RU2295351C1

RU2295351C1 - Method for treating chronic hepatitises or hepatic cirrhosis cases

Info

Publication number: RU2295351C1
Application number: RU2006101926/14A
Authority: RU
Inventors: Дмитрий Дмитриевич Генкин (RU); Дмитрий Дмитриевич Генкин; Кирилл Геннадиевич Сурков (RU); Кирилл Геннадиевич Сурков
Original assignee: Дмитрий Дмитриевич Генкин; Кирилл Геннадиевич Сурков
Priority date: 2006-01-17
Filing date: 2006-01-17
Publication date: 2007-03-20

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: method involves introducing such mononuclear cells of donor umbilical cord blood into patient blood which have a set of antigens HLA-A, HLA -B, HLA-DR, differing from a set of antigens of HLA-A, HLA -B, HLA-DR, with at least four antigens. The quantity of introduced cells is equal to 2,5х10⁶-10х10⁶ cells/kg of body weight per day. The mononuclear donor umbilical cord blood cells introduction course is 2-10 times long with 10-60 days long pauses. When introducing smaller mononuclear umbilical cord blood cells dozes, in comparison to known ones, normalization of clinical biochemical parameters is achieved.

EFFECT: enhanced effectiveness in reducing hepatitis virus copies in blood and toxic or pathological immune reactions.

3 cl,1 tbl

Description

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения заболеваний печени, а именно хронического гепатита или цирроза печени различной этиологии.The invention relates to medicine and can be used to treat liver diseases, namely chronic hepatitis or liver cirrhosis of various etiologies.

Пуповинная кровь представляет собой кровь новорожденного, остающуюся в плаценте и пуповине после родов. Эта кровь богата мононуклеарными клетками, среди которых значительную часть составляют так называемые стволовые клетки, то есть клетки, находящиеся на ранних этапах дифференцировки и дающие начало развитию многих органов и тканей. Выделение и использование этих клеток в медицине связано в первую очередь с тем, что мононуклеарные клетки пуповинной крови содержат большое количество клеток-предшественников гемопоэза - гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Фракция мононуклеарных клеток, выделенных из пуповинной крови, используется как альтернативный источник ГСК при пересадке (трансплантации) костного мозга. Клетками, ответственными за замещение больных клеток реципиента при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), считаются так называемые CD 34 - позитивные клетки, то есть клетки, содержащие на своей поверхности маркер-антиген CD 34, и обладающие наибольшим клоногенным (колониеобразующим) потенциалом. Как известно, стволовые клетки пуповинной крови морфологически относятся к так называемым мононуклеарным клеткам (МНК), которые, в свою очередь, являются частью пула ядросодержащих клеток (ЯСК) пуповинной крови. Мононуклеарные клетки (лимфоциты и моноциты в сумме) составляют примерно 1/3 часть от всех ядросодержащих клеток (лейкоцитов) пуповинной крови.Cord blood is the blood of a newborn remaining in the placenta and umbilical cord after childbirth. This blood is rich in mononuclear cells, among which a significant part is made up of so-called stem cells, that is, cells that are in the early stages of differentiation and give rise to the development of many organs and tissues. Isolation and use of these cells in medicine is primarily due to the fact that mononuclear cord blood cells contain a large number of hematopoietic progenitor cells - hematopoietic stem cells (HSCs). The fraction of mononuclear cells isolated from cord blood is used as an alternative source of HSC in bone marrow transplantation. The cells responsible for replacing diseased recipient cells during hematopoietic stem cell transplantation (HSC) are considered the so-called CD 34 - positive cells, that is, cells containing the CD 34 marker antigen on their surface and possessing the greatest clonogenic (colony forming) potential. As you know, cord blood stem cells morphologically belong to the so-called mononuclear cells (MNCs), which, in turn, are part of the pool of nucleated cells (CSC) of cord blood. Mononuclear cells (lymphocytes and monocytes in total) make up about 1/3 of all nucleated cells (leukocytes) of umbilical cord blood.

Пересадка (трансплантация) мононуклеарных клеток пуповинной крови применяется в медицинской практике с 80 годов XX века. Основным показанием для пересадки стволовых клеток пуповинной крови являлись заболевания крови, вызванные врожденным (генетическим) дефектом поли-, плюро-, или олигопотентных клеток кровяного ростка костного мозга и/или их злокачественной трансформацией, а также преодоление последствий тяжелой миелосупрессии различного генеза. Для достижения репопуляции при пересадке пуповинных клеток донора (замещении своих больных клеток чужими здоровыми) применяются два основных приема:Transplantation (transplantation) of cord blood mononuclear cells has been used in medical practice since the 80s of the 20th century. The main indication for cord blood stem cell transplantation was blood diseases caused by a congenital (genetic) defect in poly-, pluro-, or oligopotent bone marrow blood cell cells and / or their malignant transformation, as well as overcoming the consequences of severe myelosuppression of various origins. To achieve repopulation during transplantation of umbilical cord cells of a donor (replacing their diseased cells with healthy strangers), two main methods are used:

- подбор пары "донор-реципиент" по совпадению антигенов основного комплекса гистосовместимости человека (HLA) и системе групп крови АВО и резус-фактору;- selection of the “donor-recipient” pair according to the coincidence of the antigens of the main human histocompatibility complex (HLA) and the ABO blood group system and Rh factor;

- подавление иммунологического ответа самого реципиента для приживления чужих пересаженных клеток.- suppression of the immunological response of the recipient himself for the engraftment of foreign transplanted cells.

Однако в случае успешной репопуляции клеток донора чужие пересаженные клетки могут вызвать тяжелые иммунопатологические явления, в частности, реакцию «трансплантат против хозяина» (РТПХ).However, in the case of successful repopulation of donor cells, foreign transplanted cells can cause severe immunopathological phenomena, in particular, the graft versus host reaction (GVHD).

Таким образом, подбор пары "донор-реципиент" является с одной стороны, определяющим успех приживления, а, с другой стороны, самым сложным в техническом плане, поскольку даже у идентичных по HLA типу людей может возникнуть реакция отторжения трансплантата и\или РТПХ.Thus, the selection of the “donor-recipient” pair is, on the one hand, determining the success of the engraftment, and, on the other hand, the most difficult in technical terms, since even people with the same HLA type may experience a transplant rejection reaction and / or GVHD.

Таким образом, современные представления диктуют необходимость наибольшего совпадения антигенов основного комплекса гистосовместимости человека как основы эффективной трансплантации аллогенных клеток.Thus, modern ideas dictate the need for the greatest match between the antigens of the main human histocompatibility complex as the basis for effective allogeneic cell transplantation.

В течение последних лет предлагались методы лечения различных заболеваний мононуклеарными клетками пуповинной крови, основанные на замещении этими донорскими клетками погибших и/или не способных к регенерации клеток реципиента.In recent years, methods have been proposed for treating various diseases with umbilical cord blood mononuclear cells, based on the replacement of dead and / or incapable of regenerating recipient cells by these donor cells.

Известен способ лечения расстройств кровообращения, в том числе инфаркта миокарда, путем введения клеток пуповинной крови человека US 2004/0197310 А1. В способе предложено введение «эффективных» количеств мононуклеарных клеток из пуповинной крови человека либо непосредственно в зону инфаркта, либо в системный кровоток. Лечебный эффект при этом основан на приживлении пуповинных клеток донора в организме хозяина и их дифференцировке в кардиомиоциты. Однако при этом необходима высокая степень иммунологической совместимости клеток донора с клетками реципиента, что делает способ технически малоосуществимым. Согласно US 2004/0197310 А1 рекомендуется сопровождение введения пуповинных клеток подавлением иммунного ответа реципиента.A known method of treating circulatory disorders, including myocardial infarction, by introducing human cord blood cells US 2004/0197310 A1. The method proposes the introduction of "effective" amounts of mononuclear cells from human umbilical cord blood either directly into the infarction zone or into the systemic circulation. The therapeutic effect in this case is based on the engraftment of the umbilical cord cells of the donor in the host organism and their differentiation into cardiomyocytes. However, this requires a high degree of immunological compatibility of the donor cells with the recipient cells, which makes the method technically unfeasible. According to US 2004/0197310 A1, it is recommended that the administration of umbilical cord cells be suppressed by suppressing the recipient's immune response.

Известен также способ лечения заболеваний с воспалительным компонентом, к которым относятся цирроз и хронический гепатит, путем введения в кровь ядросодержащих стволовых клеток пуповинной крови или клеток, происходящих из пуповинной крови, в количестве не менее 5×10⁹ ядросодержащих клеток, WO 2004/071283. Данный способ наиболее близок к заявляемому изобретению и принят в качестве его прототипа.There is also known a method of treating diseases with an inflammatory component, which include cirrhosis and chronic hepatitis, by introducing into the blood of cord blood stem cells or cord blood derived cells in an amount of at least 5 × 10 ⁹ core cells, WO 2004/071283. This method is closest to the claimed invention and adopted as its prototype.

При реализации способа-прототипа не требуется предварительного подавления иммунного ответа больного, не требуется предварительного HLA-типирования (изучения гистосовместимости) донора и реципиента. Однако для его осуществления необходимы чрезвычайно большие количества клеток (не менее 5×10⁹ ядросодержащих клеток). Количество ядросодержащих клеток в порции пуповинной крови от одного новорожденного не превышает 2,8×10⁹, причем клетки собственной пуповинной крови можно взять у человека (донора) только один раз (при его рождении). Этого количества недостаточно для реализации способа-прототипа. Таким образом, реализация способа-прототипа требует не только одномоментного введения в организм значительного количества чужеродных клеток (несущих чужеродные антигены), но и клеток пуповинной крови от разных доноров, т.е сложного «коктейля» чужих антигенов. Не учитывается степень соотношения иммуногенности/иммунотолерантности вводимых клеток по отношению к пациенту, обусловленная степенью гистосовместимости тканей пациента и донора. При этом резко возрастает риск аллергических, в том числе анафилактических реакций, а также риск развития других иммунопатологических состояний, включаю иммунодепрессию, вызванную атакой чужих клеток белой крови против собственной иммунной системы больного. В способе-прототипе для того, чтобы добиться клинического эффекта с помощью стволовых клеток пуповинной крови, необходимо одномоментно вводить значительное количество ядросодержащих клеток. Если же объединять стволовые клетки от разных доноров, то резко возрастает риск возникновения иммунопатологических реакций на такой сложный спектр антигенов, в том числе «минорных» антигенов гистосовместимости. Кроме того, одновременная иммунизация клетками (антигенами) различных доноров, как это предполагается при осуществлении способа-прототипа, приводит к невозможности повторного применения метода у того же больного. Попытки реализации способа-прототипа для лечения названных заболеваний в 5 случаях из 10 привели к токсическим и аллергическим реакциям с развитием у всех больных иммуносупрессии в течение 7-30 дней после введения. Попытка повторного применения способа-прототипа у больных приводила к токсико-аллергическим реакциям у большинства пациентов, у которых способ-прототип уже был ранее применен.When implementing the prototype method, preliminary suppression of the patient’s immune response is not required, preliminary HLA typing (histocompatibility studies) of the donor and recipient is not required. However, its implementation requires extremely large numbers of cells (at least 5 × 10 ⁹ nucleated cells). The number of nucleated cells in a portion of umbilical cord blood from one newborn does not exceed 2.8 × 10 ⁹ , and cells of own cord blood can be taken from a person (donor) only once (at his birth). This amount is not enough to implement the prototype method. Thus, the implementation of the prototype method requires not only the simultaneous introduction into the body of a significant number of foreign cells (carrying foreign antigens), but also cord blood cells from different donors, that is, a complex “cocktail” of foreign antigens. The degree of the ratio of immunogenicity / immunotolerance of the introduced cells in relation to the patient, due to the degree of histocompatibility of the patient's tissue and the donor, is not taken into account. At the same time, the risk of allergic, including anaphylactic reactions, as well as the risk of developing other immunopathological conditions, including immunosuppression caused by an attack of other white blood cells against the patient’s own immune system, sharply increases. In the prototype method, in order to achieve a clinical effect using umbilical cord blood stem cells, it is necessary to simultaneously introduce a significant amount of nucleated cells. If stem cells from different donors are combined, the risk of immunopathological reactions to such a complex spectrum of antigens, including “minor” histocompatibility antigens, sharply increases. In addition, the simultaneous immunization with cells (antigens) of various donors, as is expected in the implementation of the prototype method, leads to the impossibility of re-applying the method in the same patient. Attempts to implement the prototype method for the treatment of these diseases in 5 cases out of 10 led to toxic and allergic reactions with the development of immunosuppression in all patients within 7-30 days after administration. An attempt to re-use the prototype method in patients led to toxic-allergic reactions in most patients in whom the prototype method was previously used.

Задачей настоящего изобретения является снижение риска токсических и иммунопатологических осложнений.An object of the present invention is to reduce the risk of toxic and immunopathological complications.

Согласно изобретению в способе лечения хронического гепатита или цирроза печени вводят в кровь мононуклеарные клетки пуповинной крови донора, имеющие набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR, отличный от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR реципиента не менее, чем по четырем антигенам. Количество вводимых клеток составляет от 2,5×10⁶ до 10×10⁶ клеток на кг массы тела пациента в сутки; введение таких клеток может быть повторено от 2 до 10 раз с интервалом 10-60 дней.According to the invention, in a method of treating chronic hepatitis or cirrhosis of the liver, donor cord blood mononuclear cells are introduced into the blood having a set of HLA-A, HLA-B, HLA-DR antigens different from the set of recipient HLA-A, HLA-B, HLA-DR no less than four antigens. The number of introduced cells is from 2.5 × 10 ⁶ to 10 × 10 ⁶ cells per kg of patient body weight per day; the introduction of such cells can be repeated from 2 to 10 times with an interval of 10-60 days.

Система распознавания «свой-чужой» у человека представлена белками основного комплекса гистосовместимости (ОКГ), которые обозначаются в литературе аббревиатурой HLA (Human Leukocyte Antigens - система лейкоцитарных антигенов). Основной иммунологической задачей этих поверхностных белков является участие в распознавании чужеродного антигена иммунной системой организма. Белки HLA связываются с антигеном и представляют («презентируют») его на поверхности клетки. Только в таком виде Т-лимфоцит человека узнает чужой антиген. При этом индуцируется иммунный ответ, призванный элиминировать чужеродный антиген из организма. Часть белков ОКГ (так называемый класс I) представляет собой одноцепочечные аминокислотные цепи, которые прикрепляются к поверхности клетки с помощью молекулы (β₂ - микроглобулина. К белкам этого класса относятся белки HLA-A, HLA-В и HLA-С. Один такой белок кодирован соответственно одним геном. Другой класс белков (класс II) относится к двуцепочечным димерным молекулам, состоящим из альфа- и бета-цепей. Таким образом, для кодирования каждой молекулы II класса ОКГ требуются 2 отдельных гена. Существует также и III класс белков ОКГ. Гены, кодирующие белки основного комплекса гистосовместимости, тесно сцеплены и находятся на коротком плече 6-й хромосомы.The recognition system "friend or foe" in humans is represented by proteins of the main histocompatibility complex (JAG), which are indicated in the literature by the abbreviation HLA (Human Leukocyte Antigens - a system of leukocyte antigens). The main immunological task of these surface proteins is to participate in the recognition of a foreign antigen by the body's immune system. HLA proteins bind to the antigen and present (“present”) it on the surface of the cell. Only in this form does a person's T-lymphocyte recognize a foreign antigen. In this case, an immune response is induced, which is designed to eliminate the foreign antigen from the body. Part of the JAG proteins (the so-called class I) are single-stranded amino acid chains that attach to the cell surface using a molecule (β ₂ - microglobulin. HLA-A, HLA-B and HLA-C proteins belong to this class of proteins. One such protein encoded by one gene, respectively. Another class of proteins (class II) refers to double-stranded dimeric molecules consisting of alpha and beta chains. Thus, 2 separate genes are required to encode each molecule of class II JAG. There is also class III of JAG proteins. Genes Encoding Proteins the main histocompatibility complex, closely linked and located on the short arm of the 6th chromosome.

Белки ОГК не только отвечают за презентацию чужеродных белков защитной (иммунной) системе организма, но и сами являются сильнейшими антигенами в отношении другого организма, на которые развивается иммунный ответ при введении их в этот другой организм. Нужно подчеркнуть, что белки (антигены) ОКГ продуцируются также и самими антигенпрезентирующими клетками - В-лифоцитами, активированными макрофагами, дендритными клетками.OGK proteins are not only responsible for the presentation of foreign proteins to the body's protective (immune) system, but they themselves are the strongest antigens against another organism, to which an immune response develops when they are introduced into this other organism. It must be emphasized that the proteins (antigens) of the laser are also produced by the antigen-presenting cells themselves - B-lymphocytes, activated macrophages, dendritic cells.

Гены HLA принято обозначать так же, как антигены HLA. Названия генов и антигенов HLA состоят из одной или нескольких букв и цифр, например A3, В18, DR13, DQ4. Буква означает ген, а цифра означает аллель этого гена.HLA genes are commonly referred to as HLA antigens. The names of HLA genes and antigens consist of one or more letters and numbers, for example A3, B18, DR13, DQ4. The letter means the gene, and the number means the allele of this gene.

Гены HLA обладают высоким полиморфизмом. Вся совокупность генов HLA одного индивидуума нередко обозначается как генотип HLA. Вся совокупность антигенов HLA, представленных на поверхности клеток, обозначается как фенотип HLA.HLA genes have high polymorphism. The entire set of HLA genes of one individual is often designated as the HLA genotype. The entire set of HLA antigens present on the surface of cells is designated as the HLA phenotype.

Белки (антигены) I класса ОГК - HLA-A, HLA-B и HLA-C - кодируются тремя отдельными парами генных локусов. Белки I класса представлены на клеточной поверхности клеток практически всех тканей организма. Продукт (белок) гена четвертого локуса I класса (HLA-G) продуцируется только клетками трофобласта.Proteins (antigens) of class I OGK - HLA-A, HLA-B and HLA-C - are encoded by three separate pairs of gene loci. Class I proteins are present on the cell surface of cells of almost all body tissues. The product (protein) of the gene of the fourth locus of class I (HLA-G) is produced only by trophoblast cells.

Область генома, где находятся гены, кодирующие белки ОКГ II класса, носит название D-области и подразделяется на DP, DQ и DR районы, каждый из которых кодирует двухцепочечный поверхностный белок в виде альфа- и бета-цепей. Соответственно, белки (антигены), кодированные этими генами, носят название HLA-DP, HLA-DQ и HLA-DR и выводятся на поверхность клетки в виде DP-альфа-бета, DQ альфа-бета и DR-альфа-бета белков.The region of the genome where the genes encoding class II laser proteins are located is called the D region and is divided into DP, DQ, and DR regions, each of which encodes a double-stranded surface protein in the form of alpha and beta chains. Accordingly, proteins (antigens) encoded by these genes are called HLA-DP, HLA-DQ and HLA-DR and are displayed on the cell surface as DP alpha beta, DQ alpha beta and DR alpha beta proteins.

Гены HLA наследуются кодоминантно (т.е. каждый из генов вносит вклад в появление признака, т.е. особенность соответствующего белка) и передаются потомству двумя блоками - по одному от каждого родителя. Такой блок называется гаплотипом HLA. Таким образом, все ядросодержащие клетки человека имеют четыре пары антигенов (А, В, С и D), - по 8 HLA антигенов (белков) на клетку, из которых 4 белка унаследованы от одного, а 4 от другого родителя. Локусы HLA генов расположены близко по отношению друг к другу и обычно наследуются от каждого родителя практически без рекомбинаций (реарранжировок) внутри блока (гаплотипа). Частота рекомбинаций внутри гаплотипа HLA оставляет около 1%, и поэтому среди потомства двух родителей имеется приблизительно 25% случаев полного диплоидного совпадения HLA антигенов, 50% случаев одно-гаплотипного сходства HLA антигенов и 25% случаев полного несоответствия HLA антигенов.HLA genes are inherited codominantly (i.e., each of the genes contributes to the appearance of the trait, i.e., a feature of the corresponding protein) and is transmitted to the offspring in two blocks - one from each parent. Such a block is called the HLA haplotype. Thus, all nucleus-containing human cells have four pairs of antigens (A, B, C and D), - 8 HLA antigens (proteins) per cell, of which 4 proteins are inherited from one and 4 from another parent. Loci of HLA genes are located close to each other and are usually inherited from each parent with virtually no recombination (rearrangement) within the block (haplotype). The recombination frequency within the HLA haplotype leaves about 1%, and therefore among the offspring of two parents there are approximately 25% of cases of complete diploid matching of HLA antigens, 50% of cases of single-haplotype similarity of HLA antigens and 25% of cases of complete mismatch of HLA antigens.

Поскольку набор антигенов (белков) ОГК главного комплекса гистосовместимости у разных индивидуумов различен, то при введении клеток одного человека (донора) в организм другого (реципиента) возникает несовместимость клеток донора с клетками реципиента. Преодоление барьера гистонесовместимости всегда являлось главным стимулом исследования генов и белков ОГК, а разработка методов ее преодоления - основным ключом к проблеме отторжения пересаженных чужеродных органов, тканей и клеток в трансплантологии и клеточной инженерии человека.Since the set of OGC antigens (proteins) of the main histocompatibility complex is different for different individuals, when cells of one person (donor) are introduced into the body of another (recipient), the incompatibility of donor cells with recipient cells occurs. Overcoming the histocompatibility barrier has always been the main stimulus for the study of genes and proteins of OGKs, and the development of methods for overcoming it is the main key to the problem of rejection of transplanted foreign organs, tissues and cells in human transplantation and cell engineering.

Понятно, что обеспечить полную совместимость по всем известным антигенам HLA невозможно. Однако многолетний опыт трансплантологии показал, что различия не всех антигенов (белков) имеют клиническое значение, т.е. несовпадение не по всем белкам ОКГ оказывает одинаковое влияние на вероятность приживления трансплантата. Оказалось, что порой необходимо и достаточно для успешной пересадки тканей и клеток подобрать донора и реципиента, совместимых по 3-4 антигенам системы HLA, несмотря на то, что другие антигены гистосовместимости, называемые «минорными», могут вызывать реакцию отторжения со стороны иммунной системы реципиента, хотя и менее сильную. В случае неудачного сочетания нескольких таких «минорных» антигенов может возникнуть острая реакция отторжения. Молекулярная основа несоответствия по «минорным» антигенам неизвестна, но предполагается, что она связана с полиморфизмом нормальных, непатологических собственных антигенов. При пересадке чужих иммунокомпетентных клеток донора (или их предшественников) в иммунокомпрометированный организм реципиента возникает другая серьезная проблема - так называемая «реакция трансплантации против хозяина (РТПХ)». Опасность РТПХ актуальна особенно в тех случаях, когда для успешной трансплантации организм реципиента предварительно подвергается иммуносупресии. Ослабленная иммунная система реципиента не может отторгнуть иммунокомпетентные Т-клетки донора, которые приживляются и начинают вызывать собственный иммунный ответ против клеток реципиента, реагируя на различия по белкам - антигенам ОКГ. РТПХ может быть острой или хронической. Вероятность развития и течение РТПХ зависит от генетических различий между клетками донора и реципиента, количества донорских клеток и их фенотипа. Даже если донор и реципиент являются сиблингами, то есть они полностью генотипически HLA - совместимы по всем определяемым локусам, частота РТПХ остается весьма высокой (от 30-70%), что также связано с различиями по «минорным» антигенам.It is clear that it is impossible to ensure full compatibility with all known HLA antigens. However, many years of experience in transplantology showed that the differences in not all antigens (proteins) are of clinical importance, i.e. the mismatch of not all JAG proteins has the same effect on the likelihood of graft engraftment. It turned out that it is sometimes necessary and sufficient for a successful tissue and cell transplant to select a donor and a recipient compatible with 3-4 HLA antigens, despite the fact that other histocompatibility antigens called “minor” can cause a rejection reaction from the recipient’s immune system , although less strong. In case of unsuccessful combination of several such "minor" antigens, an acute rejection reaction may occur. The molecular basis for the mismatch in the “minor” antigens is unknown, but it is believed to be related to the polymorphism of normal, non-pathological intrinsic antigens. When transplanting foreign immunocompetent donor cells (or their predecessors) into the immunocompromised recipient organism, another serious problem arises - the so-called “transplantation reaction against the host (GVHD)”. The danger of GVHD is relevant especially in cases where the recipient's body is previously immunosuppressed for successful transplantation. The weakened immune system of the recipient cannot reject the immunocompetent T cells of the donor, which take root and begin to elicit their own immune response against the cells of the recipient, responding to differences in the proteins - antigens of the laser. GVHD may be acute or chronic. The likelihood of developing and course of GVHD depends on the genetic differences between the cells of the donor and the recipient, the number of donor cells and their phenotype. Even if the donor and recipient are siblings, that is, they are completely genotypically HLA - compatible at all defined loci, the frequency of GVHD remains very high (from 30-70%), which is also associated with differences in "minor" antigens.

Все же, в клинике максимальную тканевую совместимость удается достичь подобрав пару донор-реципиент, идентичную по ОКГ класса II, в частности белку HLA-DR, а также двум других белкам, относящимся к классу I, а именно HLA-А и HLA-B. Такое предварительное определение набора белков ОКГ у донора или реципиента получило название HLA-типирование. С учетом того, что каждый индивидуум имеет две разновидности каждой из этих молекул (одну от матери, другую от отца) HLA-типирование может быть представлено как определение характеристик каждого из 6-ти белков ОКГ на поверхности клеток, то есть по одной паре видов каждого из трех белков: HLA-А, HLA-B и HLA-DR. При полном совпадении всех 6-ти антигенов донора с 6-ю антигенами реципиента пара донор-реципиент считается «совместимой по 6-ти антигенам». Соответственно, если говорить о генах, кодирующих эти белки, то в таком случае 6 аллелей донора совпадают с 6 аллелями реципиента. Если клетки донора и реципиента совпадают по 4 из 6-ти (HLA-А, HLA-B и HLA-DR) возможных аллелей (и соответственно, по 4 из 6 белков, которые эти аллели кодируют), то такие индивидуумы имеют «несовместимость по двум антигенам». Такое разнообразие вариантов наборов белков (и соответственно генов) ОКГ называется полиморфизмом ОКГ. Технологически типирование осуществляется либо серологическими методами (путем иммунологической детекции с помощью антител против конкретного белка - антигена ОКГ) либо молекулярными методами (путем распознавания самого гена, кодирующего данный белок в геноме клетки индивидуума). HLA - тип для индивидуума выражается набором букв и цифр. Сначала следует буквенное обозначение (белка) гена и затем цифровое обозначение варианта белка (аллеля этого гена), затем обозначение следующего белка (гена) и его вариантов (аллелей гена) и т.д. Например, А 2,3 В 5,15 DR 01,15. Совершенствование методов распознавания различий между белками ОКГ (и соответственно аллелей их генов) приводит к дальнейшему «дроблению» обозначений аллелей. Аллель, первоначально обозначенный и серологически определяющийся как В15, впоследствии на самом деле оказался совокупностью двух аллелей В62 и В75.Nevertheless, in the clinic, maximum tissue compatibility can be achieved by selecting a donor-recipient pair that is identical in class II laser, in particular the HLA-DR protein, as well as two other class I proteins, namely HLA-A and HLA-B. Such a preliminary determination of the set of JAG proteins in a donor or recipient is called HLA typing. Given that each individual has two varieties of each of these molecules (one from the mother, the other from the father), HLA typing can be represented as determining the characteristics of each of the 6 laser proteins on the cell surface, that is, one pair of species of each of three proteins: HLA-A, HLA-B and HLA-DR. With the complete coincidence of all 6 donor antigens with 6 recipient antigens, the donor-recipient pair is considered “compatible with 6 antigens”. Accordingly, if we talk about genes encoding these proteins, then in this case 6 alleles of the donor coincide with 6 alleles of the recipient. If the donor and recipient cells coincide in 4 out of 6 (HLA-A, HLA-B and HLA-DR) possible alleles (and, accordingly, 4 out of 6 proteins that encode these alleles), then such individuals have “incompatibility in two antigens. " Such a variety of variants of sets of proteins (and, accordingly, genes) of JAG is called JAG polymorphism. Technologically, typing is carried out either by serological methods (by immunological detection using antibodies against a specific protein - JAG antigen) or by molecular methods (by recognition of the gene itself encoding this protein in the genome of an individual's cell). HLA - type for an individual is expressed by a set of letters and numbers. First comes the letter designation (protein) of the gene and then the digital designation of the variant protein (allele of this gene), then the designation of the next protein (gene) and its variants (alleles of the gene), etc. For example, A 2.3 V 5.15 DR 01.15. Improving the methods for recognizing differences between JAG proteins (and, correspondingly, alleles of their genes) leads to further “fragmentation” of allele designations. The allele, originally designated and serologically defined as B15, subsequently actually turned out to be a combination of two alleles B62 and B75.

После введения стволовых клеток донора в организм реципиента, с одной стороны, происходят процессы, направленные на интеграцию этих клеток в ткани реципиента с их дальнейшим размножением и/или дифференцировкой в функционально зрелую ткань, а, с другой стороны, происходит процесс, направленный на элиминацию введенных клеток из организма. При пересадке, например, чужого костного мозга донора, содержащего гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) ставится совершенно определенная задача: новые клетки должны прижиться в новом для них организме и дать начало кроветворному ростку (репопулировать костный мозг). Результирующая этих двух процессов (репопулирования и элиминации) определяет дальнейшую судьбу введенных стволовых клеток. Сами же стволовые клетки донора, попав в организм реципиента, выделяют огромное количество факторов роста, гормонов и цитокинов, совокупность действия которых приводит к тем или иным биологическим (в том числе лечебным) эффектам. Иммунологический ответ организма хозяина на чужие клетки вызывает выброс большого количества медиаторов иммунного ответа, то есть сами чужие стволовые клетки являются мощными иммуномодуляторами. Кроме того, стволовые клетки донора могут сами созревать до иммунокомпетентных клеток и вырабатывать собственный иммунный ответ на клетки хозяина, вызывая среди прочего иммуносупрессию. Весь комплекс многофакторных динамических взаимоотношений между клетками донора и организмом реципиента определяется, в первую очередь, степенью иммунологической совместимости клеток донора и клеток хозяина (реципиента). С одной стороны, чем больше стволовая клетка донора по антигенам ОКГ похожа на клетку хозяина, тем дольше она будет циркулировать в его организме и у нее больше шансов на приживление и дальнейшее размножение. С другой стороны, иммунная реакция организма реципиента на эти клетки будет невелика, что ведет к отсутствию необходимого иммуномодулирующего эффекта. Таким образом, биологический эффект от введения чужих стволовых клеток определяется параллельным развитием следующих процессов.After the donor stem cells are introduced into the recipient’s organism, on the one hand, processes are aimed at integrating these cells into the recipient’s tissues with their further reproduction and / or differentiation into functionally mature tissue, and, on the other hand, a process is directed towards elimination of the introduced cells from the body. When transplanting, for example, a foreign donor’s bone marrow containing hematopoietic stem cells (HSCs), a completely definite task is set: new cells should take root in a new organism for them and give rise to a hematopoietic sprout (repopulate bone marrow). The result of these two processes (repopulation and elimination) determines the fate of the introduced stem cells. The stem cells of the donor themselves, having entered the recipient's body, secrete a huge number of growth factors, hormones and cytokines, the combination of the actions of which leads to certain biological (including therapeutic) effects. The immunological response of the host organism to foreign cells causes the release of a large number of mediators of the immune response, that is, foreign stem cells themselves are powerful immunomodulators. In addition, donor stem cells can themselves mature to immunocompetent cells and develop their own immune response to host cells, causing, among other things, immunosuppression. The whole complex of multifactor dynamic relationships between donor cells and the recipient organism is determined, first of all, by the degree of immunological compatibility of the donor cells and the host cells (recipient). On the one hand, the more the donor stem cell is similar to the host cell in terms of JAG antigens, the longer it will circulate in its body and it has more chances of engraftment and further reproduction. On the other hand, the immune response of the recipient's organism to these cells will be small, which leads to the absence of the necessary immunomodulating effect. Thus, the biological effect of introducing foreign stem cells is determined by the parallel development of the following processes.

1. Развитие иммунного ответа реципиента на клетки донора.1. The development of the recipient's immune response to donor cells.

2. Индукция клетками донора репопуляции собственных стволовых клеток реципиента как путем прямого контакта, так и через гуморальные воздействия на клетки реципиента.2. Induction by the donor cells of the repopulation of the recipient's own stem cells, either through direct contact or through humoral effects on the recipient's cells.

3. Выделение введенными стволовыми клетками биологически активных веществ, в том числе факторов роста, цитокинов, тканевых гормонов, метаболитов.3. Isolation of biologically active substances, including growth factors, cytokines, tissue hormones, metabolites, by the introduced stem cells.

4. Развитие иммунной реакции клеток донора против клеток реципиента.4. The development of the immune response of donor cells against recipient cells.

5. Репопуляцией клетками донора тканей организма реципиента.5. Repopulation of recipient body tissues by donor cells.

Терапия того или иного конкретного заболевания (с преобладанием конкретного патологического компонента - воспалительного, аутоиммунного, дистрофического, ишемического или фиброзного) с помощью стволовых клеток требует определенного баланса указанных процессов.Therapy of a particular disease (with the predominance of a specific pathological component - inflammatory, autoimmune, dystrophic, ischemic or fibrous) using stem cells requires a certain balance of these processes.

Определяющими факторами при этом является следующее.The determining factors are the following.

1. Степень несовместимости по системе ОКГ вводимых стволовых клеток донора и клеток реципиента.1. The degree of incompatibility of the introduced stem cell of the donor and the recipient cells in the system of OCH.

2. Количество введенных чужих стволовых клеток.2. The number of introduced foreign stem cells.

Авторами настоящего изобретения обнаружено, что при высокой степени совместимости типов HLA (совпадения по многим HLA-антигенам) между донором стволовых клеток пуповинной крови и реципиентом не удается достичь необходимого терапевтического эффекта при лечении хронического гепатита или цирроза печени.The authors of the present invention found that with a high degree of compatibility of HLA types (coincidence in many HLA antigens) between a cord blood stem cell donor and a recipient, the desired therapeutic effect in the treatment of chronic hepatitis or cirrhosis cannot be achieved.

При этом важную роль в патогенезе играют нарушения функции печени, связанные с расстройством микроциркуляции долек паренхимы печени.An important role in pathogenesis is played by impaired liver function associated with impaired microcirculation of the lobes of the liver parenchyma.

Иммунная система (в том числе моноциты и тканевые макрофаги) играет огромную роль в индукции дифференцировки собственных стволовых клеток организма в клетки вновь образующихся сосудистых коллатералей. При введении клеток донора, совместимых с клетками реципиента более, чем по 2 антигенам (из 3 пар антигенов HLA-A, HLA-В, HLA-DR) не происходит адекватного иммунного ответа на вводимые клетки. При реализации способа-прототипа без учета соотношения потенциальной иммуногенности/иммунотолерантности (обусловленной в, первую очередь, антигенами ОКГ) вводится огромное число клеток, в том числе клеток - предшественников имуннокомпетентных клеток. Это неизбежно приводит либо к иммуносупрессии собственной иммунной системы реципиента, либо к возникновению иных нежелательных иммунопатологических реакций.The immune system (including monocytes and tissue macrophages) plays a huge role in the induction of differentiation of the body's own stem cells into the cells of newly formed vascular collaterals. With the introduction of donor cells compatible with recipient cells for more than 2 antigens (out of 3 pairs of HLA-A, HLA-B, HLA-DR antigens) an adequate immune response to the introduced cells does not occur. When implementing the prototype method without taking into account the ratio of potential immunogenicity / immunotolerance (primarily due to JAG antigens), a huge number of cells are introduced, including cells that are precursors of immunocompetent cells. This inevitably leads either to immunosuppression of the recipient's own immune system, or to the occurrence of other undesirable immunopathological reactions.

Как неожиданно оказалось, для достижения значимого клинического эффекта при названных заболеваниях печени стволовые клетки пуповинной крови донора должны отличаться от клеток реципиента как минимум по 4 антигенам из 6 антигенов (3 пары: HLA-А, HLA-B и HLA-DR). То есть донор и реципиент должны быть «несовместимы как минимум по четырем антигенам». Серия выполненных авторами тестов «в смешанной культуре лимфоцитов», которая широко используется при выявлении совместимости тканей донора и реципиента, показала, что только при указанном антигенном различии в среде культивирования нарабатывается достаточное количество трофических и ростовых факторов, биологически активных веществ, способных влиять на образование и рост сосудов. Лимфоциты реципиента и мононуклеарные клетки пуповинной крови донора культивировали совместно при 37 градусах Цельсия 5 дней, отделяли клетки центрифугированием и определяли in vitro ангиогенную активность культуральной жидкости с использованием модели культивируемых клеток аорты быка, внедренных в фибриновый гель, поддерживаемый нейлоновой мембраной. Пробы культуральной жидкости вносились в среду культивирования клеток аорты, и определялась скорость роста сосудистого диска (пятна сосудообразования) в фибриновом геле. Ангиогенная активность культуральной жидкости смешанной культуры лимфоцитов проявлялась лишь в том случае, если клетки донора и реципиента различались как минимум по 4 антигенам из 6 антигенов (3 пары: HLA-А, HLA-B и HLA-DR). Если клетки донора отличались от клеток реципиента только на 3, 2 или 1 антиген из 6, ангиогенный эффект не проявлялся.As it turned out unexpectedly, in order to achieve a significant clinical effect in the aforementioned liver diseases, donor cord blood stem cells must differ from the recipient cells in at least 4 antigens from 6 antigens (3 pairs: HLA-A, HLA-B and HLA-DR). That is, the donor and the recipient must be "incompatible for at least four antigens." A series of tests performed by the authors “in a mixed culture of lymphocytes”, which is widely used in identifying the compatibility of donor and recipient tissues, showed that only with the indicated antigenic difference in the cultivation medium does a sufficient number of trophic and growth factors, biologically active substances capable of affecting the formation and vascular growth. The recipient's lymphocytes and donor umbilical cord blood mononuclear cells were cultured together at 37 degrees Celsius for 5 days, the cells were separated by centrifugation and the in vitro angiogenic activity of the culture fluid was determined using a model of cultured bull aortic cells embedded in a fibrin gel supported by a nylon membrane. Samples of the culture fluid were introduced into the culture medium of the aortic cells, and the growth rate of the vascular disc (vascular stain) in the fibrin gel was determined. The angiogenic activity of the culture fluid of a mixed lymphocyte culture was manifested only if the donor and recipient cells differed in at least 4 antigens from 6 antigens (3 pairs: HLA-A, HLA-B and HLA-DR). If the donor cells differed from the recipient cells only by 3, 2 or 1 antigen out of 6, the angiogenic effect was not manifested.

При клиническом применении мононуклеарных клеток пуповинной крови лечебный эффект при циррозе печени и хроническом гепатите проявлялся только в том случае, если клетки донора и реципиента различались минимум по 4 антигенам из 6 антигенов. Авторами настоящего изобретения установлено, что если донор и реципиент были совместимы более, чем по 2 антигенам (т.е. по 3, 4, 5 или 6 антигенам из 3 пар: HLA-А, HLA-B и HLA-DR), то введение стволовых клеток пуповинной крови не приводило к лечебному эффекту при названных заболеваниях.With the clinical use of umbilical cord blood mononuclear cells, the therapeutic effect for cirrhosis of the liver and chronic hepatitis was manifested only if the donor and recipient cells differed in at least 4 antigens from 6 antigens. The authors of the present invention found that if the donor and recipient were compatible with more than 2 antigens (i.e., 3, 4, 5 or 6 antigens of 3 pairs: HLA-A, HLA-B and HLA-DR), then the introduction of cord blood stem cells did not lead to a therapeutic effect in these diseases.

При использовании заявляемого способа эффективная доза мононуклеарных клеток пуповинной крови составляет при введении в кровоток от 2,5×10⁶ до 10×10⁶ МНК на 1 кг веса человека, что соответствует не более 1×10⁹ МНК или не более 3×10⁹ ЯСК на пациента. Таким образом, используется в 3 раза меньше клеток, чем в способе-прототипе. Это позволяет использовать для лечения клетки пуповинной крови только одного донора, так как количество пуповинной крови одного донора и соответственно количество стволовых клеток пуповинной крови одного донора ограничено.When using the proposed method, the effective dose of umbilical cord blood mononuclear cells is when introduced into the bloodstream from 2.5 × 10 ⁶ to 10 × 10 ⁶ MNCs per 1 kg of human weight, which corresponds to not more than 1 × 10 ⁹ MNCs or not more than 3 × 10 ⁹ YSC per patient. Thus, 3 times fewer cells are used than in the prototype method. This makes it possible to use only one donor for the treatment of cord blood cells, since the amount of cord blood of one donor and, accordingly, the number of stem cells of cord blood of one donor is limited.

При применении заявляемого способа ни в одном случае не возникло токсических или иммунопатологических реакцийWhen applying the proposed method in no case did not cause toxic or immunopathological reactions

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.The present invention is illustrated by the following examples.

ПРИМЕР 1. Лечение хронического гепатитаEXAMPLE 1. Treatment of chronic hepatitis

Больной И., 26 лет. Поступил в стационар с жалобами на слабость, ноющие боли в правом подреберье, интенсивную желтуху. По данным биохимического анализа крови обнаружено повышение содержание билирубина - 184,5 мкмоль/л (норма: 6,5-20,5 мкмоль/л), активности аланиновой (АлАТ) - 1280 ед/л (норма: 5-40 ед/л) и аспарагиновой (АсАТ) - 1400 ед/л (норма: 5-40 ед/л) аминотрансфераз, щелочной фосфатазы (ЩФ) - 304,2 МЕ/л (норма: <117 МЕ/л), гамма-глютамилтранспептидазы (ГГТП) - 125 МЕ/л (норма: <50 МЕ/л). Обращали на себя внимание жалобы астенического характера и наличие желтухи.Patient I., 26 years old. He entered the hospital with complaints of weakness, aching pain in the right hypochondrium, intense jaundice. According to the biochemical analysis of blood, an increase in bilirubin content was found to be 184.5 μmol / L (normal: 6.5-20.5 μmol / L), alanine activity (AlAT) - 1280 u / L (normal: 5-40 u / L ) and aspartic acid (AsAT) - 1400 u / l (normal: 5-40 u / l) aminotransferases, alkaline phosphatase (ALP) - 304.2 IU / l (normal: <117 IU / l), gamma-glutamyl transpeptidases (GGTP) ) - 125 IU / L (normal: <50 IU / L). Attention was drawn to complaints of an asthenic nature and the presence of jaundice.

Пять лет назад перенес острый вирусный гепатит С, после чего неоднократно госпитализировался с признаками внутрипеченочного холестаза, лихорадкой и ломотой в суставах. Клинический диагноз (верифицирован морфологически): хронический гепатит С, активный, HCV RNA (+). Больной дважды за время болезни подвергался лечению рекомбинантным человеческим интерфероном (по 3 млн. ME три раза в неделю) с рибавирином (1000 мг/сут), курс продолжительностью 4 недели. Однако, несмотря на некоторое уменьшение числа копий вируса в крови (до 0,5 млн/мл), нормализации биохимических показателей достигнуть не удалось, гистологическое исследование биоптата печени показало наличие умеренного портального воспаления и очагового некроза, с признаками фиброза некоторых портальных зон. С согласия пациента ему было проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA-тип больного A 3,28 В 13,40 DR 01,07. Введение клеток повторяли несколько раз следующим образом (см. Таблицу 1):Five years ago he suffered acute viral hepatitis C, after which he was hospitalized several times with signs of intrahepatic cholestasis, fever and aching joints. Clinical diagnosis (morphologically verified): chronic hepatitis C, active, HCV RNA (+). The patient was twice treated with recombinant human interferon (3 million ME three times a week) with ribavirin (1000 mg / day), a course lasting 4 weeks. However, despite a slight decrease in the number of copies of the virus in the blood (up to 0.5 million / ml), biochemical parameters could not be normalized, histological examination of the liver biopsy showed moderate portal inflammation and focal necrosis, with signs of fibrosis of some portal zones. With the consent of the patient, he was treated with the claimed method. The identified HLA-type patient A 3.28 B 13.40 DR 01.07. The introduction of cells was repeated several times as follows (see Table 1):

Таблица 1.Table 1. Доза клеток (×10⁶/кг массы тела)Dose of cells (× 10 ⁶ / kg body weight) HLA-тип клеток донораHLA type donor cells Интервал после предыдущего введения, дниInterval after previous administration, days Количество отличных антигенов HLA-А, HLA-В, HLA-DR донора и реципиента.The number of excellent antigens HLA-A, HLA-B, HLA-DR of the donor and recipient. 2,52,5 А 1,3 В 13,35 DR 01,07A 1.3 V 13.35 DR 01.07 -- 4 из 64 from 6 3,23.2 A 1,3 В 13,35 DR 01,07A 1.3V 13.35 DR 01.07 1010 4 из 64 from 6 4,54,5 A 1,2 В 14,44 DR 02,07A 1.2 V 14.44 DR 02.07 3434 5 из 65 from 6 5,05,0 A 11,23 В 8,14 DR 02,15A 11.23 V 8.14 DR 02.15 2222 6 из 66 from 6 5,65,6 A 11,30 В 2,17 DR 01,02A 11.30 V 2.17 DR 01.02 30thirty 5 из 65 from 6 6,76.7 A 3,11 В 08,44 DR 01,15A 3.11 V 08.44 DR 01.15 3131 4 из 64 from 6 7,07.0 A 1,28 В 7,40 DR 02,05A 1.28 V 7.40 DR 02.05 30thirty 4 из 64 from 6 8,68.6 А 3,11 В 14,44 DR 02,07A 3.11 V 14.44 DR 02.07 2525 4 из 64 from 6 9,09.0 А 2,30 В 14,18 DR 02,08A 2.30 V 14.18 DR 02.08 3434 6 из 66 from 6 10,010.0 А 2,3 В 27,35 DR 08,15A 2.3 V 27.35 DR 08.15 6060 5 из 65 from 6

Взвесь мононуклеарных клеток пуповинной крови вводили путем внутривенной инфузии.A suspension of cord blood mononuclear cells was administered by intravenous infusion.

В процессе проведения лечения отмечалось: улучшение самочувствия, нормализация биохимических показателей. Выявлено существенное уменьшение числа копий вируса гепатита С в крови (менее 100 копий на мл). При контрольном обследовании через 6 месяцев после последнего введения клеток состояние больного остается удовлетворительным. Функциональные пробы печени в норме.During the treatment it was noted: improvement of well-being, normalization of biochemical parameters. A significant decrease in the number of copies of hepatitis C virus in the blood was detected (less than 100 copies per ml). During the follow-up examination 6 months after the last injection of cells, the patient's condition remains satisfactory. Functional liver tests are normal.

ПРИМЕР 2. Лечение цирроза печени.EXAMPLE 2. Treatment of cirrhosis of the liver.

Пациент С., 52 года, поступил на стационарное лечение с жалобами на периодические боли в правом подреберье тянущего характера, появляющиеся при сидении, не связанные с приемом пищи. Отмечал также постоянные ноющие боли в левом подреберье, не связанные с приемом пищи и положением тела, временем суток. Повышенная утомляемость, немотивированная слабость, снижение работоспособности, вялость. Уменьшение массы тела. Чувство быстрого насыщения и переполнения желудка, тяжесть в верхнем отделе живота, метеоризм, неустойчивый стул. Тошнота, горечь во рту, сухость, непереносимость жирной пищи, свежеиспеченной сдобы, отрыжка. Снижение либидо.Patient S., 52 years old, was admitted to hospital with complaints of recurrent pain in the right hypochondrium of a pulling nature that appears when sitting, not related to eating. He also noted constant aching pain in the left hypochondrium, not associated with food intake and body position, time of day. Fatigue, unmotivated weakness, decreased performance, lethargy. Weight loss. Feeling of rapid satiety and fullness of the stomach, heaviness in the upper abdomen, flatulence, unstable stool. Nausea, bitterness in the mouth, dryness, intolerance to fatty foods, freshly baked muffins, belching. Decreased libido.

Болен в течение 3 лет, когда стал отмечать тяжесть и боли в правом подреберье, тошноту, расстройство аппетита, общее недомогание. В этот же период отмечал резкое похудение около 35 кг. После проведенной в тот период биопсии печени поставлен диагноз цирроз печени, активная фаза, декомпенсация по сосудистому типу и субкомпенсация по паренхиматозному типу. Проведено лечение препаратами мембраностабилизирующего и липотропного действия (эссенциале форте), флавоноидами (силимарин), гепабене. Больному была присвоена вторая группа инвалидности. После проведенного лечения (приема верошпирона и церукала) больному стало лучше, но спустя 6 месяцев после проведенного лечения у больного произошел эпизод кровотечение из вен пищевода. Ежегодно лечился в стационаре. Последняя госпитализация в гастроэнтерологическое отделение около года назад с диагнозом: цирроз печени, активная фаза, декомпенсация по сосудистому типу.Sick for 3 years, when he began to note the severity and pain in the right hypochondrium, nausea, appetite disorder, general malaise. In the same period noted a sharp weight loss of about 35 kg. After a biopsy of the liver was performed at that time, he was diagnosed with cirrhosis of the liver, active phase, vascular type decompensation, and parenchymal subcompensation. The treatment was performed with preparations of membrane-stabilizing and lipotropic effects (Essential Forte), flavonoids (silymarin), hepatene. The patient was assigned the second disability group. After the treatment (taking Veroshpiron and Cerucal) the patient became better, but 6 months after the treatment the patient experienced an episode of bleeding from the veins of the esophagus. Every year he was treated in a hospital. The last hospitalization in the gastroenterological department about a year ago was diagnosed with cirrhosis of the liver, active phase, vascular type decompensation.

При объективном физикальном, инструментальном и лаборантом обследовании выявлен повышенный общий билирубин за счет непрямого, снижение гемоглобина до 82 г/л, и количества эритроцитов 2,84×10¹²/л, цветной показатель на нижней границе нормы (0,9), лейкопения (лейкоциты 4,0×10⁷/л), гепатомегалия (край печени выступает за пределы реберной дуги на 3 см, болезненный. При перкуссии выявлено значительное увеличение размеров печени), спленомегалия, синдром портальной гипертензии: расширенные околопупочные вены. Присутствовали асцит - жидкость в брюшной полости, субэктеричность склер, «печеночные ладони», бледно-желтая окраска кожи. При ЭКГ исследовании: горизонтальное положение электрической оси, синусовая тахикардия (ЧСС 107 в минуту), в остальном ЭКГ без изменений. Снижен вольтаж в V, VI отведении.An objective physical, instrumental and laboratory examination revealed increased total bilirubin due to indirect, a decrease in hemoglobin to 82 g / l, and the number of red blood cells 2.84 × 10 ¹² / l, a color indicator at the lower limit of normal (0.9), leukopenia ( leukocytes 4.0 × 10 ⁷ / l), hepatomegaly (the edge of the liver extends beyond the costal arch by 3 cm, painful. Percussion revealed a significant increase in liver size), splenomegaly, portal hypertension syndrome: expanded umbilical veins. There were ascites - fluid in the abdominal cavity, subektericity of the sclera, "hepatic palms", pale yellow skin color. ECG examination: horizontal position of the electric axis, sinus tachycardia (heart rate 107 per minute), the rest of the ECG unchanged. Reduced voltage in V, VI lead.

При биопсии печени выявлен фиброз большинства портальных зон, с небольшим фиброзом долек печени (2 стадия нарушений архитектоники печени по Knodell).A liver biopsy revealed fibrosis of most of the portal areas, with slight fibrosis of the lobules of the liver (stage 2 violations of architectonics of the liver according to Knodell).

Клинический диагноз: цирроз печени, активная фаза.Clinical diagnosis: cirrhosis, active phase.

Осложнения: спленомегалия, гепатомегалия, портальная гипертензия.Complications: splenomegaly, hepatomegaly, portal hypertension.

С согласия пациента ему было проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA-тип донора А 2,29 В 13,35 DR 02,08, a HLA-тип больного А 1,2 В 7,35 DR 01,07. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 4 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки пуповинной крови донора вводились в количестве 2,5×10⁶ клеток/кг путем внутривенной инфузии, введение клеток (от этого же донора) было повторено через 10, 20, и 60 дней после первого введения. После начала лечения и до выписки больного из стационара, каких-либо негативных сдвигов в клинико-лабораторных показателях не наблюдалось. Больной продолжал принимать гепатопротекторы (эссенциале форте, силимарин, витамины) в обычном режиме. Спустя 4 месяца после выписки больной был повторно обследован. Отмечает улучшение самочувствия, боли в правом подреберье почти не беспокоят, увеличился аппетит, исчезла вялость, масса тела увеличилась на 8 кг. Усилилось либидо. Нормализовался уровень билирубина, исчез асцит, увеличился уровень гемоглобина до 128 г/л, количество эритроцитов до 4,6×10¹²/л, уровень лейкоцитов крови до 6,1×10⁷/л. При биопсии печени выявлено уменьшение количества фиброзных портальных зон. За время после проведенного лечения кровотечений из расширенных вен не наблюдалось. Уменьшились размеры селезенки, гепатомегалия уменьшилась - край печени выступает на 1,5 см.With the consent of the patient, he was treated with the claimed method. The identified HLA type of donor A 2.29 V 13.35 DR 02.08, and the HLA type of patient A 1.2 V 7.35 DR 01.07. Thus, the set of antigens of HLA-A, HLA-B, HLA-DR of donor cells differed from the set of antigens of HLA-A, HLA-B, HLA-DR of the patient (recipient) in 4 antigens from 6 antigens. Mononuclear cells of umbilical cord blood of the donor were introduced in an amount of 2.5 × 10 ⁶ cells / kg by intravenous infusion, the introduction of cells (from the same donor) was repeated 10, 20, and 60 days after the first injection. After the start of treatment and until the patient was discharged from the hospital, no negative changes in the clinical and laboratory parameters were observed. The patient continued to take hepatoprotectors (essential forte, silymarin, vitamins) as usual. 4 months after discharge, the patient was re-examined. She notes improvement in well-being, pain in the right hypochondrium almost does not bother, increased appetite, lethargy disappeared, body weight increased by 8 kg. Increased libido. The level of bilirubin normalized, ascites disappeared, the hemoglobin level increased to 128 g / l, the number of red blood cells to 4.6 × 10 ¹² / l, the level of blood leukocytes to 6.1 × 10 ⁷ / l. A liver biopsy revealed a decrease in the number of fibrous portal zones. No bleeding from dilated veins was observed after the treatment. The size of the spleen decreased, hepatomegaly decreased - the edge of the liver protrudes by 1.5 cm.

ПРИМЕР 3. Лечение хронического вирусного гепатита В.EXAMPLE 3. Treatment of chronic viral hepatitis B.

Больной Н., 38 лет. Поступил в стационар с жалобами на слабость, утомляемость, периодическую тошноту по утрам, кровоточивость десен. За год до этого перенес острый вирусный гепатит В. Проходил лечение в областной клинической больнице. В течение месяца после выписки из стационара сохранялась желтуха. В последующем отмечена нормализация биохимических показателей крови, однако сохранялась виремия. Наблюдался у терапевта поликлиники и в связи с выявленными изменениями биохимических показателей (увеличение уровней аланинаминотрансферазы (АлАТ) до 132 ед/л, асппартатаминтрансферазы (АсАТ) до 56 ед/л, щелочной фосфатазы (ЩФ) до 238 МЕ/л). При поступлении в стационар состояние удовлетворительное. В легких и сердечно-сосудистой системе патологических изменений не обнаружено. Живот в правом подреберье умеренно болезненный. Печень по среднеключичной линии выступает на 2,5 см из-под правого края реберной дуги, эластичной консистенции, безболезненная. Общий анализ крови и мочи не изменены. В БАК найдены следующие отклонения: билирубин - 20,5 мкмоль/л, АлАТ - 123 ед/л, АсАТ - 62 ед/л, ЩФ - 188 МЕ/л. Выявлен методом ПЦР РНК вируса гепатита В. Маркеры других вирусных гепатитов не обнаружены. Отмечено также увеличение IgM - 4 г/л, IgG - 28 г/л, IgA - 9 г/л. По данным УЗИ органов брюшной полости - признаки хронического диффузного заболевания печени. В биопсийном препарате печени: имеется небольшой обрывок инфильтрированного портального тракта, поля светлых гепатоцитов, мелкие зерна бурого пигмента выявляется в цитоплазме некоторых гепатоцитов, расположенных цетролобулярно. Заключение: морфологическая картина умеренно выраженного портального гепатита. Заключительный клинический диагноз: хронический гепатит В, умеренной активности, HBV DNA (+). Хронический гастродуоденит в стадии ремиссии. Больному было назначено лечение рекомбининтным интерфероном - альфа по 5 млн ME 3 раза в неделю подкожно на протяжении 24 недель. Проведенное лечение не привело к нормализации биохимических маркеров заболевания, уровень ДИК вируса гепатита В уменьшился только на одну треть, сохранялись слабость, недомогание, тошнота. С согласия больного ему была проведена терапия заявленным способом. Установленный HLA-тип больного А 1,24 В 35,37 DR 01,07, а HLA-тип донора тип А 3,28 В 7,13 DR 01,08. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 5 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки вводились в дозе 10,0×10⁶ клеток/кг массы тела однократно, путем внутривенной инфузии в течение 2,5 часов со скоростью 10 мл/ч. Непосредственных и отдаленных побочных реакций на лечение заявленным способом не наблюдалось. Проведенные через 21 день после проведения лечения заявленным анализы крови показали практически полное исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови, нормализацию уровней ферментов крови.Patient N., 38 years old. He entered the hospital with complaints of weakness, fatigue, periodic nausea in the morning, bleeding gums. The year before, he suffered acute viral hepatitis B. He was treated at the regional clinical hospital. Within a month after discharge from the hospital, jaundice persisted. Subsequently, normalization of blood biochemical parameters was noted, but viremia persisted. The clinic physician observed the change in biochemical parameters (an increase in alanine aminotransferase (AlAT) to 132 units / L, aspartate aminotransferase (AsAT) to 56 units / L, alkaline phosphatase (ALP) to 238 IU / L). Upon admission to the hospital, the condition is satisfactory. No pathological changes were found in the lungs and cardiovascular system. The abdomen in the right hypochondrium is moderately painful. The liver along the midclavicular line protrudes 2.5 cm from under the right edge of the costal arch, elastic consistency, painless. The general analysis of blood and urine is not changed. The following deviations were found in the LHC: bilirubin - 20.5 μmol / L, AlAT - 123 units / L, AsAT - 62 units / L, alkaline phosphatase - 188 IU / L. Hepatitis B virus RNA was detected by PCR. No other viral hepatitis markers were detected. There was also an increase in IgM - 4 g / l, IgG - 28 g / l, IgA - 9 g / l. According to abdominal ultrasound, there are signs of chronic diffuse liver disease. In a liver biopsy preparation: there is a small fragment of the infiltrated portal tract, fields of light hepatocytes, small grains of brown pigment are detected in the cytoplasm of some hepatocytes located cetrolobularly. Conclusion: morphological picture of moderately expressed portal hepatitis. Final clinical diagnosis: chronic hepatitis B, moderate activity, HBV DNA (+). Chronic gastroduodenitis in remission. The patient was prescribed treatment with recombinant interferon - alpha 5 million ME 3 times a week subcutaneously for 24 weeks. The treatment did not lead to the normalization of biochemical markers of the disease, the DIC level of the hepatitis B virus decreased by only one third, weakness, malaise, and nausea persisted. With the consent of the patient, he was treated with the claimed method. The identified HLA-type of patient A is 1.24 V 35.37 DR 01.07, and the HLA-type of the donor is type A 3.28 V 7.13 DR 01.08. Thus, the set of antigens of HLA-A, HLA-B, HLA-DR of donor cells differed from the set of antigens of HLA-A, HLA-B, HLA-DR of the patient (recipient) in 5 antigens from 6 antigens. Mononuclear cells were injected at a dose of 10.0 × 10 ⁶ cells / kg body weight once, by intravenous infusion for 2.5 hours at a rate of 10 ml / h. Immediate and long-term adverse reactions to treatment by the claimed method were not observed. Conducted 21 days after treatment with the claimed blood tests showed an almost complete disappearance of hepatitis B virus DNA from the blood, normalization of blood enzyme levels.

Claims

1. A method for the treatment of chronic hepatitis or cirrhosis of the liver, including the introduction into the blood of mononuclear cells of cord blood from a donor, characterized in that they have a set of HLA-A, HLA-B, HLA-DR antigens different from the set of HLA-A, HLA-B antigens , HLA-DR recipient for at least four antigens.

2. The method according to claim 1, characterized in that the number of introduced cells is from 2.5 · 10 ⁶ to 10 · 10 ⁶ cells per kg of body weight per day.

3. The method according to claim 1, characterized in that the introduction of mononuclear cells of cord blood of a donor is repeated from 2 to 10 times with an interval of 10-60 days.