RU2275633C2 - Method for diagnosis of ehrlich's carcinoma - Google Patents
Method for diagnosis of ehrlich's carcinoma Download PDFInfo
- Publication number
- RU2275633C2 RU2275633C2 RU2004121099/15A RU2004121099A RU2275633C2 RU 2275633 C2 RU2275633 C2 RU 2275633C2 RU 2004121099/15 A RU2004121099/15 A RU 2004121099/15A RU 2004121099 A RU2004121099 A RU 2004121099A RU 2275633 C2 RU2275633 C2 RU 2275633C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tumor
- cells
- labeled
- lectin
- isoform
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к способам диагностики онкологических заболеваний.The invention relates to medicine, in particular to methods for diagnosing cancer.
Одна из основных проблем онкологии состоит в том, что никому не удается найти те изъяны в иммунитете онкологических больных, которые делают возможным рост опухолей в организме. Складывается парадоксальная ситуация, когда иммунитет онкологических больных ничем не отличается от здоровых, но при этом в организме у них растет опухоль.One of the main problems of oncology is that no one can find those flaws in the immunity of cancer patients that make it possible for tumors to grow in the body. There is a paradoxical situation when the immunity of cancer patients is no different from healthy ones, but at the same time a tumor grows in their body.
На фоне роста опухоли в иммунитете организма не происходит изменений, подобных тем, которые развиваются при иммунодефицитных состояниях, когда подавлены целые звенья иммунокомпетентных клеток или когда происходит исчезновение каких-либо клеточных рецепторов. Изменения, которые происходят в лимфоцитах организма на фоне роста опухоли, касаются гликозилирования белков (рецепторов) их клеточной мембраны. В этом случае иммунокомпетентные клетки теряют способность реагировать только на опухолевые клетки, тогда как реакция на инфекционные агенты полностью сохранена, т.е. иммунодефицит не развивается.Against the background of tumor growth, there are no changes in the body’s immunity, similar to those that develop in immunodeficiency states, when whole units of immunocompetent cells are suppressed or when any cellular receptors disappear. The changes that occur in the lymphocytes of the body against the background of tumor growth relate to glycosylation of proteins (receptors) of their cell membrane. In this case, immunocompetent cells lose their ability to respond only to tumor cells, while the response to infectious agents is completely preserved, i.e. immunodeficiency does not develop.
В настоящее время все методы диагностики онкологических заболеваний по анализу крови основаны на измерении уровня опухольассоциированных антигенов. Опухольассоциированные антигены - это структуры, которые в норме представлены в тканях организма, но их количество в нормальных тканях или незначительно, или расположение их в тканях таково, что в норме в кровь они не попадают. В результате развития онкологического процесса увеличивается количество опухолевых клеток и увеличивается в организме количество опухольассоциированных антигенов, которые экспрессированы на поверхности этих клеток. При гибели и (или) слущивании с поверхности опухоли эти антигены начинают попадать в кровь. Таким образом, эта группа методов диагностики использует структуры, которые расположены на опухолевых тканях и полностью игнорирует те изменения, которые могут происходить в организме в ответ на растущую опухоль.Currently, all methods of diagnosing cancer by blood analysis are based on measuring the level of tumor-associated antigens. Tumor-associated antigens are structures that are normally present in the tissues of the body, but their amount in normal tissues is either insignificant, or their location in the tissues is such that they do not normally enter the bloodstream. As a result of the development of the oncological process, the number of tumor cells increases and the number of tumor-associated antigens that are expressed on the surface of these cells increases in the body. Upon death and (or) desquamation from the surface of the tumor, these antigens begin to enter the bloodstream. Thus, this group of diagnostic methods uses structures that are located on tumor tissues and completely ignores the changes that can occur in the body in response to a growing tumor.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний путем определения содержания малых лимфоцитов (диаметр <7.5 мкм) в крови больных онкологическими заболеваниями (В.И.Говалло и др. "Снижение содержания малых лимфоцитов в крови больных со злокачественными костными опухолями". Вопросы онкологии. 1987 г., том 33, №9, стр.15-21).A known method for the diagnosis of cancer by determining the content of small lymphocytes (diameter <7.5 μm) in the blood of patients with cancer (V. I. Govallo and others. "Reducing the content of small lymphocytes in the blood of patients with malignant bone tumors". Oncology. 1987. Volume 33, No. 9, pp. 15-21).
Как указывают авторы, снижение их на 40-75% по сравнению со здоровыми людьми наблюдается на фоне роста опухолей.As the authors indicate, their decrease by 40-75% compared with healthy people is observed against the background of tumor growth.
Однако данный способ отличается большим субъективизмом и зависит от квалификации специалистов. Так, диаметр клеток может меняться в зависимости от изотоничности растворов, скорости фиксации мазков, опыта измерения размеров клеток окуляр-микрометром МОВ-1 и т.д. Вследствие большого субъективизма метода он не нашел широкого применения.However, this method is highly subjective and depends on the qualifications of specialists. So, the diameter of the cells can vary depending on the isotonicity of the solutions, the rate of fixation of smears, the experience of measuring cell sizes with the MOV-1 eyepiece micrometer, etc. Due to the great subjectivity of the method, he did not find wide application.
Задачей изобретения является повышение специфичности диагностики онкологических заболеваний и исключение его субъективизма.The objective of the invention is to increase the specificity of the diagnosis of cancer and the exclusion of its subjectivity.
Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что лимфоциты крови обрабатывают меченной флуоресцентным красителем - флуоресцеинизотиоцанатом изоформой лектина гороха, и при снижении числа меченых лимфоцитов более чем на 50% относительно нормы судят о наличии онкологического заболевания.The problem is solved by the method consisting in the fact that blood lymphocytes are treated with a fluorescein isothiocanate-labeled pea lectin isoform, and with a decrease in the number of labeled lymphocytes by more than 50% relative to the norm, the presence of cancer is judged.
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
Лектин гороха выделяют методом аффинной хроматографии на Sephadex G-100. Выделение изоформы лектина гороха с высоким сродством связывания с сахарами является необходимым этапом для повышения специфичности диагностики, так как в противном случае с поверхностью клеток связывались бы изоформы лектина, которые при отмывании клеток от несвязавшегося лектина также удалялись (из-за их низкой константы связывания) с поверхности клеток и это приводило бы к заниженному проценту окрашенных клеток.Pea Lectin is isolated by affinity chromatography on a Sephadex G-100. Isolation of pea lectin isoforms with a high affinity for binding to sugars is a necessary step for increasing the specificity of diagnostics, since otherwise lectin isoforms would be bound to the cell surface, which would also be removed when the cells were washed from unbound lectin (due to their low binding constant) with cell surfaces and this would lead to an underestimated percentage of stained cells.
Для этого семена гороха перемалывают в мельнице в муку с размером гранул менее 0.1 мм. Затем заливают 4-кратным по весу количеством 0.5% раствора NaCl и настаивают в течение 3 часов при 4°С. Экстракт подкисляют до рН 4,6 с помощью 5N HCl и центрифугируют для удаления осадка при 1500 g в течение 30 мин.To do this, pea seeds are ground in a mill into flour with a grain size of less than 0.1 mm. Then pour 4 times the weight of 0.5% NaCl solution and insist for 3 hours at 4 ° C. The extract was acidified to pH 4.6 with 5N HCl and centrifuged to remove sediment at 1500 g for 30 minutes.
Твердый сульфат аммония (NH4)2SO4 добавляют к супернатанту до достижения 60% насыщения раствора. Выпавший в осадок белок собирают центрифугированием при 3000 g в течение 30 мин. Осадок растворяют в минимальном объеме воды и диализируют строго при 4°С против 0.15М раствора NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2). Белок, выпавший в осадок во время диализа, также удаляют центрифугированием при 3000 g в течение 30 мин.Solid ammonium sulfate (NH 4 ) 2 SO 4 is added to the supernatant to achieve 60% saturation of the solution. The precipitated protein is collected by centrifugation at 3000 g for 30 minutes. The precipitate is dissolved in a minimum volume of water and dialyzed strictly at 4 ° C against a 0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2). Protein precipitated during dialysis is also removed by centrifugation at 3000 g for 30 minutes.
Супернатант наносят на колонку с Sephadex G-100 (26×100 см). Несвязавшийся белок элюируют 4 л 0.15М раствора NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2). Лектин гороха элюируют 0.15М раствора NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2) с содержанием глюкозы от 0.01 до 0.2М, с шаговым повышением концентрации глюкозы 0.01, 0.05 и 0.2М. Элюированный лектин собирают в три отдельные фракции, которые подвергают диализу против 0.15М раствора NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2). Белок стерилизуют микрофильтрацией с помощью 0.22μ Millipore фильтра.The supernatant is applied to a Sephadex G-100 column (26 × 100 cm). Unbound protein was eluted with 4 L of a 0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2). Pea lectin is eluted with a 0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2) with a glucose content from 0.01 to 0.2 M, with a stepwise increase in glucose concentrations of 0.01, 0.05 and 0.2 M. The eluted lectin is collected in three separate fractions, which are dialyzed against a 0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2). Protein is sterilized by microfiltration using a 0.22μ Millipore filter.
Далее проводят мечение изоформы лектина флуоресцеинизотиоцианатом. Мечение изоформы лектина именно этим флуоресцентным красителем необходимо, так как именно флуоресцеинизотиоцианат флуоресцирует от лазерного источника света, который используется в проточном цитофлуориметре.Next, the lectin isoform is labeled with fluorescein isothiocyanate. Labeling of the lectin isoform with this fluorescent dye is necessary, since it is fluorescein isothiocyanate that fluoresces from a laser light source, which is used in a flow cytometer.
В данном приборе соединены воедино два блока - оптический прибор с лазерным источником света и мощный компьютер. Клетки анализируемого образца попадают и двигаются в тонком стеклянном капилляре, луч лазера просвечивает этот капилляр и клетки, которые по нему двигаются. В различных направлениях по ходу лазерного луча стоят многочисленные детекторы, которые оценивают прохождение света через клетку, его рассеивание на объекте, отражение, флуоресценцию и т.д.In this device, two units are connected together - an optical device with a laser light source and a powerful computer. The cells of the analyzed sample enter and move in a thin glass capillary, a laser beam shines through this capillary and the cells that move along it. In various directions along the laser beam there are numerous detectors that evaluate the passage of light through the cell, its scattering on the object, reflection, fluorescence, etc.
Компьютер по специальной программе оценивает поступающую информацию и выдает оптические параметры каждой, прошедшей по капилляру клетки, определяя уровень флуоресценции каждой из них, что позволяет измерить количество лектина, связавшегося с клеткой и, следовательно, уровень сахаров на поверхности анализируемой клетки, которые доступны для связывания с данным лектином.The computer, using a special program, evaluates the incoming information and gives out the optical parameters of each cell that has passed through the capillary, determining the level of fluorescence of each of them, which makes it possible to measure the amount of lectin bound to the cell and, therefore, the level of sugars on the surface of the analyzed cell that are available for binding to given lectin.
Исходно раствор лектина хранят в 0.15М растворе NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2) с добавлением азида натрия до конечной концентрации 0.1% в концентрации 8 мг/белка на мл. Для мечения берут 0.5 мл раствора и доводят этим же буфером объем до 2.5 мл. Этот объем наносят на колонку PD-10, уравновешенную 0.1М карбонатным буфером рН 9.3. Белок элюируют 3 мл карбонатного буфера. Таким образом получают раствор белка с концентрацией в пределах 0.5-2 мг/мл. 1 мг флуоресцеинизотиоцианата растворяют в 1 мл диметилсульфоксида и добавляют к раствору белка из расчета 25 мкл на 1 мл буфера. Раствор перемешивают и оставляют на ночь при 4°С. По окончании инкубации к раствору добавляют 100 мкл 0.5М раствора хлорида аммония и оставилют в прежних условиях при 4°С на 2 часа. Затем лектин переводят в исходный буфер (0.15М раствора NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2) с добавлением азида натрия до конечной концентрации 0.1%) с помощью колонки PD-10, уравновешенной 0.15М раствора NaCl в 0.01М фосфатном буфере (рН 7.2) с добавлением азида натрия до конечной концентрации 0.1%.Initially, the lectin solution was stored in a 0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2) with sodium azide added to a final concentration of 0.1% at a concentration of 8 mg / protein per ml. For labeling, take 0.5 ml of the solution and adjust the volume to 2.5 ml with the same buffer. This volume is applied to a PD-10 column balanced with 0.1M carbonate buffer pH 9.3. The protein is eluted with 3 ml of carbonate buffer. Thus, a protein solution with a concentration in the range of 0.5-2 mg / ml is obtained. 1 mg of fluoresceinisothiocyanate is dissolved in 1 ml of dimethyl sulfoxide and added to the protein solution at the rate of 25 μl per 1 ml of buffer. The solution was stirred and left overnight at 4 ° C. At the end of the incubation, 100 μl of a 0.5 M solution of ammonium chloride was added to the solution and left under the same conditions at 4 ° С for 2 hours. Then, the lectin is transferred to the initial buffer (0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2) with sodium azide added to a final concentration of 0.1%) using a PD-10 column balanced with 0.15 M NaCl solution in 0.01 M phosphate buffer (pH 7.2 ) with the addition of sodium azide to a final concentration of 0.1%.
Диагностика онкологического заболевания на перевиваемой карциноме ЭрлихаDiagnosis of cancer on transplantable Ehrlich carcinoma
Перевиваемые опухолевые модели позволяют быстро изучить те изменения, которые происходят в организме на фоне роста опухоли. Для этого берут животных одной линии, веса, пола, возраста и части из них перевивают опухоль, а часть используют как контроль. Большинство опухолей уже через две-три недели достигают значительных размеров, в то время как животные без опухоли являются адекватным контролем на те изменения в организме, которые происходят именно на рост опухоли.Transferred tumor models allow you to quickly study the changes that occur in the body against the background of tumor growth. To do this, take animals of the same line, weight, gender, age, and part of them inoculate the tumor, and part is used as a control. Most tumors reach significant size within two to three weeks, while animals without a tumor are an adequate control for those changes in the body that occur precisely on the growth of the tumor.
На фоне роста карциномы Эрлиха в сыворотке крови мышей появляются для этой опухоли факторы, ускоряющие ее рост в опытах in vivo. Однако природа этих изменений остается неизвестной, так как не удается выявить каких-либо опухольспецифических факторов. Нами было высказано предположение, что этот феномен связан с изменением гликозилирования белков крови и мембран лимфоцитов. С целью подтверждения этого предположения было изучено изменение связывания меченой изоформы лектина гороха с лейкоцитами крови на фоне роста карциномы Эрлиха. Выделенная изоформа лектина обладает способностью связываться с глюкозидом и маннозой, в том числе и входящей в состав полисахаридов при гликозилировании белков.Against the background of the growth of Ehrlich carcinoma in the blood serum of mice, factors appear for this tumor that accelerate its growth in in vivo experiments. However, the nature of these changes remains unknown, since it is not possible to identify any tumor-specific factors. We have suggested that this phenomenon is associated with a change in the glycosylation of blood proteins and lymphocyte membranes. In order to confirm this assumption, we studied the change in the binding of the labeled pea lectin isoform to blood leukocytes against the background of the growth of Ehrlich carcinoma. The isolated lectin isoform has the ability to bind to glucoside and mannose, including that included in the polysaccharides during protein glycosylation.
Способ осуществляют с использованием самцов мышей F1(CBAxC57BL/6), мышей линии C57BL/6 самцов. В каждой группе используют 10 животных. Клетки карциномы Эрлиха трансплантируют внутримышечно по 106 клеток в 0.2 мл среды RPMI-1640 на мышь. Лимфоциты выделяют из периферической крови мышей на 15 сутки после трансплантации опухоли по стандартной методике в градиенте плотности 1.093. Каждый эксперимент повторяют не менее 3 раз.The method is carried out using male F 1 mice (CBAxC 57 BL / 6), C 57 BL / 6 male mice. In each group, 10 animals are used. Ehrlich carcinoma cells are transplanted intramuscularly with 10 6 cells in 0.2 ml of RPMI-1640 medium per mouse. Lymphocytes are isolated from the peripheral blood of mice on the 15th day after tumor transplantation by a standard technique in a density gradient of 1.093. Each experiment is repeated at least 3 times.
Определение экспрессии поверхностных маркеров на поверхности лимфоцитов проводят при помощи меченных флуоресцеинизотиоцианатом лектинов. Оценку специфичности связывания пектинов с клеточной поверхностью подтверждают ингибированием их связывания при добавлении сахаров. Результаты учитывают методом проточной цитофлюорометрии на проточном цитометре FACScan (Becton Dickinson, США). Гейт (окно) популяции клеток устанавливают на основе комбинации прямого и бокового светорассеяния и размера клеток. Подобный подход полностью исключает субъективный фактор при проведении анализа, так измерения проводятся детекторами прибора и их показания полностью определяются оптическими свойствами анализируемого объекта. При учете результатов подсчитывают 10000 событий в гейте. Статистическую обработку материала проводят при помощи программного пакета WINMDI 2.8.The expression of surface markers on the surface of lymphocytes is determined using fluorescein isothiocyanate-labeled lectins. The assessment of the specificity of binding of pectins to the cell surface is confirmed by the inhibition of their binding with the addition of sugars. The results are taken into account by flow cytometry using a FACScan flow cytometer (Becton Dickinson, USA). The gate (window) of the cell population is established based on a combination of direct and side light scattering and cell size. Such an approach completely eliminates the subjective factor during the analysis, so the measurements are carried out by the instrument detectors and their readings are completely determined by the optical properties of the analyzed object. When taking into account the results, 10,000 events in the gate are counted. Statistical processing of the material is carried out using the WINMDI 2.8 software package.
Исследовали связывание лектинов с поверхностью лимфоцитов периферической крови интактных мышей и мышей на 20 день карциномы Эрлиха. В таблице 1 приведены усредненные данные по всем сериям экспериментов с различным видимым объемом опухоли от минимального менее 1 мм3 до 5 см3.We studied the binding of lectins to the surface of peripheral blood lymphocytes of intact mice and mice on day 20 of Ehrlich carcinoma. Table 1 shows the averaged data for all series of experiments with different visible tumor volumes from a minimum of less than 1 mm 3 to 5 cm 3 .
На фигуре 1 показано распределение клеток лимфоцитов крови здоровых мышей. По оси абсцисс показано распределение клеток лимфоцитов периферической крови в зависимости от их фронтального светорассеивания, а по оси ординат показано светорассеивание клеток в зависимости от их бокового светорассеивания. Лимфоциты формируют плотное облако, что свидетельствует об однородности рассматриваемых клеток. Выделенная рамка (многоугольник) на фигуре 1 называется гейт, она показывает ту популяцию лимфоцитов крови мышей, которая изучается на предмет связывания их с лектинами. Анализируемые клетки обладают сходными оптическими характеристиками как для контрольных животных, так и для животных-опухоленосителей, что также исключает субъективный фактор в проведении исследования.Figure 1 shows the distribution of blood lymphocyte cells in healthy mice. The abscissa axis shows the distribution of peripheral blood lymphocyte cells depending on their frontal light scattering, and the ordinate axis shows the light scattering of cells depending on their lateral light scattering. Lymphocytes form a dense cloud, which indicates the homogeneity of the cells in question. The highlighted frame (polygon) in Figure 1 is called the gate; it shows the population of mouse blood lymphocytes that is being studied for their binding to lectins. The analyzed cells have similar optical characteristics for both control animals and tumor-bearing animals, which also eliminates the subjective factor in the study.
На фигуре 2 представлена гистограмма распределения нормальных лейкоцитов крови до их окраски лектином гороха (гистограмма 1) и после окраски ФИЦ-меченным лектином гороха (гистограмма 2). Следовательно, после инкубации с лектином происходит сдвиг гистограммы вправо по оси абсцисс, что свидетельствует об увеличении флуоресценции клеток вследствие связывания с ними меченой изоформы лектина. При этом процент связанных клеток составляет 91,2%. По оси ординат показано число клеток, которые имеют соответствующий уровень флуоресценции.The figure 2 presents a histogram of the distribution of normal blood leukocytes before staining with pea lectin (histogram 1) and after staining with FIC-labeled pea lectin (histogram 2). Therefore, after incubation with lectin, the histogram shifts to the right along the abscissa, which indicates an increase in the fluorescence of cells due to the binding of the labeled lectin isoform to them. Moreover, the percentage of bound cells is 91.2%. The ordinate shows the number of cells that have an appropriate level of fluorescence.
На фигуре 3 приведены гистограммы лимфоцитов периферической крови животных-опухоленосителей до их окраски изоформой лектина гороха и после окраски. Так же, как в случае с нормальными лимфоцитами, окраска лектином гороха вызывает сдвиг гистограммы вправо. При этом только 21,3% клеток находятся в тех же пределах окраски, тогда как в контроле таких клеток 91,2%. Таким образом процент меченых клеток уменьшился на 69,9% (91,2-21,3=69,9).The figure 3 shows the histograms of peripheral blood lymphocytes of animal tumor carriers before staining with pea lectin isoform and after staining. As with normal lymphocytes, pea lectin staining causes a histogram shift to the right. However, only 21.3% of the cells are within the same color range, while in the control of such cells 91.2%. Thus, the percentage of labeled cells decreased by 69.9% (91.2-21.3 = 69.9).
Таким образом, окраска меченой изоформой лектина гороха лимфоцитов периферической крови мышей показала, что на фоне роста опухолей наблюдается уменьшение доступности сахаров (гликозида и маннозы) для связывания с лектинами на поверхности клеток. Рассматриваемые изменения гликозилирования мембранных белков могут вызвать нарушение адгезивных свойств лимфоцитов и снижение связывания их с поверхностью опухолевых клеток, что может привести к недостаточности противоопухолевого иммунитета.Thus, staining of mouse peripheral blood lymphocyte labeled pea lectin isoforms showed that, against the background of tumor growth, there is a decrease in the availability of sugars (glycoside and mannose) for binding to lectins on the cell surface. The considered changes in the glycosylation of membrane proteins can cause a violation of the adhesive properties of lymphocytes and a decrease in their binding to the surface of tumor cells, which can lead to insufficiency of antitumor immunity.
Выделенная в соответствии с изобретением изоформа лектина гороха может быть использована для диагностики онкологического заболевания (см. таблицу).The pea lectin isoform isolated in accordance with the invention can be used for the diagnosis of cancer (see table).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004121099/15A RU2275633C2 (en) | 2004-07-12 | 2004-07-12 | Method for diagnosis of ehrlich's carcinoma |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004121099/15A RU2275633C2 (en) | 2004-07-12 | 2004-07-12 | Method for diagnosis of ehrlich's carcinoma |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004121099A RU2004121099A (en) | 2005-12-20 |
| RU2275633C2 true RU2275633C2 (en) | 2006-04-27 |
Family
ID=35869558
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004121099/15A RU2275633C2 (en) | 2004-07-12 | 2004-07-12 | Method for diagnosis of ehrlich's carcinoma |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2275633C2 (en) |
-
2004
- 2004-07-12 RU RU2004121099/15A patent/RU2275633C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ГОВАЛЛО В.И. и др. Вопросы онкологии. 1987, т.33, №9, с.15-21. * |
| ОСЬМАК A.A. и др. Лектины лекарственных растений в иммунодиагностике и прогнозировании. Изучение и применение пектинов. Т.2. Лектины в биологии и медицине. 1989, Тарту, с.217-222. ЛУЦИК A.A. и др. Лектины в гистохимии. Львов: Изд-во при Львовском государственном Университете Издательского объединения "Вища школа", 1989, с.76-80. ХОМУТОВСКИЙ О.О. и др. Электронная гистохимия рецепторов клеточных мембран. Киев: Наукова думка, 1986, с.21-24. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004121099A (en) | 2005-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pearse | The nature of Russell bodies and Kurloff bodies: Observations on the cytochemistry of plasma cells and reticulum cells | |
| Isla Larrain et al. | IDO is highly expressed in breast cancer and breast cancer-derived circulating microvesicles and associated to aggressive types of tumors by in silico analysis | |
| EP3159694B1 (en) | Sandwich assay using labeled lectin and kit therefor | |
| Noorman et al. | Monoclonal antibodies against the human mannose receptor as a specific marker in flow cytometry and immunohistochemistry for macrophages | |
| FR2501865A2 (en) | METHOD FOR THE ANALYSIS, BY DIFFERENTIAL SORPTION OF A METACHROMATIC COLOR, OF VARIOUS BLOOD LEUKOCYTES | |
| DE3129923A1 (en) | METHOD FOR DETERMINING TUMOR-ASSOCIATED, GLYCOPROTEIN-CONTAINING COMPOUNDS, AND METHOD FOR DIAGNOSING CANCER | |
| US20210322513A1 (en) | Method for detecting cancer cells, reagent for introducing substance into cancer cells, and composition for treating cancer | |
| JPH05133957A (en) | Preservation of cell as collation reference or standard in cell analysis | |
| CN109563486A (en) | For making the diagnostic method of the specific Treatment decsion of patient in cancer is nursed | |
| FR2523310A2 (en) | METHOD FOR THE ANALYSIS AND DETERMINATION, BY DIFFERENTIAL SORPTION OF A METACHROMATIC DYE AND EMISSION OF A FLUORESCENT LIGHT, OF THE VARIOUS BLOOD LEUKOCYTES AT THEIR VARIOUS STAGES OF DEVELOPMENT | |
| Roth | Applications of immunocolloids in light microscopy. II. Demonstration of lectin-binding sites in paraffin sections by the use of lectin-gold or glycoprotein-gold complexes. | |
| Nagata | Special cytochemistry in cell biology | |
| Liu et al. | Single-particle analysis of tear fluid reveals abundant presence of tissue factor-exposing extracellular vesicles with strong coagulation activity | |
| Yunusova et al. | The characterization of exosome from blood plasma of patients with colorectal cancer | |
| Rosato et al. | Serum fucose in the diagnosis of breast cancer | |
| Pillai et al. | Development of cortical vesicles in Sicyonia ingentis ova: their heterogeneity and role in elaboration of the hatching envelope | |
| Watson et al. | Studies of protoporphyrin: IV. A comparison of the erythrocyte protoporphyrin concentration with the reticulocyte percentage under experimental and clinical conditions | |
| Newsome et al. | Detection of lymphocytes in the vitreous gel of patients with retinitis pigmentosa | |
| Zadka et al. | Label-Free Quantitative Phase Imaging Reveals Spatial Heterogeneity of Extracellular Vesicles in Select Colon Disorders | |
| Hakala et al. | Cell mediated cytotoxicity against human transitional cell carcinomas of the genitourinary tract | |
| EP1516182B1 (en) | Method for the determination of characteristics and/or the classification of circulating macrophages, and analysis arrangement for carrying out said method | |
| RU2275633C2 (en) | Method for diagnosis of ehrlich's carcinoma | |
| Whelan et al. | HLA class I and β2-microglobulin expression in frozen and formaldehyde-fixed paraffin sections of neuroblastoma tumors | |
| Schumacher et al. | Molecular anatomy of a skin gland: histochemical and biochemical investigations on the mucous glands of Xenopus laevis. | |
| Shtam et al. | Aggregation by lectins as an approach for exosome isolation from biological fluids: Validation for proteomic studies |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080713 |