mixture was hydrogenated for 3.5 hours at atmospheric pressure, then the catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated and the residue was poured into 10 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo. LC / MS showed the expected product, but it was contaminated with the main impurity.
9-трет-бутил-7-ацетамидо-доксициклин9-tert-butyl-7-acetamido-doxycycline
К перемешиваемому раствору 9-трет-бутил-7-амино-доксициклина (100 мг) в 2 мл 1,3-диметил-2-имидазолидинона добавляли 100 мг бикарбоната натрия, затем 0,07 мл ацетилхлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часов и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившийся продукт отфильтровывали. Неочищенный продукт снова растворяли в метаноле, фильтровали и добавляли по каплям в холодную смесь эфир/петролейный эфир (3:1) при перемешивании. Продукт собирали фильтрацией и высушивали под вакуумом и получали 76 мг продукта.To a stirred solution of 9-tert-butyl-7-amino-doxycycline (100 mg) in 2 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone was added 100 mg of sodium bicarbonate, followed by 0.07 ml of acetyl chloride. The mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours and then filtered. The filtrate was concentrated and poured into 100 ml of cold ether with stirring. The separated product was filtered off. The crude product was redissolved in methanol, filtered and added dropwise to a cold mixture of ether / petroleum ether (3: 1) with stirring. The product was collected by filtration and dried in vacuo to give 76 mg of the product.
4-Дедиметиламино-доксициклин4-Dedimethylamino-doxycycline
К перемешиваемому раствору тетрациклина метилиодида (860 мг) в 12 мл уксусной кислоты и 12 мл воды добавляли 432 мг цинковой пыли. После перемешивания в течение 15 мин цинковый порошок отфильтровывали. Фильтрат разбавляли 86 мл воды, содержащей 0,86 мл концентрированной соляной кислоты. Выделившийся продукт отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 419 мг продукта.To a stirred solution of tetracycline methyl iodide (860 mg) in 12 ml of acetic acid and 12 ml of water was added 432 mg of zinc dust. After stirring for 15 minutes, the zinc powder was filtered. The filtrate was diluted with 86 ml of water containing 0.86 ml of concentrated hydrochloric acid. The product that separated was filtered out and dried in vacuo to give 419 mg of the product.
4-Дедиметиламино-9-нитро-доксициклин4-Dedimethylamino-9-nitro-doxycycline
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-доксициклина (402 мг, 1 ммоль) в 20 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли 111 мг нитрата калия. После перемешивания в течение 20 минут реакционную смесь вливали в 100 мл холодной воды. В воду, содержащую продукт, добавляли н-бутанол и отделяли органический слой. Экстракцию н-бутанолом повторяли дважды. Объединенные органические экстракты концентрировали и добавляли в холодную воду при перемешивании. Выделившийся продукт отфильтровывали; большее количество продукта получали путем повторной экстракции водного фильтрата н-бутанолом, концентрирования, вливания в холодную воду и фильтрации. После высушивания под вакуумом получали 353 мг продукта.To a stirred solution of 4-dedimethylamino-doxycycline (402 mg, 1 mmol) in 20 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added 111 mg of potassium nitrate. After stirring for 20 minutes, the reaction mixture was poured into 100 ml of cold water. N-butanol was added to the water containing the product and the organic layer was separated. The extraction with n-butanol was repeated twice. The combined organic extracts were concentrated and added to cold water with stirring. The separated product was filtered; a larger amount of product was obtained by re-extraction of the aqueous filtrate with n-butanol, concentration, pouring into cold water and filtration. After drying under vacuum, 353 mg of product was obtained.
4-Дедиметиламино-9-амино-доксициклин4-Dedimethylamino-9-amino-doxycycline
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-9-нитро-доксициклина (353 мг) в 17 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 0,1 мл концентрированной серной кислоты и 200 мг 10%-ного Pd/C, и полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 10 часов. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали и вливали в 100 мл эфира. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 292 мг продукта.To a stirred solution of 4-dedimethylamino-9-nitro-doxycycline (353 mg) in 17 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 0.1 ml of concentrated sulfuric acid and 200 mg of 10% Pd / C, and the resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 10 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated and poured into 100 ml of ether. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 292 mg of product.
4-Дедиметиламино-9-диазоний-доксициклингидрохлорид4-Dedimethylamino-9-diazonium-doxycycline hydrochloride
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-9-амино-доксициклина (220 мг) в 5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,2 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, затем вливали в 150 мл холодной смеси эфир/петролейный эфир (2:1) при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 191 мг продукта.To a stirred solution of 4-demethylamino-9-amino-doxycycline (220 mg) in 5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.2 ml of n-butyl nitrite. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes, then poured into 150 ml of a cold mixture of ether / petroleum ether (2: 1) with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 191 mg of product was obtained.
4-Дедиметиламино-9-азидо-доксициклин4-Dedimethylamino-9-azido-doxycycline
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-9-диазоний-доксициклина (150 мг, 0,32 ммоль) в 6,5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 23 мг азида натрия, и полученную смесь перемешивали в течение 1 часа при 0°С. Затем смесь вливали в 120 мл холодного эфира при перемешивании. Некоторое количество образовавшегося твердого вещества фильтровали и обнаружили, что оно не является ожидаемым продуктом. Фильтрат концентрировали досуха, растворяли в метаноле и вливали в 50 мл холодной воды при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом; большее количество продукта получали путем экстракции фильтрата н-бутанолом, концентрирования, вливания в воду и фильтрации твердого вещества; получали 84 мг продукта.To a stirred solution of 4-demethylamino-9-diazonium-doxycycline (150 mg, 0.32 mmol) in 6.5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 23 mg of sodium azide, and the resulting mixture was stirred for 1 hour at 0 ° C. The mixture was then poured into 120 ml of cold ether with stirring. A certain amount of solid formed was filtered and found to be not the expected product. The filtrate was concentrated to dryness, dissolved in methanol and poured into 50 ml of cold water with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo; a larger amount of product was obtained by extraction of the filtrate with n-butanol, concentration, pouring into water and filtering a solid; received 84 mg of the product.
4-Дедиметиламино-7-нитро-9-трет-бутил-доксициклин4-Dedimethylamino-7-nitro-9-tert-butyl-doxycycline
Раствор 4-дедиметиламино-доксициклина (500 мг 1,25 ммоль) в 3 мл трет-бутанола и 15 мл метансульфокислоты перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов, затем добавляли 140 мг нитрата калия и полученную смесь перемешивали еще час. Реакционную смесь вливали в 200 мл холодной воды при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали на воздухе. Неочищенный продукт растворяли в минимальном количестве метанола и очищали с помощью ВЭЖХ. Объединенные после ВЭЖХ фракции концентрировали досуха, растворяли в метаноле и добавляли по каплям к 50 мл холодной воды. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 217 мг продукта.A solution of 4-dedimethylamino-doxycycline (500 mg 1.25 mmol) in 3 ml of tert-butanol and 15 ml of methanesulfonic acid was stirred at room temperature for 15 hours, then 140 mg of potassium nitrate was added and the resulting mixture was stirred for another hour. The reaction mixture was poured into 200 ml of cold water with stirring. The separated solid was filtered off and dried in air. The crude product was dissolved in a minimum amount of methanol and purified by HPLC. The combined HPLC fractions were concentrated to dryness, dissolved in methanol and added dropwise to 50 ml of cold water. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 217 mg of product.
4-Дедиметиламино-7-амино-9-трет-бутил-доксициклин4-Dedimethylamino-7-amino-9-tert-butyl-doxycycline
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-7-нитро-9-трет-бутил-доксициклина (217 мг, 0,42 ммоль) в 12 мл монометилового эфира этиленгликоля добавляли 170 мг 10%-ного Pd/C и полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 13 часов. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали и вливали в 20 мл смеси эфир/петролейный эфир (3:1), и получали 40 мг продукта. Оранжевый фильтрат концентрировали досуха с получением еще 138 мг продукта.To a stirred solution of 4-dedimethylamino-7-nitro-9-tert-butyl-doxycycline (217 mg, 0.42 mmol) in 12 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added 170 mg of 10% Pd / C and the resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure within 13 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated and poured into 20 ml of a mixture of ether / petroleum ether (3: 1), and 40 mg of product was obtained. The orange filtrate was concentrated to dryness to give another 138 mg of product.
4-Дедиметиламино-7-диазоний-9-трет-бутил-доксициклин4-Dedimethylamino-7-diazonium-9-tert-butyl-doxycycline
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-7-амино-9-трет-бутил-доксициклина (165 мг) в 5 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,15 мл н-бутилнитрита. Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут; половину раствора вливали в 50 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 50 мг продукта.To a stirred solution of 4-demethylamino-7-amino-9-tert-butyl-doxycycline (165 mg) in 5 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.15 ml of n-butyl nitrite. The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes; half of the solution was poured into 50 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 50 mg of product.
4-Дедиметиламино-7-амино-доксициклин4-Dedimethylamino-7-amino-doxycycline
К перемешиваемому раствору 4-дедиметиламино-доксициклина (400 мг) в 4 мл ТГФ и 4,5 мл метансульфокислоты при 0°С добавляли 418 мг (1,4 ммоль) дибензилазодикарбоксилата, и полученную смесь перемешивали в течение 4 часов, нагревая до комнатной температуры. Добавляли воду и н-бутанол, и два слоя разделяли. Водный слой экстрагировали смесью эфир/н-бутанол. Объединенные органические экстракты концентрировали досуха и добавляли 10 мл монометилового эфира этиленгликоля. Затем добавляли 430 мг 10%-ного Pd/C и полученную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 12 часов. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали и вливали в холодную смесь эфир/петролейный эфир (3:1) при перемешивании. Выделившийся продукт отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 114 мг продукта.To a stirred solution of 4-dedimethylamino-doxycycline (400 mg) in 4 ml of THF and 4.5 ml of methanesulfonic acid at 0 ° C was added 418 mg (1.4 mmol) of dibenzyl azodicarboxylate, and the resulting mixture was stirred for 4 hours, warming to room temperature . Water and n-butanol were added and the two layers were separated. The aqueous layer was extracted with ether / n-butanol. The combined organic extracts were concentrated to dryness and 10 ml of ethylene glycol monomethyl ether was added. Then 430 mg of 10% Pd / C was added and the resulting mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 12 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated and poured into a cold mixture of ether / petroleum ether (3: 1) with stirring. The separated product was filtered off and dried under vacuum, and 114 mg of product was obtained.
9-Нитро-миноциклина сульфат9-nitro-minocycline sulfate
К перемешиваемому раствору миноциклина гидрохлорида (1 г, 2,02 ммоль) в 30 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли нитрат калия (246 мг). Полученную смесь перемешивали в течение 45 минут при 0°С, затем вливали в 1,2 л холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом, и получали 1,33 г продукта.To a stirred solution of minocycline hydrochloride (1 g, 2.02 mmol) in 30 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added potassium nitrate (246 mg). The resulting mixture was stirred for 45 minutes at 0 ° C, then poured into 1.2 L of cold ether with stirring. The solid which separated out was filtered off, washed with cold ether and dried under vacuum, and 1.33 g of product was obtained.
9-Амино-миноциклина сульфат9-amino-minocycline sulfate
К перемешиваемому раствору 9-нитро-миноциклина сульфата (500 мг, 0,83 ммоль) в 10 мл монометилового эфира этиленгликоля и 7 мл метанола добавляли 250 мг 10%-ного Pd/C. Реакционную смесь гидрировали при атмосферном давлении в течение 4 часов. Катализатор фильтровали через целит, промывая метанолом. Фильтрат концентрировали, затем добавляли по каплям к 600 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом, и получали 465 мг продукта.To a stirred solution of 9-nitro-minocycline sulfate (500 mg, 0.83 mmol) in 10 ml of ethylene glycol monomethyl ether and 7 ml of methanol was added 250 mg of 10% Pd / C. The reaction mixture was hydrogenated at atmospheric pressure for 4 hours. The catalyst was filtered through celite, washing with methanol. The filtrate was concentrated, then 600 ml of cold ether were added dropwise with stirring. The solid that separated was filtered off, washed with cold ether and dried under vacuum, and 465 mg of product was obtained.
9-Диазоний-миноциклина сульфата гидрохлорид9-diazonium minocycline sulfate hydrochloride
К перемешиваемому раствору 9-амино-миноциклина сульфата (100 мг) в 3 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле, охлажденной на ледяной бане, добавляли 0,1 мл трет-бутил нитрита (или н-бутилнитрита). Раствор перемешивали при 0°С в течение 30 минут, затем вливали в 100 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 87 мг оранжево-коричневого продукта.To a stirred solution of 9-amino-minocycline sulfate (100 mg) in 3 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol, cooled in an ice bath, was added 0.1 ml of tert-butyl nitrite (or n-butyl nitrite). The solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes, then poured into 100 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 87 mg of an orange-brown product.
9-Азидо-миноциклина сульфат9-azido-minocycline sulfate
К перемешиваемому раствору 9-диазоний-миноциклина сульфата гидрохлорида (485 мг, 0,83 ммоль) в 18 мл 0,1 н. соляной кислоты в метаноле добавляли 59 мг азида натрия. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем фильтровали и фильтрат вливали в 500 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 480 мг бежевого продукта.To a stirred solution of 9-diazonium-minocycline sulfate hydrochloride (485 mg, 0.83 mmol) in 18 ml of 0.1 N. hydrochloric acid in methanol was added 59 mg of sodium azide. The solution was stirred at room temperature for 2 hours, then filtered and the filtrate was poured into 500 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 480 mg of a beige product.
9-Ацетамидо-миноциклин9-Acetamido-minocycline
К перемешиваемому раствору 9-амино-миноциклина сульфата (100 мг, 0,175 ммоль) в 1,5 мл 1,3-диметил-2-имидазолидинона добавляли 100 мг бикарбоната натрия, затем 0,05 мл ацетилхлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут и затем вливали в 150 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 165 мг продукта.To a stirred solution of 9-amino-minocycline sulfate (100 mg, 0.175 mmol) in 1.5 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone was added 100 mg of sodium bicarbonate, followed by 0.05 ml of acetyl chloride. The mixture was stirred at room temperature for 45 minutes and then poured into 150 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 165 mg of product was obtained.
4-Дедиметиламино-миноциклин4-Dedimethylamino-minocycline
Миноциклина свободное основание (175 мг, 0,38 ммоль) растворяли в 2 мл ТГФ, затем добавляли 0,43 мл метилиодида. Кристаллизации продукта не наблюдалось. Реакционную смесь концентрировали и вливали в 200 мл смеси холодной смеси эфир/петролейный эфир (40:60) при перемешивании. Выделившийся продукт отфильтровывали и высушивали под вакуумом; продукт снова подвергали реакционным условиям еще в течение 3 дней, затем осаждали из эфира, как описано выше, и получали 123 мг миноциклина метилиодида. Неочищенный продукт растворяли в 2 мл уксусной кислоты и добавляли 2 мл воды и 60 мг цинковой пыли при перемешивании. Через 15 минут цинковый порошок отфильтровывали. Фильтрат разбавляли 15 мл воды, содержащей концентрированную соляную кислоту. Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом магния и концентрировали. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 150 мг желтого продукта.Minocycline free base (175 mg, 0.38 mmol) was dissolved in 2 ml THF, then 0.43 ml methyl iodide was added. Crystallization of the product was not observed. The reaction mixture was concentrated and poured into 200 ml of a cold mixture of ether / petroleum ether (40:60) with stirring. The separated product was filtered off and dried under vacuum; the product was again subjected to the reaction conditions for another 3 days, then precipitated from ether, as described above, and 123 mg minocycline methyl iodide was obtained. The crude product was dissolved in 2 ml of acetic acid and 2 ml of water and 60 mg of zinc dust were added with stirring. After 15 minutes, the zinc powder was filtered. The filtrate was diluted with 15 ml of water containing concentrated hydrochloric acid. The combined organic extracts were dried over magnesium sulfate and concentrated. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 150 mg of a yellow product.
4-Дедиметиламино-9-нитро-миноциклин4-Dedimethylamino-9-nitro-minocycline
4-Дедиметиламиноминоциклин (415 мг, 1 ммоль) растворяли в 30 мл концентрированной серной кислоты при комнатной температуре. Раствор охлаждали на ледяной бане и добавляли нитрат калия (110 мг, 1,09 ммоль) при перемешивании. Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут, затем вливали в 300 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным эфиром и высушивали под вакуумом. ЖХ/МС показала неполное превращение исходного материала, поэтому продукт снова растворяли в 15 мл концентрированной серной кислоты, добавляли 50 мг нитрата калия при 0°С и полученную смесь перемешивали в течение 45 минут. Продукт выделяли, как описано выше, и получали 542 мг продукта.4-Dedimethylaminominocycline (415 mg, 1 mmol) was dissolved in 30 ml of concentrated sulfuric acid at room temperature. The solution was cooled in an ice bath and potassium nitrate (110 mg, 1.09 mmol) was added with stirring. The resulting mixture was stirred for 15 minutes, then poured into 300 ml of cold ether with stirring. The separated solid was filtered off, washed with cold ether and dried under vacuum. LC / MS showed incomplete conversion of the starting material, so the product was again dissolved in 15 ml of concentrated sulfuric acid, 50 mg of potassium nitrate was added at 0 ° C, and the resulting mixture was stirred for 45 minutes. The product was isolated as described above and 542 mg of product was obtained.
7,9-Дибромсанциклин7,9-Dibromsancycline
К перемешиваемому раствору санциклина (50 мг, 0,12 ммоль) в 1,5 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли 42 мг N-бромсукцинимида. Через 30 минут реакционную смесь вливали в 60 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 70 мг желтого продукта.To a stirred solution of sancycline (50 mg, 0.12 mmol) in 1.5 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added 42 mg of N-bromosuccinimide. After 30 minutes, the reaction mixture was poured into 60 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried in vacuo to give 70 mg of a yellow product.
Смесь 7-нитро- и 9-нитро-санциклинаA mixture of 7-nitro and 9-nitro-sancycline
К перемешиваемому раствору санциклина (40 мг, 0,09 ммоль) в 1,5 мл концентрированной серной кислоты при 0°С добавляли 10 мг нитрата калия. Через 20 минут реакционную смесь вливали в 50 мл холодного эфира при перемешивании. Выделившееся твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом, и получали 59 мг продукта. ЖХ/МС демонстрирует два моно-нитрированных продукта в соотношении 1,6:1.To a stirred solution of sancycline (40 mg, 0.09 mmol) in 1.5 ml of concentrated sulfuric acid at 0 ° C was added 10 mg of potassium nitrate. After 20 minutes, the reaction mixture was poured into 50 ml of cold ether with stirring. The solid that separated was filtered out and dried under vacuum, and 59 mg of product was obtained. LC / MS shows two mono-nitrated products in a ratio of 1.6: 1.
При дополнительном тестировании настоящего изобретения оценивали Минимальные Ингибирующие Концентрации (МИК) пяти исследуемых продуктов при введении в организм десяти разных штаммов микроорганизмов. Исследование представляло собой определение МИК для пяти исследуемых продуктов, выполненное с использованием модификации Способа Макроразведений Бульона, изложенного в документе Национального комитета по Клиническим Лабораторным Стандартам США (NCCLS) M7-A5 (Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically, 5th Edition). Каждый исследуемый продукт оценивали в двойной повторности относительно провокационных суспензий десяти штаммов микроорганизмов. Перед тестированием каждого продукта его разбавляли (масса/объем) в стерильном бульоне Мюллера-Хинтона (МНВ от англ. Mueller-Hinton Broth) для достижения начальной концентрации 160 мкг/мл, основываясь на эффективности 1000 мкг/мг.With additional testing of the present invention, the Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) of the five test products were evaluated when ten different strains of microorganisms were introduced into the body. The study was a MIC determination for the five products tested using a modification of the Bouillon Macro-Dilution Method described in the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) M7-A5 (Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically, 5 th Edition ) Each test product was evaluated in duplicate relative to the provocative suspensions of ten strains of microorganisms. Before testing each product, it was diluted (mass / volume) in sterile Mueller-Hinton Broth (EOM from Mueller-Hinton Broth) to achieve an initial concentration of 160 μg / ml, based on an efficiency of 1000 μg / mg.
Приблизительно за 48 часов до тестирования отдельные стерильные пробирки с триптическим соевым бульоном (Tryptic Soy Broth) были инокулированы из виал, каждая из которых содержала лиофилизированные провокационные микроорганизмы, как указано в Таблице I ниже. Бульонные культуры инкубировали при 35±2°С в течение приблизительно 24 часов. Эти бульонные культуры, приготовленные, как описано выше, инокулировали на поверхность триптического соевого агара, содержащегося в чашках Петри, и инкубировали при 35±2°С в течение приблизительно 24 часов. Это приводило к образованию "газонов" микроорганизмов на поверхности чашек с агаром, которые использовали для приготовления провокационных суспензий.Approximately 48 hours prior to testing, individual sterile Tryptic Soy Broth tubes were inoculated from vials, each containing lyophilized, provocative microorganisms, as shown in Table I below. Bouillon cultures were incubated at 35 ± 2 ° C for approximately 24 hours. These broth cultures prepared as described above were inoculated onto the surface of tryptic soy agar contained in Petri dishes and incubated at 35 ± 2 ° C. for approximately 24 hours. This led to the formation of "lawns" of microorganisms on the surface of agar plates, which were used to prepare provocative suspensions.
До начала тестирования для каждого микроорганизма приготавливали исходную провокационную суспензию, содержащую приблизительно 1,0×109 КОЕ/мл, путем инокуляции тест-пробирки микроорганизмами, взятыми из чашек с твердой средой после орошения хлоридом натрия, приготовленных, как описано выше. Конечные провокационные суспензии, содержащие приблизительно 1,0×106 КОЕ/мл, приготавливали для каждого вида микроорганизмов, помещая аликвоту 0,2 мл суспензии с концентрацией 1,0×109 КОЕ/мл в стерильный полипропиленовый флакон объемом 250 мл, содержащий 200 мл бульона Мюллера-Хинтона. Конечные провокационные суспензии тщательно перемешивали перед тем, как использовать в тестировании. Конечные разведения на чашках составляли 10-3, 10-4 и 10-5. Эти чашки инкубировали при 35±2°С до тех пор, пока наблюдался достаточный рост (Таблица I).Prior to testing, an initial challenge suspension containing approximately 1.0 × 10 9 CFU / ml was prepared for each microorganism by inoculating a test tube with microorganisms taken from solid medium plates after irrigation with sodium chloride prepared as described above. Final provocative suspensions containing approximately 1.0 × 10 6 CFU / ml were prepared for each type of microorganism by placing an aliquot of 0.2 ml of a suspension with a concentration of 1.0 × 10 9 CFU / ml in a sterile 250 ml polypropylene bottle containing 200 ml of Muller-Hinton broth. Final provocative suspensions were thoroughly mixed before being used in testing. Final dilutions on plates were 10 -3 , 10 -4 and 10 -5 . These plates were incubated at 35 ± 2 ° C until sufficient growth was observed (Table I).
После инкубации колонии на чашках подсчитывали вручную, используя счетчик с ручным подсчетом (hand-tally). При расчете данных использовали подсчеты в диапазоне от 30 до 300 КОЕ.After incubation, colonies on plates were counted manually using a hand-tally counter. When calculating the data, calculations in the range from 30 to 300 CFU were used.
Исходную популяцию (КОЕ/мл) рассчитывали для каждой провокационной суспензии следующим образом:The initial population (CFU / ml) was calculated for each provocative suspension as follows:
КОЕ/мл=(Сi×10-D)CFU / ml = (C i × 10 -D )
где:Where:
Ci=Среднее для 2 подсчитанных чашекC i = Average for 2 counted cups
D=Фактор разведения использующихся для подсчета чашек.D = The dilution factor used to count the cups.
Популяцию (КОЕ/мл) в пробирке, содержащей продукт/бульон, рассчитывали после инокуляции для каждой провокационной суспензии следующим образом:The population (CFU / ml) in a tube containing the product / broth was calculated after inoculation for each challenge suspension as follows:
где:Where:
Ci=Среднее для двух (2) подсчитанных чашекC i = Average for two (2) counted cups
D=Фактор разведения использующихся для подсчета чашекD = Dilution factor used for counting cups
2=Общий объем (мл) в каждой пробирке, содержащей продукт/бульон, после инокуляции.2 = Total volume (ml) in each tube containing product / broth after inoculation.
Процедуру тестирования проводили следующим образом: аликвоты по 30 мл бульона Мюллера-Хинтона переносили в стерильные флаконы. Аликвоту продукта объемом 30 мл с исходной концентрацией 160 мкг/мл переносили в первый из 11 стерильных флаконов, каждый из которых содержит 30 мл бульона Мюллера-Хинтона, и тщательно перемешивали, для того чтобы получить разведение продукта 1:2 (об/об). Аликвоту 30 мл отбирали из флакона, приготовленного, как описано выше, и использовали для последовательных разведении 1:2 (об/об) в оставшихся 10 флаконах (разведения продукта - 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:1024 и 1:2048), каждый из которых содержит 30 мл бульона Мюллера-Хинтона. Каждый флакон тщательно перемешивали перед тем, как отобрать аликвоту 30 мл, необходимую для следующего в этой последовательности разведения. Аликвоты по 1,0 мл из каждого приготовленного разведения продукта и аликвоты по 1,0 мл из исходного препарата продукта (концентрация продукта 160 мкг/мл) переносили в отдельные стерильные тест-пробирки. Для каждого микроорганизма, оцениваемого относительно каждого продукта, приготавливали серию из 12 пробирок, каждая из которых содержит 1,0 мл соответствующего разведения продукта (1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:1024 и 1:2048) (Таблица I). Эта процедура давала в итоге концентрации продукта, варьирующие от 160 мкг/мл до 0,078 мкг/мл.The testing procedure was carried out as follows: aliquots of 30 ml of Mueller-Hinton broth were transferred into sterile vials. An aliquot of the product with a volume of 30 ml with an initial concentration of 160 μg / ml was transferred into the first of 11 sterile vials, each of which contains 30 ml of Muller-Hinton broth, and mixed thoroughly in order to obtain a 1: 2 dilution of the product (v / v). An aliquot of 30 ml was taken from a vial prepared as described above and used for serial dilutions of 1: 2 (v / v) in the remaining 10 vials (product dilutions - 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32, 1:64, 1: 128, 1: 256, 1: 512, 1: 1024 and 1: 2048), each of which contains 30 ml of Mueller-Hinton broth. Each vial was thoroughly mixed before taking an aliquot of 30 ml needed for the next dilution in this sequence. Aliquots of 1.0 ml from each prepared dilution of the product and aliquots of 1.0 ml from the starting product preparation (product concentration 160 μg / ml) were transferred to separate sterile test tubes. For each microorganism evaluated relative to each product, a series of 12 tubes was prepared, each containing 1.0 ml of the corresponding dilution of the product (1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32 , 1:64, 1: 128, 1: 256, 1: 512, 1: 1024 and 1: 2048) (Table I). This procedure resulted in product concentrations ranging from 160 μg / ml to 0.078 μg / ml.
Аликвоту суспензии 1,0 мл, содержащую приблизительно 1,0×106 КОЕ/мл, вносили в каждую пробирку для разведения продукта в этой серии, получая таким образом конечную последовательность разведении продукта 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:1024, 1:2048 и 1:4096, с каждой пробиркой для разведения, содержащей приблизительно 5,0×105 КОЕ/мл провокационного микроорганизма. Это давало конечные концентрации продукта, варьирующие от 80 мкг/мл до 0,039 мкг/мл. Описанную выше процедуру тестирования выполняли в двойных повторностях для каждого тестируемого вида микроорганизма (Таблица I) относительно каждого исследуемого продукта. Для каждого микроорганизма приготавливали положительную контрольную пробирку (контроль роста), содержащую аликвоту 1,0 мл бульона Мюллера-Хинтона и аликвоту 1,0 мл провокационной суспензии (Таблица I). Приготавливали также отрицательную (среда) контрольную пробирку (контроль стерильности; без инокуляции микробов) с бульоном Мюллера-Хинтона.An aliquot of a 1.0 ml suspension containing approximately 1.0 × 10 6 CFU / ml was added to each tube to dilute the product in this series, thereby obtaining the final dilution sequence of the product 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1 : 16, 1:32, 1:64, 1: 128, 1: 256, 1: 512, 1: 1024, 1: 2048 and 1: 4096, with each dilution tube containing approximately 5.0 × 10 5 CFU / ml provocative microorganism. This gave final product concentrations ranging from 80 μg / ml to 0.039 μg / ml. The test procedure described above was performed in duplicate for each type of microorganism tested (Table I) relative to each test product. For each microorganism, a positive control tube (growth control) was prepared containing an aliquot of 1.0 ml of Mueller-Hinton broth and an aliquot of 1.0 ml of provocative suspension (Table I). A negative (medium) control tube was also prepared (sterility control; without inoculation of microbes) with Müller-Hinton broth.
Контроли плотности продукта приготавливали для каждого продукта путем переноса аликвот по 1,0 мл из каждого разведения продукта в отдельные стерильные тест-пробирки. Аликвоту 1,0 мл стерильного бульона Мюллера-Хинтона вносили в каждую из полученных пробирок для разведения продукта и тщательно перемешивали, используя вихревой смеситель и получая, таким образом, конечную последовательность разведений продукта, идентичную той, что описана выше. Пробирки, содержащие провокационную суспензию/разведение продукта, и контроли инкубировали при 35±2°С в течение 20 часов, до тех пор, пока в положительных контрольных пробирках наблюдался хороший рост.Product density controls were prepared for each product by transferring 1.0 ml aliquots from each dilution of the product into separate sterile test tubes. An aliquot of 1.0 ml of Müller-Hinton sterile broth was added to each of the obtained dilution tubes and mixed thoroughly using a vortex mixer, thereby obtaining the final dilution sequence of the product identical to that described above. Tubes containing a challenge suspension / dilution of the product and controls were incubated at 35 ± 2 ° C for 20 hours until good growth was observed in the positive control tubes.
После инкубации пробирки проверяли на рост микроорганизмов, определяемый визуально на основании плотности.After incubation, the tubes were checked for growth of microorganisms, determined visually based on density.
Минимальная Ингибирующая Концентрация (МИК) для каждого исследуемого продукта в зависимости от каждого провокационного микроорганизма регистрировалась как наибольшее разведение исследуемого продукта, которое полностью ингибировало рост этого микроорганизма, что определялось невооруженным глазом. Результаты дублированных измерений для каждого исследуемого продукта в зависимости от каждого микроорганизма регистрировали и затем усредняли одновременно с получением конечных представленных значений.The minimum Inhibitory Concentration (MIC) for each test product, depending on each provocative microorganism, was recorded as the largest dilution of the test product, which completely inhibited the growth of this microorganism, which was determined with the naked eye. The results of duplicate measurements for each test product depending on each microorganism were recorded and then averaged simultaneously with obtaining the final presented values.
Таблица II представляет Минимальные Ингибирующие Концентрации, выраженные как разведение продукта для каждого исследуемого продукта в отношении каждого из 10 тестируемых микроорганизмов. Таблица III представляет Минимальные Ингибирующие Концентрации, выраженные как концентрация продукта (мкг/мл) для каждого исследуемого продукта в отношении каждого из 10 тестируемых микроорганизмов. Исходный раствор, приготовленный для каждого продукта, имел концентрацию 160 мкг/мл, основанную на эффективности 1000 мкг/мл.Table II presents the Minimum Inhibitory Concentrations expressed as the dilution of the product for each test product for each of the 10 tested microorganisms. Table III presents the Minimum Inhibitory Concentrations expressed as the concentration of the product (μg / ml) for each test product for each of the 10 test microorganisms. The stock solution prepared for each product had a concentration of 160 μg / ml based on an efficiency of 1000 μg / ml.
В дополнительных исследованиях изучали активность производных тетрациклина по настоящему изобретению в качестве ингибиторов матрикс-разрушающих металлопротеиназ (ММР), которые вовлекаются в злокачественный опухолевый рост и метастазы. В этих исследованиях использовали опухолевую модель Dunning MAT LyLu, которая развивалась в крысах Copenhagen из трансплантируемой опухоли, перенесенной из первичной опухоли простаты из дорзальной простаты старых самцов крыс Copenhagen. Опухоль MAT LyLu является спонтанно метастазирующей в лимфатические узлы и легкие при инъекции и дает метастазы в кости приблизительно у 80-100% реципиентных животных. Свежие дозированные растворы, содержащие 10 мг/мл каждого исследуемого вещества в 2%-ной карбоксиметилцеллюлозе, приготавливали ежедневно и использовали при тестировании.Additional studies examined the activity of the tetracycline derivatives of the present invention as inhibitors of matrix-degrading metalloproteinases (MMPs) that are involved in malignant tumor growth and metastases. These studies used the Dunning MAT LyLu tumor model, which developed in Copenhagen rats from a transplanted tumor transferred from a primary prostate tumor from the dorsal prostate of old male Copenhagen rats. Tumor MAT LyLu is spontaneously metastatic to the lymph nodes and lungs upon injection and produces bone metastases in approximately 80-100% of the recipient animals. Fresh dosed solutions containing 10 mg / ml of each test substance in 2% carboxymethyl cellulose were prepared daily and used in testing.
Сначала в исследованиях оценивали токсичность в двух группах из пяти не несущих опухоль животных, каждое из которых получало два аналога тетрациклина (9-амино-доксициклин и 9-нитро-доксициклин) в дозе 40 мг/кг ежедневно в течение семи дней.Initially, studies evaluated toxicity in two groups of five non-tumor-bearing animals, each of which received two tetracycline analogues (9-amino-doxycycline and 9-nitro-doxycycline) at a dose of 40 mg / kg daily for seven days.
Трем группам животных (10/группу) вводили либо носитель, либо один из двух аналогов ежедневно в течение трех недель и затем трижды в неделю до смерти или до забоя. Введение доз начинали за семь дней до имплантации опухолевых клеток MAT LyLu инъекцией в хвостовую вену. Приблизительно 0,1 мл суспензии опухолевых клеток инъецировали в одну из боковых хвостовых вен. Доза, которую нужно выбрать, основывалась на двух факторах: (1) эффективности и (2) заболеваемости, связанной с введением аналога, если таковая имеется. Следующая таблица (Таблица IV ниже) демонстрирует время жизни и еженедельный вес тела животных в контрольных и обработанных группах. Как показано в Таблице, 9-амино-доксициклин и 9-нитро-доксициклин продемонстрировали значительное увеличение коэффициента выживания после опухолевой имплантации, хотя и дающее лишь незначительные изменения в весе тела, по сравнению с контрольной группой. Это последнее открытие является особенно важным, так как обычные способы лечения рака часто приводят к значительной потере веса.Three groups of animals (10 / group) were administered either a vehicle or one of two analogues daily for three weeks and then three times a week until death or before slaughter. Dosing was started seven days before the implantation of tumor cells of MAT LyLu by injection into the tail vein. Approximately 0.1 ml of a suspension of tumor cells was injected into one of the lateral caudal veins. The dose to be selected was based on two factors: (1) the effectiveness and (2) the incidence associated with the administration of the analogue, if any. The following table (Table IV below) shows the lifetime and weekly body weight of animals in the control and treated groups. As shown in the Table, 9-amino-doxycycline and 9-nitro-doxycycline showed a significant increase in the survival rate after tumor implantation, although giving only slight changes in body weight compared to the control group. This latest finding is especially important since conventional cancer treatments often result in significant weight loss.
В дополнительных исследованиях оценивали ингибирующую активность ММР, а также процентное ингибирование разных злокачественных опухолей различными производными тетрациклина. Результаты представлены в Таблице V ниже и демонстрируют эффективность способов лечения по настоящему изобретению. Одна цель исследований состояла в том, чтобы оценить ряд производных тетрациклина в качестве ингибиторов очищенных матриксных металлопротеиназ человека, включая ММР1, 2, 3, 7, 9 и 14. Производные тетрациклина были эффективными ингибиторами в диапазоне от мМ до мкМ.Additional studies evaluated the inhibitory activity of MMP, as well as the percentage inhibition of various malignant tumors by various tetracycline derivatives. The results are presented in Table V below and demonstrate the effectiveness of the treatment methods of the present invention. One research objective was to evaluate a number of tetracycline derivatives as inhibitors of purified human matrix metalloproteinases, including MMP1, 2, 3, 7, 9, and 14. The tetracycline derivatives were effective inhibitors in the range from mM to μM.
ПРОТОКОЛЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВEXPERIMENTAL PROTOCOLS
1. Протокол измерения ингибирования ММР1 (коллагеназы-1) производными тетрациклина1. Protocol for measuring the inhibition of MMP1 (collagenase-1) derivatives of tetracycline
Активность ММР1 определяли по высвобождению растворимых 14С-меченых фрагментов коллагена из 14С-ацетилированного коллагена I типа из кожи крысы (Methods in Enzymology 80, 711, 1981).MMP1 activity was determined by the release of soluble 14 C-labeled collagen fragments from 14 C-acetylated type I collagen from rat skin (Methods in Enzymology 80, 711, 1981).
Составляющие анализа:Analysis components:
100 мкг 14С-меченного коллагена I типа из кожи крысы (5-6000 dpm)100 mcg of 14 C-labeled collagen type I from rat skin (5-6000 dpm)
50 мМ Трис-HCl, рН 7,950 mM Tris-HCl, pH 7.9
15 мМ CaCl2, 0,02% азида15 mM CaCl 2 , 0.02% azide
Рекомбинантная ММР1 человека, 3-4 нМRecombinant human MMP1, 3-4 nM
± Тетрациклин (до 1 мМ) в общем объеме 300 мкл.± Tetracycline (up to 1 mM) in a total volume of 300 μl.
Инкубации проводили при 35°С в течение 5 часов. Нерасщепленные фибриллы коллагена, которые образуются в течение первых 10 минут, удаляли центрифугированием при 10000 g, 4°С, 10 минут. 200 мкл супернатанта просчитывали в Packard Opti Phase Supermix сцинтилляционной жидкости с помощью сцинтилляционного счетчика. Использовали только данные, полученные в пределах линейной части анализа (10-70% лизиса коллагена). На основании процентного ингибирования активности только ММР1 диапазоном концентраций каждого образца рассчитывали величину IC50 для каждого тетрациклина с помощью линейного регрессивного анализа.Incubations were carried out at 35 ° C for 5 hours. The unsplit collagen fibrils that form during the first 10 minutes were removed by centrifugation at 10,000 g, 4 ° C, 10 minutes. 200 μl of the supernatant was counted in a Packard Opti Phase Supermix scintillation fluid using a scintillation counter. Only the data obtained within the linear part of the analysis (10-70% collagen lysis) were used. Based on the percent inhibition of MMP1 activity alone, the concentration range of each sample calculated the IC 50 value for each tetracycline using linear regression analysis.
2. Протокол измерения ингибирования ММР2 (желатиназы А)2. Protocol for measuring the inhibition of MMP2 (gelatinase A)
Активность ММР2 определяли по высвобождению ТХУ (трихлоруксусная кислота)-растворимых фрагментов из 14С-ацетилированного желатина I типа из кожи крысы (Methods in Emymology 248, 470, 1995; Biochem. J. 195. 1981)MMP2 activity was determined by the release of TCA (trichloroacetic acid) -soluble fragments from 14 C-acetylated type I gelatin from rat skin (Methods in Emymology 248, 470, 1995; Biochem. J. 195. 1981)
Составляющие анализа:Analysis components:
100 мкг 14С-меченного желатина (коллагена I типа, денатурированного при 60°С в течение 20 мин)100 μg of 14 C-labeled gelatin (type I collagen denatured at 60 ° C for 20 min)
50 мМ Трис-HCl, рН 7,950 mM Tris-HCl, pH 7.9
15 мМ CaCl2, 0,02% азида15 mM CaCl 2 , 0.02% azide
Рекомбинантная ММР1 человека, 0,1-0,5 нМRecombinant human MMP1, 0.1-0.5 nM
± Тетрациклин (до 1 MM) в общем объеме 250 мкл.± Tetracycline (up to 1 MM) in a total volume of 250 μl.
Инкубации проводили при 37°С в течение 16 часов. Реакцию останавливали охлаждением инкубации и добавлением 50 мкл холодной 90% (масса/объем) трихлоруксусной кислоты при осторожном перемешивании. ТХУ-преципитацию продолжали в течение 15 минут при 4°С перед центрифугированием при 10000 g в течение 10 минут при 4°С. 200 мкл ТХУ-супернатанта брали для определения содержания радиоактивности с помощью сцинтилляционного счетчика (сцинтилляционная жидкость Packard Opti Phase Supermix). Использовали только данные, полученные в пределах линейной части анализа (10-70% лизиса). Процентное ингибирование ММР2 каждой концентрацией тетрациклина наносили на график, для того чтобы получить величину IC50, используя линейный регрессивный анализ.Incubations were performed at 37 ° C for 16 hours. The reaction was stopped by cooling the incubation and adding 50 μl of cold 90% (w / v) trichloroacetic acid with gentle stirring. TCA precipitation was continued for 15 minutes at 4 ° C before centrifugation at 10,000 g for 10 minutes at 4 ° C. 200 μl of TCA supernatant was taken to determine the radioactivity content using a scintillation counter (Packard Opti Phase Supermix scintillation fluid). Only the data obtained within the linear part of the analysis (10-70% lysis) were used. Percent inhibition of MMP2 by each tetracycline concentration was plotted in order to obtain an IC 50 value using linear regression analysis.
3. Протокол измерения ингибирования ММРЗ (стромелизина 1)3. Protocol for the measurement of inhibition of MMRP (stromelysin 1)
Активность ММР3 определяли по высвобождению ТХУ-растворимых фрагментов из 14С-ацетилированного β-казеина (Sigma), как описано в Methods in Enzymology 248, 451 (1995).MMP3 activity was determined by the release of TCA-soluble fragments from 14 C-acetylated β-casein (Sigma), as described in Methods in Enzymology 248, 451 (1995).
Составляющие анализа:Analysis components:
100 мкг 14С-казеина (7000 dpm)100 mcg 14 C-Casein (7000 dpm)
50 мМ Трис-HCl, рН 7,950 mM Tris-HCl, pH 7.9
15 мМ CaCl2, 0,02% азида15 mM CaCl 2 , 0.02% azide
Рекомбинантная ММР3 человека, 0,25-1,0 нМRecombinant human MMP3, 0.25-1.0 nM
±тетрациклин (до 1 мМ) в общем объеме 250 мкл.± tetracycline (up to 1 mM) in a total volume of 250 μl.
Инкубации проводили при 37°С в течение 16 часов. Реакцию останавливали добавлением 500 мкл холодной 18%-ной ТХУ и выдерживанием на льду в течение 15 минут. ТХУ-преципитаты удаляли центрифугированием при 10000 g в течение 10 минут при 4°С, и 200 мкл супернатанта брали для сцинтилляционного подсчета. Использовали только данные, полученные в пределах линейной части анализа (10-60% лизиса). Процентное ингибирование ММР3 каждой концентрацией тетрациклина-кандидата наносили на график, для того чтобы получить величину IC50, используя линейный регрессивный анализ.Incubations were performed at 37 ° C for 16 hours. The reaction was stopped by adding 500 μl of cold 18% TCA and keeping on ice for 15 minutes. TCA precipitates were removed by centrifugation at 10,000 g for 10 minutes at 4 ° C, and 200 μl of the supernatant was taken for scintillation counting. Used only data obtained within the linear part of the analysis (10-60% lysis). Percent inhibition of MMP3 by each concentration of candidate tetracycline was plotted in order to obtain an IC 50 value using linear regression analysis.
4. Протокол измерения ингибирования ММР7 (матрилизина)4. Protocol for measuring inhibition of MMP7 (matrilysin)
Активность ММР7 определяли по высвобождению ТХУ-растворимых фрагментов из 14С ацетилированного β-казеина (Sigma), как описано в Methods in Enzymology 248, 451 (1995).MMP7 activity was determined by the release of TCA-soluble fragments from 14 C acetylated β-casein (Sigma), as described in Methods in Enzymology 248, 451 (1995).
Составляющие анализа:Analysis components:
100 мкг 14С-казеина (7000 dpm)100 mcg 14 C-Casein (7000 dpm)
50 мМ Трис-HCl, рН 7,950 mM Tris-HCl, pH 7.9
15 мМ CaCl2, 0,02% азида15 mM CaCl 2 , 0.02% azide
Рекомбинантная ММР7 человека, 1,5 нМRecombinant human MMP7, 1.5 nM
± тетрациклин (до 1 мМ) в общем объеме 250 мкл.± tetracycline (up to 1 mM) in a total volume of 250 μl.
Инкубации проводили при 37°С в течение 16 часов. Инкубацию останавливали добавлением 500 мкл холодной 18%-ной ТХУ и выдерживанием на льду в течение 15 минут. ТХУ-преципитаты удаляли центрифугированием при 10000 g в течение 10 минут при 4°С, и 200 мкл супернатанта брали для сцинтилляционного подсчета. Использовали только данные, полученные в пределах линейной части анализа (10-60% лизиса). Процентное ингибирование ММР7 каждой концентрацией тетрациклина-кандидата наносили на график, для того чтобы получить величину IC50.Incubations were performed at 37 ° C for 16 hours. Incubation was stopped by adding 500 μl of cold 18% TCA and keeping on ice for 15 minutes. TCA precipitates were removed by centrifugation at 10,000 g for 10 minutes at 4 ° C, and 200 μl of the supernatant was taken for scintillation counting. Used only data obtained within the linear part of the analysis (10-60% lysis). Percent inhibition of MMP7 by each concentration of candidate tetracycline was plotted in order to obtain an IC 50 value.
5. Протокол измерения ингибирования ММР9 (желатиназы В)5. Protocol for measuring the inhibition of MMP9 (gelatinase B)
Активность ММР9 определяли по высвобождению ТХУ-растворимых фрагментов из 14С-ацетилированного коллагена I типа из кожи крысы (Methods in Enzymology 248, 470, 1995; Biochem. J. 195, 1981)MMP9 activity was determined by the release of TCA-soluble fragments from 14 C-acetylated type I collagen from rat skin (Methods in Enzymology 248, 470, 1995; Biochem. J. 195, 1981)
Составляющие анализа:Analysis components:
100 мкг 14С-меченного желатина (коллагена, денатурированного при 60°С в течение 20 мин)100 μg of 14 C-labeled gelatin (collagen denatured at 60 ° C for 20 min)
50 мМ Трис-HCl, рН 7,950 mM Tris-HCl, pH 7.9
15 мМ CaCl2, 0,02% азида15 mM CaCl 2 , 0.02% azide
Рекомбинантная ММР9 человека, 1,2-2 нМRecombinant human MMP9, 1.2-2 nM
±Тетрациклин (до 1 мМ) в общем объеме 250 мкл.± Tetracycline (up to 1 mM) in a total volume of 250 μl.
Инкубации проводили при 37°С в течение 16 часов. Инкубации останавливали охлаждением инкубации и добавлением 50 мкл холодной 90%-ной (масса/объем) трихлоруксусной кислоты при осторожном перемешивании. ТХУ-преципитацию продолжали в течение 15 минут при 4°С перед центрифугированием при 10000 g в течение 10 минут при 4°С. 200 мкл ТХУ-супернатанта брали для определения содержания радиоактивности с помощью сцинтилляционного счетчика (сцинтилляционная жидкость Packard Opti Phase Supermix). Использовали только данные, полученные в пределах линейной части анализа (10-70% лизиса). Процентное ингибирование ММР9 каждой концентрацией тетрациклина наносили на график, для того чтобы получить величину IC50.Incubations were performed at 37 ° C for 16 hours. The incubations were stopped by cooling the incubation and adding 50 μl of cold 90% (w / v) trichloroacetic acid with gentle stirring. TCA precipitation was continued for 15 minutes at 4 ° C before centrifugation at 10,000 g for 10 minutes at 4 ° C. 200 μl of TCA supernatant was taken to determine the radioactivity content using a scintillation counter (Packard Opti Phase Supermix scintillation fluid). Only the data obtained within the linear part of the analysis (10-70% lysis) were used. Percent inhibition of MMP9 by each tetracycline concentration was plotted in order to obtain an IC 50 value.
6. Протокол измерения ингибирования ММР14 (MTI-MMP) производными тетрациклина6. Protocol for the measurement of inhibition of MMP14 (MTI-MMP) derivatives of tetracycline
Активность ММР14 определяли по высвобождению растворимых 14С-меченых фрагментов коллагена из 14С-ацетилированного коллагена I типа из кожи крысы (Methods in Emymology 80, 711, 1981).MMP14 activity was determined by the release of soluble 14 C-labeled collagen fragments from 14 C-acetylated type I collagen from rat skin (Methods in Emymology 80, 711, 1981).
Составляющие анализа:Analysis components:
100 мкг 14С-меченого коллагена (5-6000 dpm)100 mcg of 14 C-labeled collagen (5-6000 dpm)
50 мМ Трис-HCl, рН 7,950 mM Tris-HCl, pH 7.9
15 мМ CaCl2 0,02% азида15 mM CaCl 2 0.02% azide
Человеческий рекомбинантный ММР14 50-100 нМHuman recombinant MMP14 50-100 nm
± Тетрациклин (до 1 мМ) в общем объеме 300 мкл.± Tetracycline (up to 1 mM) in a total volume of 300 μl.
Инкубации проводили при 35°С в течение 15 часов. Нерасщепленные фибриллы коллагена, которые образуются в течение первых 10 минут, удаляли центрифугированием при 10000 g, 4°С, 10 минут. 200 мкл супернатанта просчитывали в сцинтилляционной жидкости Packard Opti Phase Supermix с помощью сцинтилляционного счетчика. Использовали только данные, полученные в пределах линейной части анализа (10-70% лизиса коллагена). На основании процентного ингибирования активности только ММР1 диапазоном концентраций каждого образца рассчитывали величину IC50 для каждого тетрациклина.Incubations were carried out at 35 ° C for 15 hours. The unsplit collagen fibrils that form during the first 10 minutes were removed by centrifugation at 10,000 g, 4 ° C, 10 minutes. 200 μl of the supernatant was counted in Packard Opti Phase Supermix scintillation fluid using a scintillation counter. Only the data obtained within the linear part of the analysis (10-70% collagen lysis) were used. Based on the percent inhibition of MMP1 activity alone, the IC 50 value for each tetracycline was calculated by the concentration range of each sample.
Другая цель состояла в том, чтобы проанализировать in vitro эффекты специфических, тетрациклин-производных соединений на хемоинвазивный потенциал следующих клеточных линий:Another goal was to analyze in vitro the effects of specific, tetracycline-derived compounds on the chemo-invasive potential of the following cell lines:
С8161, клетки меланомы человекаC8161, human melanoma cells
MDA-MB-231, клетки рака молочной железы человекаMDA-MB-231, human breast cancer cells
РС3, клетки рака простаты человекаPC3, human prostate cancer cells
RPMI-8226, клетки миеломы человекаRPMI-8226, human myeloma cells
Ark, клетки миеломы человекаArk, human myeloma cells
Arp-1, клетки миеломы человекаArp-1, human myeloma cells
Хемоинвазивный анализ in vitro с мембранной инвазивной культуральной системы (МИКС) был выбран, для того чтобы измерить изменения в инвазивном потенциале специфических раковых клеток человека в ответ на тетрациклин-производные соединения. Маточные растворы каждого соединения гидратировали в воде, содержащей 2% ДМСО, с рН 10,0. После солюбилизации к раствору добавляли HCl для установления рН 7,5-8,0. Затем этот раствор заворачивали в фольгу и хранили при 4°С в течение 24 часов анализа. Для каждого анализа приготавливали свежее соединение. Анализы по хемоинвазии in vitro для определения инвазивности опухолевых клеток выполняют с помощью мембранной инвазивной культуральной системы (МИКС), как описано ранее.An in vitro chemoinvasive assay with a membrane invasive culture system (MICS) was chosen to measure changes in the invasive potential of specific human cancer cells in response to tetracycline-derived compounds. Stock solutions of each compound were hydrated in water containing 2% DMSO, with a pH of 10.0. After solubilization, HCl was added to the solution to establish a pH of 7.5-8.0. Then this solution was wrapped in foil and stored at 4 ° C for 24 hours of analysis. A fresh compound was prepared for each analysis. In vitro chemoinvasion assays to determine tumor cell invasiveness are performed using a membrane invasive culture system (MICS) as previously described.
МИКС-система представляет собой термически обработанную пластиковую разветвленную (коллекторную) систему, состоящую из двух подогнанных комплектов чашек, содержащих четырнадцать лунок с диаметром 13 мм. Между этими чашками был размещен поликарбонатный фильтр, содержащий 10 мкм поры и покрытый определенным матриксом, состоящим из человеческого ламинина, коллагена IV, желатина, образующих барьер толщиной 35 мкм между верхней и нижней частями лунок в МИКС. До помещения этого барьера на место нижние лунки заполняли бессывороточной культуральной средой RPMI, сделанной на 50% из кондиционированной среды, полученной от 2-дневных культур фибробластов человека, которая была очищена от клеток и клеточного дебриса либо центрифугированием, либо фильтрацией через 0,45 мкм стерильный фильтр. Затем в нижние лунки помещали барьер, и после сборки системы в верхние лунки добавляли свежую бессывороточную среду. Затем в лунки добавляли пятьдесят тысяч опухолевых клеток либо в присутствии соединения, либо в присутствии носителя ДМСО (контроли). Из 12 аналитических лунок в каждом коллекторе 3 случайным образом выбранные лунки служили в качестве контролей, 3 лунки содержали 1 мкг/мл соединения, 3 лунки - 10 мкг/мл и 3 лунки - 25 мкг/мл. Через 24 часа из нижних лунок удаляли клетки и среду и заменяли фосфатно-солевым буфером плюс 2 мМ ЭДТА. Этот раствор использовали для удаления всех клеток из нижней лунки, и эту промывку добавляли к полученным клеткам плюс среда из той же лунки. Эти образцы затем собирали на полилизин-содержащую поликарбонатную мембрану, содержащую 3 мкм поры, используя дот-блот коллекторную систему. Эти коллектор-фильтры затем фиксировали в метаноле и окрашивали in situ с помощью красителя Райта (набор для окрашивания Leukostat). Затем фильтры помещали на предметные стекла для микроскопа с иммерсионным маслом для микроскопии, которое уменьшало преломление света от пор, и просчитывали 5 микроскопических полей для расчета количества клеток, которые проникли через мембрану в течение 24 часов. Эти числа затем статистически анализировали, как описано ниже.The MIX system is a thermally processed plastic branched (collector) system consisting of two fitted sets of cups containing fourteen holes with a diameter of 13 mm. A polycarbonate filter containing 10 μm pores and coated with a specific matrix consisting of human laminin, collagen IV, gelatin, forming a 35 μm thick barrier between the upper and lower parts of the wells in the MICS, was placed between these cups. Prior to placing this barrier in place, the lower wells were filled with serum-free RPMI culture medium made from 50% conditioned medium obtained from 2-day-old human fibroblast cultures, which was purified from cells and cell debris either by centrifugation or filtration through 0.45 μm sterile filter. A barrier was then placed in the lower wells, and after assembly of the system, fresh serum-free medium was added to the upper wells. Fifty thousand tumor cells were then added to the wells, either in the presence of a compound or in the presence of a DMSO vehicle (controls). Of the 12 assay wells in each collector, 3 randomly selected wells served as controls, 3 wells contained 1 μg / ml of the compound, 3 wells 10 μg / ml and 3 wells 25 μg / ml. After 24 hours, cells and medium were removed from the lower wells and replaced with phosphate-buffered saline plus 2 mM EDTA. This solution was used to remove all cells from the lower well, and this washing was added to the obtained cells plus medium from the same well. These samples were then collected on a polylysine-containing polycarbonate membrane containing 3 μm pores using a dot blot collector system. These collector filters were then fixed in methanol and stained in situ with Wright's dye (Leukostat staining kit). Then the filters were placed on microscope slides with immersion oil for microscopy, which reduced the refraction of light from pores, and 5 microscopic fields were counted to calculate the number of cells that penetrated the membrane within 24 hours. These numbers were then statistically analyzed as described below.
Ключ к Таблице V:Key to Table V:
Соединение ВеществоCompound Substance
1: 9-Нитро-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 1: 9-Nitro-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
2: 9-Амино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 2: 9-amino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
3: 9-Изопропиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 3: 9-Isopropylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
4: 7-Диметиламино-6-деметил-6-дезокси-9-нитротетрациклин H2SO4 4: 7-Dimethylamino-6-demethyl-6-deoxy-9-nitrotetracycline H 2 SO 4
5: То же, что и 25: Same as 2
6: 9-Азидо-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 6: 9-Azido-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
7: 9-Амино-7-диметиламино-6-деметил-6-дезокситетрациклин H2SO4 7: 9-amino-7-dimethylamino-6-demethyl-6-deoxytetracycline H 2 SO 4
8: 9-Ацетамидо-7-диметиламино-6-деметил-6-дезокситетрациклин H2SO4 8: 9-Acetamido-7-dimethylamino-6-demethyl-6-deoxytetracycline H 2 SO 4
9: 7-Диметиламино-6-деметил-6-дезокситетрациклин-9-диазоний H2SO4 HCl9: 7-Dimethylamino-6-demethyl-6-deoxytetracycline-9-diazonium H 2 SO 4 HCl
10: 9-Азидо-7-деметиламино-6-деметил-6-дезокситетрациклин H2SO4 10: 9-Azido-7-demethylamino-6-demethyl-6-deoxytetracycline H 2 SO 4
11: 6-Дезокси-5-гидрокситетрациклин-9-диазоний H2SO4 11: 6-Deoxy-5-hydroxytetracycline-9-diazonium H 2 SO 4
12: 7-Амино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 12: 7-amino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
13: 7,9-Дибром-6-деметил-6-дезокситетрациклин H2SO4 13: 7,9-Dibromo-6-demethyl-6-deoxytetracycline H 2 SO 4
14: 7-Амино-6-дезокси-5-гидрокси-9-нитротетрациклин H2SO4 14: 7-amino-6-deoxy-5-hydroxy-9-nitrotetracycline H 2 SO 4
15: 7-Диметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 15: 7-Dimethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
16: 9-Ацетамидо-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 16: 9-Acetamido-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
17: 7-Ди-н-Бутиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 17: 7-Di-n-Butylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
18: 7-Ди-н-Гексиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 18: 7-Di-n-Hexylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
19: 7-Ди-(3,3-диметилбутил)амино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 19: 7-Di- (3,3-dimethylbutyl) amino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
20: 7-Азидо-6-дезокси-5-гидрокси-тетрациклин H2SO4 20: 7-Azido-6-deoxy-5-hydroxy-tetracycline H 2 SO 4
21: 6-Дезокси-5-гидрокситетрациклин-7-диазоний H2SO4 21: 6-Deoxy-5-hydroxytetracycline-7-diazonium H 2 SO 4
22: 7-Ацетамидо-9-нитро-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 22: 7-Acetamido-9-nitro-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
23: 7-Ацетамидо-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 23: 7-Acetamido-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
24: 7-Ди-н-пропиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 24: 7-Di-n-propylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
25: 7-Изобутиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 25: 7-Isobutylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
26: 7-Ацетамидо-9-амино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 26: 7-Acetamido-9-amino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
27: 7-Изобутилметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 27: 7-Isobutylmethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
28: 6-Дезокси-5-ацетокси-тетрациклин H2SO4 28: 6-Deoxy-5-acetoxy-tetracycline H 2 SO 4
29: 7-Ацетилизобутиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 29: 7-Acetylisobutylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
30: 7-Ацетамидо-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин-9-диазоний H2SO4 30: 7-Acetamido-6-deoxy-5-hydroxytetracycline-9-diazonium H 2 SO 4
31: 7-Диметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин-9-диазоний H2SO4 31: 7-Dimethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline-9-diazonium H 2 SO 4
32: 7-Цикпобутиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 32: 7-cyclobutylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
33: 7-Циклобутилметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 33: 7-Cyclobutylmethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
34: 4-Дедиметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин34: 4-Dedimethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline
35: 4-Дедиметиламино-6-дезокси-5-гидрокси-9-нитротетрациклин35: 4-Dedimethylamino-6-deoxy-5-hydroxy-9-nitrotetracycline
36: 9-Амино-4-дедиметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклинсульфат36: 9-amino-4-demethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline sulfate
37: 4-Дедиметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин-9-диазонийсульфат37: 4-Dedimethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline-9-diazonium sulfate
38: 7-Нитро-9-трет-бутил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 38: 7-Nitro-9-tert-butyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
39: 9-трет-Бутил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 39: 9-tert-Butyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
40: 7-Нитро-9-трет-бутил-4-дедиметиламино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 40: 7-Nitro-9-tert-butyl-4-demethylamino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
41: 4-Дедиметиламино-7-диметиламино-6-деметил-6-дезокситетрациклин H2SO4 41: 4-Dedimethylamino-7-dimethylamino-6-demethyl-6-deoxytetracycline H 2 SO 4
42: 7-Ацетиламино-9-азидо-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин42: 7-Acetylamino-9-azido-6-deoxy-5-hydroxytetracycline
43: 9-трет-Бутил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин-7-диазоний H2SO4 43: 9-tert-Butyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline-7-diazonium H 2 SO 4
44: 7-Амино-9-трет-бутил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 44: 7-amino-9-tert-butyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
45: 7-Азидо-9-трет-бутил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 45: 7-Azido-9-tert-butyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
46: 6-Дезокси-5-гидрокситетрациклин-4-метилиодид46: 6-Deoxy-5-hydroxytetracycline-4-methyl iodide
47: 7-(1,2-Бензилкарбоксигидразин)-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин HCl47: 7- (1,2-Benzylcarboxyhydrazine) -6-deoxy-5-hydroxytetracycline HCl
48: 4-Дедиметиламино-7-амино-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин H2SO4 48: 4-Dedimethylamino-7-amino-6-deoxy-5-hydroxytetracycline H 2 SO 4
49: 7-Амино-9-трет-бутил-4-дедиметил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин-H2SO4 49: 7-amino-9-tert-butyl-4-demethyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline-H 2 SO 4
50: 4-Дедиметиламино-9-трет-бутил-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин-7-диазоний H2SO4 50: 4-Dedimethylamino-9-tert-butyl-6-deoxy-5-hydroxytetracycline-7-diazonium H 2 SO 4
51: 9-(4-Фторфенил)-6-дезокси-5-гидрокситетрациклин51: 9- (4-Fluorophenyl) -6-deoxy-5-hydroxytetracycline
52: 4-Эпи-7-хлортетрациклин гидрохлорид52: 4-Epi-7-chlorotetracycline hydrochloride
53: 6-Деметил-6-дезокситетрациклин HCl53: 6-Demethyl-6-deoxytetracycline HCl
Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на его частную форму осуществления, понятно, что другие многочисленные формы и модификации этого изобретения будут очевидны специалистам в данной области. Приложенную формулу изобретения и само изобретение следует истолковывать в общем смысле, для того чтобы охватить все очевидные формы и модификации, которые соответствуют сущности и находятся в рамках настоящего изобретения.Although the present invention has been described with reference to its particular form of implementation, it is understood that numerous other forms and modifications of this invention will be apparent to those skilled in the art. The appended claims and the invention itself should be construed in a general sense in order to encompass all obvious forms and modifications that are consistent with the essence and are within the scope of the present invention.
Claims (4)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US32750201P | 2001-10-05 | 2001-10-05 | |
| US60/327502 | 2001-10-05 | ||
| US60/327,502 | 2001-10-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004109986A RU2004109986A (en) | 2005-02-20 |
| RU2300380C2 true RU2300380C2 (en) | 2007-06-10 |
Family
ID=23276795
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004109986/14A RU2300380C2 (en) | 2001-10-05 | 2002-10-04 | Tetracycline derivatives and methods for their using |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US7214669B2 (en) |
| EP (1) | EP1439843A4 (en) |
| JP (1) | JP2005505588A (en) |
| CN (2) | CN1564690A (en) |
| AU (1) | AU2002341970B2 (en) |
| CA (1) | CA2462572C (en) |
| MY (1) | MY133403A (en) |
| NO (1) | NO20041272L (en) |
| RU (1) | RU2300380C2 (en) |
| WO (1) | WO2003030819A2 (en) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020132798A1 (en) | 2000-06-16 | 2002-09-19 | Nelson Mark L. | 7-phenyl-substituted tetracycline compounds |
| US7094806B2 (en) | 2000-07-07 | 2006-08-22 | Trustees Of Tufts College | 7, 8 and 9-substituted tetracycline compounds |
| AU2002250331A1 (en) * | 2001-03-13 | 2002-09-24 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | 7-pyrollyl tetracycline compounds and methods of use thereof |
| EP2301914A1 (en) * | 2001-03-13 | 2011-03-30 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | 7,9-Substituted tetracycline compounds |
| EP1439843A4 (en) * | 2001-10-05 | 2007-01-03 | Tetragenex Pharmaceuticals Inc | Tetracycline derivatives and methods of use thereof |
| US20050026833A1 (en) * | 2001-11-08 | 2005-02-03 | Rabbani Shafaat Ahmed | PSP-94: use for treatment of hypercalcemia and bone metastasis |
| US7056902B2 (en) * | 2002-01-08 | 2006-06-06 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | 4-dedimethylamino tetracycline compounds |
| JP4686189B2 (en) | 2002-10-24 | 2011-05-18 | パラテック ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Methods of using substituted tetracycline compounds to modulate RNA |
| US20060287283A1 (en) * | 2003-07-09 | 2006-12-21 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | Prodrugs of 9-aminomethyl tetracycline compounds |
| EA200600221A1 (en) | 2003-07-09 | 2006-06-30 | Пэрэтек Фамэсьютикэлс, Инк. | SUBSTITUTED TETRACYCLINE COMPOUNDS (OPTIONS), PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND METHOD FOR TREATMENT OF TETRACYCLINE-SENSITIVE CONDITION IN SUBJECT |
| US8012950B2 (en) * | 2003-08-29 | 2011-09-06 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method to diagnose and treat degenerative joint disease |
| EP1716101A1 (en) * | 2004-01-15 | 2006-11-02 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | Aromatic a-ring derivatives of tetracycline compounds |
| PL1753713T3 (en) * | 2004-05-21 | 2017-02-28 | President And Fellows Of Harvard College | Synthesis of tetracyclines and analogues thereof |
| EP2301916A3 (en) * | 2004-10-25 | 2011-09-28 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | 4-aminotetracyclines and methods of use thereof |
| CA2597212A1 (en) | 2005-02-04 | 2006-08-10 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | 11a, 12-derivatives of tetracycline compounds |
| AR057324A1 (en) * | 2005-05-27 | 2007-11-28 | Wyeth Corp | TIGECICLINE AND METHODS TO PREPARE 9-AMINOMINOCICLINE |
| AR057033A1 (en) * | 2005-05-27 | 2007-11-14 | Wyeth Corp | TIGECICLINE AND METHODS TO PREPARE 9-NITROMINOCICLINE |
| AR057032A1 (en) * | 2005-05-27 | 2007-11-14 | Wyeth Corp | TIGECICLINE AND PREPARATION METHODS |
| US8486921B2 (en) * | 2006-04-07 | 2013-07-16 | President And Fellows Of Harvard College | Synthesis of tetracyclines and analogues thereof |
| EP2029749A2 (en) * | 2006-05-15 | 2009-03-04 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | Methods of regulating expression of genes or of gene products using substituted tetracycline compounds |
| WO2008045507A2 (en) | 2006-10-11 | 2008-04-17 | Paratek Pharmaceuticals, Inc. | Substituted tetracycline compounds for treatment of bacillus anthracis infections |
| EP3056487B1 (en) | 2006-10-11 | 2018-02-21 | President and Fellows of Harvard College | Synthesis of enone intermediate |
| WO2010126607A2 (en) | 2009-04-30 | 2010-11-04 | President And Fellows Of Harvard College | Synthesis of tetracyclines and intermediates thereto |
| SI2327676T1 (en) * | 2009-11-26 | 2014-07-31 | Sandoz Ag | Reaction of organic compounds with low amounts of hydrogen |
| JP2013521314A (en) * | 2010-03-10 | 2013-06-10 | ユニバーシティー ヘルス ネットワーク | Use of tigecycline for the treatment of cancer |
| CN102631356B (en) * | 2012-04-11 | 2014-03-12 | 广州市东来生物科技有限公司 | Application of 4-dedimethyl tetracycline derivatives in aspect of resisting Helicobacter pylori |
| WO2013177170A2 (en) * | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Dcb-Usa Llc | Methods for drug screen using zebrafish model and the compounds screened thereform |
| MA40836A (en) | 2014-10-23 | 2017-08-29 | Tetraphase Pharmaceuticals Inc | SEMI-SYNTHESIS PROCEDURES |
| EP3612540A1 (en) | 2017-04-20 | 2020-02-26 | Rising Tide Foundation | Triphenylphosphonium-tethered tetracycyclines for use in treating cancer |
| CN110156624B (en) * | 2019-05-29 | 2022-03-08 | 河北冀衡药业股份有限公司 | Method for synthesizing minocycline and derivatives thereof |
| AR127596A1 (en) * | 2021-02-03 | 2024-02-14 | Consejo Nacional De Investigaciones Cientificas Y Tecn Conicet | CHEMICALLY COUPLED CARRIER FOR LOW HYDROPHOBICITY BIOACTIVE DRUGS IN THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM |
Family Cites Families (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1063598B (en) * | 1957-02-14 | 1959-08-20 | Hoechst Ag | Process for the preparation of water-soluble derivatives of the tetracyclines |
| DE1088481B (en) * | 1958-01-29 | 1960-09-08 | American Cyanamid Co | Process for the preparation of new compounds of the tetracycline series |
| US2997471A (en) * | 1958-08-18 | 1961-08-22 | Bristol Myers Co | Tetracycline derivatives |
| US3104240A (en) * | 1958-08-18 | 1963-09-17 | Bristol Myers Co | Mannich bases of tetracycline antibiotics |
| US3026284A (en) * | 1959-05-13 | 1962-03-20 | Westinghouse Electric Corp | Process of treating a thermoplastic amine-aldehyde resin with a thermosetting additive and product obtained therefrom |
| US3029284A (en) * | 1960-09-14 | 1962-04-10 | Pfizer & Co C | Nu-dealkylation of carboxamido-nu-alkyltetracycline and its analogs |
| US3338963A (en) * | 1960-10-28 | 1967-08-29 | American Cyanamid Co | Tetracycline compounds |
| US3509184A (en) * | 1961-08-18 | 1970-04-28 | Pfizer & Co C | Anthracyclidine-acetic acid derivatives |
| US3502696A (en) * | 1961-08-18 | 1970-03-24 | Pfizer & Co C | Antibacterial agents |
| US3772363A (en) * | 1961-08-18 | 1973-11-13 | Pfizer | 3,4,10-trioxo octahydroanthracene-2-aminoacetic acids and derivatives thereof |
| US3829453A (en) * | 1961-08-18 | 1974-08-13 | Pfizer | Octahydroanthracene-2-aminoacetic acids and esters and mixed anhydrides thereof |
| US3145228A (en) * | 1962-09-06 | 1964-08-18 | Pfizer & Co C | 5-alkoxy-and 5-benzyloxy-tetracycline, derivatives and analogues thereof |
| US3265732A (en) * | 1964-02-28 | 1966-08-09 | American Cyanamid Co | Novel 5alpha, 6-anhydrotetracyclines |
| US3609188A (en) * | 1964-10-29 | 1971-09-28 | American Cyanamid Co | 4-dedimethylamino-4-substituted-amino-6-demethyltetracyclines |
| US3326761A (en) * | 1964-11-16 | 1967-06-20 | Pfizer & Co C | 6-demethyl-6-deoxytetracycline, anti-tumor antibiotic |
| US3345370A (en) * | 1965-03-16 | 1967-10-03 | American Cyanamid Co | 4-(n-mono-substituted) hydrazones of 4-dedimethylamino-4-oxo-tetracycline |
| US3388162A (en) * | 1966-03-14 | 1968-06-11 | American Cyanamid Co | 7-and/or 9-nitro or amino tetracyclines |
| US3515731A (en) * | 1966-06-17 | 1970-06-02 | Pfizer & Co C | Antibacterial agents |
| US3849493A (en) * | 1966-08-01 | 1974-11-19 | Pfizer | D-ring substituted 6-deoxytetracyclines |
| US3345410A (en) * | 1966-12-01 | 1967-10-03 | American Cyanamid Co | Substituted 7- and/or 9-amino tetracyclines |
| US3502660A (en) * | 1967-01-12 | 1970-03-24 | Pfizer & Co C | 2-((5'-(3' and/or 4'-substituted)isoxazoyl) methylidene)-3,4,10-trioxo-1,2,3,4,4a,9,9a,10-octahydroanthracenes |
| FR1520600A (en) * | 1967-02-27 | 1968-04-12 | Snecma | Improvements to axial flow turbo-machines, and in particular to axial compressors with two nested counter-rotating rotors |
| US3824285A (en) * | 1967-09-13 | 1974-07-16 | Pfizer | 4-oxo-4-dedimethylaminotetracycline-4,6-hemiketals |
| US3622627A (en) * | 1967-09-13 | 1971-11-23 | Pfizer | 4-dedimethylaminatetracycline and 5a, 6-anhydro derivatives thereof |
| US4925833A (en) * | 1983-12-29 | 1990-05-15 | The Research Foundation Of State University Of New York | Use of tetracycline to enhance bone protein synthesis and/or treatment of osteoporosis |
| US4704383A (en) * | 1983-12-29 | 1987-11-03 | The Research Foundation Of State University Of New York | Non-antibacterial tetracycline compositions possessing anti-collagenolytic properties and methods of preparing and using same |
| US4935412A (en) * | 1983-12-29 | 1990-06-19 | The Research Foundation Of State University Of New York | Non-antibacterial tetracycline compositions possessing anti-collagenolytic properties and methods of preparing and using same |
| USRE34656E (en) | 1983-12-29 | 1994-07-05 | The Research Foundation Of State University Of New York | Use of tetracycline to enhance bone protein synthesis and/or treatment of bone deficiency |
| US4666897A (en) * | 1983-12-29 | 1987-05-19 | Research Foundation Of State University | Inhibition of mammalian collagenolytic enzymes by tetracyclines |
| US5122519A (en) * | 1989-06-27 | 1992-06-16 | American Cyanamid Company | Stable, cosmetically acceptable topical gel formulation and method of treatment for acne |
| US5045538A (en) * | 1990-06-28 | 1991-09-03 | The Research Foundation Of State University Of New York | Inhibition of wasting and protein degradation of mammalian muscle by tetracyclines |
| US5776898A (en) * | 1991-05-14 | 1998-07-07 | Dana-Farber Cancer Institute | Method for treating a tumor with a chemotherapeutic agent |
| US5494903A (en) * | 1991-10-04 | 1996-02-27 | American Cyanamid Company | 7-substituted-9-substituted amino-6-demethyl-6-deoxytetracyclines |
| US5442059A (en) * | 1992-08-13 | 1995-08-15 | American Cyanamid Company | 9-[(substituted glycyl)amido)]-6-demethyl-6-deoxytetracyclines |
| JPH06256280A (en) * | 1992-11-17 | 1994-09-13 | Univ New York State | Tetracycline containing non-antibacterial chemically modified tetracycline inhibiting excess collagen crosslinking bonding in diabetes |
| EP0733369A1 (en) * | 1995-03-23 | 1996-09-25 | Stichting REGA V.Z.W. | Protease inhibitors, a DNA construct for the expression of a protease and a process for measuring proteases and/or protease inhibitors |
| US5837696A (en) * | 1997-01-15 | 1998-11-17 | The Research Foundation Of State University Of New York | Method of inhibiting cancer growth |
| US6506740B1 (en) * | 1998-11-18 | 2003-01-14 | Robert A. Ashley | 4-dedimethylaminotetracycline derivatives |
| CA2351703C (en) * | 1998-11-18 | 2008-12-30 | Collagenex Pharmaceuticals, Inc. | Novel 4-dedimethylaminotetracycline derivatives |
| ES2288945T3 (en) * | 2000-03-31 | 2008-02-01 | Trustees Of Tufts College | TETRACICLINE 7 AND 9-CARBAMATE, UREA, TIOUREA, THIOCARBAMATE AND HETEROARIL-AMINO SUBSTITUTED COMPOUNDS. |
| EP1439843A4 (en) * | 2001-10-05 | 2007-01-03 | Tetragenex Pharmaceuticals Inc | Tetracycline derivatives and methods of use thereof |
-
2002
- 2002-10-04 EP EP02776131A patent/EP1439843A4/en not_active Withdrawn
- 2002-10-04 RU RU2004109986/14A patent/RU2300380C2/en not_active IP Right Cessation
- 2002-10-04 CN CNA028197224A patent/CN1564690A/en active Pending
- 2002-10-04 AU AU2002341970A patent/AU2002341970B2/en not_active Ceased
- 2002-10-04 MY MYPI20023717A patent/MY133403A/en unknown
- 2002-10-04 JP JP2003533853A patent/JP2005505588A/en active Pending
- 2002-10-04 US US10/264,454 patent/US7214669B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-04 CA CA002462572A patent/CA2462572C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-04 CN CNA2006100992267A patent/CN1961885A/en active Pending
- 2002-10-04 WO PCT/US2002/031730 patent/WO2003030819A2/en active Application Filing
-
2004
- 2004-03-26 NO NO20041272A patent/NO20041272L/en not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-03-09 US US11/076,276 patent/US20050267079A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-02-11 US US11/673,589 patent/US20070142338A1/en not_active Abandoned
- 2007-02-27 US US11/679,744 patent/US20070149488A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Беликов В.Г. Фармацевтическая химия, М., Высшая школа, 1993, т.1, с.43-47. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7214669B2 (en) | 2007-05-08 |
| RU2004109986A (en) | 2005-02-20 |
| US20050267079A1 (en) | 2005-12-01 |
| EP1439843A2 (en) | 2004-07-28 |
| MY133403A (en) | 2007-11-30 |
| WO2003030819A2 (en) | 2003-04-17 |
| CA2462572A1 (en) | 2003-04-17 |
| CN1961885A (en) | 2007-05-16 |
| JP2005505588A (en) | 2005-02-24 |
| US20050245491A9 (en) | 2005-11-03 |
| US20070149488A1 (en) | 2007-06-28 |
| AU2002341970B2 (en) | 2008-02-14 |
| NO20041272L (en) | 2004-07-02 |
| CA2462572C (en) | 2008-11-18 |
| EP1439843A4 (en) | 2007-01-03 |
| WO2003030819A3 (en) | 2004-01-08 |
| CN1564690A (en) | 2005-01-12 |
| US20070142338A1 (en) | 2007-06-21 |
| US20040067912A1 (en) | 2004-04-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2300380C2 (en) | Tetracycline derivatives and methods for their using | |
| AU2002341970A1 (en) | Tetracycline derivatives and methods of use thereof | |
| ES2272097T3 (en) | NEW DERIVATIVES OF 4-DEDIMETILAMINOTETRACICLINA. | |
| US5326759A (en) | 9-amino-7-(substituted)-6-demethyl-6-deoxytetracyclines | |
| US7456158B2 (en) | 4-dedimethylaminotetracycline derivatives | |
| PL175487B1 (en) | Method of obtaining novel 7-(substituted)-8-(substituted)-9-(substituted)-6-dimethyl-6-dezoxytetracyclins | |
| EP2157085A1 (en) | Oxazole, derivatives of tetracyclines | |
| EP1894569A2 (en) | Tetracycline derivatives for treating cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20091005 |