RU2179980C2 - Peptide-simulator of human immunodeficiency type-1 virus protein gp41 conservative epitope recognized by virus-neutralizing monoclonal antibody 2f5 (variants) - Google Patents
Peptide-simulator of human immunodeficiency type-1 virus protein gp41 conservative epitope recognized by virus-neutralizing monoclonal antibody 2f5 (variants) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2179980C2 RU2179980C2 RU2000106709/13A RU2000106709A RU2179980C2 RU 2179980 C2 RU2179980 C2 RU 2179980C2 RU 2000106709/13 A RU2000106709/13 A RU 2000106709/13A RU 2000106709 A RU2000106709 A RU 2000106709A RU 2179980 C2 RU2179980 C2 RU 2179980C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- protein
- peptide
- hiv
- amino acid
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии. Конкретно - к получению с помощью фагового дисплея пептидов-имитаторов антигенной детерминанты белка gp41 вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), узнаваемой вируснейтрализующими моноклональными антителами 2F5. The invention relates to biotechnology, genetic and protein engineering. Specifically, to obtain, using the phage display, peptide mimetics of the antigenic determinant of the human immunodeficiency virus type 1 (gp-1) gp41 protein recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies.
Одной из основных проблем при создании эффективных вакцинных препаратов против СПИДа является высокая антигенная вариабельность ВИЧ. Интенсивное разрушение Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности рецептор CD4+, наряду с мощным антительным ответом на структурные белки р24, gpl20 и gp41 способствует появлению и селекции генетических вариантов ВИЧ-1 даже в течение индивидуального инфекционного процесса [I]. При использовании инактивированных цельновирионных ВИЧ-вакцин существует также опасность аутоиммунных процессов вследствие мимикрии структуры вирусного белка gpl20 под структуру иммуноглобулинов [2].One of the main challenges in creating effective AIDS vaccines is the high antigenic variability of HIV. The intense destruction of T-lymphocytes carrying the CD4 + receptor on their surface, along with a powerful antibody response to the structural proteins p24, gpl20 and gp41, promotes the appearance and selection of HIV-1 genetic variants even during an individual infection process [I]. When using inactivated whole-virus HIV vaccines, there is also a danger of autoimmune processes due to the mimicry of the structure of the gpl20 viral protein under the structure of immunoglobulins [2].
Решению проблемы может помочь использование при создании вакцин пептидов, отличающихся по аминокислотной последовательности от антигенных детерминант вирусов, но сохраняющих способность связываться с противовирусными антителами. Такие пептиды являются имитаторами антигенных детерминант. Пептиды-имитаторы могут быть достаточно вырожденными и иметь перекрестную реактивность с антителами к разным изолятам вируса. Вырожденные пептиды могут иметь свойство индуцировать при иммунизации антитела, перекрестно реагирующие с антигенными вариантами одного и того же вируса (явление молекулярной мимикрии). Пептиды, мимикрирующие вируснейтрализующие эпитопы вирусов, по-видимому, будут вызывать наработку протективных антител и могут быть вследствие этого использованы при создании вакцин против ВИЧ и других высоковариабельных патогенов. Например, было показано, что имитаторы HBsAg, селектированные с подтип-специфической сывороткой, при иньекции экспериментальным животным способны индуцировать образование антител, не обладающих специфичностью к подтипам вируса гепатита В [3]. The use of peptides when creating vaccines that differ in amino acid sequence from antigenic determinants of viruses, but retain the ability to bind to antiviral antibodies, can help solve the problem. Such peptides mimic antigenic determinants. Mimetic peptides can be quite degenerate and have cross-reactivity with antibodies to different virus isolates. Degenerate peptides can tend to induce antibodies that cross-react with antigenic variants of the same virus during immunization (the phenomenon of molecular mimicry). Peptides that mimic virus-neutralizing virus epitopes are likely to produce protective antibodies and can therefore be used to create vaccines against HIV and other highly variable pathogens. For example, it was shown that mimics of HBsAg, selected with a subtype-specific serum, during injection, experimental animals are able to induce the formation of antibodies that do not have specificity for hepatitis B virus subtypes [3].
Уникальные возможности для получения пептидов-имитаторов природных антигенов предоставляют фаговые библиотеки пептидов, включающие в себя все возможные пептиды заданной длины, экспонированные в составе одного из поверхностных белков нитчатых бактериофагов. При этом в геноме каждого фага такой библиотеки закодирована последовательность только одного из вариантов пептидов. Отбор пептидов осуществляется с помощью антител определенной специфичности (при получении вакцин это должны быть протективные антитела). При этом интересен тот факт, что на моноклональные антитела (МКА) из фаговой пептидной библиотеки обычно отбирается ряд пептидов, отличающихся по аминокислотному составу от оригинального антигена, но имитирующих его по связыванию. Phage libraries of peptides that include all possible peptides of a given length exposed as part of one of the surface proteins of filamentous bacteriophages provide unique opportunities for producing peptides that mimic natural antigens. Moreover, the sequence of only one of the peptide variants is encoded in the genome of each phage of such a library. Peptides are selected using antibodies of a specific specificity (when receiving vaccines, these must be protective antibodies). At the same time, it is interesting that a number of peptides that differ in amino acid composition from the original antigen but mimic its binding are usually selected for monoclonal antibodies (MCAs) from the phage peptide library.
Хорошим примером является работа Keller с соавторами [4], в которой показано, что пептиды из фаговой пептидной библиотеки, селектированные с МКА против gpl20 вируса иммунодефицита человека, могут индуцировать специфичный гуморальный иммунный ответ на gpl20. A good example is the work of Keller et al. [4], in which it was shown that peptides from the phage peptide library, which were selected with mAbs against human immunodeficiency virus gpl20, can induce a specific humoral immune response to gpl20.
Muster с соавторами впервые локализовал консервативный нейтрализующий эпитоп, узнаваемый МКА 2F5, на эктодомене белка gp41 ВИЧ-1, применив стандартный метод картирования эпитопов. Перекрывающиеся фрагменты эктодомена белка gp41 были проклонированы как пептиды, слитые с глютатион-S-трансферазой. Слитые пептиды, реагирующие с МКА 2F5, затем идентифицировали с помощью иммуноблоттинга. Полученные T.Muster данные предполагают, что аминокислотная последовательность ELDKWA является эпитопом, узнаваемым МКА 2F5 на эктодомене белка gp41 ВИЧ-1. Muster et al. For the first time localized a conservative neutralizing epitope recognized by MCA 2F5 on the ectodomain of HIV-1 gp41 protein using a standard method of epitope mapping. The overlapping fragments of the ectodomain of the gp41 protein were cloned as peptides fused to glutathione S-transferase. Fusion peptides reacting with 2F5 MCA were then identified by immunoblotting. The data obtained by T.Muster suggest that the amino acid sequence of ELDKWA is an epitope recognizable by 2A5 MCA on the ectodomain of HIV-1 gp41 protein.
Известны рекомбинантные конструкции, в которых нуклеотидная последовательность, соответствующая эпитопу МКА 2F5, встроена в состав гена гемагглютинина (НА) вируса гриппа и гена глютатион-S-трансферазы (GST) [5, 6], а также в состав поверхностного антигена вируса гепатита В [7]. Recombinant constructs are known in which the nucleotide sequence corresponding to the MCA 2F5 epitope is integrated into the influenza hemagglutinin (HA) gene and glutathione S-transferase (GST) gene [5, 6], as well as into the surface antigen of hepatitis B virus [ 7].
К существенным недостаткам описанных рекомбинантных конструкций следует отнести низкий уровень экспрессии, сложность культивирования и очистки. К тому же все они используют аминокислотную последовательность нативного эпитопа. Significant disadvantages of the described recombinant constructs include the low level of expression, the complexity of cultivation and purification. In addition, they all use the amino acid sequence of the native epitope.
Технической задачей изобретения является поиск пептидов-имитаторов эпитопа белка gp41 ВИЧ-1, узнаваемого МКА 2F5, с помощью фаговых пептидных библиотек. Данный эпитоп является высококонсервативным для генетически различных изолятов ВИЧ-1 нейтрализующим эпитопом и вследствие этого перспективен в плане создания вакцин [8]. An object of the invention is the search for peptides that mimic the epitope of the HIV gp41 gp41 protein recognized by MCA 2F5 using phage peptide libraries. This epitope is highly conservative for the genetically different isolates of HIV-1 neutralizing epitope and therefore promising in terms of creating vaccines [8].
Поставленная цель достигается путем аффинной селекции из фаговых пептидных библиотек, содержащих десятки миллионов разных пептидов длиной 15 а.о, тех пептидов, которые способны связываться с моноклональными антителами 2F5 (МКА 2F5) к нейтрализующему эпитопу белка gp41 ВИЧ-1. Пептиды в библиотеке экспонированы на поверхности бактериофагов в составе минорного белка оболочки pIII, при этом каждая фаговая частица содержит 5 копий одного пептида [9] . This goal is achieved by affinity selection from phage peptide libraries containing tens of millions of different peptides with a length of 15 a.o., those peptides that are able to bind to 2F5 monoclonal antibodies (2A5 MKA) to the neutralizing epitope of HIV-1 gp41 protein. Peptides in the library are exposed on the surface of bacteriophages as part of the minor membrane protein pIII, with each phage particle containing 5 copies of one peptide [9].
Метод аффинной селекции заключается в следующем. The affinity selection method is as follows.
Биотинилированные моноклональные антитела иммобилизуются на пластиковой поверхности, обработанной стрептавидином, и к ним добавляется фаговая библиотека. После наступления кинетического равновесия несвязавшиеся фаги отмываются буфером, а связавшиеся с антителами фаги элюируются и размножаются для нового цикла селекции. Трех раундов аффинной селекции обычно достаточно для получения обогащенной популяции фагов, содержащих целевые последовательности [10, II]. Для отбора всех вариантов специфичных клонов в первом раунде селекции используют насыщающее по отношению к фаговым частицам количество МКА. Для создания конкуренции между фагами за связывание с МКА и отбора наиболее специфичных вариантов во втором и третьем раундах селекции используют меньшие по отношению к фагам концентрации антител. Обогащение фаговой популяции определяют по увеличению выхода фагов после каждого раунда селекции. Из обогащенной таким образом фаговой библиотеки после 1, 2, 3-го раундов аффинной селекции отбирают индивидуальные фаговые клоны и определяют специфичность их связывания с соответствующими МКА в ИФА. По результатам ИФА отбирают эффективно взаимодействующие с МКА фаги. Аминокислотный состав специфичных к МКА пептидов, расположенных на поверхности фаговых частиц, определяют секвенированием фаговых ДНК по модифицированному методу Сэнгера [12] в кодирующей пептид области. В дальнейшем проводят анализ сходства аминокислотных последовательностей пептидов с последовательностью эпитопа, с которым связывают МКА. Biotinylated monoclonal antibodies are immobilized on a plastic surface treated with streptavidin, and a phage library is added to them. After the onset of kinetic equilibrium, unbound phages are washed with buffer, and phages bound to antibodies are eluted and propagated for a new selection cycle. Three rounds of affinity selection are usually sufficient to obtain an enriched population of phages containing target sequences [10, II]. In order to select all variants of specific clones in the first round of selection, the amount of MCA saturating with respect to phage particles is used. In order to create competition between phages for binding to MABs and to select the most specific variants in the second and third rounds of selection, lower antibody concentrations relative to phages are used. Enrichment of the phage population is determined by the increase in the output of phages after each round of selection. After the 1st, 2nd, 3rd rounds of affinity selection, individual phage clones are selected from the phage library enriched in this way and the specificity of their binding to the corresponding MABs in ELISA is determined. Based on the results of ELISA, phages efficiently interacting with MCA are selected. The amino acid composition of MCA-specific peptides located on the surface of phage particles is determined by phage DNA sequencing according to the modified Sanger method [12] in the region encoding the peptide. Subsequently, an analysis is carried out of the similarity of the amino acid sequences of the peptides with the sequence of the epitope to which MCA is bound.
Практическое использование
Для практического использования селектированные нами пептиды-миметики можно получать химическим синтезом или, что более экономично, с использованием рекомбинантной технологии в составе различных белков-носителей. Использование в качестве белка-носителя экспрессионного вектора на основе нитчатых бактериофагов (M13,fd), позволяющего экспонировать чужеродные пептиды на поверхности вириона, является наиболее эффективным и практичным:
- фаг, размножаясь в E.Coli, выходит в культуральную среду, не лизируя клетку хозяина, что упрощает процедуру его очистки;
- фаг накапливается в культуральной среде в концентрации 1012 вирионов на миллилитр, поэтому его легко наработать в больших количествах;
- конформация пептида, отобранного в составе фага, является оптимальной и при использовании других белков-носителей может сильно меняться;
- при встраивании пептида в поверхностный белок фага (2700 копий на вирион) получается очень эффективная мультимерная система презентации, позволяющая преодолеть проблему слабой иммуногенности пептидов. По своей эффективности такая система часто превосходит такие системы, как НВс-антиген.Practical use
For practical use, the mimetic peptides selected by us can be obtained by chemical synthesis or, more economically, using recombinant technology in various carrier proteins. The use of an expression vector based on filamentous bacteriophages (M13, fd), which allows exposing foreign peptides on the surface of the virion, is the most effective and practical:
- the phage, multiplying in E. Coli, enters the culture medium without lysing the host cell, which simplifies the procedure for its purification;
- the phage accumulates in the culture medium at a concentration of 10 12 virions per milliliter, so it is easy to accumulate in large quantities;
- the conformation of the peptide selected as part of the phage is optimal and when using other carrier proteins can vary greatly;
- when a peptide is inserted into a surface phage protein (2700 copies per virion), a very effective multimeric presentation system is obtained, which allows overcoming the problem of weak immunogenicity of peptides. In its effectiveness, such a system often surpasses systems such as the HBc antigen.
Сущность изобретения заключается в том, что селектированные из фаговой пептидной библиотеки пептиды обладают свойством связываться с нейтрализующими ВИЧ-1 МКА 2F5, но отличаются по аминокислотному составу от нативного эпитопа (см. фиг.3). The essence of the invention lies in the fact that peptides selected from a phage peptide library have the ability to bind to HIV-1 neutralizing MCA 2F5, but differ in amino acid composition from the native epitope (see figure 3).
Таким образом, впервые получены пептиды-имитаторы консервативного эпитопа белка gp41 ВИЧ-1, узнаваемого вируснейтрализующими антителами 2F5. Пептиды экспонированы на поверхности нитчатых бактериофагов в составе минорного белка оболочки pIII, при этом каждая фаговая частица содержит 5 копий одного пептида. Thus, for the first time, mimetic peptides of the conserved epitope of HIV-1 gp41 protein recognized by 2F5 virus-neutralizing antibodies were obtained. Peptides are exposed on the surface of filamentous bacteriophages as part of the minor membrane protein pIII, with each phage particle containing 5 copies of one peptide.
Изобретение иллюстрируется следующими фигурами. The invention is illustrated by the following figures.
Фиг. 1. Схема аффинной селекции. FIG. 1. Scheme of affinity selection.
Фиг. 2. Результаты взаимодействия фаговых клонов в ИФА. В качестве отрицательного контроля взят фаг fuse2, который не экспонирует рандомизованный пептид. FIG. 2. The results of the interaction of phage clones in ELISA. The fuse2 phage, which does not exhibit a randomized peptide, was taken as a negative control.
Фиг. 3. Сравнение аминокислотных последовательностей отобранных клонов с последовательностью белка gpl60 ВИЧ-1 (ВН10). Выделены совпадающие аминокислотные остатки. FIG. 3. Comparison of amino acid sequences of selected clones with the sequence of the gpl60 HIV-1 protein (BH10). Matching amino acid residues are highlighted.
Для лучшего понимания сущности предлагаемого изобретения ниже следуют примеры его осуществления. For a better understanding of the essence of the invention, the following are examples of its implementation.
Пример 1. Способ проведения аффинной селекции пептидов, имитирующих высококонсервативный эпитоп белка gp41 ВИЧ-1, узнаваемый моноклональными антителами 2F5. Example 1. The method of affinity selection of peptides that mimic the highly conserved epitope of the HIV-1 gp41 protein, recognized by 2F5 monoclonal antibodies.
Первый раунд аффинной селекции фаговой библиотеки проводят по следующей схеме [10] . На пластиковую чашку Петри диаметром 35 мм наносят 900 мкл дистиллированной воды и 100 мкл 1М NaHCO3, pH 8.6, добавлют 10 мкл водного стрептавидина (1мг/мл). Чашку Петри инкубируют ночь при 4oC, сливают стрептавидин и заливают 1 мл блокирующего раствора (0,1М NaHCO3, 5 мг/мл BSA, 0,1 мкг/мл стрептавидина, 0,02% азида натрия), инкубируют чашку при 4oC в течение 1 ч. Отмывают чашку 6 раз буфером TBS/Tween (50мМ трис-HCl, рН7.5, Tween-20 0,5% v/v) и добавляют 400 мкл TBS/Tween, содержащий BSA (1 мг/мл) и 0,02% азид натрия, биотинилированные антитела (конечная концентрация в растворе 250нМ), инкубируют чашку в течение 2 ч при 4oC, затем добавляют 4 мкл 10мМ биотина, выдерживают при 4oC в течение 1ч, отмывают чашку 6 раз с TBS/Tween, наносят 400 мкл TBS/Tween, 4 мкл 10мМ биотина и 5 мкл исходной фаговой библиотеки (5•1011 вирионов). Чашку инкубируют при 4oC в течение 4 ч, отмывают 10 раз TBS/Tween, наносят 400 мкл элюирующего буфера (О, IN HC1, рН доводится глицином до 2.2, 1 мг/мл BSA), инкубируют 10 мин, элюат переносят в пластиковые пробирки, содержащие 75 мкл 1М Трис-НС1 рН 9.1 для нейтрализации кислоты, конечный рН раствора (7-8.5) проверяют индикаторной бумагой. Амплификацию фагового элюата проводят добавлением суспензии элюированных фагов к аликвоте клеток Escherichia coli K91Kan, выращенных на ТВ-среде (1,2% бактотриптон, 2,4% дрожжевой экстракт, 0,5% глицерин, 1,7мМ КН2РO4, 7,2мМ К2 НРO4). Фаги выращивают в LB среде [10]. Фаги титруют с использованием клеток K91Kan, выращенных на ТВ-среде, с последующим высевом на чашки с агаром, содержащим канамицин (100 мкг/мл) и тетрациклин (40 мкг/мл) и подсчетом выросших колоний. Титр фагов определют по числу колоний (трансдуцирующих единиц (TU)) по G.P.Smith [10]. Количество фаговых частиц рассчитывают по формуле 1 TU = 20 вирионов. Второй и третий раунды аффинной селекции проводят следующим образом. В пластиковую пробирку вносят 100 мкл фаговой суспензии (1011 TU), биотинилированных МКА (конечная концентрация антител во втором раунде составлет 100нМ, в третьем - 0,1нМ), инкубируют в течение ночи при 4oC, добавляют 400 мкл TBS/Tween и немедленно наносят на стрептавидин-обработанную чашку (как описано выше), инкубируют 10 мин при комнатной температуре. Чашку отмывают TBS/Tween, связавшиеся фаги элюируют, титруют и амплифицируют, как описано выше. После третьего раунда селекции получают индивидуальные фаговые колонии, которые используют для наработки одноцепочечной ДНК и фагов для имммуноферментного анализа (ИФА). Определение последовательности ДНК проводят по модифицированному методу Сэнгера [12]. В качестве праймера используют олигонуклеотид 5'-TGAATTTTCTGTATGAGG [10].The first round of affinity selection of the phage library is carried out according to the following scheme [10]. 900 μl of distilled water are applied to a plastic Petri dish with a diameter of 35 mm and 100 μl of 1M NaHCO 3 , pH 8.6, 10 μl of aqueous streptavidin (1 mg / ml) are added. The Petri dish is incubated overnight at 4 ° C., streptavidin is drained and 1 ml of blocking solution is poured (0.1 M NaHCO 3 , 5 mg / ml BSA, 0.1 μg / ml streptavidin, 0.02% sodium azide), the cup is incubated at 4 o C for 1 h. Wash the dish 6 times with TBS / Tween buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, Tween-20 0.5% v / v) and add 400 μl TBS / Tween containing BSA (1 mg / ml) and 0.02% sodium azide, biotinylated antibodies (final concentration in solution 250nM), incubate the dish for 2 hours at 4 ° C, then add 4 μl of 10mM biotin, incubate at 4 ° C for 1 h, wash the dish 6 once with TBS / Tween, apply 400 μl TBS / Tween, 4 μl 10mM biotin and 5 μl of the original phage library (5 • 10 11 virions). The cup is incubated at 4 ° C for 4 hours, washed 10 times with TBS / Tween, 400 μl of elution buffer is applied (O, IN HC1, pH is adjusted with glycine to 2.2, 1 mg / ml BSA), incubated for 10 minutes, the eluate is transferred into plastic tubes containing 75 μl of 1M Tris-HC1 pH 9.1 to neutralize the acid, the final pH of the solution (7-8.5) is checked with indicator paper. Amplification of phage eluate is carried out by adding a suspension of eluted phages to an aliquot of Escherichia coli K91Kan cells grown on TV medium (1.2% bactotrypton, 2.4% yeast extract, 0.5% glycerin, 1.7 mM KH 2 PO 4 , 7, 2 mM K 2 HPO 4 ). Phages are grown in LB medium [10]. Phages are titrated using K91Kan cells grown on TV medium, followed by plating on agar plates containing kanamycin (100 μg / ml) and tetracycline (40 μg / ml) and counting the grown colonies. The phage titer is determined by the number of colonies (transducing units (TU)) by GPSmith [10]. The number of phage particles is calculated by the
Пример 2. Анализ связывания пептидов, имитирующих высококонсервативный эпитоп белка gp41 ВИЧ-1, с моноклональными антителами 2F5 методом ИФА
Подтверждение специфичности связывания выделенных фагов с МКА проводят методом непрямого иммуноферментного анализа [11].Example 2. The analysis of the binding of peptides that mimic the highly conserved epitope of the gp41 protein of HIV-1, with 2F5 monoclonal antibodies by ELISA
Confirmation of the specificity of binding of the isolated phages to MAB is carried out by the method of indirect enzyme immunoassay [11].
На 96-луночный планшет для ИФА (ВНИИ Медбиополимер) наносят по 50 мкл в лунку фагового препарата (1010вирионов) и инкубируют в течение ночи в холодильнике. После 3-кратной промывки PBS/Tween в каждую лунку добавляют по 150 мкл блокирующего буфера (1% раствор казеина в PBS), блокируют неспецифические места сорбции на пластике 1 ч при 37oС, промывают 3 раза PBS/Tween и добавляют по 1 мкг биотинилированных МКА в объеме 50 мкл. После инкубации в течение суток в холодильнике промывают 3 раза PBS/Tween и добавляют по 50 мкл разбавленного в 500 раз (в блокирующем буфере) конъюгата стрептавидин-пероксидаза хрена. Реакцию проводят 30 мин при 37oС, промывают планшет 6 раз PBS/Tween и добавляют по 50 мкл ЦФБ с ОФД. Выдерживают планшет 20 мин в темноте при комнатной температуре и останавливают реакцию добавлением 50 мкл 2Н раствора серной кислоты. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре Multiscan (Labsystem).On a 96-well ELISA plate (VNII Medbiopolymer), 50 μl per well of phage preparation (10 10 virions) are applied and incubated overnight in the refrigerator. After washing 3 times with PBS / Tween, 150 μl blocking buffer (1% casein solution in PBS) was added to each well, non-specific sites of sorption on plastic were blocked for 1 h at 37 ° C, washed 3 times with PBS / Tween and 1 μg was added biotinylated MCA in a volume of 50 μl. After incubation for one day in the refrigerator, wash 3 times with PBS / Tween and add 50 μl of horseradish streptavidin-peroxidase conjugate diluted 500 times (in blocking buffer). The reaction is carried out for 30 minutes at 37 ° C. , the plate is washed 6 times with PBS / Tween, and 50 μl of CPB with RPD are added. The plate is held for 20 minutes in the dark at room temperature and the reaction is stopped by adding 50 μl of a 2N sulfuric acid solution. The optical density is measured on a Multiscan spectrophotometer (Labsystem).
Превышение значений оптической плотности над контролем в несколько раз позволяет считать, что отобраные фаговые клоны действительно эффективно взаимодействуют с МКА и имитируют узнаваемые МКА эпитопы белка gp41 BИЧ-1. The excess of optical density values over the control by several times suggests that the selected phage clones really effectively interact with MABs and mimic the recognizable MAB epitopes of the gp41 HIV-1 protein.
Таким образом, впервые получены пептиды-имитаторы консервативного эпитопа белка gp41 ВИЧ-1, узнаваемого вируснейтрализующими антителами 2F5. Thus, for the first time, mimetic peptides of the conserved epitope of HIV-1 gp41 protein recognized by 2F5 virus-neutralizing antibodies were obtained.
Литература
1. Coffin J.M.// Science.-1995.-Vol.267.-P.483-489.Literature
1. Coffin JM // Science.-1995.-Vol.267.-P.483-489.
2. Allan H. , Gerstenm M. J., Salk P. L., Salk J.// Immunol. Today., 1993., Vol. 14., p. 200-202. 2. Allan H., Gerstenm M. J., Salk P. L., Salk J. // Immunol. Today., 1993., Vol. 14., p. 200-202.
3. Delmastro P., Meola A., Monaci P., Cortese R., Golfre G. //Vaccine., 1997.,Aug;15(ll),p. 1276-1285. 3. Delmastro P., Meola A., Monaci P., Cortese R., Golfre G. // Vaccine., 1997., Aug; 15 (ll), p. 1276-1285.
4. Keller P.M., Arnold B.A., Show A.R., Tolman R.L., Van-Middlesworth F. , Bondy S. , Rusiecki V.K, Koening S., et al.// Virology, 1993, V. 193, p. 709-716. 4. Keller P.M., Arnold B.A., Show A.R., Tolman R.L., Van-Middlesworth F., Bondy S., Rusiecki V.K, Koening S., et al. // Virology, 1993, V. 193, p. 709-716.
5. Muster Т., Steindl F., Purtscher M., Trkola A., Klima A., Himmler G., Ruker F. and Katinger H. // J. Virol., 1993, V. 67, p.6642-6647. 5. Muster, T., Steindl F., Purtscher M., Trkola A., Klima A., Himmler G., Ruker F. and Katinger H. // J. Virol., 1993, V. 67, p.6642- 6647.
6. Muster Т., R. Guinea, A. Trkola, M. Purtscher, A. Kiima, F. Steindl, P.Palese and H. Katinger. // J. Virol. 1994, V. 68, p.4031-4034. 6. Muster, T., R. Guinea, A. Trkola, M. Purtscher, A. Kiima, F. Steindl, P. Palese and H. Katinger. // J. Virol. 1994, V. 68, p. 4031-4034.
7. Eckhart L., Raffelsberger W., Ferco В., Klima A., Purtscher M., Katinger H., Ruker F.// J. General Virol., 1996., V. 77, p. 2001-2008. 7. Eckhart L., Raffelsberger W., Ferco B., Klima A., Purtscher M., Katinger H., Ruker F. // J. General Virol., 1996., V. 77, p. 2001-2008.
8. Buchacher A., Predl R., Strutzenberger К., Trkola A., Purtscher M et al.//AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1994, V. 10, 359-369. 8. Buchacher A., Predl R., Strutzenberger K., Trkola A., Purtscher M et al. // AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1994, V. 10, 359-369.
9. Scott J.K., Smith G.P. Searching for peptide ligands with an epitope library.// Science., 1990., V. 249, p. 386-390. 9. Scott J.K., Smith G.P. Searching for peptide ligands with an epitope library.// Science., 1990., V. 249, p. 386-390.
10. G.P. Smith Cloning in fuse vectors (laboratory manual)//1992. 10. G.P. Smith Cloning in fuse vectors (laboratory manual) // 1992.
11. Motti с., Nuzzo M., Meola A., Galfre G., Felici F., Cortese R., Nicosia M. And Monaci P. //Gene, 1994, V.146, P.191-198. 11. Motti S., Nuzzo M., Meola A., Galfre G., Felici F., Cortese R., Nicosia M. And Monaci P. // Gene, 1994, V.146, P.191-198.
12. Kretz K., Callen W., Hedden V. Cycle sequencing// Methods of Enzimology. V. 154. P. 527-536. 12. Kretz K., Callen W., Hedden V. Cycle sequencing // Methods of Enzimology. V. 154. P. 527-536.
Claims (12)
YFCYANCDKWVLKGD.1. The peptide is a mimic of the conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognizable by neutralizing 2F5 monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
YFCYANCDKWVLKGD.
GAIYGSPPXDRWSAV.2. A peptide imitator of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
GAIYGSPPXDRWSAV.
RDWSFDRWSLSEFWL.3. A peptide mimic of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
RDWSFDRWSLSEFWL.
SSGFRDAFRGWDGSA.4. A peptide mimic of a conserved epitope of the HIV-1 gp41 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
SSGFRDAFRGWDGSA.
RNVPPIFNDVYWIAF.5. The peptide is a mimic of the conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
RNVPPIFNDVYWIAF.
VKLSLDRWPPSHLT.6. A peptide mimic of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
VKLSLDRWPPSHLT.
YLFYPSVTFDRWGYL.7. A peptide mimic of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
YLFYPSVTFDRWGYL.
VTLDRWHAVTARPFG.8. A peptide mimic of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
VTLDRWHAVTARPFG.
GRSFLDRWSKVPRDP.9. A peptide mimic of a conserved epitope of the HIV-1 gp41 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
GRSFLDRWSKVPRDP.
GNPGLERWAPRPLFA.10. A peptide mimic of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
GNPGLERWAPRPLFA.
WGHIDADRWAGIVGS.11. A peptide mimic of a conserved epitope of the HIV gp41 gp41 protein recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
WGHIDADRWAGIVGS.
LGRANLSFLESLGFF.12. The mimic peptide of a conserved epitope of the gp41 HIV-1 protein, recognized by 2F5 virus-neutralizing monoclonal antibodies, having the following amino acid sequence:
LGRANLSFLESLGFF.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000106709/13A RU2179980C2 (en) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | Peptide-simulator of human immunodeficiency type-1 virus protein gp41 conservative epitope recognized by virus-neutralizing monoclonal antibody 2f5 (variants) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000106709/13A RU2179980C2 (en) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | Peptide-simulator of human immunodeficiency type-1 virus protein gp41 conservative epitope recognized by virus-neutralizing monoclonal antibody 2f5 (variants) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000106709A RU2000106709A (en) | 2002-01-27 |
| RU2179980C2 true RU2179980C2 (en) | 2002-02-27 |
Family
ID=20232037
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000106709/13A RU2179980C2 (en) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | Peptide-simulator of human immunodeficiency type-1 virus protein gp41 conservative epitope recognized by virus-neutralizing monoclonal antibody 2f5 (variants) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2179980C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013110790A1 (en) * | 2012-01-26 | 2013-08-01 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Vaccine compositions for hiv prevention and treatment |
-
2000
- 2000-03-20 RU RU2000106709/13A patent/RU2179980C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013110790A1 (en) * | 2012-01-26 | 2013-08-01 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Vaccine compositions for hiv prevention and treatment |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Irving et al. | Random-peptide libraries and antigen-fragment libraries for epitope mapping and the development of vaccines and diagnostics | |
| Emini et al. | Priming for and induction of anti-poliovirus neutralizing antibodies by synthetic peptides | |
| Nelson et al. | An affinity-enhanced neutralizing antibody against the membrane-proximal external region of human immunodeficiency virus type 1 gp41 recognizes an epitope between those of 2F5 and 4E10 | |
| JP2023533228A (en) | Stabilized coronavirus spike (S) protein immunogens and related vaccines | |
| Lerner | Tapping the immunological repertoire to produce antibodies of predetermined specificity | |
| Zolla-Pazner et al. | The cross-clade neutralizing activity of a human monoclonal antibody is determined by the GPGR V3 motif of HIV type 1 | |
| EP0570357B1 (en) | Peptides that induce antibodies which neutralize genetically divergent HIV-1 isolates | |
| Perham et al. | Engineering a peptide epitope display system on filamentous bacteriophage | |
| Lazdina et al. | Molecular basis for the interaction of the hepatitis B virus core antigen with the surface immunoglobulin receptor on naive B cells | |
| Arnold et al. | Broad neutralization of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) elicited from human rhinoviruses that display the HIV-1 gp41 ELDKWA epitope | |
| Cleveland et al. | Immunogenic and antigenic dominance of a nonneutralizing epitope over a highly conserved neutralizing epitope in the gp41 envelope glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1: its deletion leads to a strong neutralizing response | |
| Tan et al. | Phage display creates innovative applications to combat hepatitis B virus | |
| Jolivet‐Reynaud et al. | Localization of hepatitis B surface antigen epitopes present on variants and specifically recognised by anti‐hepatitis B surface antigen monoclonal antibodies | |
| Pereboeva et al. | Identification of antigenic sites on three hepatitis C virus proteins using phage‐displayed peptide libraries | |
| Yasuko et al. | Expression of an immunogenic region of HIV by a filamentous bacteriophage vector | |
| Resnick et al. | Chimeras from a human rhinovirus 14-human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) V3 loop seroprevalence library induce neutralizing responses against HIV-1 | |
| Jolivet-Reynaud et al. | Specificities of multiple sclerosis cerebrospinal fluid and serum antibodies against mimotopes | |
| Waffo et al. | Surface Engineering of Recombinant RNA Coliphage Q? to Display gp41 MembraneProximal External-Region Epitopes from HIV-1 | |
| RU2179980C2 (en) | Peptide-simulator of human immunodeficiency type-1 virus protein gp41 conservative epitope recognized by virus-neutralizing monoclonal antibody 2f5 (variants) | |
| Eshaghi et al. | Identification of epitopes in the nucleocapsid protein of Nipah virus using a linear phage‐displayed random peptide library | |
| RU2184780C2 (en) | Peptide-simulator of protein gp120 hiv-1 epitope | |
| Chassot et al. | Fine mapping of neutralization epitopes on duck hepatitis B virus (DHBV) pre-S protein using monoclonal antibodies and overlapping peptides | |
| Hariharan et al. | Analysis of the cross-reactive anti-gp120 antibody population in human immunodeficiency virus-infected asymptomatic individuals | |
| Sibille et al. | A FIV epitope defined by a phage peptide library screened with a monoclonal anti-FIV antibody | |
| JP2017141291A (en) | Antibody recognizing arbitrarily designed epitope of three or more amino acid residues in peptide and method of generating thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040321 |