RU2264405C2

RU2264405C2 - 40-o-(2-hydroxy)ethylrapamycin in crystalline nonsolvated form, pharmaceutical composition comprising such macrolide as active substance and method for its preparing

Info

Publication number: RU2264405C2
Application number: RU2003136738/04A
Authority: RU
Inventors: Франсуа НАВАРРО (FR); Франсуа НАВАРРО; Самюэль ПЕТИ (FR); Самюэль ПЕТИ; Гай СТОУН (CH); Гай СТОУН
Original assignee: Новартис Аг
Priority date: 1999-12-06
Filing date: 1999-12-06
Publication date: 2005-11-20
Also published as: RU2003136738A

Abstract

FIELD: organic chemistry, antibiotics, pharmacy.

SUBSTANCE: invention relates to a new crystalline nonsolvated form of 40-O-(2-hydroxy)-ethylrapamycin that shows crystalline lattice with the following parameters: a = 14.37Å; b = 11.24Å; c = 18.31 Å, and volume value is 2805Å. Also, invention relates to a method for preparing this crystalline form that involves crystallization of 40-O-(2-hydroxy)ethylrapamycin from a solvent with mixture with aliphatic hydrocarbon of the formula C_nH_2n+2 wherein n = 5, 6 or 7. Also, invention relates to a pharmaceutical composition based on thereof and its using in preparing medicinal agents used in treatment or prophylaxis of organ or tissue transplant rejection, autoimmune, inflammatory states, asthma, proliferative disorders, tumor or hyperproliferative vascular diseases. Invention provides preparing the novel crystalline nonsolvated form of 40-O-(2-hydroxy)ethylrapamycin possessing immunosuppressive properties.

EFFECT: improved preparing method, improved and valuable medicinal properties of compound and composition.

7 cl, 2 ex

Description

Изобретение относится к стабилизации фармацевтического действующего вещества, чувствительного к окислению, например полиенового макролида, предпочтительно полиенового макролида, обладающего иммуносупрессорными свойствами, прежде всего рапамицинов.The invention relates to the stabilization of a pharmaceutical active substance that is sensitive to oxidation, for example, a polyene macrolide, preferably a polyene macrolide, having immunosuppressive properties, in particular rapamycins.

Обработка и хранение, прежде всего бестарное хранение, фармацевтических действующих веществ, чувствительных к окислению, являются затруднительными. В этом случае необходимо применять специальные методы обработки, и часто чувствительный к окислению ингредиент хранят в герметичной упаковке в атмосфере защитного газа. В процессе приготовления композиций на основе таких фармацевтических действующих веществ добавляют значительные количества стабилизаторов.The processing and storage, especially bulk storage, of pharmaceutical active substances that are sensitive to oxidation are difficult. In this case, it is necessary to apply special processing methods, and often the oxidation sensitive ingredient is stored in a sealed package in a protective gas atmosphere. During the preparation of compositions based on such pharmaceutical active substances, significant amounts of stabilizers are added.

Полиеновые макролиды обладают удовлетворительными характеристиками стабильности. Однако при создании изобретения было установлено, что их стабильность в отношении кислорода может быть значительно улучшена путем добавления стабилизатора, например антиоксиданта, на стадии их выделения.Polyene macrolides have satisfactory stability characteristics. However, when creating the invention, it was found that their stability with respect to oxygen can be significantly improved by adding a stabilizer, for example an antioxidant, at the stage of their isolation.

Объектом изобретения являетсяThe object of the invention is

1. Способ стабилизации полиенового макролида, предусматривающий добавление антиоксиданта к очищенному макролиду, предпочтительно в начале стадии его выделения.1. A method of stabilizing a polyene macrolide comprising adding an antioxidant to a purified macrolide, preferably at the beginning of the isolation step.

Способ может применяться прежде всего для получения стабилизированного полиенового макролида без упаковки. Количество антиоксиданта обычно может составлять до 1%, более предпочтительно от 0,01 до 0,5% (в пересчете на массу макролида). Далее в настоящем описании такое небольшое количество называется каталитическим количеством.The method can be used primarily to obtain stabilized polyene macrolide without packaging. The amount of antioxidant can usually be up to 1%, more preferably from 0.01 to 0.5% (based on the weight of the macrolide). Hereinafter, such a small amount is called a catalytic amount.

Кроме того, объектом настоящего изобретения также является:In addition, an object of the present invention is also:

2. Смесь, например смесь без упаковки, содержащая полиеновый макролид и антиоксидант, предпочтительно в каталитическом количестве, предпочтительно в твердой форме.2. A mixture, for example, an unpacked mixture containing a polyene macrolide and an antioxidant, preferably in a catalytic amount, preferably in solid form.

Смесь может находиться в форме отдельных частиц, например, в кристаллической или аморфной форме. Она может находиться в стерильном или практически стерильном состоянии, например в состоянии, пригодном для фармацевтического применения.The mixture may be in the form of individual particles, for example, in crystalline or amorphous form. It may be in a sterile or substantially sterile state, for example, in a condition suitable for pharmaceutical use.

3. Применение смеси, указанной в п.2, для приготовления фармацевтической композиции.3. The use of the mixture specified in claim 2 for the preparation of a pharmaceutical composition.

Примерами полиеновых макролидов являются, например, молекулы, содержащие двойные связи, предпочтительно сопряженные двойные связи, например, соединения, обладающие антибиотическими и/или иммуносупрессорными свойствами, например макролиды, содержащие лактамовую или лактоновую связь, и их производные, например, соединения, обладающие биологической активностью, качественно сходной с активностью встречающихся в естественных условиях макролидов, например, замещенные химическим путем макролиды. Соответствующими примерами являются, например, рапамицины и аскомипины. Предпочтительным полиеновым макролидом является макролид, содержащий по крайней мере 2 сопряженные двойные связи, например 3 сопряженные двойные связи.Examples of polyene macrolides are, for example, molecules containing double bonds, preferably conjugated double bonds, for example, compounds having antibiotic and / or immunosuppressive properties, for example macrolides containing a lactam or lactone bond, and derivatives thereof, for example, compounds having biological activity qualitatively similar to the activity of naturally occurring macrolides, for example, chemically substituted macrolides. Suitable examples are, for example, rapamycins and ascomipines. A preferred polyene macrolide is a macrolide containing at least 2 conjugated double bonds, for example 3 conjugated double bonds.

Рапамицин представляет собой известный лактамовый макролид, который продуцируется, например, Streptomyces hvgroscopicus. Строение рапамицина описано у Н. Kessler и др., Helv. Chim. Acta, 76: 117, 1993. Рапамицин обладает антибиотическими и иммуносупрессорными свойствами. Известны производные рапамицина, например, 16-О-замещенные рапамицины, например, описанные в WO 94/01136 и WO 96/41807, 40-О-замещенные рапамицины, например, описанные в WO 94/09010, WO 92/05179, WO 95/14023, WO 94/01136, WO 94/02385 и WO 96/13273, все документы включены в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительными производными рапамицина являются, например, рапамицины, в которых гидроксигруппа в положении 40 формулы А, приведенной на стр.1 WO 94/01010, замещена группой -OR, где R обозначает гидроксиалкил, гидроксиалкоксиалкил, ациламиноалкил или аминоалкил, например, 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин, 40-O-(3-гидрокси)пропилрапамицин и 40-O-[2-(2-гидрокси)этокси]этилрапамицин.Rapamycin is a known lactam macrolide that is produced, for example, by Streptomyces hvgroscopicus. The structure of rapamycin is described by N. Kessler et al., Helv. Chim. Acta, 76: 117, 1993. Rapamycin has antibiotic and immunosuppressive properties. Derivatives of rapamycin, for example, 16-O-substituted rapamycins, for example, described in WO 94/01136 and WO 96/41807, 40-O-substituted rapamycins, for example, described in WO 94/09010, WO 92/05179, WO 95 / 14023, WO 94/01136, WO 94/02385 and WO 96/13273, all documents are incorporated herein by reference. Preferred rapamycin derivatives are, for example, rapamycins in which the hydroxy group at position 40 of formula A shown on page 1 of WO 94/01010 is substituted with an —OR group, where R is hydroxyalkyl, hydroxyalkoxyalkyl, acylaminoalkyl or aminoalkyl, for example 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin, 40-O- (3-hydroxy) propylrapamycin and 40-O- [2- (2-hydroxy) ethoxy] ethylrapamycin.

Аскомицины, среди которых наиболее известными являются FK-506 и аскомицин, представляют собой другой класс лактамовых макролидов, многие из которых обладают выраженной иммуносупрессорной и противовоспалительной активностью. FK-506 представляет собой лактамовый макролид, продуцируемый Streptomyces tsukubaensis. Строение FK-506 приведено в приложении к Merck Index, 11-е изд. (1989) в пункте А5. Аскомицин описан, например, в USP 3244592. Аскомицин, FK-506 и другие встречающиеся в естественных условиях макролиды, обладающие сходной биологической активностью, и их производные, например синтетические аналоги, и производные, в целом называются "аскомицинами". Примерами синтетических аналогов или производных являются, например, галогенированные аскомицины, например, 33-эпихлор-33-дезоксиаскомицин, описанный в ЕР-А 427680, тетрагидропирановые производные, которые, например, описаны в ЕР-А 626385.Ascomycins, among which the most famous are FK-506 and ascomycin, are another class of lactam macrolides, many of which have pronounced immunosuppressive and anti-inflammatory activity. FK-506 is a lactam macrolide produced by Streptomyces tsukubaensis. The structure of the FK-506 is given in the appendix to the Merck Index, 11th ed. (1989) in paragraph A5. Ascomycin is described, for example, in USP 3244592. Ascomycin, FK-506 and other naturally occurring macrolides having similar biological activity and derivatives thereof, for example synthetic analogs and derivatives, are generally referred to as "ascomycins." Examples of synthetic analogs or derivatives are, for example, halogenated ascomycins, for example, 33-epichloro-33-deoxy-ascomycin described in EP-A 427680, tetrahydropyran derivatives, which, for example, are described in EP-A 626385.

Наиболее предпочтительными макролидами являются рапамицин и 40-О-(2-гидрокси) этилрапамицин.The most preferred macrolides are rapamycin and 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin.

Предпочтительными антиоксидантами являются, например, 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (далее в настоящем описании называемый ВНТ), витамин Е или С, наиболее предпочтительным является ВНТ.Preferred antioxidants are, for example, 2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol (hereinafter referred to as BHT), vitamin E or C, BHT is most preferred.

Наиболее предпочтительной смесью по изобретению является смесь рапамицина или 40-О-(2-гидрокси)этилрапамицина и 0,2% (в пересчете на массу макролида) антиоксиданта, предпочтительно ВНТ.The most preferred mixture of the invention is a mixture of rapamycin or 40-O- (2-hydroxy) ethyl rapamycin and 0.2% (based on macrolide weight) antioxidant, preferably BHT.

Антиоксидант может быть добавлен к полиеновому макролиду в начале стадий выделения, предпочтительно на конечной стадии выделения, более предпочтительно непосредственно перед конечной стадией осаждения. Макролид предпочтительно находится в очищенном состоянии. Он может быть растворен в инертном растворителе, и к образовавшемуся раствору добавляют антиоксидант, после чего осуществляют стадию осаждения стабилизированного макролида, например, в аморфной форме или в форме кристаллов. Предпочтительно смесь по изобретению находится в аморфной форме.An antioxidant may be added to the polyene macrolide at the beginning of the isolation step, preferably at the final isolation step, more preferably immediately before the final precipitation step. The macrolide is preferably in a purified state. It can be dissolved in an inert solvent, and an antioxidant is added to the resulting solution, followed by the stage of precipitation of the stabilized macrolide, for example, in amorphous form or in the form of crystals. Preferably, the mixture of the invention is in amorphous form.

Полученный стабилизированный макролид неожиданно обладает более высокой стабильностью к окислению, и его обработка и хранение, например, в форме без упаковки, до его дальнейшей обработки, например, для получения галеновой композиции, становятся намного легче. Это наиболее важно для макролидов в аморфной форме.The obtained stabilized macrolide unexpectedly has a higher oxidation stability, and its processing and storage, for example, in unpacked form, until its further processing, for example, to obtain a galenic composition, become much easier. This is most important for macrolides in amorphous form.

Макролид, стабилизированный согласно изобретению, может применяться в немодифицированной форме для приготовления требуемой галеновой композиции. Такие композиции могут быть приготовлены согласно известным в данной области методам, включающим добавление одного или нескольких фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей, в том числе при необходимости добавление дополнительного стабилизатора.The macrolide stabilized according to the invention can be used in unmodified form to prepare the desired galenic composition. Such compositions can be prepared according to methods known in the art, including the addition of one or more pharmaceutically acceptable diluents or carriers, including, if necessary, the addition of an additional stabilizer.

В соответствии с этим еще одним объектом изобретения является:In accordance with this, another object of the invention is:

4. Фармацевтическая композиция, включающая в качестве действующего вещества описанную выше стабилизированную смесь в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.4. A pharmaceutical composition comprising, as an active ingredient, the stabilized mixture described above in combination with one or more pharmaceutically acceptable diluents or carriers.

Композиция по изобретению может быть приспособлена для перорального, парентерального, местного (например, на кожу), глазного, назального введения или введения путем ингаляции (например, в легкие). Предпочтительной композицией является композиция для перорального введения, предпочтительно безводная композиция, в которой действующее вещество представляет собой лактоновый макролид.The composition of the invention can be adapted for oral, parenteral, topical (eg, on the skin), ophthalmic, nasal administration or administration by inhalation (eg, to the lungs). A preferred composition is an oral composition, preferably an anhydrous composition in which the active substance is a lactone macrolide.

Фармацевтические композиции по изобретению могут включать другие эксципиенты, например, замасливатель, разрыхлитель, поверхностно-активное вещество, носитель, разбавитель, усилитель запаха и т.д. Композиции могут находиться в жидкой форме, например, в форме растворов, суспензий или эмульсий, таких как микроэмульсии, например, описанные в USP 5536729, или в твердой форме, например в форме капсул, таблеток, драже, порошков (включая тонкоизмельченные или другим образом уменьшенные частицы), твердые дисперсии, гранулы и т.д., например, описанные в WO 97/03654, содержание обоих документов включено в настоящее описание в качестве ссылки, или в полутвердых формах, таких как мази, гели, кремы и пасты. Предпочтительно их приготавливают в форме, пригодной для перорального введения. Предпочтительно они находятся в твердой форме. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть получены согласно известным методам путем смешения макролида, стабилизированного согласно изобретению, с дополнительными ингредиентами; при этом ингредиенты могут быть размолоты или измельчены и при необходимости спрессованы, например, в таблетки.The pharmaceutical compositions of the invention may include other excipients, for example, a sizing agent, a disintegrant, a surfactant, a carrier, a diluent, an odor enhancer, etc. The compositions may be in liquid form, for example, in the form of solutions, suspensions or emulsions, such as microemulsions, for example described in USP 5536729, or in solid form, for example in the form of capsules, tablets, dragees, powders (including micronized or otherwise reduced particles), solid dispersions, granules, etc., for example, described in WO 97/03654, the contents of both documents are incorporated herein by reference, or in semi-solid forms such as ointments, gels, creams and pastes. Preferably, they are prepared in a form suitable for oral administration. Preferably they are in solid form. The pharmaceutical compositions of the invention can be prepared according to known methods by mixing stabilized macrolide according to the invention with additional ingredients; however, the ingredients can be crushed or crushed and, if necessary, compressed, for example, into tablets.

Настоящее изобретение наиболее предпочтительно касается содержащих рапамицин композиций в жидкой или твердой форме. Наиболее предпочтительной композицией является твердая дисперсия, например, содержащая стабилизированный рапамицин по изобретению и носитель, например водорастворимый полимер, такой как гидроксипропилметилцеллюлоза, например, как описано в WO 97/03654.The present invention most preferably relates to compositions containing rapamycin in liquid or solid form. The most preferred composition is a solid dispersion, for example, containing the stabilized rapamycin of the invention and a carrier, for example, a water-soluble polymer, such as hydroxypropyl methylcellulose, for example, as described in WO 97/03654.

Композиции по изобретению могут применяться при показаниях, известных для макролидов, которые в них содержатся, например, в известных дозах. Например, если макролид обладает иммуносупрессорными свойствами, например, представляет собой рапамицин или производное рапамицина, то композиция может применяться, например, для лечения или предупреждения острого или хронического отторжения алло- или ксенотрансплантата органа или ткани, аутоиммунных болезней или воспалительных состояний, астмы, пролиферативных болезней, например, опухолей, или гиперпролиферативных сосудистых заболеваний, предпочтительно для предупреждения или лечения отторжения трансплантата.The compositions of the invention can be used for indications known for the macrolides that they contain, for example, in known doses. For example, if a macrolide has immunosuppressive properties, for example, is rapamycin or a rapamycin derivative, the composition can be used, for example, to treat or prevent acute or chronic rejection of an organ or tissue allo or xenograft, autoimmune diseases or inflammatory conditions, asthma, proliferative diseases , for example, tumors, or hyperproliferative vascular diseases, preferably for the prevention or treatment of transplant rejection.

Количество макролида и композиции, которое требуется ввести, зависит от многочисленных факторов, например, от применяемого действующего вещества, состояний, подлежащих лечению, продолжительности лечения и т.д. Например, для рапамицина или 40-О-(2-гидрокси)этилрапамицина пригодная суточная доза при пероральном введении составляет от 0,1 до 10 мг, и она может вводиться однократно или в виде разделенных доз.The amount of macrolide and composition to be administered depends on numerous factors, for example, on the active substance used, the conditions to be treated, the duration of treatment, etc. For example, for rapamycin or 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin, a suitable daily dose for oral administration is from 0.1 to 10 mg, and it can be administered once or in divided doses.

Еще одним объектом настоящего изобретения также является 40-О-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме, прежде всего в практически чистой форме. Предпочтительно кристаллическая форма отличается отсутствием или практически отсутствием любых компонентов растворителя; она находится в несольватированной форме.Another object of the present invention is also 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin in crystalline form, especially in substantially pure form. Preferably, the crystalline form is characterized by the absence or substantially absence of any solvent components; it is in unsolvated form.

Кристаллическая форма 40-О-(2-гидрокси)этилрапамицина относится к моноциклической системе. Образовавшиеся кристаллы имеют t_пл 146-147°С, в основном 146,5°С. Для идентификации новой кристаллической формы был проведен анализ с использованием дифракции ренгеновских лучей. Условия, при которых получали эти данные, были следующими:The crystalline form of 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin belongs to the monocyclic system. The resulting crystals have a _mp 146-147 ° C, mostly 146.5 ° C. To identify the new crystalline form, an analysis was carried out using X-ray diffraction. The conditions under which this data was obtained were as follows:

температураtemperature 293 (2) К293 (2) K длина волныwavelength 1,54178 Å1.54178 Å пространственная группаspace group P2₁ P2 ₁ размеры единичной ячейкиunit cell sizes аa 14,378(2) Å14.378 (2) Å bb 11,244(1) Å11,244 (1) Å сfrom 18,310(2) Å18,310 (2) Å ββ 108,58(1)°108.58 (1) ° объемvolume 2805,8(6) Å³ 2805.8 (6) Å ³ ZZ 22 плотность (рассчитанная)density (calculated) 1,134 г/см³ 1.134 g / cm ³ коэффициент поглощенияabsorption coefficient 0,659 мм^-1 0.659 mm ^-1 F(000)F (000) 10401040 размер кристаллаcrystal size 0,59×0,11×0,03 мм0.59 × 0.11 × 0.03 mm диапазон θ сбора данныхdata collection range θ от 2,55 до 57,20°from 2.55 to 57.20 ° количество регистрируемых отраженийnumber of recorded reflections 41824182 количество независимых отраженийnumber of independent reflections 4037 [R(int)=0,0341]4037 [R (int) = 0,0341] ослабление интенсивностиattenuation of intensity 32%32% метод уточненияrefinement method Метод наименьших квадратов сLeast squares method with использованием полной матрицыusing the full matrix F² F ² данные/ограничения/параметрыdata / restrictions / parameters 3134/1/6133134/1/613 качество подбора кривой F² quality selection curve F ² 1,0551,055 конечные индексы R [I>2 сигма (I)]finite indices R [I> 2 sigma (I)] R₁=0,0574, wR₂=0,1456R ₁ = 0.0574, wR ₂ = 0.1456 максимальный дифракционный пик и дыраmaximum diffraction peak and hole 0,340 и -0,184 е/Å³ 0.340 and -0.184 e / Å ³

40-О-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме может быть получен путем растворения аморфного соединения в растворителе, например в этилацетате, и добавления алифатического углеводорода С_nН_2n+2(n=5, 6 или 7). После добавления углеводорода образовавшаяся смесь может быть нагрета, например, до температуры 25-50°С, например, до 30-35°С. Выдерживание образовавшейся смеси обычно производят при низкой температуре, например, ниже 25°С, предпочтительно от 0 до 25°С. Кристаллы фильтруют и сушат. В качестве алифатического углеводорода предпочтительно используют гептан. При необходимости процесс образования центров кристаллизации можно инициировать, например, путем облучения ультразвуком или с помощью затравки.Crystalline 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin can be prepared by dissolving an amorphous compound in a solvent, for example ethyl acetate, and adding an aliphatic hydrocarbon C _n H _{2n + 2} (n = 5, 6 or 7). After adding the hydrocarbon, the resulting mixture can be heated, for example, to a temperature of 25-50 ° C, for example, to 30-35 ° C. The resulting mixture is usually aged at a low temperature, for example, below 25 ° C, preferably from 0 to 25 ° C. The crystals are filtered and dried. Heptane is preferably used as an aliphatic hydrocarbon. If necessary, the formation of crystallization centers can be initiated, for example, by irradiation with ultrasound or by seed.

Настоящее изобретение также относится к способу очистки 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицина, включающему кристаллизацию 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицина из среды для кристаллизации, например, из описанной выше среды, и выделения полученных таким образом кристаллов. Среда для кристаллизации может включать один или несколько компонентов в дополнение к перечисленным выше. Было установлено, что наиболее пригодной средой для кристаллизации является среда, содержащая приблизительно 2 части этилацетата и приблизительно 5 частей алифатического углеводорода, например гептана.The present invention also relates to a method for purifying 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin, comprising crystallizing 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin from a crystallization medium, for example, from the medium described above, and isolating the crystals thus obtained. The crystallization medium may include one or more components in addition to those listed above. It has been found that the most suitable crystallization medium is one containing about 2 parts of ethyl acetate and about 5 parts of an aliphatic hydrocarbon, for example heptane.

Было установлено, что 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме обладает in vitro и in vivo иммуносупрессорной активностью, сопоставимой с активностью аморфной формы. В локализованном GvHD максимальное ингибирование (70-80%) набухания лимфатических узлов достигается при использовании дозы 3 мг 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицина в кристаллической форме.It was found that 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin in crystalline form has in vitro and in vivo immunosuppressive activity comparable to that of the amorphous form. In localized GvHD, the maximum inhibition (70-80%) of lymph node swelling is achieved using a dose of 3 mg of 40-O- (2-hydroxy) ethyl rapamycin in crystalline form.

40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин может применяться для тех же показаний, которые известны для аморфного соединения, например, для предупреждения или лечения острого или хронического отторжения алло- или ксенотрансплантата, аутоиммунных болезней или воспалительных состояний, астмы, пролиферативных болезней, например опухолей, или гиперпролиферативных сосудистых заболеваний, например, как описано в WO 94/09010 или в WO 97/35575, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки. В целом удовлетворительные результаты получают при пероральном введении в дозах приблизительно от 0,05 до 5 или до 20 мг/кг/день, например, приблизительно от 0,1 до 2 или до 7,5 мг/кг/день, которые вводят в виде однократной дозы или в виде разделенных доз 2-4 раза в день. Таким образом, пригодные суточные дозы для пациентов составляют приблизительно до 10 мг, например от 0,1 до 10 мг.40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin can be used for the same indications as are known for an amorphous compound, for example, for the prevention or treatment of acute or chronic rejection of an allo or xenograft, autoimmune diseases or inflammatory conditions, asthma, proliferative diseases, for example tumors, or hyperproliferative vascular diseases, for example, as described in WO 94/09010 or in WO 97/35575, the contents of which are incorporated herein by reference. In general, satisfactory results are obtained when administered orally in doses of from about 0.05 to 5 or up to 20 mg / kg / day, for example, from about 0.1 to 2 or up to 7.5 mg / kg / day, which are administered as single dose or in divided doses 2-4 times a day. Thus, suitable daily dosages for patients are up to about 10 mg, for example from 0.1 to 10 mg.

40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме может вводиться любым пригодным путем, например перорально, например, в виде таблеток или капсул, или назально или в легкие (путем ингаляции). Он может вводиться в качестве единственного действующего вещества или вместе с другими лекарствами, например, иммунодепрессантами и/или иммуномодуляторами, и/или противовоспалительными агентами, например, как это описано в WO 94/09010.Crystalline 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin can be administered by any suitable route, for example, orally, for example, in the form of tablets or capsules, or nasally or into the lungs (by inhalation). It can be administered as the only active substance or together with other drugs, for example, immunosuppressants and / or immunomodulators and / or anti-inflammatory agents, for example, as described in WO 94/09010.

В соответствии с вышеизложенным объектами настоящего изобретения также являются:In accordance with the foregoing objects of the present invention are also:

5. Способ предупреждения или лечения острого или хронического отторжения алло- или ксенотрансплантата, аутоиммунных болезней или воспалительных состояний, астмы, пролиферативных болезней, или гиперпролиферативных сосудистых заболеваний у пациента, нуждающегося в таком лечении, предусматривающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицина в кристаллической форме.5. A method for preventing or treating acute or chronic rejection of an allo or xenograft, autoimmune diseases or inflammatory conditions, asthma, proliferative diseases, or hyperproliferative vascular diseases in a patient in need of such treatment, comprising administering to the indicated patient a therapeutically effective amount of 40-O- ( 2-hydroxy) ethyl rapamycin in crystalline form.

6. 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме, предназначенный для применения в качестве фармацевтического средства, например, согласно описанному выше способу.6. 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin in crystalline form, intended for use as a pharmaceutical, for example, according to the method described above.

7. Фармацевтическая композиция, включающая 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.7. A pharmaceutical composition comprising 40-O- (2-hydroxy) ethyl rapamycin in crystalline form together with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier.

8. Набор или упаковка, предназначенные для применения с целью иммуносупрессии или оказания противовоспалительного действия, включающие описанную выше фармацевтическую композицию, и фармацевтическая композиция, включающая иммунодепрессант или иммуномодулятор, или противовоспалительный агент.8. A kit or package intended for use for immunosuppression or anti-inflammatory action, comprising the pharmaceutical composition described above, and a pharmaceutical composition comprising an immunosuppressant or immunomodulator or anti-inflammatory agent.

Приведенные ниже примеры служат для иллюстрации изобретения, не ограничивая его объем.The following examples serve to illustrate the invention without limiting its scope.

Пример 1. КристаллизацияExample 1. Crystallization

0,5 г аморфного 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицина растворяют в 2,0 мл этилацетата при 40°С. Добавляют 5,0 мл гептана, после чего раствор становится "мутным". После нагревания до 30°С раствор снова становится прозрачным. После охлаждения до 0°С и поскребывания из раствора выделяется масло. Опытную пробирку закрывают и хранят в течение ночи при 10°С. Затем образовавшееся объемное твердое вещество фильтруют и промывают 0,5 мл смеси этилацетат/гексан (1:2,5) и образовавшиеся кристаллы сушат при 40°С при давлении 5 мбар в течение 16 ч. Таким образом получают 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин в кристаллической форме, имеющий t_пл 146,5°С.0.5 g of amorphous 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin was dissolved in 2.0 ml of ethyl acetate at 40 ° C. 5.0 ml of heptane is added, after which the solution becomes "cloudy". After heating to 30 ° C, the solution again becomes transparent. After cooling to 0 ° C and scraping, oil is released from the solution. The test tube is closed and stored overnight at 10 ° C. Then, the resulting bulk solid was filtered and washed with 0.5 ml of a mixture of ethyl acetate / hexane (1: 2.5) and the resulting crystals were dried at 40 ° C at a pressure of 5 mbar for 16 hours. Thus, 40-O- (2- hydroxy) ethyl rapamycin in crystalline form having a _{mp of} 146.5 ° C.

Крупномасштабная кристаллизация может быть осуществлена следующим образом.Large-scale crystallization can be carried out as follows.

250 г аморфного 40-О-(2-гидрокси)этилрапамицина растворяют при медленном перемешивании в 1,0 л этилацетата в атмосфере аргона. Раствор выдерживают при 30°С и затем в течение 45 мин по каплям добавляют 1,5 л гептана. В тех же самых условиях добавляют порциями 0,25 г затравочных кристаллов, полученных как описано выше. Смесь перемешивают при 30°С в течение 2 ч и смесь для кристаллизации охлаждают до 25°С в течение 1 ч, а затем до 10°С в течение 30 мин и фильтруют. Кристаллы промывают 100 мл смеси этилацетат/гексан (2:3). Последующую сушку осуществляют при 50°С и давлении приблизительно 5 мбар. T_пл 14 6,5°С250 g of amorphous 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin is dissolved with slow stirring in 1.0 l of ethyl acetate in an argon atmosphere. The solution was kept at 30 ° C. and then 1.5 L of heptane was added dropwise over 45 minutes. Under the same conditions, 0.25 g of seed crystals prepared as described above are added in portions. The mixture was stirred at 30 ° C. for 2 hours and the crystallization mixture was cooled to 25 ° C. for 1 hour, then to 10 ° C. for 30 minutes and filtered. The crystals are washed with 100 ml of a mixture of ethyl acetate / hexane (2: 3). Subsequent drying is carried out at 50 ° C and a pressure of approximately 5 mbar. _Mp 14.5 ° C

ИК (КBr): 3452, 2931, 1746, 1717, 1617, 1453, 1376, 1241, 1191, 1163, 1094, 1072, 1010, 985, 896 см^-1 IR (KBr): 3452, 2931, 1746, 1717, 1617, 1453, 1376, 1241, 1191, 1163, 1094, 1072, 1010, 985, 896 cm ^-1

Элементарная строение, полученное с помощью рентгеновских лучей, с соответствующими координатами представлены ниже на фиг.1-3.The elementary structure obtained using x-rays, with the corresponding coordinates are presented below in figures 1-3.

Пример 2. Получение стабилизированного 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицинаExample 2. Obtaining stabilized 40-O- (2-hydroxy) ethylrapamycin

100 г 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицина растворяют в 600 л абсолютного этанола. После добавления 0,2 г ВНТ образовавшийся раствор по каплям при перемешивании в течение 1 ч добавляют к 3,0 л воды. Образовавшуюся суспензию перемешивают еще в течение 30 мин. После фильтрации с последующей промывкой (3×200 мл смеси вода/этанол в соотношении 5:1 (об./об.)) получают влажный продукт белого цвета, который затем сушат под вакуумом (1 мбар) при 30°С в течение 48 ч. Образовавшийся высушенный продукт содержит 0,2 мас.% ВНТ.100 g of 40-O- (2-hydroxy) ethyl rapamycin are dissolved in 600 l of absolute ethanol. After adding 0.2 g of BHT, the resulting solution was added dropwise with stirring for 1 h to 3.0 l of water. The resulting suspension was stirred for another 30 minutes. After filtration, followed by washing (3 × 200 ml of a 5: 1 (v / v) water / ethanol mixture), a wet white product is obtained, which is then dried under vacuum (1 mbar) at 30 ° C for 48 hours The resulting dried product contains 0.2 wt.% BHT.

Образовавшийся продукт обладает улучшенной стабильностью при хранении. Сумма побочных продуктов и продуктов разложения в % после хранения в течение 1 недели составляет:The resulting product has improved storage stability. The amount of by-products and decomposition products in% after storage for 1 week is:

СоединениеCompound 50°С в открытой колбе50 ° C in an open flask соединение из примера 2 (0,2% ВНТ)the compound of example 2 (0.2% BHT) 1,491.49 без ВНТwithout VNT >10> 10

Процесс, описанный выше в примере, может быть повторен с использованием рапамицина в качестве действующего вещества.The process described above in the example can be repeated using rapamycin as the active substance.

Claims

1. 40-O- (2-hydroxyethyl) rapamycin in crystalline unsolvated form.

2. 40-O- (2-hydroxyethyl) rapamycin according to claim 1, having a crystal lattice with the following parameters: a = 14.37 Å, b = 11.24 Å, c = 18.31 Å, volume 2805 Å ³ .

3. A pharmaceutical composition having immunosuppressive properties, comprising, as an active ingredient, 40-O- (2-hydroxyethyl) rapamycin according to claim 1 or 2, together with one or more pharmaceutically acceptable diluent (s) or carrier (s) .

4. The composition according to claim 3 for the treatment or prevention of organ or tissue transplant rejection, autoimmune diseases, inflammatory conditions, asthma, proliferative disorders, tumors or hyperproliferative vascular diseases.

5. The use of the crystalline unsolvated form of 40-O- (2-hydroxyethyl) rapamycin according to claim 1 or 2 for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of organ or tissue transplant rejection, autoimmune diseases, inflammatory conditions, asthma, proliferative disorders, tumors or hyperproliferative vascular diseases.

6. The method of obtaining the crystalline form of 40-O- (2-hydroxyethyl) rapamycin according to claim 1, which consists in crystallizing 40-O- (2-hydroxyethyl) rapamycin from a solvent with a mixture with aliphatic hydrocarbons C _n H _{2n + 2} , where n denotes 5, 6 or 7, followed by isolation of the crystals thus obtained.

7. The method according to claim 6, where the solvent is ethyl acetate.