RU2252026C1 - Method for stimulating the processes of natural hepatic regeneration - Google Patents
Method for stimulating the processes of natural hepatic regeneration Download PDFInfo
- Publication number
- RU2252026C1 RU2252026C1 RU2003131932/15A RU2003131932A RU2252026C1 RU 2252026 C1 RU2252026 C1 RU 2252026C1 RU 2003131932/15 A RU2003131932/15 A RU 2003131932/15A RU 2003131932 A RU2003131932 A RU 2003131932A RU 2252026 C1 RU2252026 C1 RU 2252026C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liver
- ropren
- animals
- processes
- hepatocytes
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, фармакологии и может быть использовано в качестве средства, обладающего гепатопротекторным действием при лечении нарушений функций печени живого организма.The invention relates to medicine, pharmacology and can be used as a tool with hepatoprotective action in the treatment of impaired liver functions of a living organism.
Известны гепатопротекторы: эссенциале, липоевая кислота, сирепар, α -токоферол. Однако эти средства не могут полностью защитить или восстановить нарушенные функции мембран, митохондрий и других структур гепатоцитов, поскольку любой из них влияет лишь на отдельные звенья патогенеза гепатитов (Гайдамака О.В., Литвинова О.В. Гепатопротекторнi препарати: сучасний стан i перспектива ix створення, Фармацевтичний журнал. - 1998, Киев, № 6, стр. 42-46). В связи с этим современные гепатопротекторы используются в комплексной терапии. Однако такой подход к лечению гепатитов опасен взаимодействием препаратов вследствие полипрагмазии и осложнением течения заболевания. Одновременно практически все препараты данной группы имеют побочные эффекты, которые ограничивают их применение (Белоусов Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия. - М.: Универсум паблишинт, 1997, - 532 с.).Known hepatoprotectors: essentiale, lipoic acid, sirepar, α-tocopherol. However, these agents cannot fully protect or restore impaired functions of membranes, mitochondria, and other structures of hepatocytes, since any of them affects only certain links in the pathogenesis of hepatitis (Gaydamaka O.V., Litvinova O.V. Sorennya, Pharmaceutical Journal. - 1998, Kiev, No. 6, pp. 42-46). In this regard, modern hepatoprotectors are used in complex therapy. However, this approach to the treatment of hepatitis is dangerous for drug interactions due to polypharmacy and complication of the course of the disease. At the same time, almost all drugs in this group have side effects that limit their use (Belousov Yu.B., Moiseev B.C., Lepakhin V.K. Clinical Pharmacology and Pharmacotherapy. - M .: Universum Publishint, 1997, 532 p.).
Известны также препараты, обладающие гепатопротекторным действием, в которых активным агентом является группа флавоноидных соединений - Silimarin, выделенных из экстрактов плодов расторопши пятнистой (Sylybum marianum L). На основе этих соединений разработан ряд лекарственных препаратов "силимарин", "силибор", "силибинин", "карсил" и др. Все эти препараты зарубежного производства, поэтому очевидна актуальность и необходимость поиска и изучения новых природных источников сырья.Also known are drugs with a hepatoprotective effect, in which the active agent is a group of flavonoid compounds - Silimarin, isolated from extracts of the fruit of milk thistle (Sylybum marianum L). Based on these compounds, a number of silymarin, silibor, silibinin, karsil, and other drugs have been developed. All of these drugs are foreign-made, so the relevance and need for searching and studying new natural sources of raw materials are obvious.
Известен препарат легалон, содержащий в своем составе в качестве активного агента группу флавоноидов из экстракта плодов расторопши пятнистой. Легалон обладает гепатопротекторным и антитоксическим действием. Механизм действия связан с ингибированием перекисного окисления липидов, вследствие чего предотвращается разрушение клеточных мембран. В поврежденных гепатоцитах препарат стимулирует синтез белков и фосфолипидов, в результате чего происходит стабилизация клеточных мембран, предотвращается потеря компонентов клетки, например трансаминаз. Препарат препятствует проникновению в клетку некоторых гепатотоксических веществ (Лекарственные препараты зарубежных фирм в России. - М.: Астрафармсервис, 1993, с.350).Known drug legalon containing in its composition as an active agent a group of flavonoids from the extract of the fruit of milk thistle. Legalon has hepatoprotective and antitoxic effects. The mechanism of action is associated with the inhibition of lipid peroxidation, which prevents the destruction of cell membranes. In damaged hepatocytes, the drug stimulates the synthesis of proteins and phospholipids, as a result of which stabilization of cell membranes occurs, and the loss of cell components, such as transaminases, is prevented. The drug prevents the penetration into the cell of certain hepatotoxic substances (Medicines of foreign companies in Russia. - M .: Astrafarmservis, 1993, p. 350).
К недостаткам известного средства можно отнести невысокую биологическую активность препарата и наличие побочных эффектов.The disadvantages of the known funds include the low biological activity of the drug and the presence of side effects.
Задача, на решение которой направлено изобретение, заключается в создании нового гепатопротекторного средства растительного происхождения с более высокой биологической активностью и не имеющего побочных эффектов.The problem to which the invention is directed, is to create a new hepatoprotective agent of plant origin with higher biological activity and without side effects.
Поставленная задача решена тем, что в качестве гепатопротектора применяют полипренолы (Ропрен), получаемые из древесной зелени хвойных пород, общей формулыThe problem is solved in that polyprenols (Ropren) obtained from coniferous woody of the general formula are used as hepatoprotector
где n=10-20,where n = 10-20,
Полипренолы представляют собой природную смесь олигомеров (изопренолов) вышеуказанной общей формулы, содержащие структурные соединения, например, формулыPolyprenols are a natural mixture of oligomers (isoprenols) of the above general formula, containing structural compounds, for example, the formula
где n=8-16.where n = 8-16.
Смесь полипренолов ведет себя как одно вещество, может быть разделено на обращеннофазных сорбентах на индивидуальные изопренологи и представляет собой маслянистую маловязкую жидкость желто-оранжевого цвета, хорошо растворимую в растительных маслах.A mixture of polyprenols behaves as one substance, can be divided into individual isoprenologists on reversed-phase sorbents and is an oily, low-viscosity yellow-orange liquid, highly soluble in vegetable oils.
Предлагаемые в качестве гепатопротектора полипренолы формулы получают путем переработки растительного сырья, состоящего из древесной зелени хвойных и лиственных пород. Способ основан на экстракции ее органическим растворителем, последующем выделении отстаиванием при охлаждении и фильтрованием восков, отделении свободных кислот от полученного раствора экстрактивных веществ в углеводородном растворителе раствором щелочи, разделении полученного нейтрализованного раствора на раствор нейтральных веществ в углеводородном растворителе и водно-щелочной раствор солей органических кислот, подкислении водно-щелочного раствора солей неорганической или органической кислотой, выделении отстаиванием из него хлорофиллиновых кислот и фракции жирных и смоляных кислот и последующем разделении суммы дитерпеновых и высших жирных кислот, отгонке растворителя от нейтральных веществ и разделении нейтральных веществ. Способ отличается тем, что сумму дитерпеновых и высших жирных кислот обрабатывают в низкомолекулярном спирте с добавкой в качестве катализатора серной кислоты, отгоняют спирт и нейтрализуют неорганическим основанием дитерпеновые кислоты и катализатор, проводят экстракцию эфиров высших жирных кислот углеводородным экстрагентом, подкисляют водно-щелочной раствор и экстрагируют выделившиеся дитерпеновые кислоты углеводородным растоврителем, отгоняют растворитель до концентрации дитерпеновых кислот 30-50% и получают репеллент против грызунов. Нейтральные вещества последовательно экстрагируют ацетоном и спиртом C1-С3. Массовое соотношение нейтральные вещества:экстрагент 1:2 до 1:5 получают при обработке ацетоном концентратов сложных эфиров высших жирных кислот с тритерпеновыми спиртами, стеринами и высшими жирными спиртами и остаток, растворимый в ацетоне. При переработке остатка спиртом отделяют сумму дитерпеновых спиртов от соединений, нерастворимых в спирте, омылением которых спиртовым раствором щелочи получают концентрат полипренолов, хроматография на силикогеле которого при соотношении вещество:сорбент 1:10 и использовании гексана и гексана с добавкой объемных 5 и 10% диэтилового эфира в соотношении сорбент:растворитель 1:1 выделяют полипренолы с плотностью 0,893-0,897; на хроматограмме ВЭЖХ должны присутствовать пики, дающие по расположению и высоте пиков типичную для полипренолов хроматограмму. Условия хроматографии: колонка размером 3,0× 150 мм, заполненная сорбентом октадецилсиликагелем типа X-Terra C18 или аналогичная, подвижная фаза - смесь ацетон-метанол (80:20), скорость потока - 1 мл/мин.The formulas proposed as a hepatoprotector are obtained by processing plant materials consisting of coniferous and deciduous woody plants. The method is based on extraction with an organic solvent, subsequent isolation by settling upon cooling and filtering waxes, separation of free acids from the resulting solution of extractives in a hydrocarbon solvent with an alkali solution, separation of the resulting neutralized solution into a solution of neutral substances in a hydrocarbon solvent and an aqueous-alkaline solution of salts of organic acids , acidification of an aqueous-alkaline solution of salts with an inorganic or organic acid, isolation by settling from non about hlorofillinovyh acids and fractions of fatty and resin acids, and subsequent separation of diterpene amount of higher fatty acid, distilling the solvent from neutral substances and separation of neutral compounds. The method is characterized in that the sum of the diterpenic and higher fatty acids is treated in low molecular weight alcohol with the addition of sulfuric acid as a catalyst, the alcohol is distilled off and the diterpenic acids and catalyst are neutralized with an inorganic base, the higher fatty acid esters are extracted with a hydrocarbon extractant, the aqueous alkaline solution is acidified and extracted the released diterpenic acids with a hydrocarbon solvent, the solvent is distilled off to a concentration of diterpenic acids of 30-50% and a repellent is obtained against g rodents. Neutral substances are sequentially extracted with acetone and C 1 -C 3 alcohol. The mass ratio of neutral substances: extractant 1: 2 to 1: 5 is obtained by treatment with acetone concentrates of esters of higher fatty acids with triterpene alcohols, sterols and higher fatty alcohols and the residue soluble in acetone. During the processing of the residue with alcohol, the sum of diterpenic alcohols is separated from compounds insoluble in alcohol, saponification of which with an alcohol solution of alkali gives a polyprenol concentrate, chromatography on silica gel of which at a ratio of substance: sorbent 1:10 and using hexane and hexane with the addition of 5 and 10% volumetric diethyl ether in the ratio of sorbent: solvent 1: 1, polyprenols with a density of 0.893-0.897 are isolated; peaks should be present on the HPLC chromatogram, giving the location and height of the peaks a chromatogram typical of polyprenols. Chromatography conditions: column 3.0 × 150 mm in size, filled with an adsorbent octadecyl silica gel of the X-Terra C 18 type or similar, the mobile phase is a mixture of acetone-methanol (80:20), flow rate - 1 ml / min.
Оценку гепатопротекторных свойств Ропрена (полипренолов) проводили на доступных и воспроизводимых моделях токсического гепатита, повреждениях печени, вызванных фенацетином, дихлорэтаном, частичной резекцией печени. Повреждения печени, вызываемые данными токсическими веществами, наиболее сходны с таковыми при вирусном гепатите (под редакцией А.Г.Рахмановой, Вирусные гепатиты и другие актуальные инфекции, Т.1, Санкт-Петербург, 1997, с.175). Изучение препарата при частичной резекции печени позволяет оценить его действие на репаративно-регенерационную функцию гепатоцитов (Салопаев Б.П. Регенерация, адаптация, гомеостаз, Горький, Волго-Вятское издательство, 1990 г., с.152).The hepatoprotective properties of Ropren (polyprenols) were evaluated using accessible and reproducible models of toxic hepatitis, liver damage caused by phenacetin, dichloroethane, and partial resection of the liver. Damage to the liver caused by these toxic substances is most similar to those with viral hepatitis (edited by A.G. Rakhmanova, Viral hepatitis and other relevant infections, T.1, St. Petersburg, 1997, p.175). The study of the drug with partial resection of the liver allows you to evaluate its effect on the reparative-regenerative function of hepatocytes (Salopaev B.P. Regeneration, adaptation, homeostasis, Gorky, Volga-Vyatka Publishing House, 1990, p. 152).
Изучение гепатопротекторного действия Ропрена выполнены в Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования, Институте экспериментальной медицины РАМИ, Институте токсикологии Минздрава РФ.A study of the hepatoprotective effect of Ropren was performed at the St. Petersburg Medical Academy of Postgraduate Education, the Institute of Experimental Medicine of the RAMI, the Institute of Toxicology of the Ministry of Health of the Russian Federation.
Крысам самцам массой 160-170 г вводили внутрижелудочно дихлорэтан (500 мг/кг) и ацетаминофен (фенацетин) (400 мг/кг) 1 раз в день на протяжении 4 дней в смеси с подсолнечным маслом (1:1). Через 10 дней у всех экспериментальных животных по морфологической картине печени подтверждалось наличие токсического гепатита. С этого времени на протяжении 10 дней экспериментальным животным с лечебной целью вводили 1 раз в сутки Ропрен в дозе 20,0 мг/кг живой массы животного (25% раствор в растительном масле) внутрижелудочно и препараты сравнения: эссенциале - ампулы (1 мл/кг, внутривенно в хвостовую вену) и легалон (силимарин) в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно. Об эффективности лечения судили по динамике массы тела относительной массе печени, содержанию билирубина, трансаминаз, фосфатаз, церулоплазмина, общего белка, липидов сыворотки крови, содержанию гликогена, глутатиона, SH-групп, цитохромов в печени, а также по гексеналовому сну, бромсульфоаминовой пробе и гистологической картине печени.Male rats weighing 160-170 g were injected intragastrically with dichloroethane (500 mg / kg) and acetaminophen (phenacetin) (400 mg / kg) once a day for 4 days in a mixture with sunflower oil (1: 1). After 10 days, the presence of toxic hepatitis was confirmed in all experimental animals by the morphological picture of the liver. Since that time, for 10 days, Ropren was administered to experimental animals for therapeutic purposes once a day at a dose of 20.0 mg / kg of animal body weight (25% solution in vegetable oil) intragastrically and comparison preparations: essentiale - ampoules (1 ml / kg , intravenously in the tail vein) and legalon (silymarin) at a dose of 100 mg / kg intragastrically. The effectiveness of treatment was judged by the dynamics of body weight, relative liver mass, bilirubin, transaminases, phosphatases, ceruloplasmin, total protein, serum lipids, glycogen, glutathione, SH-groups, cytochromes in the liver, as well as hexenal sleep, bromosulfoamine test and histological picture of the liver.
К 20 дню эксперимента в группе с токсическим поражением печени дихлорэтаном и без лечения погибло 40% животных, а при лечении с легалоном - 10% крыс. После воздействия фенацетина за это время в группе животных без лечения погибло 60% подопытных животных, а в группе, леченной легалоном, - 30% крыс. В группах при лечении Ропреном и эссенциале летальности не наблюдалось. При создании экспериментальной модели гепатита путем интоксикации дихлорэтаном или фенацетином наблюдалась некоторая желтушность слизистых оболочек и склер, пальпаторно определялось увеличение размеров печени, снижалась масса тела. Результаты морфометрических показателей интактных, подвергнутых интоксикации и леченых животных приведены в таблице 1.By the 20th day of the experiment, 40% of the animals died in the group with toxic liver damage with dichloroethane and without treatment, and 10% in rats treated with legalon. After exposure to phenacetin, during this time, 60% of the experimental animals died in the group of animals without treatment, and 30% of the rats in the group treated with legalon. In groups treated with Ropren and Essential, mortality was not observed. When creating an experimental model of hepatitis by intoxication with dichloroethane or phenacetin, some yellowness of the mucous membranes and sclera was observed, an increase in liver size was determined by palpation, and body weight was reduced. The results of morphometric indicators of intact, intoxicated and treated animals are shown in table 1.
При интоксикации животных дихлорэтаном и фенацетином достоверно снижалась масса тела и увеличивалась относительная масса печени. Лечение животных Ропреном позволило вернуть массу тела и относительную массу печени в большей степени к нормальным показателям, чем лечение легалоном и эссенциале.During animal intoxication with dichloroethane and phenacetin, body weight significantly decreased and the relative weight of the liver increased. Treatment of animals with Ropren allowed to return body weight and relative liver mass to a greater extent to normal values than treatment with legalone and essential.
Для оценки функционального состояния печени использовали результаты биохимического анализа крови, приведенные в таблице 2.To assess the functional state of the liver used the results of a biochemical blood test, shown in table 2.
Из результатов анализов крови экспериментальных и интактных животных следует, что при поражении печени дихлорэтаном и фенацетином в крови животных отмечались явные биохимические сдвиги: увеличивалась активность трансаминазы, фосфатазы, лактатдегидрогеназы, снижалось в сыворотке крови содержание общего белка, липидов, резерва сульфгидрильных групп крови, повысились уровни билирубина и церулоплазмина, замедлялось выведение бромсульфалеина. При лечении Ропреном и препаратами сравнения установлено, что все препараты уменьшают признаки поражения печени. По сравнению с лечением легалоном лечение Ропреном и эссенциале показало более высокий терапевтический эффект. При использовании Ропрена большинство биохимических показателей вернулись или приблизились к показателям интактных животных.From the results of blood tests of experimental and intact animals, it follows that with liver damage with dichloroethane and phenacetin, obvious biochemical shifts were observed in the blood of animals: the activity of transaminase, phosphatase, lactate dehydrogenase increased, the total protein, lipids, reserve of sulfhydryl blood groups in blood serum decreased, levels increased bilirubin and ceruloplasmin, the excretion of bromosulfalein was slowed. When treated with Ropren and comparison drugs, it was found that all drugs reduce signs of liver damage. Compared with legalon treatment, treatment with Ropren and Essential showed a higher therapeutic effect. When using Ropren, most of the biochemical parameters returned or approached those of intact animals.
Наряду с биохимическими показателями крови проводились исследования ткани печени. В таблице 3 приведены данные по содержанию восстановленного глутатиона, гликогена, цитохромов Р450 и В5. Антоксическую функцию печени оценивали по продолжительности гексеналового сна.Along with biochemical blood parameters, liver tissue was examined. Table 3 shows data on the content of reduced glutathione, glycogen, cytochromes P 450 and B 5 . Antoxic liver function was evaluated by the duration of hexenal sleep.
Из результатов анализа следует, что при токсикологических поражениях печени дихлорэтаном и фенацетином уменьшились запасы гликогена, восстановленного глутатиона, уровня детоксицирующих цитохромов. Поражение печени также подтверждается снижением ее функциональной активности в виде уменьшения скорости распада гексенала.From the results of the analysis it follows that with toxicological lesions of the liver with dichloroethane and phenacetin, the stores of glycogen, reduced glutathione, and the level of detoxifying cytochromes decreased. Damage to the liver is also confirmed by a decrease in its functional activity in the form of a decrease in the rate of decomposition of hexenal.
Применение Ропрена, эссенциале и легалона (в меньшей степени) способствует улучшению показателей печени. Ропрен и эссенциале в большей степени способствуют восстановлению печеночных показателей, функционального состояния печени, приближая их к норме.The use of Ropren, Essential and Legalon (to a lesser extent) helps to improve liver function. Ropren and essentialia contribute to a greater degree to the restoration of hepatic indices, the functional state of the liver, bringing them closer to normal.
Таким образом, применение Ропрена значительно улучшало морфологические, биохимические и функциональные показатели печени экспериментальных животных, предотвращало их гибель. Ропрен по многим показателям превосходит или показывает близкие результаты репаративных процессов по сравнению с эссенциале и значительно превосходит по изученным показателям легалон. Это подтверждается и гистологическими исследованиями печени интактных и экспериментальных животных.Thus, the use of Ropren significantly improved the morphological, biochemical and functional parameters of the liver of experimental animals, and prevented their death. In many respects, Ropren surpasses or shows similar results of reparative processes in comparison with the essentials and significantly exceeds legalons in terms of the studied parameters. This is confirmed by histological studies of the liver of intact and experimental animals.
Печень животных исследовали через 1, 3 и 10 дней лечения. При просмотре гистологических препаратов печени животных через 1 сутки после перорального введения дихлорэтана и фенацетина наблюдались признаки острого токсического гепатита. На препаратах, окрашенных суданом, было видно, что цитоплазма гепатоцитов густо заполнена мелкими и крупными каплями жира. Жировая дистрофия печени носила диффузный характер. На препаратах, окрашенных гематоксилинэозином, наблюдались вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов, набухание клеточных тел, нечеткость клеточных границ и бледная окраска некоторых групп ядер.The liver of animals was examined after 1, 3, and 10 days of treatment. When viewing histological preparations of the liver of animals 1 day after oral administration of dichloroethane and phenacetin, signs of acute toxic hepatitis were observed. On preparations stained with Sudan, it was seen that the hepatocyte cytoplasm is densely filled with small and large drops of fat. Fatty degeneration of the liver was diffuse. On preparations stained with hematoxylineosine, vacuolization of hepatocyte cytoplasm, swelling of cell bodies, fuzzy cell borders, and pale color of some groups of nuclei were observed.
У животных, получавших лечение в течение 3 дней Ропреном и эссенциале, степень и распространение жировой дистрофии были менее выражены, чем у животных, не получавших лечение, и животных, получавших легалон.In animals treated with Ropren and Essential for 3 days, the degree and spread of fatty degeneration was less pronounced than in animals not treated and animals treated with legalon.
У животных, получавших лечение в течение 10 дней Ропреном, наблюдалась нормализация структуры печени. На препаратах, окрашенных гематоксилинэозином, клеточные границы были выражены. Ядра гепатоцитов имели достаточное содержание хроматина и четкую мембрану. Капли жира были видны лишь в единичных гепатоцитах (окрашивание суданом). Ропрен значительно улучшал гистологическую картину органа при сравнении с лечением легалоном, а при лечении эссенциале можно было наблюдать остаточные явления гепатита.In animals treated with Ropren for 10 days, normalization of the liver structure was observed. On preparations stained with hematoxylineosine, cell boundaries were expressed. Hepatocyte nuclei had a sufficient chromatin content and a clear membrane. Drops of fat were visible only in single hepatocytes (Sudan staining). Ropren significantly improved the histological picture of the organ when compared with legalon treatment, and residual hepatitis could be observed in the treatment of essentials.
По данным патоморфологического исследования ежедневное в течение 10 дней применение Ропрена устраняет признаки жировой дистрофии и нормализует структуру печени опытных крыс. Аналогичные результаты получены и при электронной микроскопии препаратов печени животных, пролеченных Ропреном в течение 10 дней. Наиболее характерным являлось некоторое увеличение количества липосом и умеренное набухание митохондрий и эндоплазматического ретикулума, что свидетельствует об активных процессах репарации.According to a pathomorphological study, daily for 10 days, the use of Ropren eliminates signs of fatty degeneration and normalizes the liver structure of experimental rats. Similar results were obtained with electron microscopy of animal liver preparations treated with Ropren for 10 days. The most characteristic was a slight increase in the number of liposomes and moderate swelling of the mitochondria and the endoplasmic reticulum, which indicates active repair processes.
Важной моделью изучения влияния лекарственных препаратов на стимуляцию процессов естественной регенерации печени и восстановления ее функциональной активности является модель частичной гепатоэктомии животных. Эксперименты проведены на 60 белых крысах самцах массой 180-200 г. Частичную гепатоэтомию осуществляли, удаляя центральную долю печени под эфирным наркозом. Опытным группам животных перорально с помощью зонда вводили Ропрен в дозе 40 мг/кг (1 мл раствора на оливковом масле) или препарат сравнения оротат калия в дозе 100 мг/кг 2 раза в день, начиная со следующего дня после операции, в течение 7 дней.An important model for studying the effect of drugs on the stimulation of the processes of natural regeneration of the liver and the restoration of its functional activity is the model of partial hepatectomy of animals. The experiments were performed on 60 white rats of males weighing 180-200 g. Partial hepatoetomy was performed by removing the central lobe of the liver under ether anesthesia. Ropren was administered orally with a probe at a dose of 40 mg / kg (1 ml of solution in olive oil) or a comparison drug of potassium orotate at a dose of 100 mg / kg 2 times a day, starting from the day after surgery, for 7 days, to the experimental groups of animals. .
Выбранный в качестве препарата сравнения оротат калия (производное пиримидина) является эталонным препаратом, рекомендуемым для ускорения регенерации печени. Оротовая кислота является предшественником урацила, в который она превращается при декарбоксилировании.The potassium orotate (pyrimidine derivative) selected as the reference drug is the reference drug recommended for accelerating liver regeneration. Orotic acid is the precursor of uracil, into which it is converted by decarboxylation.
Контрольной группе крыс через зонд вводили оливковое масло в таком же объеме (плацебо, 1 мл, 2 раза в день). О функциональной активности печени судили по тесту продолжительности гексеналового сна на 8 сутки после частичной гепатоэктомии. Гексенал вводили животным внутрибрюшинно в дозе 80 мг/кг. Для количественной оценки процессов регенерации использовали коэффициент полноты регенерации (Гайворонская В.В. и др. Влияние бемитила, этомерзола и яктона на процессы регенерации печени после частичной гепатоэктомии. - Экспериментальная и клиническая фармакология, Т.63, №5, 2000, с.34-36). Этот коэффициент имеет вид К=P1· Р2/Р3, где P1 - масса печени через 7 дней после частичной гепатоэктомии, Р3 - масса удаленной при гепатоэктомии печени. Р1 и Р3 измеряют непосредственно, Р2 - масса оставшейся после гепатоэктомии печени (измеряется расчетным способом). Результаты эксперимента и расчета приведены в таблице 4.To the control group of rats, olive oil was injected in the same volume through a probe (placebo, 1 ml, 2 times a day). The functional activity of the liver was judged by the test of the duration of hexenal sleep on the 8th day after a partial hepatectomy. Hexenal was administered to animals intraperitoneally at a dose of 80 mg / kg. For a quantitative assessment of regeneration processes, the coefficient of completeness of regeneration was used (Gayvoronskaya V.V. et al. Effect of bemitil, etomersol and yakton on liver regeneration processes after partial hepatectomy. - Experimental and Clinical Pharmacology, T.63, No.5, 2000, p. 34 -36). This coefficient has the form K = P 1 · P 2 / P 3 , where P 1 is the mass of the liver 7 days after partial hepatectomy, P 3 is the mass of the liver removed during hepatectomy. P 1 and P 3 are measured directly, P 2 is the mass of the liver remaining after hepatectomy (measured by calculation). The results of the experiment and calculation are shown in table 4.
Коэффициент полноты регенерации печени “К” достоверно (Р< 0,03) превышает таковой для групп, получавшей оротат калия и плацебо. С другой стороны, группа плацебо имеет также коэффициент “К” выше, чем группа, получавшая оротат калия.The coefficient of completeness of liver regeneration “K” significantly (P <0.03) exceeds that for groups receiving potassium orotate and placebo. On the other hand, the placebo group also has a “K” coefficient higher than the group receiving potassium orotate.
Полученные результаты позволяют считать, что тестируемый препарат Ропрен не нарушает процесс естественной репаративной регенерации печени и выше, чем у препарата сравнения.The results obtained suggest that the tested drug Ropren does not violate the process of natural reparative regeneration of the liver and is higher than that of the comparison drug.
На той же модели частичной гепатоэктомии было изучено влияние Ропрена и оротата калия на функциональную активность микросомальной системы по тесту гексеналового сна. Результаты приведены в таблице 5.In the same model of partial hepatectomy, the effect of Ropren and potassium orotate on the functional activity of the microsomal system was studied using the hexenal sleep test. The results are shown in table 5.
Были проведены морфологические исследования печени у крыс после частичной гепатоэктомии с последующим введением Ропрена. Печени исследуемых групп крыс, включая интактную группу (25 объектов), выведенных на 8 день эксперимента согласно Международным правилам гуманного обращения с животными, фиксировали в 10% нейтральном формалине, после чего производили заливку в парафин и готовили гистологические срезы толщиной не более 5 мк. Срезы окрашивали обзорными гистологическими красками - гематоксилином и эозином, азуром и эозином. Для выявления волокнистых структур проводили окрашивание по Ван Гизону. Для выявления гликогена проводили ШИК-реакцию. Оценку и подсчет гистологических структур проводили в 10 полях зрения объекта × 20, × 40, окуляра × 10 в условной единице площади. Статистическую обработку материала осуществляли с учетом принципов доказательной медицины. Проводили микрофотографирование гистологических препаратов. При просмотре гистологических препаратов для оценки репаративных процессов в печени обращалось внимание на состояние стромы и паренхимы печени. Для оценки состояния стромы оценивались волокнистые структуры печени, в том числе в портальных, перепортальных трактах и дольках печени, а также учитывалось состояние звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (ЗРЭ)-купферовских клеток. При оценке состояния паренхимы печени обращалось внимание на содержание гликогена (как одного из важнейших показателей метаболической активности печени), а также на возможные дистрофические изменения гепатоцитов. Для оценки интенсивности, полноценности и особенностей регенераторных процессов в печени проводили подсчет митозов в гепатоцитах, амитотически разделившихся гепатоцитов (дву- и многоядерных) ядрышек в ядрах гепатоцитов (как показатель синтеза рибосомной РНК и пролиферативной активности гепатоцитов).Morphological studies of the liver in rats after partial hepatectomy followed by the introduction of Ropren were performed. The liver of the studied groups of rats, including the intact group (25 objects), bred on the 8th day of the experiment according to the International Rules for the Humane Treatment of Animals, was fixed in 10% neutral formalin, after which paraffin was filled and histological sections were prepared with a thickness of not more than 5 microns. Sections were stained with panoramic histological paints - hematoxylin and eosin, azure and eosin. To identify fibrous structures, Van Gieson staining was performed. To detect glycogen, a SIC reaction was performed. Assessment and calculation of histological structures was carried out in 10 fields of view of the object × 20, × 40, eyepiece × 10 in a conventional unit of area. Statistical processing of the material was carried out taking into account the principles of evidence-based medicine. Microphotography of histological preparations was performed. When viewing histological preparations for assessing reparative processes in the liver, attention was paid to the state of stroma and parenchyma of the liver. To assess the condition of the stroma, the fibrous structures of the liver were evaluated, including in the portal, transortal tracts and liver lobules, and the state of stellate reticuloendotheliocytes (RRE) -Kuffer cells was also taken into account. When assessing the state of the liver parenchyma, attention was paid to the content of glycogen (as one of the most important indicators of the metabolic activity of the liver), as well as to possible dystrophic changes in hepatocytes. To assess the intensity, usefulness and characteristics of regenerative processes in the liver, mitoses in hepatocytes, amitotically separated hepatocytes (binuclear and multinuclear) nucleoli in hepatocyte nuclei were counted (as an indicator of the synthesis of ribosomal RNA and proliferative activity of hepatocytes).
Таким образом, проведенные морфологические исследования печени у крыс после частичной гепатоэктомии с последующим введением Ропрена показали, что у этих животных оказывается более сохраненная строма органа без значительных разрастаний соединительной ткани. Имеет место активация (в форме пролиферации) звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, активно участвующих в метаболических процессах печени.Thus, morphological studies of the liver in rats after partial hepatectomy followed by the introduction of Ropren showed that these animals have a more preserved organ stroma without significant growths of connective tissue. There is an activation (in the form of proliferation) of stellate reticuloendotheliocytes actively involved in the metabolic processes of the liver.
В паренхиме печени наблюдалась активация метаболических процессов в виде заметного отложения гликогена в гепатоцитах. Вместе с тем выраженных дистрофических изменений гепатоцитов, равно как и так называемой “дисплазии” (полиморфизма) ядер гепатоцитов не наблюдалось как в группе получавших, так и не получавших Ропрен животных, что свидетельствует о щадящем действии препарата на паренхиму печени. Об этом же свидетельствует отсутствие активациии так называемой спонтанной патологии лабораторных животных под воздействием Ропрена. Следует особо отметить, что вследствие частичной гепатоэктомии в паренхиме печени у животных, не получавших Ропрен, наблюдается появление двуядрышковых ядер гепатоцитов, что указывает на некоторое нарушение процессов синтеза рибосомной РНК и возникновение нетипичных для ткани печени митозов в гепатоцитах.In the liver parenchyma, activation of metabolic processes in the form of a marked deposition of glycogen in hepatocytes was observed. At the same time, pronounced dystrophic changes in hepatocytes, as well as the so-called “dysplasia” (polymorphism) of hepatocyte nuclei, were not observed in the group of animals that received or did not receive Ropren, which indicates the sparing effect of the drug on the liver parenchyma. This is also evidenced by the lack of activation of the so-called spontaneous pathology of laboratory animals under the influence of Ropren. It should be noted that due to partial hepatectomy in the liver parenchyma in animals that did not receive Ropren, the appearance of bipolar nuclei of hepatocytes is observed, which indicates some disturbance in the processes of synthesis of ribosomal RNA and the occurrence of mitoses atypical for liver tissue in hepatocytes.
При введении Ропрена количество дву- и полиядрышковых ядер гепатоцитов значительно (почти в два раза) уменьшается, а митозы практически не встречаются. В то же время у получавших Ропрен животных наблюдается увеличение количества двуядерных гепатоцитов, что является доказательством усилия обычного для репарации печени амитотического типа пролиферации гепатоцитов. Двуядерность гепатоцитов, как принято считать, является своеобразным механизмом приспособления для увеличения поверхностных отношений между ядром и цитоплазмой, особенно при предъявлении повышенных требований функции органа, например при репаративных процессах, развивающихся вследствие альтерации (в данном случае после частичной гепатоэктомии).With the introduction of Ropren, the number of double and polynucleolar hepatocyte nuclei decreases significantly (almost twice), and mitoses practically do not occur. At the same time, in animals treated with Ropren, an increase in the number of binuclear hepatocytes is observed, which is evidence of the efforts of the amitotic type of hepatocyte proliferation common for liver repair. The binuclear nature of hepatocytes, as is commonly believed, is a kind of adaptation mechanism for increasing the surface relations between the nucleus and the cytoplasm, especially when presenting increased requirements for organ function, for example, during reparative processes developing as a result of alteration (in this case, after partial hepatectomy).
Все отмеченные выше морфологические особенности регенераторных изменений свидетельствовали о развитии более эффективных репаративных процессов в печени после введения Ропрена.All the morphological features of the regenerative changes noted above indicated the development of more effective reparative processes in the liver after the administration of Ropren.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003131932/15A RU2252026C1 (en) | 2003-10-29 | 2003-10-29 | Method for stimulating the processes of natural hepatic regeneration |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003131932/15A RU2252026C1 (en) | 2003-10-29 | 2003-10-29 | Method for stimulating the processes of natural hepatic regeneration |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2252026C1 true RU2252026C1 (en) | 2005-05-20 |
Family
ID=35820475
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003131932/15A RU2252026C1 (en) | 2003-10-29 | 2003-10-29 | Method for stimulating the processes of natural hepatic regeneration |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2252026C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008143551A1 (en) * | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Viktor Ivanovich Roschin | Active ingredient of a medicinal agent, a medicinal agent, a pharmaceutical composition and method for treating dementia syndrome patients |
| WO2008143553A1 (en) * | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Viktor Ivanovich Roschin | Medicinal agent for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity and a method for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity |
| WO2008143552A1 (en) | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Viktor Ivanovich Roschin | Agent, pharmaceutical composition, and method for treating the ethyl alcohol and/or narcotic dependence |
| RU2563138C1 (en) * | 2014-03-25 | 2015-09-20 | Михаил Иванович Синенко | Method of regenerating liver hepatocytes with phospholipids |
| WO2017044002A1 (en) * | 2015-09-07 | 2017-03-16 | Вагиф Султанович СУЛТАНОВ | Active ingredient of a drug and a drug, a pharmaceutical composition and a method for treating demyelinating diseases of the human body, which includes prophylaxis |
| RU2667646C1 (en) * | 2017-04-20 | 2018-09-21 | Общество с ограниченной ответственностью "Артлайф" | Composition for correction of disorders in case of liver diseases |
| RU2818680C1 (en) * | 2023-05-25 | 2024-05-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского" | Method for determining mitotic activity of hepatocytes |
-
2003
- 2003-10-29 RU RU2003131932/15A patent/RU2252026C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СКУЯ Н.А. и др. Продукты переработки древесной зелени – перспективные исследования в гастроэнтерологии "Функциональная диагностика и эффективность лечения заболеваний органов пищеварения" Вильнюс, 1988, ч.4, с.675-676. * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008143551A1 (en) * | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Viktor Ivanovich Roschin | Active ingredient of a medicinal agent, a medicinal agent, a pharmaceutical composition and method for treating dementia syndrome patients |
| WO2008143553A1 (en) * | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Viktor Ivanovich Roschin | Medicinal agent for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity and a method for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity |
| WO2008143552A1 (en) | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Viktor Ivanovich Roschin | Agent, pharmaceutical composition, and method for treating the ethyl alcohol and/or narcotic dependence |
| US20100196457A1 (en) * | 2007-05-23 | 2010-08-05 | Viktor Ivanovich Roschin | Agent, pharmaceutical composition, and method for treating the ethyl alcohol and/or narcotic dependence |
| AU2008253775B2 (en) * | 2007-05-23 | 2014-07-03 | Viktor Ivanovich Roschin | Active ingredient of a medicinal agent, a medicinal agent, a pharmaceutical composition and method for treating dementia syndrome patients |
| AU2008253777B2 (en) * | 2007-05-23 | 2014-07-10 | Viktor Ivanovich Roschin | Medicinal agent for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity and a method for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity |
| US8952074B2 (en) | 2007-05-23 | 2015-02-10 | Viktor Ivanovich Roschin | Medicinal agent for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity and a method for treating patients suffering from diseases caused by the monoaminooxidase excessive activity |
| US8987338B2 (en) | 2007-05-23 | 2015-03-24 | Viktor Ivanovich Roschin | Active ingredient of a medicinal agent, a medicinal agent, a pharmaceutical composition and method for treating dementia syndrome patients |
| RU2563138C1 (en) * | 2014-03-25 | 2015-09-20 | Михаил Иванович Синенко | Method of regenerating liver hepatocytes with phospholipids |
| WO2017044002A1 (en) * | 2015-09-07 | 2017-03-16 | Вагиф Султанович СУЛТАНОВ | Active ingredient of a drug and a drug, a pharmaceutical composition and a method for treating demyelinating diseases of the human body, which includes prophylaxis |
| RU2631887C2 (en) * | 2015-09-07 | 2017-09-28 | Вагиф Султанович Султанов | Active drug ingredient, drug, pharmaceutical composition and method for treatment of demyelinating diseases of living organism, including disease prevention |
| RU2667646C1 (en) * | 2017-04-20 | 2018-09-21 | Общество с ограниченной ответственностью "Артлайф" | Composition for correction of disorders in case of liver diseases |
| RU2818680C1 (en) * | 2023-05-25 | 2024-05-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского" | Method for determining mitotic activity of hepatocytes |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ngbolua et al. | In vitro antisickling and radical scavenging activities of a poly-herbal formula (Drepanoalpha®) in sickle cell erythrocyte and acute toxicity study in wistar albino rats. | |
| Idoh et al. | Toxicological assessment of the hydroethanolic leaf extract of Clerodendrum capitatum in Wistar rats | |
| RU2252026C1 (en) | Method for stimulating the processes of natural hepatic regeneration | |
| Kamsu et al. | Toxicological profile of the aqueous extract of tectona grandis lf (verbenaceae) leaves: a medicinal plant used in the treatment of typhoid fever in traditional Cameroonian medicine | |
| Sarker et al. | In-vitro and in-vivo pharmacological activities with phytochemical evaluation of methanolic extract of Microcos paniculata stem barks | |
| Usunobun et al. | Hepatoprotective and antioxidant effect of Rhaphiostylis beninensis ethanol root extract on carbon tetrachloride (CCl4)-induced hepatotoxicity and oxidative stress | |
| KR100414187B1 (en) | Hepatoprotective extract derived from Protaetia brevitarsis and its use | |
| Mushtaq et al. | Multiple treatment of Eremurus himalaicus extracts ameliorates carbon tetrachloride induced liver injury in rats | |
| Epoh et al. | Evaluation of acute and sub-acute toxicity of the aqueous extract from the fruit of Solanum indicum Linn.(Solanaceae) in Rats | |
| Mohamed et al. | The possible protective effects of alfa lipoic acid on diethanolamine-induced renal toxicity in adult male albino rats: A histological and immunohistochemical study | |
| RU2641380C1 (en) | Method for beryllium intoxication simulation | |
| Manonmani et al. | Hepatoprotective activity of aqueous extract of Phyllanthusniruri in CCl4 induced liver toxicity-in vivo study | |
| Adongo et al. | Toxicological assessment of Pseudospondias microcarpa (A. Rich.) Engl. hydroethanolic leaf extract in rats: Haematological, biochemical, and histopathological studies | |
| Asaad et al. | Toxicity of Cadmium Chloride on White Rats Liver and the Protective Role of Brassica Nigra Seed Extract | |
| Abdu et al. | Effect of stem bark extract of Kigelia Africana on liver and kidney function of alloxan induced diabetic rats | |
| Kim et al. | Evaluation of the toxicological properties and hepatoprotective effects of PAI-N002, a mixture of herbal extracts, in rats | |
| Dhakar et al. | Anti-diabetic activity of polyherbal formulation containing ethanolic extract of leaves of Azadirachta indica, Allium sativum and Annona squamosa | |
| Hrytsyk et al. | Investigation of the effect of Artemisia L. herb extracts on the progress of the toxic tetrachloromethane liver damage | |
| Omeodu et al. | Effect of Decryodes edulis (African Black Pear) aqueous leaf extract on Liver enzyme markers of acetaminopheninduced hepatotoxicity in Wistar Rats | |
| RU2296579C1 (en) | Agent with hepatoprotective and cholagostic action | |
| Oyinloye et al. | Ethyl acetate fraction of Mucuna pruriens leaves mitigates diclofenac-induced hepatotoxicity via modulation of biochemical and histological parameters changes in Wistar Rats | |
| Fotso et al. | Acute and sub-chronic toxicity studies of aqueous bark extract of Detarium microcarpum guill. and perr in albinos wistar rat | |
| RU2186577C1 (en) | Preparation eliciting hepatoprotective effect | |
| Norazhar et al. | Zebrafish Embryotoxicity and Teratogenic Effects of Christia vespertilionis Leaf Extract. | |
| Ogbe et al. | Comparative study on the effects of Alchornea cordifolia and Cassia spectabilis leaf extracts on diclofenac-induced liver and kidney injuries in rats |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20070823 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20101018 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: SUB-LICENCE Effective date: 20120126 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner |