RU2247389C2 - Method for identifying individual for vascular and cancer disease risk - Google Patents
Method for identifying individual for vascular and cancer disease risk Download PDFInfo
- Publication number
- RU2247389C2 RU2247389C2 RU2002107982/15A RU2002107982A RU2247389C2 RU 2247389 C2 RU2247389 C2 RU 2247389C2 RU 2002107982/15 A RU2002107982/15 A RU 2002107982/15A RU 2002107982 A RU2002107982 A RU 2002107982A RU 2247389 C2 RU2247389 C2 RU 2247389C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- concentration
- homocysteine
- serum
- pgi
- individual
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6806—Determination of free amino acids
- G01N33/6812—Assays for specific amino acids
- G01N33/6815—Assays for specific amino acids containing sulfur, e.g. cysteine, cystine, methionine, homocysteine
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Область, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION
Настоящее изобретение относится к комбинированному диагностическому способу идентификации индивидуумов с риском возникновения коронарных и сосудистых заболеваний, а также раковых заболеваний.The present invention relates to a combined diagnostic method for identifying individuals at risk for coronary and vascular diseases, as well as cancer.
Способ настоящего изобретения основан на комбинации двух тестов, проводимых на пробах крови или сыворотки в целях идентификации индивидуумов, у которых имеется предрасположенность к вырабатыванию или проявлению повышенных уровней гомоцистеина и которые, тем самым, подвержены риску развития у них заболеваний, вызываемых указанными повышенными уровнями, таких как болезни сердца и сердечно-сосудистые заболевания, включая атеросклероз и ишемический инсульт, а также раковые заболевания.The method of the present invention is based on a combination of two tests performed on blood or serum samples to identify individuals who are predisposed to produce or display elevated levels of homocysteine and who are therefore at risk of developing diseases caused by these elevated levels, such like heart disease and cardiovascular disease, including atherosclerosis and ischemic stroke, as well as cancer.
Предпосылки создания изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION
Раку желудка предшествует ряд различных желудочных заболеваний или состояний, таких как хронический атрофический гастрит, пернициозная анемия, язва желудка, полипоз желудка и болезнь Менетрие (гигантский гипертрофический гастрит). Четко идентифицируемыми изменениями слизистой оболочки являются дисплазия и аденома. Было установлено, что почти при всех заболеваниях риск возникает вследствие развития хронического атрофического гастрита.Gastric cancer is preceded by a number of different gastric diseases or conditions, such as chronic atrophic gastritis, pernicious anemia, gastric ulcer, polyposis of the stomach and Menetrie's disease (giant hypertrophic gastritis). Clearly identifiable mucosal changes are dysplasia and adenoma. It was found that in almost all diseases, the risk arises from the development of chronic atrophic gastritis.
Хронический гастрит характеризуется длительным воспалительным состоянием слизистой желудка. Это заболевание может быть приближенно разделено на поверхностную и атрофическую форму. При поверхностном гастрите зона воспалительного клеточного инфильтрата концентрируется ниже поверхностного эпителия. В случае, когда воспаление прогрессирует и распространяется между специфическими желудочными секреторными железами, то оно может быть отнесено к хроническому атрофическому гастриту. В этом случае нормальные железистые структуры слизистой желудка, по крайней мере частично, подвергаются метапластическим изменениям.Chronic gastritis is characterized by a prolonged inflammatory state of the gastric mucosa. This disease can be approximately divided into superficial and atrophic forms. With superficial gastritis, the zone of inflammatory cell infiltrate is concentrated below the superficial epithelium. In the case when the inflammation progresses and spreads between specific gastric secretory glands, it can be attributed to chronic atrophic gastritis. In this case, the normal glandular structures of the gastric mucosa, at least in part, undergo metaplastic changes.
Был оценен относительный риск возникновения рака желудка у пациентов, страдающих атрофическим гастритом в области тела желудка, который, как было вычислено исходя из финской статистики заболеваемости раком, примерно в 4-5 раз превышает риск заболевания раком у лиц со здоровой слизистой желудка. Кроме того, риск заболевания раком существует и у пациентов с пернициозной анемией, обусловленной дефицитом внутреннего фактора и нарушением абсорбции витамина В12. При тяжелой атрофии в области привратниковой полости риск повышается даже в 18 раз. Если атрофические изменения наблюдаются как в области привратниковой полости, так и в области тела желудка (пангастрит), то риск возрастает уже в 90 раз.The relative risk of gastric cancer in patients with atrophic gastritis in the stomach area was estimated, which, based on Finnish statistics on cancer incidence, was approximately 4-5 times higher than the risk of cancer in people with healthy gastric mucosa. In addition, there is a risk of cancer in patients with pernicious anemia due to deficiency of the internal factor and impaired absorption of vitamin B12. In severe atrophy in the pyloric area, the risk increases even by 18 times. If atrophic changes are observed both in the pyloric cavity and in the region of the body of the stomach (pangastritis), then the risk increases by 90 times.
В публикации WO 96/15456 описан метод скрининга для определения риска заболевания раком желудка, в соответствии с которым атрофию слизистой тела или привратниковой полости желудка, либо того и другого определяют путем измерения уровней аналитов, то есть пепсиногена I (PGI) и гастрина-17 (G-17), в пробе сыворотки, и сравнения определенных таким образом уровней с метод-специфическим граничным значением для соответствующего аналита. Измеренные уровни также предпочтительно сравнивают с метод-специфическим эталонным значением для соответствующего аналита.WO 96/15456 describes a screening method for determining the risk of gastric cancer, according to which atrophy of the mucous membrane of the body or pyloric of the stomach, or both, is determined by measuring the levels of analytes, i.e. pepsinogen I (PGI) and gastrin-17 ( G-17), in a serum sample, and comparing the levels thus determined with the method-specific boundary value for the corresponding analyte. Measured levels are also preferably compared with a method-specific reference value for the corresponding analyte.
Значение PGI в сыворотке, которое ниже специфического граничного значения для PGI, указывает на атрофический гастрит в области тела желудка. Если концентрация G-17 в сыворотке ниже ее граничного значения, то атрофия локализуется в области привратниковой полости желудка. При пангастрите, концентрация PGI в сыворотке имеет значение ниже граничного, а концентрация G-17 в сыворотке приближается к нижнему пределу его эталонного значения.A serum PGI value that is below a specific boundary value for PGI indicates atrophic gastritis in the body region of the stomach. If the concentration of G-17 in serum is below its boundary value, then atrophy is localized in the pyloric cavity of the stomach. With pangastritis, the concentration of PGI in serum is below the limit, and the concentration of G-17 in serum approaches the lower limit of its reference value.
Метилентетрагидрофолат-редуктаза (MTHFR) представляет собой внутриклеточный фермент, необходимый для реметилирования гомоцистеина с образованием метионина. Нарушение функционирования этого фермента обусловлено дефектами в структуре гена MTHFR или дефицитом микроэлементов, например фолата, витамина В6 и/или витамина В12. Нарушение функционирования фермента MTHFR приводит к повышению уровня гомоцистеина в сыворотке/плазме (гомоцистеинемии) и к гомоцистеинурии. Многие исследования показали, что повышенные уровни гомоцистеина в сыворотке/плазме ассоциируются с повышенным риском возникновения различных коронарных и сосудистых заболеваний, причем высокий уровень гомоцистеина в сыворотке/плазме, превышающий эталонное значение, представляет собой серьезный независимый фактор риска возникновения коронарных и сосудистых заболеваний и ишемического инсульта1-5.Methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) is an intracellular enzyme necessary for the remethylation of homocysteine to form methionine. Impaired functioning of this enzyme is caused by defects in the structure of the MTHFR gene or a deficiency of trace elements, such as folate, vitamin B6 and / or vitamin B12. Impaired functioning of the MTHFR enzyme leads to an increase in serum / plasma homocysteine (homocysteinemia) and homocysteinuria. Many studies have shown that elevated serum / plasma homocysteine levels are associated with an increased risk of various coronary and vascular diseases, and high serum / plasma homocysteine levels exceeding the reference value are a serious independent risk factor for coronary and vascular diseases and ischemic stroke. 1-5 .
Предполагается, что атерогенное влияние гомоцистеина основано на повышенном продуцировании реакционноспособных молекул кислорода, которые приводят к перокислению липидов. Обеспечение достаточного уровня витамина В12 необходимо для метаболизма фолата и нормального продуцирования элементов крови, а также для функционирования нервных клеток. Витамин В12 образует комплекс с белком, внутренним фактором, продуцируемым слизистой оболочкой в области тела желудка, где этот комплекс ресорбируется в нижней части подвздошной кишки. Указанный комплекс является предпочтительной формой ресорбции витамина В12.The atherogenic effect of homocysteine is believed to be based on increased production of reactive oxygen molecules that lead to lipid peroxidation. Ensuring a sufficient level of vitamin B12 is necessary for folate metabolism and the normal production of blood elements, as well as for the functioning of nerve cells. Vitamin B12 forms a complex with protein, an intrinsic factor produced by the mucous membrane in the region of the stomach’s body, where this complex is resorbed in the lower ileum. The specified complex is the preferred form of resorption of vitamin B12.
Дефицит внутреннего фактора, как следствие атрофического гастрита или рака желудка, особенно в области тела желудка, в конечном счете, приводит к дефициту витамина В12, а следовательно, и к повышению концентрации гомоцистеина. Таким образом, было бы чрезвычайно важно выявить тех индивидуумов, у которых имеется дефицит витамина В12 или существует высокий риск возникновения дефицита витамина В12, обусловленный атрофическим гастритом, и которые поэтому могут иметь повышенный уровень гомоцистеина в сыворотке или плазме. Раннее введение дополнительного витамина В12 этим индивидуумам должно благоприятствовать предупреждению у них сосудистых заболеваний. Кроме того, было бы чрезвычайно важно выявить тех индивидуумов, у которых имеется риск возникновения рака вследствие сверхпродуцирования внутриклеточных кислородных радикалов, и для которых может оказаться благоприятным дополнительное введение витамина В12 или другое лечение.Deficiency of an internal factor, as a result of atrophic gastritis or gastric cancer, especially in the area of the stomach’s body, ultimately leads to a deficiency of vitamin B12 and, consequently, to an increase in homocysteine concentration. Thus, it would be extremely important to identify individuals who are deficient in vitamin B12 or who are at high risk of developing vitamin B12 deficiency due to atrophic gastritis and who may therefore have elevated levels of homocysteine in serum or plasma. Early administration of supplemental vitamin B12 to these individuals should be conducive to preventing vascular disease in them. In addition, it would be extremely important to identify those individuals who are at risk of cancer due to overproduction of intracellular oxygen radicals, and for whom additional vitamin B12 administration or other treatment may be beneficial.
Краткое описание изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
Настоящее изобретение относится к способу комбинирования анализа для определения маркера для атрофического гастрита в пробе сыворотки, с анализом на гомоцистеин для облегчения диагностики или для выявления риска возникновения сосудистых, а также раковых заболеваний у индивидуума, где термин "сосудистый" имеет широкое значение и относится к любому коронарному или сосудистому заболеванию, которое может развиваться в результате атерогенного влияния гомоцистеина.The present invention relates to a method of combining an analysis to determine a marker for atrophic gastritis in a serum sample, with a homocysteine test to facilitate diagnosis or to identify the risk of vascular as well as cancer in an individual, where the term "vascular" has a broad meaning and refers to any coronary or vascular disease, which can develop as a result of the atherogenic effect of homocysteine.
Способ настоящего изобретения представляет собой способ идентификации индивидуума с риском возникновения сосудистого и ракового заболевания, где указанный способ включает стадии:The method of the present invention is a method of identifying an individual at risk of a vascular and cancerous disease, wherein said method comprises the steps of
- количественного определения концентрации аналита, пепсиногена I (PGI), в пробе сыворотки, взятой у данного индивидуума,- quantitative determination of the concentration of analyte, pepsinogen I (PGI), in a serum sample taken from this individual,
- выбора метод-специфического граничного значения для указанного аналита,- selecting a method-specific boundary value for the specified analyte,
- сравнения определенной таким образом концентрации аналита с метод-специфическим граничным значением для данного аналита и- comparing the analyte concentration thus determined with the method-specific boundary value for the analyte and
- определения концентрации гомоцистеина в пробе сыворотки, взятой у данного индивидуума, и ее сравнения с метод-специфическим эталонным значением для гомоцистеина.- determination of the concentration of homocysteine in a serum sample taken from a given individual, and its comparison with a method-specific reference value for homocysteine.
Настоящее изобретение также позволяет идентифицировать индивидуума, имеющего концентрацию пепсиногена I в сыворотке ниже метод-специфического граничного значения для сывороточного пепсиногена I и концентрацию гомоцистеина в сыворотке выше эталонного значения для гомоцистеина, как индивидуума с повышенным риском возникновения сосудистого и/или ракового заболевания, или предрасположенного к этим заболеваниям.The present invention also allows the identification of an individual having a serum pepsinogen I concentration below a method-specific limit for serum pepsinogen I and a serum homocysteine concentration higher than the reference value for homocysteine, as an individual with an increased risk of vascular and / or cancer, or predisposed to to these diseases.
Определение концентраций PGI и гомоцистеина в сыворотке может быть осуществлено в любом порядке в целях одновременного получения данных об уровнях как PGI, так и гомоцистеина в сыворотке для облегчения диагностики сосудистых заболеваний или рака, или для оценки риска возникновения этих заболеваний. Однако в соответствии с одним из вариантов осуществления изобретения сначала определяют концентрацию PGI в сыворотке и сравнивают ее с определенным или выбранным метод-специфическим граничным значением, и для последующего установления диагноза отбирают индивидуума, у которого концентрация PGI в сыворотке ниже метод-специфического граничного значения. В этом варианте осуществления изобретения на гомоцистеин исследуют лишь тех индивидуумов, в сыворотке которых присутствуют низкие уровни PGI, указывающие на атрофию слизистой тела желудка.Serum PGI and homocysteine concentrations can be determined in any order to simultaneously obtain serum PGI and homocysteine levels to facilitate the diagnosis of vascular diseases or cancer, or to assess the risk of these diseases. However, in accordance with one embodiment of the invention, the serum PGI concentration is first determined and compared with a specific or selected method-specific limit value, and an individual whose serum PGI concentration is lower than the method-specific limit value is selected for subsequent diagnosis. In this embodiment of the invention, only those individuals are examined for homocysteine in the serum of which there are low PGI levels indicative of atrophy of the gastric mucosa.
В соответствии с одним из вариантов осуществления изобретения определяют также концентрацию В12 в сыворотке указанного индивидуума и сравнивают ее с метод-специфическим эталонным граничным значением для витамина В12.In accordance with one embodiment of the invention, the concentration of B12 in the serum of the indicated individual is also determined and compared with a method-specific reference limit value for vitamin B12.
Настоящее изобретение включает стадию сравнения измеренных концентраций аналита с метод-специфическим граничным значением или эталонным значением для указанных аналитов. Выбор таких значений хорошо известен специалистам и зависит от специфичности и чувствительности, выбранных для тест-метода, используемого для определения концентраций аналита, см. например, William J. Marshall, Clinical Chemistry, Third Edition, 1995, Mosby.The present invention includes the step of comparing the measured analyte concentrations with a method-specific limit value or reference value for said analytes. The choice of such values is well known to those skilled in the art and depends on the specificity and sensitivity selected for the test method used to determine analyte concentrations, see, for example, William J. Marshall, Clinical Chemistry, Third Edition, 1995, Mosby.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления, настоящее изобретение, главным образом, направлено на выявление таких индивидуумов, которые еще не имеют дефицита витамина В12, то есть которые имеют, в основном, нормальные уровни витамина В12, но которым, вследствие низких значений PGI, был поставлен диагноз атрофии в области тела желудка, и которые также имеют высокие уровни гомоцистеина в сыворотке. Такая идентификация дает возможность уже на ранней стадии прибегнуть к предупредительным мерам, например, к введению дополнительного В12 для противодействия развитию заболеваний, асссоциированных с повышенными уровнями гомоцистеина. Подробное описание изобретенияIn accordance with a preferred embodiment, the present invention is mainly directed to the identification of those individuals who do not yet have a deficiency of vitamin B12, that is, which have basically normal levels of vitamin B12, but which, due to low PGI values, have been delivered a diagnosis of atrophy in the body area of the stomach, and which also have high serum homocysteine levels. Such identification makes it possible at an early stage to resort to precautionary measures, for example, the introduction of additional B12 to counteract the development of diseases associated with elevated levels of homocysteine. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
1. Определение пепсиногена I (PGI)1. Determination of pepsinogen I (PGI)
Способ определения PGI в пробе сыворотки может быть осуществлен, как описано в публикации WO 96/15456, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки.A method for determining PGI in a serum sample can be carried out as described in WO 96/15456, which is incorporated herein by reference.
Указанный способ, предпочтительно, включает стадии использования поли- или моноклональных антител против пепсиногена I в иммунологическом методе для определения пепсиногена I. Обычно реакцию осуществляют на подходящем носителе, таком как пластиковый, стеклянный или целлюлозный носитель, например на микропланшете. Иммунологические методы могут быть осуществлены известным способом, например, методом оптического поглощения, люминесцентным методом или флуоресцентным методом для измерения концентрации указанного пепсиногена I в образце.Said method preferably includes the steps of using poly- or monoclonal antibodies against pepsinogen I in an immunological method to determine pepsinogen I. Typically, the reaction is carried out on a suitable carrier, such as a plastic, glass or cellulose carrier, for example a microplate. Immunological methods can be carried out in a known manner, for example, by optical absorption, by a luminescent method or by a fluorescence method to measure the concentration of said pepsinogen I in a sample.
Если концентрация пепсиногена I в сыворотке ниже граничного значения, которое зависит от специфичности и чувствительности, согласованных для рассматриваемого метода, и составляет 20-30 мкг/л, что соответствует приблизительно 450-690 пмоль/л, то это означает, что атрофия локализуется в области тела желудка. Нормальное или эталонное значение для PGI составляет в пределах от 25 до 120 мкг/л.If the concentration of pepsinogen I in serum is lower than the boundary value, which depends on the specificity and sensitivity agreed for the method under consideration, and is 20-30 μg / L, which corresponds to approximately 450-690 pmol / L, this means that atrophy is localized in the region the body of the stomach. The normal or reference value for PGI is in the range of 25 to 120 μg / L.
2. Определение гомоцистеина2. Determination of homocysteine
Уровни гомоцистеина в сыворотке могут быть определены любыми известными per se методами, которые используются для этих целей, и которые также являются коммерчески доступными, например, в форме набора. Известным методом для количественного определения общего гомоцистеина в плазме или сыворотке является жидкостная хроматография высокого разрешения с радиоактивной, флуоресцентной или электрохимической детекцией. Кроме того, был разработан метод иммуноферментного анализа (ИФА) (Bio-Rad Laboratories; Axis-Shield A/S), а также метод флуоресцентного поляризационного иммуноанализа (ФПИА)(FPIA; Abbott Laboratories), где указанный иммуноанализ включает предварительную обработку образцов дитиотреитолом и аденозином с последующим проведением ферментативной стадии с получением S-аденозил-L-гомоцистеина, и где общий гомоцистеин определяют с использованием моноклональных антител против S-аденозил-L-гомоцистеина, см., например, патент США 5631127.Serum homocysteine levels can be determined by any methods known per se that are used for this purpose and which are also commercially available, for example, in kit form. A known method for the quantification of total homocysteine in plasma or serum is high performance liquid chromatography with radioactive, fluorescence or electrochemical detection. In addition, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed (Bio-Rad Laboratories; Axis-Shield A / S), as well as a method of fluorescence polarization immunoassay (FPIA) (FPIA; Abbott Laboratories), where this immunoassay includes pre-treatment of samples with dithiothreitol and adenosine followed by an enzymatic step to produce S-adenosyl-L-homocysteine, and where total homocysteine is determined using monoclonal antibodies against S-adenosyl-L-homocysteine, see, for example, US Pat. No. 5,631,127.
Эталонные значения для гомоцистеина являются до некоторой степени метод-специфическими, но обычно, они варьируются в пределах приблизительно от 5 до 15 мкмоль/л. Уровень гомоцистеина в сыворотке, превышающий метод-специфический эталонный уровень для гомоцистеина, рассматривается как составляющая фактора риска, как объясняется выше. В большинстве случаев, можно считать, что уровень гомоцистеина выше 15 мкмоль/л представляет собой такой повышенный уровень, который указывает на явный фактор риска.The reference values for homocysteine are to some extent method-specific, but usually they range from about 5 to 15 μmol / L. Serum homocysteine levels in excess of the method-specific reference level for homocysteine are considered a component of the risk factor, as explained above. In most cases, it can be considered that a homocysteine level above 15 μmol / L is such an elevated level that indicates a clear risk factor.
3. Определение витамина В123. Definition of Vitamin B12
В соответствии с настоящим изобретением, способ диагностики включает, но необязательно, определение концентрации витамина В12 в образце сыворотки. Концентрация витамина В12 (кобаламина) может быть определена любым из методов, известных per se и используемых для этой цели. Такие известные методы предусматривают проведение микробиологического анализа для определения В12 в сыворотке с использованием микроорганизмов, таких как Euglena gracilis или Lactobaclllus leichmanii, которые для своего роста требуют присутствия кобаламина. Для определения В12 были также использованы анализы методом разведения радиоизотопами, и такие аналитические методы хорошо описаны в литературе, например, Lau et al. "Measurement of serum B12 levels using Radioisotope Dilution and Coated Charcoal", Blood, 26 (1965), 202. Методы разведения радиоизотопами являются более быстрыми и дают результаты, сравнимые с результатами анализа, например, с использованием Euglena, при условии, что связывающий белок является специфическим для биологически активного кобаламина. Стандартизированный препарат чистого или очищенного внутреннего фактора является наиболее подходящим в качестве связывающего белка, поскольку он специфически связывается с истинным кобаламином, а не с аналогами кобаламина.In accordance with the present invention, a diagnostic method includes, but not necessarily, determining the concentration of vitamin B12 in a serum sample. The concentration of vitamin B12 (cobalamin) can be determined by any of the methods known per se and used for this purpose. Such known methods include microbiological analysis to determine serum B12 using microorganisms such as Euglena gracilis or Lactobaclllus leichmanii, which require the presence of cobalamin for their growth. Radioisotope dilution assays were also used to determine B12, and such analytical methods are well described in the literature, for example, Lau et al. "Measurement of serum B12 levels using Radioisotope Dilution and Coated Charcoal", Blood, 26 (1965), 202. Methods of dilution with radioisotopes are faster and give results comparable to the results of analysis, for example, using Euglena, provided that the binding protein is specific for biologically active cobalamin. A standardized preparation of pure or purified intrinsic factor is most suitable as a binding protein because it specifically binds to true cobalamin and not to cobalamin analogues.
Анализ на B12 методом разведения радиоизотопами обычно включает стадию отделения эндогенного B12 от его природного связывающего белка, например, путем кипячения при выбранном рН с последующим добавлением измеренного количества радиоизотопа 57Сo-В12 и ограниченного количества связывающего белка. Весь связывающий белок будет связываться с определенной формой B12, поскольку количество добавляемого меченного радиоизотопом B12 является достаточным для связывания небольшого количества белка. Поскольку как природный, так и радиоактивный B12 конкурируют за связывание со связывающим белком, то степень, до которой ингибируется количество радиоактивности связанного с белком B12, указывает на количество В12 в образце. Этот метод был модифицирован Lau, см. выше, путем отделения несвязанного В12 от В12, связанного с белком, с использованием покрытой белком угольной пыли, и подсчета радиоактивности надосадочной жидкости, содержащей смесь связанного радиоактивного В12 и связанного нерадиоактивного В12. Затем исходя из этого количества вычисляют концентрацию В12 в сыворотке, часто путем сравнения со стандартной кривой. Для осуществления этого метода существует коммерчески доступный набор для радиоизотопного анализа.Radioisotope dilution assays for B12 typically include the step of separating endogenous B12 from its natural binding protein, for example by boiling at a selected pH, followed by adding a measured amount of the 57 Co-B12 radioisotope and a limited amount of binding protein. All binding protein will bind to a specific form of B12, since the amount of added radioisotope-labeled B12 is sufficient to bind a small amount of protein. Since both natural and radioactive B12 compete for binding to the binding protein, the degree to which the amount of radioactivity associated with the B12 protein is inhibited indicates the amount of B12 in the sample. This method was modified by Lau, see above, by separating the unbound B12 from the B12 bound to the protein using carbon-coated coal dust and counting the radioactivity of the supernatant containing a mixture of bound radioactive B12 and bound non-radioactive B12. Then, the serum B12 concentration is calculated from this amount, often by comparison with a standard curve. To implement this method, there is a commercially available kit for radioisotope analysis.
Дефицит витамина В12 может быть также определен с использованием, например, хемолюминесцентных рецепторных анализов (Wentworth S. et al., Clin. Chem., vol.40, 537-540), радиоиммунноанализов (Endres, D.B., et al. Clin. Chem., Vol.24, 460-465), а также анализов на неизотопное связывание, CEDIA, т.е. иммунноферментных анализов с использованием клонированного донора фермента (van der Weide, J. et al. Clin. Chem., Vol. 38, 766-768).Vitamin B12 deficiency can also be determined using, for example, chemoluminescent receptor assays (Wentworth S. et al., Clin. Chem., Vol. 40, 537-540), radioimmunoassays (Endres, DB, et al. Clin. Chem. Vol. 24, 460-465), as well as non-isotope binding assays, CEDIA, i.e. enzyme-linked immunosorbent assays using a cloned enzyme donor (van der Weide, J. et al. Clin. Chem., Vol. 38, 766-768).
Эталонное значение для В12 варьируется в пределах от 200 до 900 нг/л, что соответствует приблизительно 170-700 пмоль/л.The reference value for B12 varies from 200 to 900 ng / L, which corresponds to approximately 170-700 pmol / L.
В последней еще неопубликованной работе было обнаружено, что 50% индивидуумов, страдающих атрофией тела желудка (SPGI < 25 мкг/л), у которых концентрация витамина В12 в сыворотке была ниже нижнего предела эталонных значений (<170 пмоль/л), имели заметно повышенную концентрацию гомоцистеина в сыворотке (среднее значение 33,3 мкмоль/л, 16-157 мкмоль/л). Кроме того, 22% из этих индивидуумов, у которых концентрация витамина В12 в сыворотке составляла 180-230 пмоль/л (эталонные значения 170-700 пмоль/л), также имели повышенную концентрацию гомоцистеина (среднее значение 18,9 мкмоль/л, 16-25 мкмоль/л).In a recent unpublished work, it was found that 50% of individuals suffering from atrophy of the body of the stomach (SPGI <25 μg / L), whose serum vitamin B12 concentration was below the lower limit of the reference values (<170 pmol / L), had a markedly increased the concentration of homocysteine in serum (average value of 33.3 μmol / l, 16-157 μmol / l). In addition, 22% of these individuals with a serum vitamin B12 concentration of 180-230 pmol / L (reference values of 170-700 pmol / L) also had an increased homocysteine concentration (average 18.9 μmol / L, 16 -25 μmol / L).
Настоящее изобретение также относится к набору для использования в способе настоящего изобретения, где указанный набор включает:The present invention also relates to a kit for use in the method of the present invention, where the kit includes:
- средство для определения концентрации PGI в пробе сыворотки,- a means for determining the concentration of PGI in a serum sample,
- средство для определения концентрации гомоцистеина в пробе сыворотки.- a means for determining the concentration of homocysteine in a serum sample.
Набор настоящего изобретения может содержать комбинацию единичных компонентов, необходимых для количественного определения концентрации пепсиногена I и гомоцистеина в пробе сыворотки крови. Для этих целей указанный набор может содержать отдельные флаконы или контейнеры для необходимых компонентов, таких как антитела и субстраты, которые могут быть использованы для исследования аналита.The kit of the present invention may comprise a combination of the single components necessary to quantify the concentration of pepsinogen I and homocysteine in a serum sample. For these purposes, the specified kit may contain separate vials or containers for the necessary components, such as antibodies and substrates, which can be used to study the analyte.
СсылкиReferences
1. Boushey C.J., Beresford S.A.A., Omenn G.S., Motulsky A.G., JAMA 1995; 274:1049-57.1. Boushey C. J., Beresford S. A. A., Omenn G. S., Motulsky A. G., JAMA 1995; 274: 1049-57.
2. Graham I.M., Daly L.E., Rafsum H.M., et. al. The European Concerted Action Project, JAMA 1997; 277:1775-81.2. Graham I.M., Daly L.E., Rafsum H.M., et. al. The European Concerted Action Project, JAMA 1997; 277: 1775-81.
3. Jacobsen O.W., Clin Chem 1998; 44:1833-43.3. Jacobsen O.W., Clin Chem 1998; 44: 1833-43.
4. Mogadashian M.H., McManus B.M., Frohlich J.J., Arch Intern Med 1997; 157:2299-2308.4. Mogadashian M.H., McManus B.M., Frohlich J.J., Arch Intern Med Med 1997; 157: 2299-2308.
5. Rafsum H., Ueland P.M., 
Claims (5)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI19991836 | 1999-08-31 | ||
| FI991836A FI107808B (en) | 1999-08-31 | 1999-08-31 | A method for identifying an individual at risk for vascular and cancerous disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002107982A RU2002107982A (en) | 2003-11-10 |
| RU2247389C2 true RU2247389C2 (en) | 2005-02-27 |
Family
ID=8555217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002107982/15A RU2247389C2 (en) | 1999-08-31 | 2000-08-30 | Method for identifying individual for vascular and cancer disease risk |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1210452A1 (en) |
| JP (1) | JP2003508059A (en) |
| CN (1) | CN1158389C (en) |
| AU (1) | AU6845600A (en) |
| FI (1) | FI107808B (en) |
| RU (1) | RU2247389C2 (en) |
| WO (1) | WO2001016356A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2453001C1 (en) * | 2010-10-18 | 2012-06-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method for l-norvaline correction of hyperhomocystein induced nitrogen oxide deficiency in experiment |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114924016B (en) * | 2022-04-28 | 2024-03-08 | 中国医学科学院北京协和医院 | Method for simultaneously detecting sulfated and non-sulfated gastrin G17 and detection kit thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI97304C (en) * | 1994-11-16 | 1996-11-25 | Locus Genex Oy | A method for screening for the risk of gastric cancer |
-
1999
- 1999-08-31 FI FI991836A patent/FI107808B/en active
-
2000
- 2000-08-30 EP EP00956556A patent/EP1210452A1/en not_active Ceased
- 2000-08-30 AU AU68456/00A patent/AU6845600A/en not_active Abandoned
- 2000-08-30 RU RU2002107982/15A patent/RU2247389C2/en active
- 2000-08-30 WO PCT/FI2000/000733 patent/WO2001016356A1/en active Application Filing
- 2000-08-30 CN CNB008122261A patent/CN1158389C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-30 JP JP2001520901A patent/JP2003508059A/en active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Болезни органов кровообращения. Лечение опухолевых заболеваний. Справочник практического врача. Изд-во "БАЯН", 1994, с.34-52, 60-95. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2453001C1 (en) * | 2010-10-18 | 2012-06-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method for l-norvaline correction of hyperhomocystein induced nitrogen oxide deficiency in experiment |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1158389C (en) | 2004-07-21 |
| FI19991836A (en) | 2001-02-28 |
| CN1371427A (en) | 2002-09-25 |
| FI107808B (en) | 2001-10-15 |
| JP2003508059A (en) | 2003-03-04 |
| WO2001016356A1 (en) | 2001-03-08 |
| EP1210452A1 (en) | 2002-06-05 |
| AU6845600A (en) | 2001-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ueland et al. | Total homocysteine in plasma or serum: methods and clinical applications | |
| JP2579434B2 (en) | Methods for detecting and distinguishing cobalamin and folate deficiencies | |
| Still et al. | ACP Broadsheet No 152: March 1998. Clinical implications of plasma homocysteine measurement in cardiovascular disease. | |
| Nexø et al. | How to diagnose cobalamin deficiency | |
| KR100394940B1 (en) | Method for measuring serum asialo-glycoprotein concentration for diagnosis of hepatic disease and a kit therefor | |
| Zighetti et al. | Determination of total homocysteine in plasma: comparison of the Abbott IMx immunoassay with high performance liquid chromatography | |
| EP2894477A1 (en) | Method for determining breast cancer | |
| DE60217665T2 (en) | Method for determining the activity of thymidine kinase-1 and its use | |
| Wang | Concentration of arsenic, selenium, zinc, iron and copper in the urine of blackfoot disease patients at different clinical stages | |
| EP3234104B1 (en) | Accurate assay measurement of hydrophobic haptenic analytes | |
| RU2247389C2 (en) | Method for identifying individual for vascular and cancer disease risk | |
| Besch et al. | Measurement of insulin in human sera using a new RIA kit. 1. Insulin determination in the absence of insulin antibodies—conventional assay and micro Modification2 | |
| RU2224258C2 (en) | Method for identifying person with the risk of non reversible neurological lesions including stages for quantitative detection of pepsinogen i (pg i) and vitamin b 12 concentrations | |
| JP2003508059A5 (en) | ||
| Zappacosta et al. | Comparing different methods for homocysteine determination | |
| Finglas et al. | Validity of dual-label stable isotopic protocols and urinary excretion ratios to determine folate bioavailability from food | |
| Urdal et al. | Measurement of magnesium in mononuclear blood cells. | |
| Bamonti-Catena et al. | Whole blood folate concentrations: Comparison between Stratus Folate (DADE) and radioassay (DPC) methods | |
| JP3564668B2 (en) | Method for screening prostate cancer by measuring apolipoprotein D level in body fluid | |
| Mourvaki et al. | Performance comparison of three assay methods used in fasting and postmethionine load plasma homocysteine determinations from patients with vascular disease | |
| Cao et al. | Effects of Biotin Supplements Ingestion on Beckman Biotinylated Immunoassays | |
| Serin et al. | Alkaline phosphatase interference in immuno-enzymatic assays. | |
| JP2002523749A (en) | Assay methods for cardiovascular disease | |
| Guerrero Irigoyen et al. | Simultaneous determination of CXCL7 chemokine and MMP3 metalloproteinase as biomarkers for rheumatoid arthritis | |
| Ollila et al. | Verification of Access GI Monitor (CA 19-9) Assay on Beckman Coulter Unicel DXI 800 |