RU2180002C2 - Method of collagenase producing - Google Patents
Method of collagenase producing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2180002C2 RU2180002C2 RU99117840A RU99117840A RU2180002C2 RU 2180002 C2 RU2180002 C2 RU 2180002C2 RU 99117840 A RU99117840 A RU 99117840A RU 99117840 A RU99117840 A RU 99117840A RU 2180002 C2 RU2180002 C2 RU 2180002C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- casein
- collagenase
- distilled water
- acid
- purification
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области микробиологии, в частности к производству бактериальных ферментных препаратов, и может быть использовано в медицине при терапии ожоговых и инфицированных ран, в парфюмерной промышленности, а также в научно-исследовательской работе, например, для определения структуры коллагенов. The invention relates to the field of microbiology, in particular to the production of bacterial enzyme preparations, and can be used in medicine in the treatment of burns and infected wounds, in the perfume industry, as well as in research work, for example, to determine the structure of collagen.
Известен способ выделения колагеназы с использованием в качестве продуцента актиномицета Streptomyces lavendulae, при котором культивирование продуцирующего микроорганизма проводят на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода кукурузную муку, в качестве источника азота - белковый препарат 1, с последующим центрифугированием и осаждением ферментного препарата ацетоном при 0 -5oС. (Авторское свидетельство 1822879, кл. C 12 N 9/58, 1993).A known method for the isolation of collagenase using actinomycete Streptomyces lavendulae as a producer, in which the producing microorganism is cultured on a nutrient medium containing corn flour as a carbon source, protein preparation 1 as a nitrogen source, followed by centrifugation and precipitation of the enzyme preparation with acetone at 0 -5 o C. (Copyright certificate 1822879, class C 12 N 9/58, 1993).
Недостатком данного метода является применение в больших количествах органического растворителя - ацетона, являющегося взрывоопасным веществом (температура вспышки ацетона равна -18oС), способным нарушить экологическое равновесие окружающей среды, а также необходимость создания низких температур при осаждении фермента.The disadvantage of this method is the use in large quantities of an organic solvent - acetone, which is an explosive substance (flash point of acetone is -18 o C), which can upset the ecological balance of the environment, as well as the need to create low temperatures during precipitation of the enzyme.
Также известен способ получения коллагеназы путем культивирования продуцента Clostridium histolyticum штамм 468 в анаэробных условиях на бульоне Рамона с добавлением 1% (по объему) глюкозы с последующим осаждением 60% сульфатом аммония и очисткой методом гельфильтрации на колонке, заполненной сефадексом G-100. (Авторское свидетельство 694534, кл. С 12 D 13/10, 1979). Однако этот способ является многостадийным, трудоемким и не позволяет полностью автоматизировать процесс получения фермента. Кроме того, для приготовления питательной среды используется говяжье мясо, являющееся достаточно нестандартным и дорогостоящим сырьем. There is also a method for producing collagenase by culturing producer Clostridium histolyticum strain 468 under anaerobic conditions on Ramon broth with the addition of 1% (by volume) glucose, followed by precipitation with 60% ammonium sulfate and purification by gel filtration on a column filled with Sephadex G-100. (Copyright certificate 694534, class C 12 D 13/10, 1979). However, this method is multi-stage, time-consuming and does not fully automate the process of obtaining the enzyme. In addition, for the preparation of a nutrient medium, beef meat is used, which is a rather non-standard and expensive raw material.
Технический результат изобретения заключается в увеличении выхода целевого продукта, а также в упрощениии и удешевлении способа получения коллагеназы. The technical result of the invention is to increase the yield of the target product, as well as to simplify and reduce the cost of the method of producing collagenase.
Сущность изобретения заключается в том, что культивирование Clostridium histolyticum ведут на казеиново-соево-пепсинной среде в анаэробных условиях при следующем соотношении компонентов среды, г/л: гидролизат казеина и соевого шрота с содержанием аминного азота 85-105 мг% - 958,8-979,2, гидрофосфат натрия однозамещенный 1,4-1,6, дигидрофосфат калия двузамещенный 1,4-1,6, пиридоксин 0,0019-0,0021, рибофлавин 0,0019-0,0021, тиамина бромид 0,0019-0,0021, фолевая кислота 0,0019-0,0021, пантотенат кальция 0,0019-0,0021, никотиновая кислота 0,0019-0,0021, липоевая кислота 0,0019-0,0021, биотип 0,0009-0,0011, вода дистиллированная - до 1 л. Очистку и концентрацию коллагеназы проводят на ультрафильтрационных мембранах с порогом задержания веществ по молекулярной массе 50 кД с последующей диафильтрацией дистиллированной водой и 0,9% раствором хлорида натрия. The essence of the invention lies in the fact that the cultivation of Clostridium histolyticum is carried out on casein-soy-pepsin medium under anaerobic conditions with the following ratio of medium components, g / l: casein hydrolyzate and soybean meal with an amine nitrogen content of 85-105 mg% - 958.8- 979.2, sodium hydrogen phosphate monosubstituted 1.4-1.6, potassium dihydrogen phosphate 1.4-1.6, pyridoxine 0.0019-0.0021, riboflavin 0.0019-0.0021, thiamine bromide 0.0019- 0.0021, folic acid 0.0019-0.0021, calcium pantothenate 0.0019-0.0021, nicotinic acid 0.0019-0.0021, lipoic acid 0.0019-0.0021, biotype 0.0009-0 , 0011, distilled water lined - up to 1 l. The purification and concentration of collagenase is carried out on ultrafiltration membranes with a threshold for retention of substances by a molecular weight of 50 kD, followed by diafiltration with distilled water and a 0.9% sodium chloride solution.
Штамм продуцента Clostridium histolyiticum 468 хранится в коллекции культур микроорганизмов Государственного контрольного института медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича. The producer strain Clostridium histolyiticum 468 is stored in a collection of microorganism cultures of the State Control Institute of Biological Medicines named after L.A. Tarasevich.
Использование казеиново-соево-пепсинной среды для культивирования Clostridium histolyticum обеспечивает получение нетоксичного, высокоактивного препарата коллагеназы. Увеличение или уменьшение вышеуказанных концентраций компонентов среды отрицательно влияет на синтез коллагеназы - активность снижается на 10-50%. The use of casein-soy-pepsin medium for the cultivation of Clostridium histolyticum provides a non-toxic, highly active collagenase preparation. An increase or decrease in the above concentrations of the components of the medium negatively affects the synthesis of collagenase - activity decreases by 10-50%.
Применение ультрафильтрации позволяет упростить способ получения ферментного препарата, что открывает перспективу использования его в лечебных целях. Объединение стадий очистки и концентрирования сокращает технологические потери и упрощает процесс получения препарата, а применение отечественного серийно выпускаемого оборудования для ультрафильтрации позволяет полностью автоматизировать весь технологический процесс и увеличить выход целевого продукта. The use of ultrafiltration makes it possible to simplify the method of obtaining the enzyme preparation, which opens up the prospect of using it for medicinal purposes. The combination of the stages of purification and concentration reduces technological losses and simplifies the process of obtaining the drug, and the use of domestic commercially available equipment for ultrafiltration allows you to fully automate the entire process and increase the yield of the target product.
Способ получения коллагеназы осуществляется следующим образом. The method of producing collagenase is as follows.
Готовят казеиново-соевый гидролизат путем гидролиза казеина и соевого шрота пепсином в водной среде, при этом казеин предварительно смешивают с соевым шротом и полученную смесь гидролизуют до содержания аминного азота 0,85-1,05 мг/мл. Приготовление питательной среды проводят по следующей схеме: прозрачный гидролизат нагревают до 60-70oС, вносят соли, витамины и биотин и стерилизуют 30 мин при давлении 0,05 МПа.A casein-soybean hydrolyzate is prepared by hydrolysis of casein and soybean meal with pepsin in an aqueous medium, while casein is pre-mixed with soybean meal and the resulting mixture is hydrolyzed to an amine nitrogen content of 0.85-1.05 mg / ml. The preparation of the nutrient medium is carried out according to the following scheme: the transparent hydrolyzate is heated to 60-70 o C, salts, vitamins and biotin are introduced and sterilized for 30 minutes at a pressure of 0.05 MPa.
Культуру Clostridium histolyticum засевают в казеиново-соево-пепсинную среду и проводят культивирование в течение 72 ч при температуре 37oС. Культуральную жидкость отделяют от микробной массы микрофильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,22 мкм и очищают на ультрафильтрационных мембранах с порогом задержания веществ по молекулярной массе 50 кД. Выделенную фракцию последовательно промывают дистиллированной водой и 0,9%-ным раствором хлорида натрия, затем проводят концентрацию целевого продукта. После стерилизующей фильтрации концентрированный очищенный препарат лиофилизируют. Коллагеназная активность ферментного препарата определяется с помощью нингидринового метода и выражается в ед. лейцина / мг лиофилизированного препарата. Коллагеназная активность 1 мг лиофилизированного препарата составила 0,20-0,25 ед. лей (в мкмоль лейцина) за 20 мин инкубации в реакционной смеси.The culture of Clostridium histolyticum is seeded in casein-soy-pepsin medium and cultured for 72 hours at a temperature of 37 o C. The culture fluid is separated from the microbial mass by microfiltration on membranes with a pore diameter of 0.22 μm and purified on ultrafiltration membranes with a threshold of retention of substances on molecular weight 50 kD. The isolated fraction is washed successively with distilled water and 0.9% sodium chloride solution, and then the target product is concentrated. After sterilizing filtration, the concentrated purified preparation is lyophilized. The collagenase activity of the enzyme preparation is determined using the ninhydrin method and is expressed in units. leucine / mg lyophilized preparation. Collagenase activity of 1 mg of lyophilized preparation was 0.20-0.25 units. lei (in μmol of leucine) for 20 min incubation in the reaction mixture.
Получение коллагеназы. Пример. Obtaining collagenase. Example.
В реактор со стерильной дистиллированной водой объемом 160±15 л засыпают 4,80±0,45 кг казеина и 1,6±0,15 кг соевого шрота. Растворение ведут при перемешивании при температуре 40±5oС и рН 1,5±0,1 в течение 3,5±0,5 ч. Коррекцию рН выполняют 10%-ным раствором соляной кислоты. Затем в реактор загружают 0,350±0,002 кг очищенного пепсина. Гидролиз ведут при рН 1,5+0,1 и температуре 40±0,2oС до содержания аминного азота в гидролизате 85-105 мг%. Затем рН доводят до 4,5±0,1 20 %-ным раствором гидроксида натрия и кипятят в течение 20 минут. Гидролизат охлаждают до температуры 20±2oС и отстаивают 19±1 ч. Затем прозрачный гидролизат декантируют в реактор-культиватор, нагревают до 60-70o С и доводят рН до 8,5+0,1 20%-ным раствором гидроксида натрия. К полученным 130 л гидролизата, добавляют по 195 г гидрофосфата натрия однозамещенного и дигидрофосфата калия двузамещенного и витамины: пиридоксин 0,26 г, рибофлавин 0,26 г, тиамина бромид 0,26 г, фолиевая кислота 0,26 г, пантотенат кальция 0,26 г, никотиновая кислота 0,26 г, липоевая кислота 0,26 г, биотин 0,13 г. Питательную среду стерилизуют 30 минут при давлении 0,05 МПа. Стерильная питательная среда должна иметь следующие показатели: рН 7,8±0,1, аминный азот 0,95±0,1 мг/мл.4.80 ± 0.45 kg of casein and 1.6 ± 0.15 kg of soybean meal are poured into a reactor with sterile distilled water with a volume of 160 ± 15 l. The dissolution is carried out with stirring at a temperature of 40 ± 5 o C and a pH of 1.5 ± 0.1 for 3.5 ± 0.5 hours. The pH correction is performed with a 10% hydrochloric acid solution. Then 0.350 ± 0.002 kg of purified pepsin is charged to the reactor. Hydrolysis is carried out at a pH of 1.5 + 0.1 and a temperature of 40 ± 0.2 o With the content of amine nitrogen in the hydrolyzate 85-105 mg%. Then the pH was adjusted to 4.5 ± 0.1 with a 20% sodium hydroxide solution and boiled for 20 minutes. The hydrolyzate is cooled to a temperature of 20 ± 2 o C and stand for 19 ± 1 h. Then, the transparent hydrolyzate is decanted into the cultivator reactor, heated to 60-70 o C and adjusted to pH 8.5 + 0.1 with 20% sodium hydroxide solution . To the obtained 130 l of hydrolyzate, 195 g of monosubstituted sodium hydrogen phosphate and disubstituted potassium dihydrogen phosphate are each added and vitamins: pyridoxine 0.26 g, riboflavin 0.26 g, thiamine bromide 0.26 g, folic acid 0.26 g, calcium pantothenate 0, 26 g, nicotinic acid 0.26 g, lipoic acid 0.26 g, biotin 0.13 g. The medium is sterilized for 30 minutes at a pressure of 0.05 MPa. A sterile culture medium should have the following indicators: pH 7.8 ± 0.1, amine nitrogen 0.95 ± 0.1 mg / ml.
К стерильному бульону объемом 130 литров добавляют 6±1 л маточной культуры Clostridium histolyticum. Культивирование ведут в течение 72±1 ч при температуре 36±0,5oС. Культуральную жидкость отделяют микрофильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,22 мкм. Получают 100 л нативной коллагеназы. Нативную коллагеназу концентрируют до 1/10 от первоначального объема на ультрафильтрационном аппарате с полыми волокнами марки ВПУ-50 под давлением 0,06+0,02 МПа. После этого проводят отмывку концентрированной коллагеназы последовательно стерильной апирогенной дистиллированной водой и 0,9%-ным раствором хлорида натрия до исчезновения азотистых веществ в фильтрате (по показаниям спектрофотометра при 280 нм). Очищенный препарат стерилизуют через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм. Получают 10 л очищенного концентрированного препарата коллагеназы. Затем препарат лиофилизируют. Режим сушки: замораживание при 44±2oС не менее 16 часов, продожительность высушивания 55 часов при температуре не выше +35oС. Активность 1 мг готового препарата составляет 0,20-0,25 ед. лейцина за 20 мин инкубации в реакционной смеси.To a sterile broth with a volume of 130 liters add 6 ± 1 l of the uterine culture of Clostridium histolyticum. Cultivation is carried out for 72 ± 1 h at a temperature of 36 ± 0.5 o C. The culture fluid is separated by microfiltration on membranes with pore diameters of 0.22 μm. Get 100 l of native collagenase. Native collagenase is concentrated to 1/10 of the initial volume on an ultrafiltration apparatus with hollow fibers of the VPU-50 brand under a pressure of 0.06 + 0.02 MPa. After that, concentrated collagenase is washed with successively sterile pyrogen-free distilled water and a 0.9% sodium chloride solution until nitrogenous substances disappear in the filtrate (according to the spectrophotometer at 280 nm). The purified preparation is sterilized through membranes with a pore diameter of 0.22 μm. Get 10 l of purified concentrated collagenase preparation. Then the drug is lyophilized. Drying mode: freezing at 44 ± 2 o C for at least 16 hours, drying time 55 hours at a temperature not exceeding +35 o C. The activity of 1 mg of the finished product is 0.20-0.25 units. leucine for 20 min incubation in the reaction mixture.
Таким образом, изобретение позволяет создать простой, легко масштабируемый и экологически чистый процесс выделения и очистки коллагеназы Clostridium histolyiticum при небольших затратах материалов, сырья, рабочего и технологического времени с высоким выходом целевого продукта. Thus, the invention allows to create a simple, easily scalable and environmentally friendly process for the isolation and purification of collagenase Clostridium histolyiticum at low cost of materials, raw materials, working and technological time with a high yield of the target product.
Claims (1)
Гидролизат казеина и соевого шрота с содержанием аминного азота 85-105 мг% - 958,8-979,2
Гидрофосфат натрия однозамещенный - 1,4-1,6
Дигидрофосфат калия двузамещенный - 1,4-1,6
Пиридоксин - 0,0019-0,0021
Рибофлавин - 0,0019-0,0021
Тиамина бромид - 0,0019-0,0021
Фолиевая кислота - 0,0019-0,0021
Пантотенат кальция - 0,0019-0,0021
Никотиновая кислота - 0,0019-0,0021
Липоевая кислота - 0,0019-0,0021
Биотин - 0,0009-0,0011
Вода дистиллированная - До 1 л
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что коллагеназу очищают и концентрируют на ультрафильтрационных мембранах с порогом задержания веществ по молекулярной массе 50 кД с последующей диафильтрацией дистиллированной водой и 0,9%-ным раствором хлорида натрия.1. The method of producing collagenase by cultivating the producer of Clostridium histolyticum 468 under anaerobic conditions on a nutrient medium containing carbon and nitrogen sources, distilled water, followed by isolation and purification of the target product, characterized in that the cultivation is carried out on casein-soy-pepsin medium containing hydrolyzate casein and soybean meal with an amine nitrogen content of 85-105 mg%, monosubstituted sodium hydrogen phosphate, disubstituted potassium dihydrogen phosphate, pyridoxine, riboflavin, thiamine bromide, folic acid, pantot calcium tension, nicotinic acid, lipoic acid, biotin, in the following ratio of the medium, g / l:
The hydrolyzate of casein and soybean meal with an amine nitrogen content of 85-105 mg% - 958.8-979.2
Monosubstituted sodium hydrogen phosphate - 1.4-1.6
Potassium dihydrogen phosphate disubstituted - 1.4-1.6
Pyridoxine - 0.0019-0.0021
Riboflavin - 0.0019-0.0021
Thiamine Bromide - 0.0019-0.0021
Folic Acid - 0.0019-0.0021
Calcium pantothenate - 0.0019-0.0021
Niacin - 0.0019-0.0021
Lipoic acid - 0.0019-0.0021
Biotin - 0.0009-0.0011
Distilled water - Up to 1 L
2. The method according to p. 1, characterized in that the collagenase is purified and concentrated on ultrafiltration membranes with a retention threshold of substances with a molecular weight of 50 kDa, followed by diafiltration with distilled water and a 0.9% sodium chloride solution.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99117840A RU2180002C2 (en) | 1999-08-16 | 1999-08-16 | Method of collagenase producing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99117840A RU2180002C2 (en) | 1999-08-16 | 1999-08-16 | Method of collagenase producing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU99117840A RU99117840A (en) | 2001-07-27 |
| RU2180002C2 true RU2180002C2 (en) | 2002-02-27 |
Family
ID=20223995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99117840A RU2180002C2 (en) | 1999-08-16 | 1999-08-16 | Method of collagenase producing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2180002C2 (en) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009002209A1 (en) * | 2007-06-19 | 2008-12-31 | Otkrytoe Akzionernoe Obschestvo 'moscow Committee Of Science And Technologies' | Substance for dermatological medicinal agents based on microbiotic collagenase 'ultra-lisin' |
| EP2133415A1 (en) | 2008-06-11 | 2009-12-16 | Roche Diagnostics GmbH | Growth medium for Clostridium histolyticum without ingredients of mammalian sources |
| WO2012125948A1 (en) * | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Biospecifics Technologies Corp. | Compositions and methods for producing clostridial collagenases |
| US9744138B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-08-29 | Biospecifics Technologies Corp. | Treatment method and product for uterine fibroids using purified collagenase |
| RU2684220C1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-04-04 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Strain clostridium histolyticum - producer of collagenase |
| US10272140B2 (en) | 2014-01-15 | 2019-04-30 | Biospecifics Technologies Corp. | Thermosensitive hydrogel collagenase formulations |
| RU2687973C1 (en) * | 2018-04-03 | 2019-05-17 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Method of producing drug preparation of collalisin®, lyophilizate for preparing solution for local and parenteral application for treating fibroproliferative diseases |
| US11123280B2 (en) | 2017-03-01 | 2021-09-21 | Endo Ventures Limited | Method of assessing and treating cellulite |
| RU2781289C1 (en) * | 2021-04-12 | 2022-10-11 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Method for production of highly purified concentrated preparation with collagenase activity |
| US11473074B2 (en) | 2017-03-28 | 2022-10-18 | Endo Global Aesthetics Limited | Method of producing collagenase |
| US11872267B2 (en) | 2019-10-15 | 2024-01-16 | The Johns Hopkins University | Treatment of uterine fibroids using purified collagenase |
| US11879141B2 (en) | 2012-01-12 | 2024-01-23 | Endo Global Ventures | Nucleic acid molecules encoding clostridium histolyticum collagenase II and methods of producing the same |
-
1999
- 1999-08-16 RU RU99117840A patent/RU2180002C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009002209A1 (en) * | 2007-06-19 | 2008-12-31 | Otkrytoe Akzionernoe Obschestvo 'moscow Committee Of Science And Technologies' | Substance for dermatological medicinal agents based on microbiotic collagenase 'ultra-lisin' |
| EP2133415A1 (en) | 2008-06-11 | 2009-12-16 | Roche Diagnostics GmbH | Growth medium for Clostridium histolyticum without ingredients of mammalian sources |
| US8236356B2 (en) | 2008-06-11 | 2012-08-07 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Growth medium for Clostridium histolyticum |
| WO2012125948A1 (en) * | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Biospecifics Technologies Corp. | Compositions and methods for producing clostridial collagenases |
| US10119131B2 (en) | 2011-03-16 | 2018-11-06 | Biospecifics Technologies Corp. | Compositions and methods for producing clostridial collagenases |
| US11879141B2 (en) | 2012-01-12 | 2024-01-23 | Endo Global Ventures | Nucleic acid molecules encoding clostridium histolyticum collagenase II and methods of producing the same |
| US11975054B2 (en) | 2012-01-12 | 2024-05-07 | Endo Global Ventures | Nucleic acid molecules encoding clostridium histolyticum collagenase I and methods of producing the same |
| US10369110B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-08-06 | Biospecifics Technologies Corporation | Treatment method and product for uterine fibroids using purified collagenase |
| US11857685B2 (en) | 2013-03-15 | 2024-01-02 | Biospecifics Technologies Llc | Treatment method and product for uterine fibroids using purified collagenase |
| US9744138B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-08-29 | Biospecifics Technologies Corp. | Treatment method and product for uterine fibroids using purified collagenase |
| US10272140B2 (en) | 2014-01-15 | 2019-04-30 | Biospecifics Technologies Corp. | Thermosensitive hydrogel collagenase formulations |
| US11123280B2 (en) | 2017-03-01 | 2021-09-21 | Endo Ventures Limited | Method of assessing and treating cellulite |
| US11813347B2 (en) | 2017-03-01 | 2023-11-14 | Endo Ventures Limited | Method of assessing and treating cellulite |
| US11473074B2 (en) | 2017-03-28 | 2022-10-18 | Endo Global Aesthetics Limited | Method of producing collagenase |
| RU2684220C1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-04-04 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Strain clostridium histolyticum - producer of collagenase |
| RU2687973C1 (en) * | 2018-04-03 | 2019-05-17 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Method of producing drug preparation of collalisin®, lyophilizate for preparing solution for local and parenteral application for treating fibroproliferative diseases |
| RU2687973C9 (en) * | 2018-04-03 | 2020-01-23 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Method of producing drug preparation of collalisin®, lyophilizate for preparing solution for local and parenteral application for treating fibroproliferative diseases |
| US11872267B2 (en) | 2019-10-15 | 2024-01-16 | The Johns Hopkins University | Treatment of uterine fibroids using purified collagenase |
| RU2781289C1 (en) * | 2021-04-12 | 2022-10-11 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Method for production of highly purified concentrated preparation with collagenase activity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2180002C2 (en) | Method of collagenase producing | |
| JPH0956394A (en) | Preparation of hyaluronic acid by fermentation using streptococcus | |
| JPS6232893A (en) | Production of hyaluronic acid | |
| CN102864190A (en) | Producing method of gamma-aminobutyric acid | |
| NO159394B (en) | PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF IMMUNOGENIC CAPSULATED POLYOSIDES FROM Capsule Bacteria. | |
| CZ2017537A3 (en) | The strain of Clostridium histolyticum, collagenase prepared using this strain and its use | |
| RU2397247C1 (en) | Lipase biosynthesis method | |
| RU2208637C1 (en) | Method for preparing gene-engineering human insulin | |
| CN107988293B (en) | Fermentation process for improving production level of recombinant human-derived collagen by adjusting pressure | |
| RU2687973C1 (en) | Method of producing drug preparation of collalisin®, lyophilizate for preparing solution for local and parenteral application for treating fibroproliferative diseases | |
| US3686072A (en) | L-asparaginase from erwinia | |
| JPS62289198A (en) | Novel process of producing hyaluronic acid | |
| US3708576A (en) | Novel anti-inflammatory substances and production thereof | |
| JP2898022B2 (en) | Method for producing collagen degrading enzyme | |
| SU883174A1 (en) | Method of preparing milk-coagulating enzymic agent, russulin | |
| KR880002315B1 (en) | Culture method of streptococcus sp. | |
| RU2054479C1 (en) | Method of preparing amylolytic and proteolytic enzyme complex | |
| RU2158302C2 (en) | Nutrient medium for bifidobacterium and lactobacterium culturing | |
| KR880001949B1 (en) | Process for preparing hyaluronic acid | |
| Noble Jr et al. | THE ACTION OF B. DIPHTHERIAE AND SOME RELATED ORGANISMS ON GLUCOSAMINE | |
| SU1514776A1 (en) | Method of producing endo-1,4-beta-mannanase | |
| SU572495A1 (en) | Method for preparing acylaza 1 | |
| SU871525A1 (en) | Method for prepariing supradependent formiatehydrogenase | |
| SU908796A1 (en) | Process for preparing glucoamylase composition | |
| RU1822879C (en) | Method of collagenase preparing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070817 |