RU2213780C2 - Method for assay of bacteriostatic and bactericidal effect of antibiotic - Google Patents
Method for assay of bacteriostatic and bactericidal effect of antibiotic Download PDFInfo
- Publication number
- RU2213780C2 RU2213780C2 RU2001130405/13A RU2001130405A RU2213780C2 RU 2213780 C2 RU2213780 C2 RU 2213780C2 RU 2001130405/13 A RU2001130405/13 A RU 2001130405/13A RU 2001130405 A RU2001130405 A RU 2001130405A RU 2213780 C2 RU2213780 C2 RU 2213780C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibiotic
- growth
- wells
- bacteria
- concentration
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии и касается способа определения бактерицидного и бактериостатического действия антибиотиков. The invention relates to medical and veterinary microbiology and relates to a method for determining the bactericidal and bacteriostatic effect of antibiotics.
Одним из важнейших признаков для антибиотиков является тип их действия на микроорганизмы - бактериостатический и бактерицидный (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., "Медицина", 1982, с.15-17). One of the most important signs for antibiotics is the type of their effect on microorganisms - bacteriostatic and bactericidal (Navashin S.M., Fomina I.P. Rational antibiotic therapy. M., "Medicine", 1982, p.15-17).
Такое деление антибиотиков в значительной мере определяет тактику их применения для лечения больных (доза, способ введения, продолжительность лечения, сочетанная антибиотикотерапия и другие показатели). Определенное влияние на тип действия антибиотиков оказывают микроорганизм, свойства антибиотика, а также их концентрация. This division of antibiotics to a large extent determines the tactics of their use for the treatment of patients (dose, method of administration, duration of treatment, combined antibiotic therapy and other indicators). A certain influence on the type of action of antibiotics is exerted by the microorganism, the properties of the antibiotic, as well as their concentration.
Для отличия типов действия антибиотиков до настоящего времени используют установление жизнеспособности клеток чаще всего посевами в жидкие или агаровые питательные среды с определением числа бактерий до и после контакта с антибиотиком (Сазыкин Ю. О. Биохимические основы действия антибиотиков на микробную клетку. М., "Наука", 1965, с.11-13). В специальных целях применяют и другие методики, например способность бактерий к синтезу белка, дыханию клеток, ферментации углеводов и другие показатели их жизнедеятельности, а также регистрируемое приборами нарушение морфологии клетки (Сидоренко С.В., Федорович В.Ю. Ускоренный метод определения минимальной подавляющей концентрации антибиотиков на планшетных спектрофотометрах со встроенным термостатом. Тезисы 11-й Российской научно-практической конференции, 7-9.12.99 г. "Внутрибольничные инфекции - проблемы эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики". М., 1999, с.220-221). Однако наиболее доступным и доказательным бактерицидным типом действия является отсутствие способности клеток к росту и размножению после удаления антибиотика. To distinguish the types of antibiotic action, to date, they use the establishment of cell viability most often by sowing in liquid or agar culture media with the determination of the number of bacteria before and after contact with the antibiotic (Sazykin Yu. O. Biochemical principles of the action of antibiotics on a microbial cell. M., "Science ", 1965, pp. 11-13). For special purposes, other methods are also used, for example, the ability of bacteria to synthesize protein, respiration of cells, fermentation of carbohydrates and other indicators of their vital activity, as well as violation of cell morphology recorded by devices (Sidorenko S.V., Fedorovich V.Yu. Accelerated method for determining the minimum inhibitory concentrations of antibiotics on plate spectrophotometers with a built-in thermostat. Abstracts of the 11th Russian Scientific and Practical Conference, December 7–9, 1999 "Nosocomial infections - problems of epidemiology, clinics, diagnosis tics, treatment and prevention. "Moscow, 1999, s.220-221). However, the most accessible and evidence-based bactericidal type of action is the lack of the ability of cells to grow and multiply after removal of the antibiotic.
Известно, что существуют бактериальные ферменты, вырабатываемые микроорганизмами семейства Еnterobacteriасеае, которые инактивируют беталактамные антибиотики различных классов, в том числе цефалоспорины I-IV поколений, кроме цефаломицинов. Эти ферменты получили название беталактамазы расширенного спектра действия. По субстратной специфичности выделяют пенициллиназу - фермент, разрушающий пенициллины ("Антибактериальная терапия" под ред. Страчунского Л.С. и др. М., 2000, с.ХШ). Фермент инактивирует чувствительные к нему антибиотики. It is known that there are bacterial enzymes produced by microorganisms of the Enterobacteriaceae family that inactivate betalactam antibiotics of various classes, including cephalosporins of the I-IV generations, except cephalomycin. These enzymes are called extended-spectrum betalactamases. According to substrate specificity, penicillinase is an enzyme that destroys penicillins ("Antibacterial therapy" under the editorship of L. Strachunsky et al. M., 2000, S. Kh.S.). The enzyme inactivates antibiotics sensitive to it.
Наиболее близким по техническому решению и достигаемому положительному эффекту к предлагаемому способу определения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков является метод серийных разведений суспензии смеси бактерий и раствора антибиотика (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., "Медицина", 1982, с.72). Однако этот метод выполняют в пробирках и в объеме до 500 мкл. Результаты учитывают через 16-18 ч инкубации посевов при 37oС по изменению цвета и помутнению среды. При этом определяют задержку роста бактерий без дифференциации бактерицидного и бактериостатического действия антибиотика. Прототипом является способ определения чувствительности бактерий к антибиотикам с применением индикатора фенолрот в средах Хэнкса с сывороткой и гидролизатом лактальбумина, входящих в состав синтетической среды 199 для культуры тканей, что позволяет учитывать результаты через 5-6 ч по изменению цвета среды после посева стафилококков, кишечной палочки, синегнойной палочки, протея, стрептококка и других (более 12 видов) бактерий семейства Еnterobacteriасеае, что не всегда к этому времени сопровождается помутнением питательной среды (Леви М.И., Горожанкина И. А., Сагатовская Л.А. Быстрый метод определения чувствительности культур к различным антибиотикам в жидкой среде. Антибиотики, 1, 1967, с.57-60). В указанном способе-прототипе не предусмотрена возможность дифференцировать бактериостатический и бактерицидный тип действия антибиотиков.The closest in technical solution and the achieved positive effect to the proposed method for determining the bacteriostatic and bactericidal action of antibiotics is the method of serial dilutions of a suspension of a mixture of bacteria and an antibiotic solution (Navashin S.M., Fomina I.P. Rational antibiotic therapy. M., "Medicine", 1982, p. 72). However, this method is performed in test tubes and in a volume of up to 500 μl. The results are taken into account after 16-18 hours of incubation of crops at 37 o With the change in color and turbidity. In this case, the growth retardation of bacteria is determined without differentiating the bactericidal and bacteriostatic effects of the antibiotic. The prototype is a method for determining the sensitivity of bacteria to antibiotics using the phenolrot indicator in Hanks’s serum and lactalbumin hydrolyzate, which are part of the synthetic medium 199 for tissue culture, which allows you to take into account the results after 5-6 hours of color change after plating staphylococci, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa, Proteus, streptococcus and other (over 12 species) bacteria of the Enterobacteriaceae family, which is not always accompanied by clouding of the nutrient medium by this time (Levi M.I., Gor Ozhankina I. A., Sagatovskaya L. A. A quick method for determining the sensitivity of cultures to various antibiotics in a liquid medium (Antibiotics, 1, 1967, p. 57-60). In the specified prototype method is not provided the ability to differentiate the bacteriostatic and bactericidal type of action of antibiotics.
Целью изобретения является повышение надежности метода и ускорение определения с разграничением типа бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков. The aim of the invention is to increase the reliability of the method and accelerate the determination with the distinction between the type of bacteriostatic and bactericidal action of antibiotics.
Поставленную цель достигают использованием очищенных препаратов беталактамаз для инактивации чувствительных к ним беталактамных антибиотиков и последующего беспрепятственного роста выживших бактерий в пробах. Это определяют по изменению окраски и (или) мутности среды. Ферментирующие глюкозу бактерии окисляют ее, что регистрирует индикатор в жидкой среде, изменяя цвет. При этом некоторые бактерии могут подщелачивать ее. Не ферментирующие глюкозу бактерии не меняют рН, но рост сопровождается помутнением среды. This goal is achieved by using purified betalactamase preparations to inactivate sensitive beta-lactam antibiotics and subsequent unhindered growth of surviving bacteria in the samples. This is determined by the change in color and (or) turbidity of the medium. Fermenting glucose bacteria oxidize it, which registers the indicator in a liquid medium, changing color. However, some bacteria may alkalize it. Non-fermenting glucose bacteria do not change pH, but growth is accompanied by turbidity.
Предлагаемый способ выполняют в три этапа. Исследование проводят в стерильных 96-луночных планшетах, предназначенных для иммуноферментного анализа однократного применения (ТУ 64-2-375-86. "Медполимер", Санкт-Петербург) или других подобных планшетах. The proposed method is performed in three stages. The study is carried out in sterile 96-well plates intended for single-use enzyme immunoassay (TU 64-2-375-86. Medpolymer, St. Petersburg) or other similar tablets.
Первый этап - последовательное двукратное (или с другим интервалом) разведение исследуемого антибиотика в двух параллельных рядах в 8 или 12 лунках планшета в объеме 50 мкл цветной питательной среды с 0,5% глюкозы и 0,002% бромкрезолового пурпурового в качестве индикатора. Среда при рН 7,4-7,7 имеет интенсивный сиреневый цвет. The first stage is a sequential double (or with a different interval) dilution of the studied antibiotic in two parallel rows in 8 or 12 wells of a tablet in the volume of 50 μl of colored nutrient medium with 0.5% glucose and 0.002% bromocresol purple as an indicator. The medium at pH 7.4-7.7 has an intense lilac color.
Второй этап - добавление во все лунки с антибиотиком по 50 мкл суспензии исследуемых бактерий в указанной цветной среде, содержащей 2•107 микробных клеток (м. к.) 1 мл по оптическому стандарту мутности. После ручного встряхивания пластины помещают в термостат при 37oС, где инкубируют в течение времени, необходимого для появления роста бактерий в контроле (без антибиотика). Для большинства бактерий семейства Enterobacteriaceae требуется для этого 3-6 ч. При отсутствии изменения цвета в контроле пластины оставляют в термостате, продолжая наблюдение. После инкубации регистрируют результаты. Ускорение роста бактерий достигается уменьшением объема питательной среды, как это было установлено ранее (Патент на изобретение 2151187: Способ определения эффективности паровой стерилизации бактериологическим методом. Ю.Г. Сучков, М. И. Леви. 20.06.2000 г.), и необходимой концентрацией бактерий в ней (до 105 м.к.). Дальнейшее повышение концентрации не целесообразно, так как результат может искажаться за счет появления спонтанных мутантов с устойчивостью к антибиотикам, которые могут появляться с частотой 1•10-6-1•10-13 (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., "Медицина", 1982, с.26).The second stage is the addition of 50 μl of a suspension of the studied bacteria in all colored antibiotic wells in the indicated colored medium containing 2 • 10 7 microbial cells (mc) 1 ml according to the optical turbidity standard. After manual shaking, the plates are placed in a thermostat at 37 o C, where they are incubated for the time necessary for the growth of bacteria in the control (without antibiotic). For most bacteria of the Enterobacteriaceae family, this takes 3-6 hours. If there is no color change in the control, the plates are left in the thermostat, continuing to observe. After incubation, the results are recorded. Acceleration of bacterial growth is achieved by reducing the volume of the nutrient medium, as was previously established (Patent for invention 2151187: Method for determining the effectiveness of steam sterilization by the bacteriological method. Yu. G. Suchkov, M. I. Levy. 06/20/2000), and the necessary concentration bacteria in it (up to 10 5 mk). A further increase in concentration is not advisable, since the result may be distorted due to the appearance of spontaneous mutants with resistance to antibiotics, which can appear with a frequency of 1 • 10 -6 -1 • 10 -13 (Navashin S.M., Fomina I.P. Rational antibiotic therapy. M., "Medicine", 1982, p.26).
Третий этап исследования. После регистрации роста бактерий добавляют в один ряд 50 мкл раствора беталактамазы в цветной среде в избыточной дозе, в 3-6 раз превышающей минимальную, для надежной нейтрализации наибольшей концентрации антибиотика, что выясняют эмпирически до проведения исследования или исходят из определения 1 ЕД беталактамазы. За 1 ЕД принимается наименьшее количество препарата фермента, способное инактивировать 60 ЕД бензилпенициллина в течение 1 ч при 37oС (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 1978, ч. II, с. 35-36). В другой параллельный ряд добавляют 50 мкл цветной среды. Пластины вновь помещают на 3-5 или до 18-24 ч в термостат при температуре 37oС. Результаты регистрации роста бактерий после второго этапа сравнивают с ростом после добавления фермента. При бактериостатическом действии антибиотика на бактерии после добавления пенициллиназы появляется рост бактерий в тех лунках, где его не обнаружили после второго этапа исследования. При бактерицидном действии антибиотика рост бактерий не возобновляется.The third stage of the study. After registration of bacterial growth, 50 μl of a solution of betalactamase in a colored medium in an excess dose 3-6 times higher than the minimum is added in one row to reliably neutralize the highest concentration of the antibiotic, which is determined empirically before the study or based on the definition of 1 U of betalactamase. For 1 unit, the smallest amount of the enzyme preparation is taken, which is able to inactivate 60 units of benzylpenicillin for 1 h at 37 o C (Mashkovsky MD Medicines. M., 1978, part II, pp. 35-36). In another parallel row add 50 μl of color medium. The plates are again placed for 3-5 or up to 18-24 hours in a thermostat at a temperature of 37 o C. The results of the registration of bacterial growth after the second stage are compared with the growth after adding the enzyme. With the bacteriostatic effect of the antibiotic on bacteria, after the addition of penicillinase, bacterial growth appears in those wells where it was not found after the second stage of the study. With the bactericidal effect of the antibiotic, bacterial growth does not resume.
Способом разграничения бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков, не входящих в группу беталактамных, является использование разведения смеси антибиотика и бактерий до таких концентраций, когда становится возможным размножение бактерий и регистрация этого размножения. В этом способе была использована способность бактерий (в присутствии подпороговых концентраций антибиотика) размножаться, что документируется ростом колоний на агаре, помутнением жидкой питательной среды или изменением ее цвета в результате утилизации глюкозы. A way to distinguish between the bacteriostatic and bactericidal effects of antibiotics that are not part of the betalactam group is to use a dilution of a mixture of antibiotic and bacteria to such concentrations when it becomes possible to multiply bacteria and register this reproduction. In this method, the ability of bacteria (in the presence of subthreshold concentrations of the antibiotic) to reproduce was used, which is documented by the growth of colonies on agar, turbidity of the liquid nutrient medium or a change in its color as a result of glucose utilization.
Способы исследованы в сравнении со способом-протопипом по критериям изменения окраски и (или) помутнению среды при плановом бактериологическом исследовании материала от гнойно-септических больных в лечебно-профилактических учреждениях Москвы. Применение в исследовании небольших объемов ингредиентов наряду с ускорением получения результатов приносит экономический эффект. Использование предлагаемого способа разграничения бактериостатического и бактерицидного эффекта действия антибиотиков основывалось на "Методических рекомендациях по ускоренному отбору эффективных антибиотиков для лечения больных госпитальными инфекциями", утвержденными МЗ РФ 10.01.2000 г., 1100/26-0-117. The methods were investigated in comparison with the protopip method according to the criteria for discoloration and (or) turbidity of the medium during a planned bacteriological study of material from purulent-septic patients in medical institutions in Moscow. The use of small amounts of ingredients in the study along with accelerating the receipt of results brings economic benefits. The use of the proposed method for distinguishing the bacteriostatic and bactericidal effects of antibiotics was based on the “Methodological recommendations for the accelerated selection of effective antibiotics for the treatment of patients with hospital infections”, approved by the Ministry of Health of the Russian Federation on 10.01.2000, 1100 / 26-0-117.
Пример 1. Определение бактерицидного и бактериостатического действия натриевой соли бензилпенициллина на музейные культуры бактерий. Example 1. Determination of the bactericidal and bacteriostatic effect of the sodium salt of benzylpenicillin on museum cultures of bacteria.
В экспериментальных исследованиях использовали музейные бактериальные штаммы Е. соli К-12, Stahylococcus aureus Wood, Yersinia реstis ЕV (вакцина), Yersinia рsеudotuberculosis 1985 III серовара, Васillus аnthracis СТИ (вакцина), Васillus сеrеus 96, Васillus subtilis 168, Васillus stearothermophilus ВКМ-718. Все культуры бактерий выращивали при температуре 37oС, кроме Yersinia реstis ЕV (26oС) и Васillus stearothermophilus (55oС). В качестве основы жидкой питательной среды применяли питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой, НПО "Питательные среды" (г. Махачкала), в который добавляли 0,5% глюкозы и 0,002% индикатора бромтимолового синего или бромкрезолового пурпурового (цветная среда). Раствор натриевой соли бензилпенициллина 1000 мкг/мл титровали в двух параллельных рядах для каждой культуры цветной среды двукратным последовательным разведением в объеме 50 мкл. В оба ряда добавляли по 50 мкл суспензии бактерий в цветной среде из концентрации 2•107 м.к. в 1 мл. Пластины с посевами после ручного встряхивания помещали в термостат при оптимальной для каждого микроорганизма температуре. В контрольных лунках находились бактерии без антибиотика.Museum bacterial strains of E. coli K-12, Stahylococcus aureus Wood, Yersinia restis EV (vaccine), Yersinia pcudotuberculosis 1985 III serovar, Bacillus anthracis STI (vaccine), Bacillus serusus 96, Bacillus subtilis 168othermophilus 718. All bacterial cultures were grown at a temperature of 37 ° C, except for Yersinia estis EV (26 ° C) and Vasillus stearothermophilus (55 ° C). A nutrient broth for cultivating microorganisms, dry, NPO Nutrient Medium (Makhachkala) was used as the basis of a liquid nutrient medium, to which 0.5% glucose and 0.002% bromthymol blue or bromocresol purple indicator (color medium) were added. A solution of the sodium salt of benzylpenicillin 1000 μg / ml was titrated in two parallel rows for each color medium culture by double serial dilution in a volume of 50 μl. 50 μl of a suspension of bacteria in a colored medium from a concentration of 2 • 10 7 mk were added to both rows. in 1 ml. Plates with crops after manual shaking were placed in a thermostat at the optimum temperature for each microorganism. In the control wells were bacteria without antibiotic.
После пожелтения среды в контрольных посевах регистрировали результаты, а затем в один ряд добавляли по 50 мкл раствора пенициллиназы с исходной концентрацией 1000 БД в 1 мл цветной среды, в другой ряд добавляли по 50 мкл той же среды без фермента. Через 11-12 ч дополнительной инкубации при оптимальных для бактерий температурах вновь регистрировали рост бактерий и сравнивали с первым результатом (табл. 1). По этим данным видно, что учет роста бактерий в испытанных средах возможен через 3-5 ч. Добавление пенициллиназы с последующим инкубированием посевов в ряде случаев приводит к появлению роста бактерий в тех лунках, где ранее цвет среды не изменился. Однако для St. аureus, Y. рsеudotuberculosis и В. сеrеus - высокочувствительных к антибиотику, эта разница не превышала двукратного значения. В то же время МЗК после добавления пенициллиназы для других бактерий возрастала более чем в 40-80 раз. After yellowing of the medium in the control crops, the results were recorded, and then 50 μl of penicillinase solution with an initial concentration of 1000 BD in 1 ml of colored medium was added in one row, 50 μl of the same medium without enzyme was added to another row. After 11-12 hours of additional incubation at optimal temperatures for bacteria, bacterial growth was again recorded and compared with the first result (Table 1). According to these data, it is possible to take into account the growth of bacteria in the tested media in 3-5 hours. The addition of penicillinase followed by incubation of crops in some cases leads to the appearance of bacteria in those wells where the medium color has not previously changed. However, for St. aureus, Y. pseudotuberculosis and B. serus are highly sensitive to the antibiotic, this difference did not exceed twofold. At the same time, the MPC after the addition of penicillinase for other bacteria increased by more than 40-80 times.
В способе последовательного двукратного разведения антибиотика с использованием автоматических пипеток со съемными наконечниками разница в одно разведение (в 2 раза) не является доказательной. Поэтому результаты, полученные в питательных средах с двумя испытанными индикаторами, следует признать идентичными и считать, что в данных условиях постановки опыта пенициллин оказывает бактерицидное действие на St. аurеus, Y. рseudotuberculosis и В. сеrеus, а для других видов при данных условиях опыта пенициллин оказывает бактериостатический тип действия. In the method of sequential double dilution of the antibiotic using automatic pipettes with removable tips, the difference in one dilution (2 times) is not conclusive. Therefore, the results obtained in nutrient media with two tested indicators should be considered identical and it should be considered that under the given conditions of the experiment, penicillin has a bactericidal effect on St. aureus, Y. pseudotuberculosis and B. serus, and for other species under these experimental conditions, penicillin has a bacteriostatic type of action.
Пример 2. Определение бактерицидного и бактериостатического действия натриевой соли бензилпенициллина на Staphylococcus аurеus. Example 2. Determination of the bactericidal and bacteriostatic effect of the sodium salt of benzylpenicillin on Staphylococcus aureus.
Смешивали суспензию Staphylococcus аurеus, штамм Wood с раствором пенициллина и после экспозиции при 37oС готовили последовательные разведения смеси в цветной питательной среде, как указано в табл. 2. После 24-часового термостатирования при 37oС учитывали результаты.A suspension of Staphylococcus aureus, Wood strain was mixed with a solution of penicillin, and after exposure at 37 ° C, serial dilutions of the mixture were prepared in a colored nutrient medium, as indicated in Table. 2. After 24-hour thermostating at 37 o With the results were taken into account.
Задержка роста бактерий с пенициллином происходит до разведения смеси 1: 64 тыс. при росте бактерий в разведениях с 1:128 тыс. до 1:1 млн., как и в контроле, при отсутствии роста в последующих разведениях, где и теоретически не было бактерий. The growth inhibition of bacteria with penicillin occurs until a 1: 64 thousand mixture is diluted with bacteria growing in dilutions from 1: 128 thousand to 1: 1 million, as in the control, in the absence of growth in subsequent dilutions, where theoretically there were no bacteria .
Появление роста в разведениях 1:128 тыс. - 1:1 млн. произошло за счет снижения содержания антибиотика ниже минимальной задерживающей концентрации. В параллельном ряду с добавленной пенициллиназой во всех лунках, в том числе при максимальной концентрации антибиотика, наблюдали рост бактерий (пожелтение и помутнение среды). Наличие бактерий в этих лунках подтвердили посевами из них на питательный агар. The appearance of growth in dilutions of 1: 128 thousand - 1: 1 million occurred due to a decrease in the antibiotic content below the minimum retention concentration. In a parallel row with added penicillinase, bacterial growth (yellowing and clouding of the medium) was observed in all wells, including at the maximum concentration of antibiotic. The presence of bacteria in these wells was confirmed by inoculating them on nutrient agar.
Пример 3. Определение бактерицидного и бактериостатического действия небеталактамного антибиотика - ципрофлоксацина. Example 3. Determination of the bactericidal and bacteriostatic action of a non-beta-lactam antibiotic, ciprofloxacin.
Приводятся результаты опыта с раневым отделяемым больного Т-ва. В лунках планшета антибиотик протитрован с 4-кратным интервалом, после чего высушен. Во все лунки добавлено отделяемое 6-го Т-ва. Через 6 ч обнаружили задержку роста бактерий в первых трех лунках при концентрации антибиотика. Из этих лунок сделали ряды последовательных двукратных разведений ("вертикальное титрование") в цветной среде в объеме 50 мкл. Посевы в планшете инкубировали при 37oС в течение 14 ч. Результаты приведены в табл.3. В контроле и низких концентрациях антибиотика рост бактерий обнаружили в тех же разведениях, что и в рядах, где в исходных лунках планшета была задержка размножения бактерий за счет высокой концентрации ципрофлоксацина. При снижении концентрации разведением ниже 6,2 мкг/мл обнаружили рост бактерий. Следовательно, как в примерах 1 и 2 с пенициллином, так и примере 3, но методом серийных разведений, доказали не бактерицидное, а бактериостатическое действие небеталактамного антибиотика - ципрофлоксацина.The results of the experiment with wound discharge of the patient T-va are given. In the wells of the tablet, the antibiotic is triturated at 4-fold intervals, and then dried. In all holes added detachment of the 6th T-va. After 6 hours, bacteria growth retardation was detected in the first three wells at an antibiotic concentration. From these wells, serial double dilutions (“vertical titration”) in a color medium of 50 μl were made. Crops in the plate were incubated at 37 o C for 14 hours. The results are shown in table.3. In the control and low concentrations of the antibiotic, bacterial growth was found in the same dilutions as in the series where in the original wells of the plate there was a delay in bacterial reproduction due to the high concentration of ciprofloxacin. With a decrease in concentration by dilution below 6.2 μg / ml, bacterial growth was detected. Therefore, as in examples 1 and 2 with penicillin, and example 3, but by the serial dilution method, the bacteriostatic effect of the non-beta-lactam antibiotic, ciprofloxacin, was proved.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001130405/13A RU2213780C2 (en) | 2001-11-13 | 2001-11-13 | Method for assay of bacteriostatic and bactericidal effect of antibiotic |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001130405/13A RU2213780C2 (en) | 2001-11-13 | 2001-11-13 | Method for assay of bacteriostatic and bactericidal effect of antibiotic |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001130405A RU2001130405A (en) | 2003-07-20 |
| RU2213780C2 true RU2213780C2 (en) | 2003-10-10 |
Family
ID=31988488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001130405/13A RU2213780C2 (en) | 2001-11-13 | 2001-11-13 | Method for assay of bacteriostatic and bactericidal effect of antibiotic |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2213780C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3690025A4 (en) * | 2017-09-25 | 2021-06-09 | Idemitsu Kosan Co., Ltd | Production method for bacterial cells |
-
2001
- 2001-11-13 RU RU2001130405/13A patent/RU2213780C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3690025A4 (en) * | 2017-09-25 | 2021-06-09 | Idemitsu Kosan Co., Ltd | Production method for bacterial cells |
| US11377632B2 (en) | 2017-09-25 | 2022-07-05 | Idemitsu Kosan Co., Ltd. | Production method for bacterial cells |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Biemer | Antimicrobial susceptibility testing by the Kirby-Bauer disc diffusion method | |
| Gold-Deutch et al. | How does infected bile affect the postoperative course of patients undergoing laparoscopic cholecystectomy? | |
| US8420347B2 (en) | Test mixture for detecting the presence or absence of methicillin resistant Staphylococcus aureus directly in a first generation test sample | |
| Lacey et al. | Properties of methicillin-resistant Staphylococcus aureus colonizing patients in a burns unit | |
| RU2455355C1 (en) | Pseudomonas aeruginosa BACTERIOPHAGE STRAIN USED AS BASE FOR PREPARING ASEPTIC FOR P AERUGINOSA | |
| US8524468B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of methicillin resistant staphylococcus aureus (MRSA) in a test sample | |
| RU2213780C2 (en) | Method for assay of bacteriostatic and bactericidal effect of antibiotic | |
| US8546103B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of pathogenic Staphylococci in a test sample, including test mixture with micro particles | |
| Carleton et al. | Unmasking of false-negative blood cultures in patients receiving new penicillins | |
| Soriano et al. | Struvite crystal formation by Corynebacterium group D2 in human urine and its prevention by acetohydroxamic acid | |
| Domingue et al. | The possible role of microbial L-forms in pyelonephritis | |
| RU2219238C1 (en) | Strains of microorganisms bacillus subtilis and bacillus licheniformis used for prophylaxis and treatment of infectious diseases and dysbiosis and biopreparation "bisporin" for prophylaxis and treatment of infectious diseases and dysbiosis | |
| Srinivasan et al. | Bacteriology of the burn wound at the Bai Jerbai Wadia hospital for children, Mumbai, India-A 21 year study of predominant Pseudomonas species | |
| RU2117045C1 (en) | Method of assay of mycobacterial beta-lactamase activity | |
| AL-Rubaye et al. | Isolation and Diagnosis of Multi Drug Resistance Pseudomonas Aeruginosa from Wound and Burnpatients in Baghdad City | |
| Michel et al. | Bactericidal synergistic effect due to chloramphenicol-induced inhibition of staphyloccal penicillinase | |
| RU2010860C1 (en) | Method of definition of anticomplementary activity of microorganisms | |
| Acar et al. | Bacterial persistence in vivo: resistance or tolerance to antibiotics | |
| US20240132933A1 (en) | Improved anti-biofilm assay methods | |
| Rommes et al. | Inoculation and Culturing | |
| RU2177152C2 (en) | Method for controlling antagonistic activity of preparations for treating and preventing dysbacteriosis | |
| Kadhim et al. | Demonstration of the effects of virulence factor and antibiotic resistance on the plasmids of Proteus mirabilis and Proteus vulgaris | |
| Bin-Masalam et al. | The Identification and Antibiotic-Susceptibility Profiling of Non-Hospital Wound Infecting Staphylococcus aureus Isolated from Ghail-Bawazeer Patients, Yemen | |
| Madacki-Todorović et al. | CORTICOSTEROID-INDUCED EXPRESSION OF MICROBIAL VIRULENCE CAN ENHANCE THE DEVELOPMENT OF HOST INFECTIOUS DISEASE | |
| Bin-Masalam et al. | Hadhramout University Journal of Natural & Applied Science s |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20031114 |