RU2262515C2 - Synthetic antigen based on copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and para-crotonoyl aminophenol comprising covalently joined 2-naphthylamine as hapten - Google Patents
Synthetic antigen based on copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and para-crotonoyl aminophenol comprising covalently joined 2-naphthylamine as hapten Download PDFInfo
- Publication number
- RU2262515C2 RU2262515C2 RU2003121321/04A RU2003121321A RU2262515C2 RU 2262515 C2 RU2262515 C2 RU 2262515C2 RU 2003121321/04 A RU2003121321/04 A RU 2003121321/04A RU 2003121321 A RU2003121321 A RU 2003121321A RU 2262515 C2 RU2262515 C2 RU 2262515C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- naphthylamine
- hapten
- antigen
- mol
- vinylpyrrolidone
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к иммунохимии высокомолекулярных соединений, обладающих антигенными характеристиками.The invention relates to the immunochemistry of high molecular weight compounds with antigenic characteristics.
Изобретение может найти широкое использование при иммунологическом определении в биологических жидкостях 2-нафтиламин-белковых аддуктов, являющихся специфическими маркерами профессионального онкологического риска, образующимися у лиц, имеющих контакт с 2-нафтиламином или с веществами, содержащими его в структуре молекулы, например, с анилиновыми красителями.The invention can be widely used for immunological determination in biological fluids of 2-naphthylamine-protein adducts, which are specific markers of professional oncological risk, arising in persons in contact with 2-naphthylamine or with substances containing it in the structure of the molecule, for example, with aniline dyes .
Известно, что 2-нафтиламин, широко используемый на различных производствах, является сильньм органотропным канцерогеном, вызывающим у людей и собак рак мочевого пузыря, а у мышей - гепатомы (Темкин И.С. Опухоли мочевого пузыря, вызванные канцерогенными аминосоединениями. - М.: Медицина, 1957 - с.36-47). К наиболее характерным для ранних стадий химического канцерогенеза иммунометаболическим нарушениям относится образование в сыворотке крови и в ткани-мишени животных канцероген-белковых антигенов (КБА) (Коростелева Т.А. Об изменениях тканевых антигенов в процессе экспериментального канцерогенеза. - Л.: Медицина, 1966, с.247). КБА обнаруживаются на ранних стадиях канцерогенеза при действии на животных канцерогенов-орто-амино-азотолуола, бензидина, 2-нафтиламина, 3-метилдиметиламиноазобензола, 3-оксиантраниловой кислоты. КБА обнаруживаются также при онкологическом риске у лиц, контактирующих с канцерогенами (Коростелева Т.А., Белохвостова А.Т. Возможности использования иммунологических маркеров для выявления групп онкологического риска в производственных контингентах (Сборник научных трудов. - Практические и научные основы профилактики канцерогенных воздействий. - Ленинград, 1984. - c.159).It is known that 2-naphthylamine, widely used in various industries, is a strong organotropic carcinogen that causes bladder cancer in humans and dogs, and hepatoma in mice (I. Temkin, Bladder tumors caused by carcinogenic amino compounds. - M.: Medicine, 1957 - p. 36-47). The most characteristic for the early stages of chemical carcinogenesis immunometabolic disorders include the formation in the blood serum and in target tissue of animals of carcinogen-protein antigens (CBA) (Korosteleva TA About changes in tissue antigens during experimental carcinogenesis. - L .: Medicine, 1966 , p. 247). CBA is found in the early stages of carcinogenesis when carcinogens-ortho-amino-azotoluene, benzidine, 2-naphthylamine, 3-methyldimethylaminoazobenzene, 3-hydroxyanthranilic acid are exposed to animals. CBA is also found in cancer risk in persons in contact with carcinogens (Korosteleva T.A., Belokhvostova A.T. Possibilities of using immunological markers to identify cancer risk groups in production contingents (Collection of scientific papers. - Practical and scientific basis for the prevention of carcinogenic effects. - Leningrad, 1984. - p. 159).
Исходный сополимер N-винилпирролидона (ВП) с кротоновой кислотой (КК), используемый для получения тройного сополимера ВП-КК-n-кротоноиламинофенол и заявленного соединения на его основе описан в литературе: С.Н.Ушаков, В.А.Кропачев, Л.Б.Трухманова, Р.И.Груз, Т.М.Маркелова, «О сополимеризации кротоновой кислоты с винилпирролидоном»//Высокомолекулярные соединения, т. IX (А), №8, с.1807-1813, 1967.The initial copolymer of N-vinylpyrrolidone (VP) with crotonic acid (KK) used to obtain the ternary copolymer VP-KK-n-crotonoylaminophenol and the claimed compound based on it is described in the literature: S.N. Ushakov, V.A. Kropachev, L .B. Trukhmanova, RI Gruz, T. M. Markelova, “On the copolymerization of crotonic acid with vinyl pyrrolidone” // High-Molecular Compounds, vol. IX (A), No. 8, p. 1807-1813, 1967.
Эти факторы послужили основой для разработки иммунологического метода регистрации 2-нафтиламина как гаптена в биологических материалах в качестве маркера онкологического риска.These factors served as the basis for the development of an immunological method for registering 2-naphthylamine as a hapten in biological materials as a marker of cancer risk.
Описан антиген, содержащий ковалентно присоединенный к белковому носителю 2-нафтиламин в качестве гаптена (Скачков А.П. Изучение тканевых антигенов и антител на ранних стадиях канцерогенеза при действии 2-нафтиламина. Автореферат канд. дисс., Л., 1970). Этот антиген является прототипом заявляемого изобретения. Автор использовал антитела против 2-нафтиламин-антигена как реактивы для выявления 2-нафтиламина, входящего в антигенные комплексы, образующиеся в организме животных при введении им этого канцерогена. Поиски КБА приводились при помощи реакции преципитации в геле.An antigen is described that contains 2-naphthylamine covalently attached to a protein carrier as a hapten (A. Skachkov. Study of tissue antigens and antibodies in the early stages of carcinogenesis under the action of 2-naphthylamine. Abstract of Cand. Diss., L., 1970). This antigen is a prototype of the claimed invention. The author used antibodies against 2-naphthylamine antigen as reagents to detect 2-naphthylamine, which is part of the antigenic complexes formed in animals when this carcinogen is introduced. Searches for CBA were performed using a gel precipitation reaction.
Недостатком известного комплексного решения, направленного на получение синтетического антигена, содержащего ковалентно присоединенный 2-нафтиламин в качестве гаптена, является необходимость использования в качестве макромолекулярных носителей белков сыворотки крови различных животных, имеющих общевидовые антигены. Иммунизация антигенами, содержащими остаток 2-нафтиламина, присоединенный к белку, неизбежно приводит к образованию побочных антител к общевидовым антигенам, что затрудняет качественную и количественную интерпретацию конечных результатов определения 2-нафтиламин-белковых антигенов, образующихся в организме. В связи с этим автор прототипа был вынужден ставить дополнительные реакции истощения общевидовых антигенов.A disadvantage of the known complex solution aimed at obtaining a synthetic antigen containing covalently attached 2-naphthylamine as a hapten is the need to use blood serum proteins of various animals having general-type antigens as macromolecular carriers. Immunization with antigens containing a 2-naphthylamine residue attached to a protein inevitably leads to the formation of side antibodies to general antigens, which complicates the qualitative and quantitative interpretation of the final results of the determination of 2-naphthylamine-protein antigens formed in the body. In this regard, the prototype author was forced to put additional reactions of depletion of common antigens.
Техническим результатом изобретения является повышение специфичности антител против 2-нафтиламина как гаптена.The technical result of the invention is to increase the specificity of antibodies against 2-naphthylamine as a hapten.
Это достигается использованием для выработки антител против 2-нафтиламина синтетического антигена, представляющего собой азопроизводные 2-нафтиламина на основе сополимера N-винилпирролидона с кротоновой кислотой и кротоноиламинофенолом общей формулы I:This is achieved by using a synthetic antigen to produce antibodies against 2-naphthylamine, which is azo derivatives of 2-naphthylamine based on a copolymer of N-vinylpyrrolidone with crotonic acid and crotonoylaminophenol of the general formula I:
где m=88,5 мол.%; n=6,8÷10,3 мол.%; l=1,2÷4,7 мол.%.where m = 88.5 mol.%; n = 6.8 ÷ 10.3 mol%; l = 1.2 ÷ 4.7 mol.%.
Способ получения этого антигена реализуется следующим образом:The method of obtaining this antigen is implemented as follows:
1. Аминогруппу 2-нафтиламина диазотируют с получением хлористого 2-нафтиламиндиазония. Проводят азосочетание сополимеров N-винилпирролидона с кротоновой кислотой и n-кротоноиламинофенолом II с хлористым 2-нафтиламиндиазонием III в водном растворе при 0÷5°С сначала в кислой (рН 4,2÷4,6), а затем в щелочной (рН 9,0÷9,4) среде.1. The amino group of 2-naphthylamine is diazotized to obtain 2-naphthylamine diazonium chloride. The copolymers of N-vinylpyrrolidone with crotonic acid and n-crotonoylaminophenol II with 2-naphthylamine diazonium chloride III are combined in an aqueous solution at 0 ÷ 5 ° C, first in acidic (pH 4.2 ÷ 4.6) and then in alkaline (pH 9 , 0 ÷ 9.4) medium.
2. При этом молярные количества терполимера (в расчете на одно звено n-кротоноиламинофенола) хлористого 2-нафтиламиндиазония составляют 1:2÷2,2. Схему синтеза антигена 1 можно представить следующим образом:2. Moreover, the molar amounts of terpolymer (calculated per unit of n-crotonoylaminophenol) of 2-naphthylamine diazonium chloride are 1: 2 ÷ 2.2. The synthesis scheme of antigen 1 can be represented as follows:
Анализ известного уровня науки и техники показал отсутствие информации о тройных сополимерах общей формулы 1.Analysis of the known level of science and technology showed a lack of information on ternary copolymers of the general formula 1.
Строение терполимера 1 подтверждено методом ПМР-спектроскопии. В ПМР-спектре терполимера 1, снятого в дейтерированном диметилформамиде, в области 0,5÷5,0 м.д. сохраняются сигналы исходного тройного сополимера винилпирролидона с кротоновой кислотой и с n-кротоноиламинофенолом (n-КАФ). В отличие от ПМР-спектра терполимера II в ПМР-спектре продукта азосочетания I обнаруживается интенсивный сигнал в области 7,9-8,5 м.д., относящийся к протонам бензольного ядра звена п-КАФ, находящихся в орто- и в мета-положениях к азогруппе. Отсутствие сигнала при 6,8-7,3 м.д. позволяет утверждать, что замещение протонов на остаток азо-2-нафтиламина произошло в двух местах бензольного кольца звена n-КАФ. Сравнение площадей пиков в области 7,4-7,8 м.д. и в области 7,9-8,5 м.д. в ПМР-спектре коньюгата I позволило определить места замещения протонов бензольного ядра звена n-КАФ на остаток азо-2-нафтиламина. Наблюдаемым в спектре пикам равной площади соответствует только замещение в положениях 2 и 6 бензольного кольца звена n-КАФ.The structure of terpolymer 1 was confirmed by PMR spectroscopy. In the PMR spectrum of terpolymer 1, recorded in deuterated dimethylformamide, in the range of 0.5 ÷ 5.0 ppm the signals of the initial triple copolymer of vinylpyrrolidone with crotonic acid and n-crotonoylaminophenol (n-CAF) are retained. In contrast to the PMR spectrum of terpolymer II, the intense signal in the region of 7.9-8.5 ppm, which is related to the protons of the benzene nucleus of the p-CAF unit located in the ortho- and meta- provisions to the azo group. No signal at 6.8-7.3 ppm suggests that the substitution of protons for the remainder of azo-2-naphthylamine occurred in two places on the benzene ring of the n-CAF unit. Comparison of peak areas in the region of 7.4-7.8 ppm and in the region of 7.9-8.5 ppm. in the PMR spectrum of conjugate I, it was possible to determine the substitution sites of the protons of the benzene core of the n-CAF unit with the azo-2-naphthylamine residue. Peaks of equal area observed in the spectrum correspond only to substitution at positions 2 and 6 of the benzene ring of the n-CAF unit.
Для определения содержания остатков 2-нафтиламина в продукте азосочетания снимали его УФ спектр в этаноле в референции с раствором исходного сополимера II. Использовали калибровку Д280 - С (мкг/мл), ранее установленную для 2-нафтиламина, в УФ спектре которого имеется интенсивная полоса поглощения (lg∑=4,2) с максимумом при 280 нм.To determine the content of 2-naphthylamine residues in the azo-coupling product, its UV spectrum in ethanol was removed in reference with the solution of the initial copolymer II. We used the calibration D 280 - C (μg / ml), previously established for 2-naphthylamine, in the UV spectrum of which there is an intense absorption band (log∑ = 4.2) with a maximum at 280 nm.
Для лучшего понимания сущности заявляемого изобретения приводим примеры его конкретного выполнения.For a better understanding of the essence of the claimed invention, we give examples of its specific implementation.
А. Приготовление водного раствора хлористого 2-нафтиламиндиазония.A. Preparation of an aqueous solution of 2-naphthylamine diazonium chloride.
К суспензии 0,001 кг 2-нафтиламина в смеси 0,01 л дистиллированной воды и 0,003 л концентрированной соляной кислоты, охлажденной до 0°С, по каплям при перемешивании добавляют охлажденный раствор 0,58·10-3 кг нитрита натрия в 0,01 л воды. Полученный прозрачный раствор темно-желтого цвета перемешивают при 0°С в течение 30 мин.To a suspension of 0.001 kg of 2-naphthylamine in a mixture of 0.01 l of distilled water and 0.003 l of concentrated hydrochloric acid, cooled to 0 ° C, a cooled solution of 0.58 · 10 -3 kg of sodium nitrite in 0.01 l is added dropwise with stirring water. The resulting clear dark yellow solution was stirred at 0 ° C for 30 minutes.
Б. Примеры 1-6 по синтезу антигена I.B. Examples 1-6 for the synthesis of antigen I.
Пример 1.Example 1
К охлажденному до 5°С раствору терполимера II (m=88,5 мол.%, n=10,3 мол.%, 1=1,2 мол.% с молекулярной массой 11.000) в 0,01 л. воды по каплям приливают при перемешивании 1,5·10-3 л полученного раствора хлористого 2-нафтиламиндиазония, содержащего 0,06·10-6 кг соли диазония, и добавлением сухого бикарбоната натрия доводят рН раствора до 4,3. Смесь перемешивают в течение 30 мин и доводят рН реакционного раствора до 9,2 с помощью 5% раствора NaOH. Азосочетание проводят при этом значении рН в течение 1 часа при 5°С и еще в течение 3 часов при комнатной температуре. Затем проводят диализ полученного раствора против воды в течение 3 суток. Продукт реакции выделяют путем лиофильной сушки. Получают 1,23·10-3 кг (79,3%) антигена I (m=88,5 мол.%, n=10,3 мол.%, l=1,2 мол.%), содержащего 3,3 мас.% связанного 2-нафтиламина.To a solution of terpolymer II cooled to 5 ° C (m = 88.5 mol%, n = 10.3 mol%, 1 = 1.2 mol% with a molecular weight of 11.000) in 0.01 l. water is added dropwise with stirring 1.5 · 10 -3 L of the resulting solution of 2-naphthylamine diazonium chloride containing 0.06 · 10 -6 kg of diazonium salt, and the pH of the solution is adjusted to 4.3 by adding dry sodium bicarbonate. The mixture was stirred for 30 minutes and the pH of the reaction solution was adjusted to 9.2 with a 5% NaOH solution. Azo coupling is carried out at this pH value for 1 hour at 5 ° C and for another 3 hours at room temperature. Then, the resulting solution is dialyzed against water for 3 days. The reaction product is isolated by freeze drying. Obtain 1.23 · 10 -3 kg (79.3%) of antigen I (m = 88.5 mol.%, N = 10.3 mol.%, L = 1.2 mol.%) Containing 3.3 wt.% bound 2-naphthylamine.
Проводят иммунизацию беспородных кроликов разводки Рапполовского питомника весом 1,5-2 кг 5% водным раствором полученного антигена по следующей схеме:Immunize outbred rabbits wiring Rappolovsky nursery weighing 1.5-2 kg of 5% aqueous solution of the resulting antigen according to the following scheme:
1. Один раз в неделю внутрикожно в 10 точек вдоль спинного хребта на расстоянии 1,5-2 см от него в обе стороны (по 5 точек с каждой стороны) вводят 1,0·10-3 л водного раствора антигена I.1. Once a week, intradermally at 10 points along the spine at a distance of 1.5-2 cm from it in both directions (5 points on each side) injected 1.0 · 10 -3 l of an aqueous solution of antigen I.
2. Через неделю повторяют внутрикожное введение антигена I в той же дозе также в 10 точек спины.2. After a week, the intradermal administration of antigen I is repeated in the same dose at 10 points of the back.
3. Через 2 недели вводят раствор антигена I под обе лопатки подкожно и внутрибрюшинно в общей дозе 1,5·10-3 л.3. After 2 weeks, a solution of antigen I is administered under both scapulae subcutaneously and intraperitoneally in a total dose of 1.5 · 10 -3 L.
4. Через 1,5 месяца вводят раствор антигена I по 0,5·10-3 л внутривенно через день три раза в неделю. Кровь берут на 9-й день после последней инъекции. В дальнейшем кроликов реиммунизируют через 3-4 месяца, используя только внутривенное введение антигена.4. After 1.5 months, a solution of antigen I is administered at 0.5 · 10 -3 L intravenously every other day three times a week. Blood is taken on the 9th day after the last injection. Subsequently, rabbits are re-immunized after 3-4 months using only intravenous antigen.
На следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка центрифугированием в течение 10 мин при 400g. Сыворотку концентрируют в 2 раза в целлофановых трубках под вентиляторами, консервируют борной кислотой и используют для постановки реакции встречной иммунодиффузии в агаре и реакции связывания комплемента (РСК).The day after blood collection, the serum is separated from the clot by centrifugation for 10 min at 400g. The serum is concentrated 2 times in cellophane tubes under fans, preserved with boric acid and used for the reaction of counter immunodiffusion in agar and the complement binding reaction (CSC).
Для постановки реакции преципитации в агаре используют 1% водный раствор агара Дифко. Для постановки РСК используют готовую гемолитическую сыворотку против эритроцитов барана и сухой комплемент. В качестве антигенов применяют водные растворы антигена I и гетерологичных азопротеинов, содержащих 2-нафтиламин, присоединенный к белкам человеческой сыворотки крови. Титрование антигенов проводят перед постановкой каждого опыта. Связывание комплемента осуществляют при объеме 0,5·10-5 л в платах. РСК ставят на холоду при +4°С (18 часов).For the formulation of the precipitation reaction in agar, use a 1% aqueous solution of Difco agar. Ready-made hemolytic serum against sheep erythrocytes and dry complement are used for stating DSC. As antigens, aqueous solutions of antigen I and heterologous azoproteins containing 2-naphthylamine attached to human serum proteins are used. Titration of antigens is carried out before staging each experiment. The binding of complement is carried out with a volume of 0.5 · 10 -5 l in the circuit boards. RSK set in the cold at + 4 ° C (18 hours).
Результаты испытаний иммунсыворотки приведены в таблице. В графе А указаны содержания в мол.% антигена I в последних разведениях, дающих видимую реакцию преципитации в агаре с сыворотками крови интактных (контроль) и иммунизированных антигеном I кроликов. В графе Б указаны титры антител против 2-нафтиламинга в РСК.The test results of the immune serum are shown in the table. Column A shows the content in mol.% Of antigen I in the last dilutions giving a visible precipitation reaction in agar with intact blood serum (control) and rabbits immunized with antigen I. Column B shows the titers of antibodies against 2-naphthylamine in CSCs.
Пример 2.Example 2
В условиях примера I из 0,001 кг терполимера II (m=88,5 мол.%, n=9,0 мол.%, 1=2,5 мол.%) и 0,081·10-3 кг хлористого 2-нафтиламиндиазония получают 0,74·10-3 кг (69,2%) антигена I (m=88,5 мол.%, n=9,0 мол.%, l=2,5 мол.%), содержащего 6,6 мас.% 2-нафтиламина.Under the conditions of example I, from 0.001 kg of terpolymer II (m = 88.5 mol%, n = 9.0 mol%, 1 = 2.5 mol%) and 0.081 · 10 -3 kg of 2-naphthylamine diazonium chloride, 0 , 74 · 10 -3 kg (69.2%) of antigen I (m = 88.5 mol.%, N = 9.0 mol.%, L = 2.5 mol.%) Containing 6.6 wt. % 2-naphthylamine.
По схеме, описанной в примере 1, проводят иммунизацию кроликов полученным антигеном. Результаты испытаний полученной иммунсыворотки на наличие и уровень антител против 2-нафтиламина приведены в таблице.According to the scheme described in example 1, rabbits are immunized with the obtained antigen. The test results of the obtained immune serum for the presence and level of antibodies against 2-naphthylamine are shown in the table.
Пример 3.Example 3
В условиях примера 1 из 0,7·10-3 кг терполимера II (m=88,5 мол.%, n=7,6 мол.%, l=3,9 мол.%) и 0,093·10-3 кг хлористого 2-нафтиламиндиазония получают 0,58·10-3 кг (75,3%) антигена I (m=88,5 мол.%, n=7,6 мол.%, l=3,9 мол.%), содержащего 9,8 мас.% 2-нафтиламина.In the conditions of example 1 from 0.7 · 10 -3 kg of terpolymer II (m = 88.5 mol.%, N = 7.6 mol.%, L = 3.9 mol.%) And 0.093 · 10 -3 kg 2-naphthylamine diazonium chloride receive 0.58 · 10 -3 kg (75.3%) of antigen I (m = 88.5 mol.%, n = 7.6 mol.%, l = 3.9 mol.%), containing 9.8 wt.% 2-naphthylamine.
По схеме, описанной в примере 2, проводят иммунизацию кроликов полученным антигеном. Результаты испытаний полученной иммунсыворотки приведены в таблице.According to the scheme described in example 2, rabbits are immunized with the obtained antigen. The test results of the obtained immune serum are shown in the table.
Пример 4.Example 4
В условиях примера 1 из 0,8·10-3 кг терполимера II (m=88,5 мол.%, n=6,8 мол.%, 1=4,7 мол.%) и 0,127·10-3 кг хлористого 2-нафтиламиндиазония получают 0,67·10-3 кг (74,2%) антигена I (m=88,5 мол.%, n=6,8 мол.%, l=4,7 мол.%), содержащего 11,5 мас.% 2-нафтиламина.In the conditions of example 1 from 0.8 · 10 -3 kg of terpolymer II (m = 88.5 mol.%, N = 6.8 mol.%, 1 = 4.7 mol.%) And 0.127 · 10 -3 kg 2-naphthylamine diazonium chloride receive 0.67 · 10 -3 kg (74.2%) of antigen I (m = 88.5 mol.%, n = 6.8 mol.%, l = 4.7 mol.%), containing 11.5 wt.% 2-naphthylamine.
По схеме, описанной в примере 1, проводят иммунизацию кроликов полученным антигеном. Результаты испытаний полученной иммунсыворотки приведены в таблице.According to the scheme described in example 1, rabbits are immunized with the obtained antigen. The test results of the obtained immune serum are shown in the table.
Пример 5 (контрольный).Example 5 (control).
В условиях примера 1 из 0,001 кг терполимера II (m=88,5 мол.%, n=5,7 мол.%, l=5,8 мол.%) и 0,19·10-3 кг хлористого 2-нафтиламиндиазония получают 0,82·10-3 кг (70,7%) антигена I (m=88,5 мол.%, n=5,7 мол.%, 1=5,8 мол.%), содержащего 13,7 мас.% 2-нафтиламина.In the conditions of example 1 from 0.001 kg of terpolymer II (m = 88.5 mol.%, N = 5.7 mol.%, L = 5.8 mol.%) And 0.19 · 10 -3 kg of 2-naphthylamine diazonium chloride get 0.82 · 10 -3 kg (70.7%) of antigen I (m = 88.5 mol.%, n = 5.7 mol.%, 1 = 5.8 mol.%) containing 13.7 wt.% 2-naphthylamine.
Полученный антиген в воде не растворяется, поэтому иммунизацию кроликов этим антигеном не проводили.The resulting antigen does not dissolve in water; therefore, rabbits were not immunized with this antigen.
Пример 6 (контрольный).Example 6 (control).
В условиях примера 1 из 0,001 кг терполимера II (m=88,5 мол.%, n=10,6 мол.%, l=0,5 мол.%) и 0,016·10-3 кг хлористого 2-нафтиламиндиазония получают 0,65·10-3 кг (64,3%) антигена I (m=88,5 мол.%, n=10,6 мол.%, l=0,5 мол.%), содержащего 1,4 мас.% 2-нафтиламина.Under the conditions of Example 1, from 0.001 kg of terpolymer II (m = 88.5 mol%, n = 10.6 mol%, l = 0.5 mol%) and 0.016 · 10 -3 kg of 2-naphthylamine diazonium chloride, 0 65 · 10 -3 kg (64.3%) of antigen I (m = 88.5 mol.%, N = 10.6 mol.%, L = 0.5 mol.%) Containing 1.4 wt. % 2-naphthylamine.
По схеме, описанной в примере 1, проводят иммунизацию кроликов полученным антигеном. Результаты испытания полученной иммунсыворотки показали, что в ней отсутствуют антитела против 2-нафтиламина.According to the scheme described in example 1, rabbits are immunized with the obtained antigen. The test results of the obtained immune serum showed that it lacks antibodies against 2-naphthylamine.
Как видно из данных таблицы, результаты испытаний иммунсывороток как в реакции встречной иммунодиффузии в агаре, так и в РСК, свидетельствуют о том, что при иммунизации животных антигеном I, полученным по примерам 1-4, может быть получена иммунсыворотка, содержащая антитела против 2-нафтиламина как гаптена. Наиболее высокий титр антител обнаружен в иммунсыворотке, полученной при иммунизации кроликов антигеном I по примеру 3. Для подтверждении специфичности присутствующих в ней антител против 2-нафтиламина как гаптена используют реакцию частичной идентичности путем исследования иммунсыворотки с антигеном I и гетерологичным антигеном, содержащим тот же гаптен-2-нафтиламин, но другой носитель - альбумины лошадиной сыворотки.As can be seen from the table, the results of the tests of immunological sera both in the reaction of counter immunodiffusion in agar and in CSC indicate that when immunizing animals with antigen I, obtained in examples 1-4, an antiserum containing antibodies against 2- can be obtained. naphthylamine as a hapten. The highest antibody titer was found in the serum obtained by immunizing rabbits with the antigen I according to Example 3. To confirm the specificity of the antibodies against 2-naphthylamine as a hapten present in it, a partial identity reaction is used by examining the immune serum with antigen I and a heterologous antigen containing the same hapten 2-naphthylamine, but another carrier is horse serum albumin.
На фото показаны результаты реакции частичной идентичности при взаимодействии иммунсыворотки кролика, иммунизированного антигеном I по примеру 3, содержащим 2-нафтиламин (1), с этим антигеном (2) и с гетерологичным антигеном, содержащим тот же гаптен-2-нафтиламин, но другой носитель - альбумины лошадиной сыворотки (3). Образование "шпоры", видной на фото, свидетельствует о присутствии антител против 2-нафтиламина в исследуемой иммунсыворотке кролика, дающих реакцию частичной идентичности при взаимодействии их с антигенами, содержащими один и тот же гаптен-2-нафтиламин, но различные макромолекулярные носители. Как видно на фото, взаимодействия этой иммунсыворотки с белковым носителем - альбуминами лошадиной сыворотки (4), не наблюдалось.The photo shows the results of a partial identity reaction in the interaction of a rabbit immune serum immunized with antigen I of Example 3 containing 2-naphthylamine (1), with this antigen (2) and with a heterologous antigen containing the same hapten-2-naphthylamine, but with a different carrier - horse serum albumin (3). The formation of a “spur”, visible in the photo, indicates the presence of antibodies against 2-naphthylamine in the rabbit immunoassay studied, giving a partial identity reaction when they interact with antigens containing the same hapten-2-naphthylamine, but different macromolecular carriers. As can be seen in the photo, no interactions of this immune serum with a protein carrier - horse serum albumin (4) were observed.
Иммунсыворотка, содержащая антитела против 2-нафтиламина как гаптена, полученная путем иммунизации кролика 2-нафтиламин-полимерным антигеном по примеру 3, была использована как тест-система при определении 2-нафтиламина в сыворотке крови рабочих ЛПО "Красный треугольник", у которых возможна экспозиция 2-нафтиламином. При помощи этой иммунсыворотки 2-нафтиламин-антиген был обнаружен у 5 из 43 обследованных рабочих, что составляет 11,6%. При помощи иммунсыворотки кролика, полученной путем иммунизации 2-нафтиламин-антигеном, содержащим белковый носитель (альбумины лошадиной сыворотки), 2-нафтиламин-антиген был обнаружен у 3 из 50 рабочих, что составляет 6,0%. Эти данные свидетельствуют о достижении положительного эффекта путем повышения точности определения 2-нафтиламина как гаптена в крови рабочих по сравнению с прототипом при использовании в качестве тест-системы иммунсыворотки, полученной путем иммунизации кроликов 2-нафтиламин-полимерным антигеном.An immune serum containing antibodies against 2-naphthylamine as a hapten, obtained by immunizing a rabbit with a 2-naphthylamine-polymer antigen according to Example 3, was used as a test system for the determination of 2-naphthylamine in the blood serum of workers of the Red Triangle LPO, which can be exposed 2-naphthylamine. Using this immune serum, 2-naphthylamine antigen was detected in 5 of the 43 workers examined, which is 11.6%. Using rabbit immune serum obtained by immunization with a 2-naphthylamine antigen containing a protein carrier (horse serum albumin), 2-naphthylamine antigen was detected in 3 out of 50 workers, which is 6.0%. These data indicate the achievement of a positive effect by increasing the accuracy of the determination of 2-naphthylamine as a hapten in the blood of workers compared to the prototype when using immunological serum obtained by immunizing rabbits with a 2-naphthylamine-polymer antigen.
Анализ таблицы позволяет подтвердить критериальные значения заявляемых составов антигенов I:Analysis of the table allows you to confirm the criteria values of the claimed compositions of antigens I:
А. Заявлено содержание звеньев n-кротоноиламинофенола в исходном терполимере II, равное 1,2÷4,7 мол.%. Снижение содержания этого звена до 0,5 мол.% (пример 6) приводит к потере положительного эффекта.A. The claimed content of units of n-crotonoylaminophenol in the original terpolymer II, equal to 1.2 ÷ 4.7 mol.%. The decrease in the content of this link to 0.5 mol.% (Example 6) leads to the loss of a positive effect.
Б. Молярное соотношение n-кротоноиламинофенольных звеньев и хлористого 2-нафтиламиндиазония составляет 1:2÷2,2, что обеспечивает введение двух молекул 2-нафтиламина в бензольное кольцо указанного звена.B. The molar ratio of n-crotonoylaminophenol units to 2-naphthylamine diazonium chloride is 1: 2 ÷ 2.2, which ensures the introduction of two 2-naphthylamine molecules into the benzene ring of the indicated unit.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003121321/04A RU2262515C2 (en) | 2003-07-10 | 2003-07-10 | Synthetic antigen based on copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and para-crotonoyl aminophenol comprising covalently joined 2-naphthylamine as hapten |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003121321/04A RU2262515C2 (en) | 2003-07-10 | 2003-07-10 | Synthetic antigen based on copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and para-crotonoyl aminophenol comprising covalently joined 2-naphthylamine as hapten |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003121321A RU2003121321A (en) | 2005-02-27 |
| RU2262515C2 true RU2262515C2 (en) | 2005-10-20 |
Family
ID=35285764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003121321/04A RU2262515C2 (en) | 2003-07-10 | 2003-07-10 | Synthetic antigen based on copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and para-crotonoyl aminophenol comprising covalently joined 2-naphthylamine as hapten |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2262515C2 (en) |
-
2003
- 2003-07-10 RU RU2003121321/04A patent/RU2262515C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СКАЧКОВ А.П. Изучение тканевых антигенов и антител на ранних стадиях канцерогенеза при действии 2-нафтиламина. Автореферат дисс.: Л, 1970. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2003121321A (en) | 2005-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fleet et al. | Affinity labelling of antibodies with aryl nitrene as reactive group | |
| US11834551B2 (en) | Photoactive macromolecules and uses thereof | |
| Ercegovich et al. | Development of a radioimmunoassay for parathion | |
| JP2023025018A (en) | Composition and method for enhanced fluorescence | |
| Ottersen et al. | Glycine-like immunoreactivity in the cerebellum of rat and Senegalese baboon, Papio papio: a comparison with the distribution of GABA-like immunoreactivity and with [3 H] glycine and [3 H] GABA uptake | |
| Ansari et al. | Preferential recognition of Amadori-rich lysine residues by serum antibodies in diabetes mellitus: role of protein glycation in the disease process | |
| Tourville et al. | Natural antibodies of human serum, saliva, and urine reactive with Escherichia coli | |
| AU2016207126A1 (en) | Macromolecular conjugates for visualization and separation of proteins and cells | |
| Parker et al. | Studies in human penicillin allergy: A comparison of various penicilloyl-polylysines | |
| CN106831498B (en) | Furacilin metabolite SEM derivatizations haptens, artificial antigen preparation method and applications | |
| GB1581075A (en) | Radiolabeled derivatives of folic acid | |
| RU2262515C2 (en) | Synthetic antigen based on copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and para-crotonoyl aminophenol comprising covalently joined 2-naphthylamine as hapten | |
| Halliday et al. | Isoferritin composition of tissues and serum in human cancers | |
| Maurer et al. | ANTIGENICITY OF POLYPEPTIDES (POLY ALPHA AMINO ACIDS) VII. Studies in Humans | |
| Goodner et al. | PROPERTIES OF THE TYPE SPECIFIC PROTEINS OF ANTIPNEUMOCOCCUS SERA: I. The Mouse Protective Value of Type I Sera with Reference to the Precipitin Content | |
| Conway-Jacobs et al. | Extrinsic Cotton effect and immunological properties of the p-azobenzenearsonate hapten attached to a helical amino acid copolymer | |
| Gell et al. | The antigenic function of simple chemical compounds: correlation of antigenicity with chemical reactivity | |
| US5019521A (en) | Paired polypeptides | |
| Shanin et al. | Determination of levofloxacin (the Levorotatory Stereoisomer of Ofloxacin) in milk by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay | |
| Imai et al. | Composition of IgA immune complexes precipitated with polyethylene glycol: A model for isolation and analysis of immune complexes | |
| Treffers et al. | Quantitative experiments with antibodies to specific precipitates. II | |
| Anderer et al. | Antigenic properties of proteins cross-linked by multidiazonium compounds | |
| CN110117286B (en) | Heterocyclic amine 8-MeIQx hapten and antibody as well as preparation method and application thereof | |
| RU2181127C2 (en) | Copolymers of n-vinylpyrrolidone, crotonic acid and p- crotonoylaminophenol containing covalently bound 3-hydroxyanthranilic acid (hapten) as synthetic antigens | |
| Pressman | Antibodies as specific chemical reagents |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080711 |