RU2209634C1 - Kit "estrogen-receptor" for detecting estrogen-receptors in bioptic histological preparations - Google Patents
Kit "estrogen-receptor" for detecting estrogen-receptors in bioptic histological preparations Download PDFInfo
- Publication number
- RU2209634C1 RU2209634C1 RU2002111419/14A RU2002111419A RU2209634C1 RU 2209634 C1 RU2209634 C1 RU 2209634C1 RU 2002111419/14 A RU2002111419/14 A RU 2002111419/14A RU 2002111419 A RU2002111419 A RU 2002111419A RU 2209634 C1 RU2209634 C1 RU 2209634C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- tris
- buffer
- sodium azide
- antibodies
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины. The invention relates to the field of medicine.
Эстрогены - семейство стероидных гормонов, регулирующих жизнедеятельность человеческого организма путем воздействия на ряд органов-мишеней, в первую очередь - органов половой системы. Действие эстрогенов на организм человека осуществляется через стадию связывания гормона с молекулой специфического белка - эстрогенового рецептора (ЭР), который после такого связывания с гормоном способен активировать генетический аппарат клетки и реализовать биологическую активность гормона. Estrogens are a family of steroid hormones that regulate the vital activity of the human body by acting on a number of target organs, primarily organs of the reproductive system. The action of estrogens on the human body is carried out through the stage of binding of the hormone to a molecule of a specific protein - the estrogen receptor (ER), which after such binding to the hormone is able to activate the genetic apparatus of the cell and realize the biological activity of the hormone.
Необходимость определения ЭР в человеческих клетках связана в первую очередь с тем, что целый ряд злокачественных опухолей, в том числе - очень распространенный рак молочной железы, могут быть гормон-чувствительными, т. е. рост гормон-чувствительных форм опухолей ускоряется при действии эстрогенов (см., например, Saunders РТ, Мillar MR, Williams К, Macpherson S, Bayne C, O'Sullivan С, Anderson TJ, Groome NP, Miller WR. Expression of oestrogen receptor beta (ERbetal) protein in human breast cancer biopsies. Br J Cancer 2002 Jan 21;86(2):250-6). The need to determine ER in human cells is primarily due to the fact that a number of malignant tumors, including a very common breast cancer, can be hormone-sensitive, i.e., the growth of hormone-sensitive forms of tumors is accelerated by the action of estrogen ( see, for example, Saunders RT, Millar MR, Williams K, Macpherson S, Bayne C, O'Sullivan C, Anderson TJ, Groome NP, Miller W. Expression of oestrogen receptor beta (ERbetal) protein in human breast cancer biopsies. Br J Cancer 2002 Jan 21; 86 (2): 250-6).
На этой чувствительности основано действие многих противоопухолевых препаратов, однако прежде чем такие препараты применять, необходимо убедиться в том, что опухоль обладает гормон-чувствительностью. Поскольку в подавляющем большинстве случаев причиной нечувствительности является именно отсутствие ЭР, определение этого рецептора при помощи тест-набора дает ответ на вопрос о возможности применения противоопухолевых препаратов, действующих через ЭР, т.е. позволяет выбрать правильный путь лечения. The effect of many antitumor drugs is based on this sensitivity, however, before such drugs are used, it is necessary to make sure that the tumor has hormone sensitivity. Since in the overwhelming majority of cases the cause of numbness is precisely the absence of ER, the determination of this receptor using a test kit gives an answer to the question of the possibility of using antitumor drugs that act through ER, i.e. allows you to choose the right treatment.
Принцип действия набора основан на следующем:
- взаимодействии молекул ЭР (на микроскопических срезах) со специфическими антителами;
- присоединении к специфическим антителам, модифицированным биотином, комплекса стрептавидина и щелочной фосфатазы;
- получении окрашенного продукта щелочной фосфатазы и его регистрации при помощи светового микроскопа.The principle of operation of the kit is based on the following:
- the interaction of ER molecules (on microscopic sections) with specific antibodies;
- accession to specific antibodies modified with biotin, a complex of streptavidin and alkaline phosphatase;
- obtaining a colored alkaline phosphatase product and its registration using a light microscope.
Принцип специфического взаимодействия антител с антигенами является фундаментальным принципом физико-химии белков и иммунохимии. В общем он описан во всех руководствах по иммунологии и иммунохимии, например "Иммунология", А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл, Мир, 2000 г. The principle of the specific interaction of antibodies with antigens is a fundamental principle of the physical chemistry of proteins and immunochemistry. In general, it is described in all manuals on immunology and immunochemistry, for example, "Immunology", A. Royt, J. Brostoff, D. Mail, Mir, 2000.
В применении к рецепторам к стероидным гормонам и, в частности, к эстрогенам, он описан: Dabbs DJ, Landreneau RJ, Liu Y, Raab SS, Maley RH, Tung MY, Silverman JF. Detection of estrogen receptor by immunohistochemistry in pulmonary adenocarcinoma. Ann Thorac Surg. 2002 Feb; 73(2):403-5. As applied to receptors for steroid hormones and, in particular, to estrogens, it is described: Dabbs DJ, Landreneau RJ, Liu Y, Raab SS, Maley RH, Tung MY, Silverman JF. Detection of estrogen receptor by immunohistochemistry in pulmonary adenocarcinoma. Ann Thorac Surg. 2002 Feb; 73 (2): 403-5.
Принцип использования биотиновой модификации с последующим присоединением фермента и получением окрашенного продукта также является общепринятым; в применении к ЭР он описан: McCluggage WG, Sumathi VP, McBride НА, Patterson A. A panel of immunohistochemical stains, including carcinoembryonic antigen, vimentin, and estrogen receptor, AIDS the distinction between primary endometrial and endocervical adenocarcinomas. Int J Gynecol Pathol. 2002 Jan; 21(l): 11-5. The principle of using a biotin modification with subsequent attachment of the enzyme and obtaining a colored product is also generally accepted; as applied to ER, it is described: McCluggage WG, Sumathi VP, McBride HA, Patterson A. A panel of immunohistochemical stains, including carcinoembryonic antigen, vimentin, and estrogen receptor, AIDS the distinction between primary endometrial and endocervical adenocarcinomas. Int J Gynecol Pathol. 2002 Jan; 21 (l): 11-5.
Основной не иммунохимический метод определения экспрессии ЭР основан на использовании обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией (ПЦР). Этот метод имеет существенные недостатки. Во-первых, метод ПЦР дает возможность анализировать экспрессию гена ЭР на уровне образования мРНК, но активный белок ЭР может не образовываться в клетке и в присутствии нормальной мРНК. Во-вторых, метод ПЦР с обратной транскрипцией требует выделения РНК, что весьма трудоемко, сложно технически и вообще неприменимо для широкомасштабных диагностических анализов. Оба эти недостатка отсутствуют в методе определения ЭР, предлагаемом в данном патенте. The main non-immunochemical method for determining the expression of ER is based on the use of reverse transcription followed by polymerase chain reaction (PCR). This method has significant drawbacks. First, the PCR method makes it possible to analyze the expression of the ER gene at the level of mRNA formation, but the active ER protein may not form in the cell in the presence of normal mRNA. Secondly, the reverse transcription PCR method requires RNA isolation, which is very laborious, technically difficult and generally not applicable for large-scale diagnostic assays. Both of these disadvantages are absent in the method for determining ER proposed in this patent.
В настоящее время в России не производятся наборы для иммунохимического определения ЭР, наиболее близким из наборов, производимых вне России, является тест-набор DAKO ER/PR System фирмы "Дако", Дания (kat. #1900 по каталогу 2002 г.). Currently, Russia does not produce kits for the immunochemical determination of ER, the closest of the kits produced outside Russia is the DAKO ER / PR System test kit from Dako, Denmark (kat. # 1900 from the 2002 catalog).
Задачей настоящего изобретения является создание отечественного набора для иммунохимического определения эстрогенного рецептора, предназначенного для диагностических целей (см. табл.1). The objective of the present invention is to provide a domestic kit for the immunochemical determination of estrogen receptor, intended for diagnostic purposes (see table 1).
Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом и представляющая собой варианты. To solve this problem, a group of inventions is proposed, united by a common inventive concept and representing options.
1-й вариант. 1st option.
Набор для обнаружения рецепторов к эстрогенам (ЭР) в биопсийных гистологических препаратах содержит
- раствор, восстанавливающий структуру антигена, 10х-концентрат;
- первичные антитела, представляющие собой раствор мышиных моноклональных антител к ЭР в 0,05М Трис-НСl буфере, рН 7,6, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия;
- вторичные антитела, представляющие собой раствор мышиных моноклональных биотин-меченных антител к иммуноглобулину мыши в 0.05М Трис-НСl буфере, рН 7,6, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия;
- стрептавидин-пероксидазу, представляющую собой стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена в PBS, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия;
- 3% раствор перекиси водорода;
- имидазол-НСl-буфер, рН 7,5, содержащий перекись водорода и 15 mM азид натрия;
- DAB-хромогенный субстрат: 3,3'-диаминобензидин в растворе хромогена;
- промывочный раствор, содержащий смесь солей на 1 л Трис-НСl 50 mM, pH 8,0; NaCl 150 mM.A kit for detecting estrogen receptors (ERs) in biopsy histological specimens contains
- solution restoring the structure of the antigen, 10x-concentrate;
- primary antibodies, which are a solution of murine monoclonal antibodies to ER in 0.05 M Tris-Hcl buffer, pH 7.6, containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide;
- secondary antibodies, which are a solution of murine monoclonal biotin-labeled antibodies to mouse immunoglobulin in 0.05M Tris-Hcl buffer, pH 7.6, containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide;
- streptavidin peroxidase, which is streptavidin conjugated to horseradish peroxidase in PBS containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide;
- 3% hydrogen peroxide solution;
- imidazole-Hcl buffer, pH 7.5, containing hydrogen peroxide and 15 mM sodium azide;
- DAB-chromogenic substrate: 3,3'-diaminobenzidine in a chromogen solution;
- a washing solution containing a mixture of salts per 1 liter of Tris-Hcl 50 mM, pH 8.0; NaCl 150 mM.
2-й вариант. 2nd option.
Набор для обнаружения рецепторов к эстрогенам (ЭР) в биопсийных гистологических препаратах содержит
- раствор, восстанавливающий структуру антигена, 10х-концентрат;
- первичные антитела, представляющие собой раствор мышиных моноклональных антител к ЭР в 0,05М Трис-НСl буфере, рН 7,6, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия;
- вторичные антитела, представляющие собой раствор мышиных моноклональных биотин-меченных антител к иммуноглобулину мыши в 0,05М Трис-НСl буфере, рН 7,6, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия;
- буфер-детектор, Сигма А4955;
- Стрептавидин, раствор 1 мг/мл, раствор в буфере-детекторе;
- Биотинилированная щелочная фосфатаза, 1 мг/мл, раствор в
- буфере-детекторе;
- NBT-BCIP - реагент, Сигма, В 1911;
- реакционный буфер, включающий Трис-HCl 50 mM, pH 9,5; NaCl 100 mM, MgCl2 1 mM, NaN3 0.1%, левамизол 0.1 мМ;
- промывочный раствор, содержащий смесь солей на 1 л Трис-НСl 50 mM, pH 8,0; NaCl 150 mM.A kit for detecting estrogen receptors (ERs) in biopsy histological specimens contains
- solution restoring the structure of the antigen, 10x-concentrate;
- primary antibodies, which are a solution of murine monoclonal antibodies to ER in 0.05 M Tris-Hcl buffer, pH 7.6, containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide;
- secondary antibodies, which are a solution of murine monoclonal biotin-labeled antibodies to mouse immunoglobulin in 0.05 M Tris-Hcl buffer, pH 7.6, containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide;
- buffer detector, Sigma A4955;
- Streptavidin, a solution of 1 mg / ml, a solution in the buffer detector;
- Biotinylated alkaline phosphatase, 1 mg / ml, solution in
- buffer detector;
- NBT-BCIP - reagent, Sigma, In 1911;
- reaction buffer, including Tris-HCl 50 mM, pH 9.5; NaCl 100 mM,
- a washing solution containing a mixture of salts per 1 liter of Tris-Hcl 50 mM, pH 8.0; NaCl 150 mM.
В предлагаемом наборе "ЭСТРОГЕН-РЕЦЕПТОР":
- использованы новые моноклональные антитела к бета-цепи ЭР, специально полученные для иммунохимического окрашивания (IgG, Sigma AER311) и стандартные моноклональные антитела против IgG, коньюгированные с биотином, производства компании Sigma, также предназначенные для иммунохимического окрашивания;
- использована в качестве фермента, дающего окрашенный продукт, регистрируемый методом световой микроскопии, не только пероксидаза, но и щелочная фосфатаза, что дает более широкие возможности для оптимизации окрашивания препаратов из различных тканей, обладающих разными свойствами;
- использован комплекс щелочная фосфатаза-стрептавидин, причем стрептавидин и щелочная фосфатаза включены в состав набора раздельно, это дает возможность менять их соотношение для оптимизации определения ЭР;
- в отличии от набора PathoGene, ЭСТРОГЕН-РЕЦЕПТОР предназначен для диагностических целей.In the proposed set of "ESTROGEN-RECEPTOR":
- used new monoclonal antibodies to the beta chain of ER, specially obtained for immunochemical staining (IgG, Sigma AER311) and standard monoclonal antibodies against IgG conjugated with biotin, manufactured by Sigma, also intended for immunochemical staining;
- used not only peroxidase, but also alkaline phosphatase as an enzyme giving a stained product detected by light microscopy, which gives more opportunities for optimizing staining of preparations from various tissues with different properties;
- the alkaline phosphatase-streptavidin complex was used, and streptavidin and alkaline phosphatase are included separately in the kit, this makes it possible to change their ratio to optimize the determination of ER;
- unlike the PathoGene kit, the ESTROGEN RECEPTOR is intended for diagnostic purposes.
СОСТАВ НАБОРА. COMPOSITION OF THE SET.
1) Раствор, восстанавливающий структуру антигена: 10x-концентрат. 100мл. 1) Solution restoring the structure of the antigen: 10x-concentrate. 100ml
2) Первичные антитела: 7 мл раствора мышиных моноклональных антител к эстрогеновому рецептору (ЭР) в 0,05М Трис-НСl буфере, рН 7,6, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия. 2) Primary antibodies: 7 ml of a solution of murine monoclonal antibodies to the estrogen receptor (ER) in 0.05 M Tris-Hcl buffer, pH 7.6, containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide.
3) Вторичные антитела: 7 мл раствора мышиных моноклональных биотин-меченных антител к иммуноглобулину мыши в 0,05М Трис-НСl буфере, рН 7,6, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия. 3) Secondary antibodies: 7 ml of a solution of murine monoclonal biotin-labeled antibodies to mouse immunoglobulin in 0.05 M Tris-Hcl buffer, pH 7.6, containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide.
4) Стрептавидин-Пероксидаза: стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена в PBS, содержащем бычий сывороточный альбумин и 15 mM азид натрия. 4) Streptavidin-Peroxidase: streptavidin conjugated to horseradish peroxidase in PBS containing bovine serum albumin and 15 mM sodium azide.
5) Перекись водорода: 3% раствор перекиси водорода. 15 мл. 5) Hydrogen peroxide: 3% hydrogen peroxide solution. 15 ml
6) Имидазол-HCl-буфер, рН 7,5, содержащий перекись водорода и 15 mM азид натрия. 6) Imidazole-HCl buffer, pH 7.5, containing hydrogen peroxide and 15 mM sodium azide.
7) DAB-хромогенный субстрат: 3,3'-диаминобензидин в растворе хромогена. 7) DAB-chromogenic substrate: 3,3'-diaminobenzidine in a chromogen solution.
8) Буфер-детектор, 10 мл. Сигма, А4955. 8) Buffer detector, 10 ml. Sigma, A4955.
9) Стрептавидин, раствор 1 мг/мл, раствор в буфере-детекторе ( 8), 2 мл. 9) Streptavidin, a solution of 1 mg / ml, a solution in the detector buffer (8), 2 ml.
10) Биотинилированная щелочная фосфатаза, 1 мг/мл, раствор в буфере-детекторе ( 8), 1 мл. 10) Biotinylated alkaline phosphatase, 1 mg / ml, solution in the detector buffer (8), 1 ml.
11) NBT-BCIP - реагент, 200 мкл. Сигма, В 1911. 11) NBT-BCIP - reagent, 200 μl. Sigma, In 1911.
12) Реакционный буфер, 10 мл:
Трис-HCl 50 mM, pH 9,5; NaCl 100 mM, MgCl2 1 mM, NaN3 0,1%, левамизол 0.1 мМ.12) Reaction buffer, 10 ml:
Tris-HCl 50 mM, pH 9.5; NaCl 100 mM,
13) Смесь солей для промывочного раствора - на 1 л:
Трис-НСl 50 mM, pH 8,0; NaCl 150 mM.13) A mixture of salts for washing solution - 1 l:
Tris-Hcl 50 mM, pH 8.0; NaCl 150 mM.
МЕТОДИКА ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА. SET APPLICATION TECHNIQUE.
Подготовка и предварительная обработка гистологических срезов. Preparation and pre-treatment of histological sections.
Приготавливают парафиновые срезы гистологического материала толщиной 4-6 мкм. Необходимо использовать высокоадгезивные стекла, предварительно обработанные раствором полилизина или силана. Высушивают срезы в вертикальном положении 18 часов при температуре 60-80oС. При необходимости готовые срезы хранят при 4oС.Prepare paraffin sections of the histological material with a thickness of 4-6 microns. It is necessary to use highly adhesive glass, pre-treated with a solution of polylysine or silane. Slices are dried in an upright position for 18 hours at a temperature of 60-80 o C. If necessary, the finished sections are stored at 4 o C.
Далее выдерживают срезы при температуре 60-80oС 5-15 мин и проводят депарафинирование:
- Ксилол 10 мин
- Ксилол 2 мин
- 100% спирт 1 мин
- 100% спирт 1 мин
- 96% спирт 1 мин
- 70% спирт 1 мин
- 50% спирт 1 мин
- Дистилированная вода 1 мин.Next, the sections are kept at a temperature of 60-80 o C for 5-15 minutes and dewaxing is carried out:
- Xylene 10 min
- Xylene 2 min
- 100
- 100
- 96
- 70
- 50
-
Затем при комнатной температуре дегидратируют срезы по следующей схеме:
- Н2O дистилированная - 1 мин
- 50% спирт - 1 мин
- 70% спирт - 1 мин
- 96% спирт - 1 мин
и высушивают срезы при температуре 37oС 5-10 мин. При необходимости подготовленные срезы можно хранить при 4oС до 1 недели.Then, at room temperature, the sections are dehydrated according to the following scheme:
- H 2 O distilled - 1 min
- 50% alcohol - 1 min
- 70% alcohol - 1 min
- 96% alcohol - 1 min
and dried sections at a temperature of 37 o C for 5-10 minutes If necessary, prepared sections can be stored at 4 o C for up to 1 week.
Окрашивание срезов. Staining slices.
Проводят тепловую обработку материала по стандартной гистохимической методике, используя скороварку или автоклав. Для обработки используют раствор, восстанавливающий структуру антигена. Рабочий раствор, восстанавливающий структуру антигена, готовят разведением в 10 раз входящего в набор ( 1) 10x-концентрата. Наносят на образцы по 100 мкл раствора перекиси водорода ( 5) и инкубируют 5 мин. The material is heat treated according to standard histochemical methods using a pressure cooker or an autoclave. For processing using a solution that restores the structure of the antigen. A working solution that restores the antigen structure is prepared by diluting 10 times the 10x concentrate included in the kit (1). Apply 100 μl of hydrogen peroxide solution (5) to the samples and incubate for 5 minutes.
Промывают образцы промывочным раствором ( 13). Наносят раствор первичных антител ( 2) и инкубируют 10 мин. Промывают образцы промывочным раствором ( 13). Наносят раствор вторичных антител ( 3) и инкубируют 10 мин. Промывают образцы промывочным раствором ( 13). Wash samples with wash solution (13). Apply a solution of primary antibodies (2) and incubate for 10 minutes. Wash samples with wash solution (13). Apply a solution of secondary antibodies (3) and incubate for 10 minutes. Wash samples with wash solution (13).
Далее следует использовать один из двух вариантов методики в зависимости от выбранного фермента. Вариант 1. Окрашивание срезов с использованием пероксидазы. Next, you should use one of the two methods, depending on the selected enzyme.
1. Наносят раствор Стрептавидин-Пероксидаза: ( 4) и инкубируют 10 мин. 1. Apply Streptavidin-Peroxidase solution: (4) and incubate for 10 minutes.
2. Промывают образцы промывочным раствором ( 13). 2. Wash the samples with wash solution (13).
3. Готовят раствор субстрата, для чего 20 мкл раствора 7 добавляют к 1 мл буфера 6 и тщательно перемешивают. Наносят раствор субстрата на образцы и инкубируют 5 мин. 3. A substrate solution is prepared, for which 20 μl of
4. Промывают образцы промывочным раствором ( 13) и дистиллированной водой. 4. Wash the samples with wash solution (13) and distilled water.
Вариант 2. Окрашивание срезов с использованием щелочной фосфатазы. Option 2. Staining sections using alkaline phosphatase.
1. Наносят на срезы реагент - детектор по 100 мкл и инкубируют во влажной камере при 37oС 30 мин.1. Apply a reagent detector of 100 μl to the sections and incubate in a humid chamber at 37 ° C for 30 minutes.
Для приготовления реагента-детектора в буфер-детектор ( 8) добавляют раствор стрептавидина ( 9), 1:5 по объему и раствор биотинированной щелочной фосфатазы ( 10), 1:10 по объему, осторожно перемешивают и выдерживают при 37oС 30 мин.To prepare the detector reagent, a streptavidin solution (9), 1: 5 by volume and a solution of biotinated alkaline phosphatase (10), 1:10 by volume, are added to the buffer detector (8), carefully mixed and kept at 37 ° C for 30 minutes.
После этого готовый реагент-детектор можно наносить на срезы. After this, the finished reagent detector can be applied to the slices.
2. Промывают срезы 3 раза промывочным раствором ( 13) по 1 мин. 2. The sections are washed 3 times with washing solution (13) for 1 min.
3. Наносят на срезы раствор NBT/BCIP реагента по 100 мкл на срез и инкубируют во влажной камере в темноте! при 37oС 30 мин.3. Apply 100 μl NBT / BCIP reagent solution to the sections per section and incubate in a humid chamber in the dark! at 37 o C for 30 minutes
Для приготовление NBT/BCIP реагента
Готовят 2% NBT/BCIP реагент в реакционном буфере ( 12), приготовленный раствор необходимо беречь от прямых солнечных лучей.For the preparation of NBT / BCIP reagent
A 2% NBT / BCIP reagent is prepared in the reaction buffer (12); the prepared solution must be protected from direct sunlight.
4. Промывают срезы 3 раза промывочным раствором ( 13) по 1 мин. 4. The sections are washed 3 times with washing solution (13) for 1 minute.
5. Промывают срезы дистилированной водой 1 мин. 5. Wash sections with distilled water for 1 min.
Срезы, окрашенные с помощью пероксидазы или щелочной фосфатазы, дегидратируют
- 96% спирт 1 мин
- 100% спирт 1 мин
- 100% спирт безводный 1 мин
- ксилол 1 мин
и заключают в канадский бальзам (или другую среду) под покровное стекло. Препарат готов к исследованию под световым микроскопом.Sections stained with peroxidase or alkaline phosphatase dehydrate
- 96
- 100
- 100% alcohol anhydrous 1 min
-
and enclose in a Canadian balm (or other medium) under a coverslip. The drug is ready for examination under a light microscope.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002111419/14A RU2209634C1 (en) | 2002-04-29 | 2002-04-29 | Kit "estrogen-receptor" for detecting estrogen-receptors in bioptic histological preparations |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002111419/14A RU2209634C1 (en) | 2002-04-29 | 2002-04-29 | Kit "estrogen-receptor" for detecting estrogen-receptors in bioptic histological preparations |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2209634C1 true RU2209634C1 (en) | 2003-08-10 |
RU2002111419A RU2002111419A (en) | 2003-11-20 |
Family
ID=29246627
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2002111419/14A RU2209634C1 (en) | 2002-04-29 | 2002-04-29 | Kit "estrogen-receptor" for detecting estrogen-receptors in bioptic histological preparations |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2209634C1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2523899C1 (en) * | 2013-05-27 | 2014-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Маркёр" | Kit of reagents for simultaneous or separate immunohistochemical detection of oestrogen, progesterone and her2 receptors in diagnosing breast cancer |
-
2002
- 2002-04-29 RU RU2002111419/14A patent/RU2209634C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Тест-набор DAKO ER/PR System фирмы "Дако", Дания (Kat. #1900 по каталогу 2002г.). * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2523899C1 (en) * | 2013-05-27 | 2014-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Маркёр" | Kit of reagents for simultaneous or separate immunohistochemical detection of oestrogen, progesterone and her2 receptors in diagnosing breast cancer |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5846749A (en) | Quantitative measurement of tissue protein identified by immunohistochemistry and standardized protein determination | |
JP5221381B2 (en) | Use of HE4 and other biochemical markers to determine ovarian cancer | |
Graddis et al. | Prostatic acid phosphatase expression in human tissues | |
US8367353B2 (en) | Method for improved diagnosis of dysplasias | |
Matsui et al. | The prognosis of patients with gastric cancer possessing sex hormone receptors | |
MXPA01010984A (en) | Tandem immuno-assay for cancer. | |
US7785793B2 (en) | Method for isolating and modifying DNA from blood and body fluids | |
WO2014100220A2 (en) | Antibody cocktail systems and methods for classification of histologic subtypes in lung cancer | |
EP1493032B1 (en) | Method for discrimination of metaplasias from neoplastic or preneoplastic lesions | |
KR20200128689A (en) | MAGEA4 detection method | |
US10145850B2 (en) | Assay | |
US9678077B2 (en) | ERG/TFF3/HMWCK triple immunostain for detection of prostate cancer | |
Sato et al. | Applicability of Nanotrap Sg as a semen detection kit before male-specific DNA profiling in sexual assaults | |
RU2209634C1 (en) | Kit "estrogen-receptor" for detecting estrogen-receptors in bioptic histological preparations | |
Miller et al. | Immunocytochemical assay for estrogen receptor with monoclonal antibody d753pγ in routinely processed formaldehyde‐fixed breast tissue. Comparison with frozen section assay and with monoclonal antibody h222 | |
TAKEMURA et al. | Proto‐oncogene expression in human glomerular diseases | |
van Netten et al. | Multiple microsample analysis of intratumor estrogen receptor distribution in breast cancers by a combined biochemical/immunohistochemical method | |
US20070275420A1 (en) | Method For Detecting Prognosis Of Cancer | |
CN113960313B (en) | Exosome ALK fusion protein magnetic immunochemiluminescence detection kit | |
Jakse et al. | Hormone receptors in renal cancer: an overview | |
US6162606A (en) | Immunohistochemical method for the detection of defective estrogen receptors | |
EP3380843B1 (en) | Prognostic method and kits useful in said method | |
EP1387173A1 (en) | Method for improved diagnosis of cervical lesions based on detection of INK4a gene products | |
US20070134742A1 (en) | Diagnostic reagent for uterine adenocarcinoma and method of detecting adenocarcinoma cells | |
US20060148688A1 (en) | Use of na, k-atpase a-and b-subunits in bladder cancer detection and drug screening |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060430 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20070820 |
|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20100422 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110430 |