RU2194278C2

RU2194278C2 - Strip-test for detection of glucose

Info

Publication number: RU2194278C2
Application number: RU98122095/14A
Authority: RU
Inventors: В.Х. Тихонов; В.Н. Злобин
Original assignee: Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения
Priority date: 1998-12-09
Filing date: 1998-12-09
Publication date: 2002-12-10

Abstract

FIELD: medicine, laboratory diagnostics. SUBSTANCE: strip-test deals with detection of glucose in urine. It contains a cellulose carrier impregnated with a composition consisted of glucose oxidase, peroxidase, a film-forming polymer, a surface-active substance, 4- aminoantipyrine and 8-anilino-1-naphthalenosulfate and, additionally, the composition of a strip-test is supplemented with 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone-5 at concentration of 90-500 wt. % on conversion to 4- aminoantipyrine. In contrast to the well-known strip-tests the present innovation increases the accuracy in detecting urinary concentration of glucose. EFFECT: higher efficiency of detection.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к тест-полоскам для определения глюкозы. The invention relates to medicine, namely to test strips for determining glucose.

Известны индикаторные полосы для определения глюкозы (авт. свид. СССР 1155944, 1269021, кл. C 01 N 33/50). Known indicator strip for determining glucose (ed. Certificate. USSR 1155944, 1269021, class C 01 N 33/50).

Индикаторная полоса содержит подложку, на которую нанесен индикаторный слой, в состав которого входит целлюлозная основа, глюкозооксидаза, перокоидаза, хромогенный реагент о-толидин, буфер и связывающий компонент. Недостатком данных индикаторных полос является канцерогеннооть хромогенного реагента о-толидина, ограничивающая его использование. The indicator strip contains a substrate on which an indicator layer is applied, which includes a cellulose base, glucose oxidase, perocoidase, the chromogenic reagent o-tolidine, a buffer and a binding component. The disadvantage of these indicator strips is the carcinogenicity of the chromogenic reagent o-tolidine, limiting its use.

Прототипом является аналитический элемент для определения глюкозы в крови (патент РФ 2042947, кл. С 01 N 33/48), содержащий подложку, реагентный и два защитных слоя, причем в состав реагентного слоя входят глюкозооксидаза, пероксидаза, пленкообразующий полимер, поверхностно-активное вещество и двухкомпонентная хромогенная композиция из 4-аминоантипирина и 8-анилино-1-нафталиносульфата. The prototype is an analytical element for determining blood glucose (RF patent 2042947, class C 01 N 33/48), containing a substrate, a reagent and two protective layers, the reagent layer comprising glucose oxidase, peroxidase, a film-forming polymer, a surfactant and a two-component chromogenic composition of 4-aminoantipyrine and 8-anilino-1-naphthalenosulfate.

При использовании аналогичной системы с данной парой красителей для изготовления тест-полосок для определения глюкозы в моче, предназначенных для анализа с помощью цветовой шкалы, оказалось, что даже небольшие пороговые концентрации глюкозы (0,05%) вызывают достаточно интенсивное окрашивание индикаторной зоны полоски, при этом большие концентрации глюкозы вызывали близкие по цветности интенсивные окраски, которые трудно различать между собой визуально. Область малых интенсивностей окрашивания при этом не используется в анализе, так как пороговая концентрация глюкозы уже дает окраску средней интенсивности. При анализе с помощью таких полосок мала точность определения больших концентраций из-за трудности их визуальной дифференцировки. When using a similar system with this pair of dyes for the manufacture of test strips for determination of glucose in urine, intended for analysis using a color scale, it turned out that even small threshold glucose concentrations (0.05%) cause quite intense staining of the indicator zone of the strip, with In this case, high glucose concentrations caused intense colors close in color, which are difficult to visually distinguish among themselves. The region of low staining intensities is not used in the analysis, since the threshold glucose concentration already gives a medium intensity coloration. When analyzing using such strips, the accuracy of determining large concentrations is low due to the difficulty of visual differentiation.

Предлагается изобретение, устраняющее указанный недостаток. An invention is proposed to eliminate this drawback.

Сущность изобретения заключается в том, что в состав реагентного слоя тест-полоски, содержащего глюкозооксидазу, пероксидазу, пленкообразующий полимер, поверхностно-активное вещество, 4-аминоантипирин и 8-анилино-1-нафталиносульфат, введен 1-фенил-2,3-диметилпиразолон-5 в концентрации 90-500 вес. % в пересчете на 4-аминоантипирин. При этом ослабляется окраска тест-полосок, возникающая при контакте с глюкозой. в результате чего малые концентрации глюкозы дают слабую окраску, средние - окраску средней интенсивности, а большие - различающиеся окраски повышенной интенсивности. Увеличение разницы в окрасках, вызванных разными концентрациями глюкозы повышает точность визуального определения концентраций глюкозы. The essence of the invention lies in the fact that the composition of the reagent layer of the test strip containing glucose oxidase, peroxidase, a film-forming polymer, a surfactant, 4-aminoantipyrine and 8-anilino-1-naphthalenosulfate, introduced 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone -5 at a concentration of 90-500 weight. % in terms of 4-aminoantipyrine. In this case, the color of the test strips, which occurs upon contact with glucose, is weakened. as a result, low concentrations of glucose give a weak color, medium ones give a color of medium intensity, and large ones have different colors of increased intensity. An increase in the color difference caused by different glucose concentrations increases the accuracy of the visual determination of glucose concentrations.

Так как предлагаемая тест-полоска предназначена для анализа мочи, то в качестве носителя в ней используется впитывающий материал: фильтровальная бумага или другие волокнистые или пористые носители. Since the proposed test strip is intended for urine analysis, it uses absorbent material as a carrier: filter paper or other fibrous or porous carriers.

По сравнению с прототипом изобретение является новым, так как представляет собой новую совокупность признаков, позволяющую более точно проводить анализ. Compared with the prototype, the invention is new, as it is a new set of features that allows more accurate analysis.

Изобретение имеет изобретательский уровень, так как авторами не обнаружена тест-полоска с заявляемой совокупностью признаков. The invention has an inventive step, since the authors have not found a test strip with the claimed combination of features.

Изобретение является промышленно применимым, так как 1-фенил-2,3-диметилпиразолон-5 является дешевым и доступным реактивом, что позволяет вводить его в состав полосок без значительного удорожания их. The invention is industrially applicable, since 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone-5 is a cheap and affordable reagent, which allows you to enter it into the composition of the strips without significantly increasing their cost.

Предлагаемую тест-полооку получают следующим способом. The proposed test strip is obtained in the following way.

Пример 1. Приготавливают индикаторный состав: в 26 мл 0,1 М цитратного буфера рН 5,5 растворяют глюкозооксидазу (70 тыс. ед.) и пероксидазу (16 тыс. ед.), затем добавляют последовательно при перемешивании 26 мл 5% раствора поливинилового спирта в дистиллированной воде, 12 мл 4%-ного водного раствора 8-анилино-1-нафталинсульфата, 3 мл 4%-ного водного раствора 4-аминоантипирина, 6 мл 4%-ного водного раствора 1-фенил-2,3-диметилпиразолон-5, 12 мл 0,3%-ного водного раствора аурамина и 0,8 мл 10%-ного водного раствора октаглицерида алкенилянтарных кислот. Example 1. Prepare an indicator composition: in 26 ml of 0.1 M citrate buffer pH 5.5 dissolve glucose oxidase (70 thousand units) and peroxidase (16 thousand units), then 26 ml of 5% polyvinyl solution are added sequentially with stirring alcohol in distilled water, 12 ml of a 4% aqueous solution of 8-anilino-1-naphthalenesulfate, 3 ml of a 4% aqueous solution of 4-aminoantipyrine, 6 ml of a 4% aqueous solution of 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone -5, 12 ml of a 0.3% aqueous solution of auramine and 0.8 ml of a 10% aqueous solution of octaglyceride alkenyl succinic acids.

Пропитывают бумагу хроматографическую марки "С" 5%-ным водным раствором поливинилового спирта и высушивают при 60^oС. Затем пропитывают ее индикаторным составом и высушивают при 60^oС и снова пропитывают 5%-ным водным раствором поливинилового спирта и высушивают при 60^oС.The grade C chromatographic paper is impregnated with a 5% aqueous solution of polyvinyl alcohol and dried at 60 ^° C. Then it is impregnated with an indicator composition and dried at 60 ^{° C.} and again impregnated with a 5% aqueous solution of polyvinyl alcohol and dried at 60 ^{° C.} .

Готовят растворы глюкозы на нормальной моче следующих концентраций: 0,05; 0,1; 0,25; 0,5 и 1,0%. Проводят анализ глюкозы, опуская тест-полоски в растворы глюкозы на 1-2 с и регистрируя результат через 2 мин. Отмечают следующую окраску:
0 - желтая
0,05% глюкоза - слабо-зеленая
0,1% глюкоза - зеленая
0,25% глюкоза - сине-зеленая
0,5% глюкоза - синяя
1,0% глюкоза - темно-синяя
Без добавления 1-фенил-2,3-диметилпиразолона-5 цвет полоски при анализе 0,05% раствора глюкозы был зеленым, а 0,5 и 1,0% растворов - темно-синим.Prepare glucose solutions in normal urine of the following concentrations: 0.05; 0.1; 0.25; 0.5 and 1.0%. A glucose analysis is carried out by dropping test strips into glucose solutions for 1-2 s and recording the result after 2 minutes. The following coloration is noted:
0 - yellow
0.05% glucose - light green
0.1% glucose - green
0.25% glucose - blue-green
0.5% glucose - blue
1.0% glucose - navy blue
Without the addition of 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone-5, the color of the strip in the analysis of a 0.05% glucose solution was green, and 0.5 and 1.0% solutions were dark blue.

Пример 2. Проводятся все операции, как указано в примере 1, за исключением того, что в состав добавляют дополнительно еще 6 мл 4%-ного водного раствора 1-фенил-2,3-диметилпиразолон-5. Отмечают следующие цвета полосок:
0 - желтая
0,05% глюкоза - желто-зеленая
0,1% глюкоза - слабо-зеленая
0,25% глюкоза - зеленая
0,5% глюкоза - сине-зеленая
1,0% глюкоза - синяя
Таким образом, введение в состав аналитической композиции полосок 1-фенил-2,3-диметилпиразолона-5 повышает точность визуального определения глюкозы.Example 2. All operations are carried out as described in example 1, except that an additional 6 ml of a 4% aqueous solution of 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone-5 is added to the composition. The following strip colors are noted:
0 - yellow
0.05% glucose - yellow green
0.1% glucose is slightly green
0.25% glucose - green
0.5% glucose - blue-green
1.0% glucose - blue
Thus, the introduction of 1-phenyl-2,3-dimethylpyrazolone-5 strips into the analytical composition increases the accuracy of the visual determination of glucose.

Тест-полоски предлагаемого состава могут использоваться для определения глюкозы в моче в диагностических лабораториях медицинских учреждений и для самоконтроля больных диабетом. Test strips of the proposed composition can be used to determine glucose in the urine in the diagnostic laboratories of medical institutions and for the self-monitoring of patients with diabetes.

Claims

A urine glucose test strip containing a cellulose carrier impregnated with a composition containing glucose oxidase, peroxidase, a film-forming polymer, a surfactant, 4-aminoantipyrine and 8-anilino-1-naphthalenosulfate, characterized in that 1- phenyl-2,3-dimethylpyrazolone-5 at a concentration of 90-500 weight. % in terms of 4-aminoantipyrine.