RU2179315C1 - Method to determine functional body state by blood resistance degree to acidic hemolysis - Google Patents
Method to determine functional body state by blood resistance degree to acidic hemolysis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2179315C1 RU2179315C1 RU2000122001/14A RU2000122001A RU2179315C1 RU 2179315 C1 RU2179315 C1 RU 2179315C1 RU 2000122001/14 A RU2000122001/14 A RU 2000122001/14A RU 2000122001 A RU2000122001 A RU 2000122001A RU 2179315 C1 RU2179315 C1 RU 2179315C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemolysis
- sample
- kinetics
- parts
- parameters
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии и медицине, может применяться в экологической физиологии человека и животных, ветеринарной и клинической экспресс-диагностике. The invention relates to biology and medicine, can be used in the ecological physiology of humans and animals, veterinary and clinical rapid diagnostics.
Известны способы определения осмотического, теплового и химического гемолиза изолированных эритроцитов и цельной крови с добавкой антикоагулянтов с целью диагностики (а. с. СССР N1097949, G 01 N 33/48, опубл. 15.06.84, Бюл. N 22; N 1250952, G 01 N 33/48, опубл. 15.08.86, Бюл. N 30; N 1411669, G 01 N 33/48, опубл. 23.07.88, Бюл. N 27; N 1469464, G 01 N 33/49, опубл. 30.03.89, Бюл. N 12 и N 1647403, G 01 N 33/49, опубл. 07.05.91, Бюл. N 17), которые включают разбавление образцов гипо- или изотоническими растворами хлорида натрия, инкубацию проб в присутствии гемолитиков, периодическое измерение убыли их светорассеяния при длинах волн 670-750 нм, против холостых или полностью гемолизированных проб и последующие расчеты относительных скоростей гемолиза в те же отрезки времени. Однако все они требуют применения рядов пробирок с разными концентрациями гемолитиков, повышенного расхода крови и реагентов, раздельных затрат времени на выделение эритроцитов, регистрацию процесса, нередко с помощью технически сложных устройств, последующих расчетов и построения графиков гемолиза (эритрограмм) для полуколичественной оценки избранного типа резистентности. Поэтому указанные способы трудоемки и пригодны для характеристики свойств эритроцитов или крови, но не организма. Тем более они неприемлемы для популяционных обследований людей и диких животных, особенно мелких птиц и млекопитающих. Known methods for determining the osmotic, thermal and chemical hemolysis of isolated red blood cells and whole blood with the addition of anticoagulants for the purpose of diagnosis (A.S. USSR N1097949, G 01
Наиболее близок предлагаемому изобретению "Способ определения индивидуальной чувствительности к гемосорбции при ишемической болезни сердца" (Патент РФ N 2007192, A 61 М 1/36, опубл. 15.02.94, Бюл. N 3). При его осуществлении разводят физиологическим раствором 1-2 капли капиллярной крови до объема 1,5 мл и оптической плотности суспензии 0,7. Полученную взвесь смешивают в термостатированной кювете спектрофотометра с равным объемом 0,04 н. соляной кислоты, регистрируя по секундомеру через каждые 30 с снижение величин оптической плотности. По результатам регистрации рассчитывают относительное содержание фракций эритроцитов с низкой и пониженной (до 180 с), средней (180-270 с) и высокой (более 270 с) устойчивостью к кислоте. Индекс резистентности, служащий критерием эффективности лечения, находят по процентному соотношению относительных количеств эритроцитов с низкой и пониженной устойчивостью и эритроцитов со средней и высокой устойчивостью. Closest to the proposed invention "A method for determining individual sensitivity to hemosorption in coronary heart disease" (RF Patent N 2007192, A 61
К недостаткам данного способа относятся: невозможность длительного хранения разбавленных растворов хлорида натрия и соляной кислоты, которые быстро теряют исходные свойства из-за поглощения атмосферного аммиака, что вынуждает пренебрегать возможным искажением результатов анализа, либо готовить свежие растворы перед каждой серией определений; приблизительность объемов крови, физиологического раствора и соляной кислоты, неприемлемых для количественного определения показателей; дискретная регистрация гемолиза через относительно большие интервалы времени, препятствующая детализации процесса; неизбежность последующих расчетов, повышающих трудоемкость и длительность анализа; условность выражения результатов в относительных единицах графика и предложенных индексов, которые не интерпретируются в обычные диагностические показатели, снижая информативность анализа; непригодность этой громоздкой и трудоемкой процедуры для экспресс-диагностики морфофункционального состояния организма. The disadvantages of this method include: the impossibility of long-term storage of dilute solutions of sodium chloride and hydrochloric acid, which quickly lose their original properties due to absorption of atmospheric ammonia, which forces one to neglect the possible distortion of the analysis results, or to prepare fresh solutions before each series of determinations; the approximation of blood volumes, saline and hydrochloric acid, unacceptable for the quantification of indicators; discrete registration of hemolysis at relatively large time intervals, which impedes the process details; the inevitability of subsequent calculations, increasing the complexity and duration of the analysis; the conditionality of expressing the results in relative units of the graph and the proposed indices, which are not interpreted in the usual diagnostic indicators, reducing the information content of the analysis; unsuitability of this cumbersome and time-consuming procedure for rapid diagnosis of the morphofunctional state of the body.
Задачей предлагаемого способа является повышение надежности и информативности анализа при одновременном снижении его трудоемкости, за счет стандартизации условий проведения и автоматизации большинства операций, включая фоторегистрацию гемолиза, построение эритрограмм, измерение количества эритроцитов и параметров кинетики гемолиза, а также расчеты количественных показателей, обеспечивающих экспресс-диагностику функционального состояния организмов людей и животных и их популяций. The objective of the proposed method is to increase the reliability and information content of the analysis while reducing its complexity, due to standardization of the conditions for the implementation and automation of most operations, including photographic recording of hemolysis, building red blood cells, measuring the number of red blood cells and hemolysis kinetics parameters, as well as calculating quantitative indicators that provide rapid diagnostics functional state of organisms of humans and animals and their populations.
Поставленная задача достигается тем, что при проведении способа определения функционального состояния организма по степени резистентности крови к кислотному гемолизу, включающего разведение пробы крови изотоническим раствором хлорида натрия, дискретную фоторегистрацию убыли оптической плотности до достижения ее постоянного значения под действием соляной кислоты, математическую обработку полученных данных и определение по ее результатам фракций крови с различной кислотной резистентностью, предлагается разводить пробу крови в 2001 раз изотоническим раствором хлорида натрия со значением pH 7,4 и брать из полученной разбавленной пробы крови две равные части, одну из которых инкубировать с добавкой пропранолола, а другую помещать в кювету фотометра, определять ее исходную оптическую плотность и, добавив в нее раствор соляной кислоты, проводить дискретную регистрацию значений оптической плотности в процессе автоматической регистрации кинетики кислотного гемолиза, затем в кювету помещать проинкубированную с пропранололом вторую часть пробы, определять ее исходную оптическую плотность и, добавив в нее раствор соляной кислоты, также выполнять регистрацию кинетики кислотного гемолиза, при этом регистрацию значений оптической плотности обеих частей пробы выполнять в автоматическом режиме с дискретностью в одну секунду, с введением данных в компьютер, их обработкой с помощью программного обеспечения, занесением результатов обработки в базу данных и их представлением в виде прямых и дифференцированных графиков кинетики кислотного гемолиза первой и второй частей пробы, по которым определять фракции эритроцитов с различной кислотной резистентностью и регистрировать параметры кинетики гемолиза, проводить их обработку с помощью программного обеспечения и вводить результаты обработки в базу данных и подпрограмму экспертной оценки сравнения полученных величин показателей с нормой. The problem is achieved by the fact that when carrying out a method for determining the functional state of an organism by the degree of blood resistance to acid hemolysis, including diluting a blood sample with an isotonic solution of sodium chloride, discrete photo-recording of optical density loss until it reaches a constant value under the influence of hydrochloric acid, mathematical processing of the data obtained and determination of blood fractions with various acid resistance by its results; it is proposed to breed a blood sample in 2001 az isotonic sodium chloride solution with a pH value of 7.4 and take two equal parts from the diluted blood sample, one of which is incubated with propranolol and the other is placed in the cuvette of the photometer, its initial absorbance is determined and hydrochloric acid is added to it , carry out discrete registration of optical density values in the process of automatic registration of the kinetics of acid hemolysis, then place the second part of the sample incubated with propranolol in the cuvette, determine its initial opt density and, adding hydrochloric acid solution to it, also carry out registration of the kinetics of acid hemolysis, while recording the optical density of both parts of the sample in automatic mode with a one-second increment, entering data into a computer and processing it using software, by entering the processing results into the database and presenting them in the form of direct and differentiated graphs of the kinetics of acid hemolysis of the first and second parts of the sample, by which to determine the eri fractions ROCIT with various acid resistant and record the kinetics parameters of hemolysis, conduct their processing with the software and enter the processing results into the database and subroutine Defect comparing the indicator values with norm.
При этом кислотный гемолиз обеих частей пробы проводить 0,1 н. раствором соляной кислоты в соотношении 1:20 к исходному объему. In this case, acid hemolysis of both parts of the sample is carried out 0.1 n. a solution of hydrochloric acid in a ratio of 1:20 to the original volume.
Кроме того, при определении исходной оптической плотности обеих частей пробы, вводить подпрограмму с калибровочным графиком и определять абсолютное содержание эритроцитов в крови, а при дискретной регистрации значений оптической плотности обеих частей проб вводить подпрограмму с калибровочным графиком и определять абсолютное и относительное содержание эритроцитов во фракциях с различной кислотной резистентностью. In addition, when determining the initial optical density of both parts of the sample, enter a subprogram with a calibration graph and determine the absolute content of red blood cells in the blood, and when discrete recording the values of the optical density of both parts of the samples, enter a subprogram with a calibration graph and determine the absolute and relative content of red blood cells in fractions with different acid resistance.
Также при регистрации параметров кинетики кислотного гемолиза вводить подпрограмму и определять по прямым и дифференциальным графикам обеих частей пробы такие стабильные параметры кинетики, как: время начала и окончания гемолиза, его продолжительность, количества фракций эритроцитов, максимальные скорости гемолиза каждой фракции, время их развития и процентные доли на графике гемолиза. Also, when registering the parameters of the kinetics of acid hemolysis, enter a subroutine and determine from the direct and differential graphs of both parts of the sample such stable kinetics parameters as: the time of the beginning and end of hemolysis, its duration, the number of erythrocyte fractions, the maximum hemolysis rates of each fraction, the time of their development and percentage shares on the hemolysis plot.
При регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей пробы вводить подпрограмму и определять лабильные параметры кинетики гемолиза путем расчета разностей стабильных параметров кинетики гемолиза в двух частях пробы. When registering the stable parameters of the hemolysis kinetics of two parts of the sample, enter a subroutine and determine the labile parameters of the hemolysis kinetics by calculating the differences between the stable parameters of the hemolysis kinetics in two parts of the sample.
Кроме того, при регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей пробы вводить подпрограмму и рассчитывать гематологические показатели пробы крови. In addition, when registering stable parameters of the hemolysis kinetics of two parts of the sample, enter a subroutine and calculate the hematological parameters of the blood sample.
Также при графическом представлении кинетики гемолиза вводить подпрограмму и определять относительный сдвиг прямых графиков кислотного гемолиза двух частей пробы, по которым рассчитывать индекс свободных β2-адренорецепторов на мембранах эритроцитов.Also, in a graphical representation of the hemolysis kinetics, enter a subroutine and determine the relative shift of the direct graphs of acid hemolysis of two parts of the sample, from which to calculate the index of free β 2 -adrenoreceptors on erythrocyte membranes.
При регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей пробы вводить подпрограмму и рассчитывать концентрации в плазме тиротропного гормона гипофиза, а также тетра- и трийодтиронинов щитовидной железы. When registering the stable parameters of the hemolysis kinetics of two parts of the sample, enter a subroutine and calculate the plasma concentrations of the thyrotropic hormone of the pituitary gland, as well as the tetra- and triiodothyronines of the thyroid gland.
Кроме того, в отдельных случаях проводить повторные анализы проб крови, регистрируя динамику изменения их показателей. In addition, in some cases, re-analyze blood samples, recording the dynamics of changes in their indicators.
Стандартизация условий проведения анализа, позволяющая автоматизировать процесс, достигается точным дозированием крови и реагентов и постоянной величиной pH раствора хлорида натрия, делающей анализ независимым от pH образца крови. Применение 0,1 н. раствора соляной кислоты как гемолитика допускает его длительное хранение, а добавки в объеме 1/20 от разбавленной части пробы оптимизируют время гемолиза (для эритроцитов человека 250-350 секунд) и позволяют обойтись без перемешивания проб. Разведение проб крови в 2001 раз вводит концентрацию эритроцитов в них, в пределы линейной зависимости с ее оптической плотностью, что позволяет применить калибровочный график и с его помощью определять в пробах крови количество эритроцитов. Повторение анализа после инкубации части разбавленной крови с пропранололом (обзиданом) позволяет сравнивать исходную резистентность образца с имитацией in vitro его состояния при стрессе. Standardization of the conditions for the analysis, which allows to automate the process, is achieved by accurate dosing of blood and reagents and a constant pH of a solution of sodium chloride, making the analysis independent of the pH of the blood sample. Use 0.1 n. A solution of hydrochloric acid as a hemolytic allows its long-term storage, and additives in the amount of 1/20 of the diluted part of the sample optimize the hemolysis time (for human red blood cells 250-350 seconds) and allow you to do without mixing the samples. Dilution of blood samples in 2001 introduces the concentration of red blood cells in them, within a linear relationship with its optical density, which allows you to use the calibration graph and with it to determine the number of red blood cells in blood samples. Repeating the analysis after incubation of part of the diluted blood with propranolol (obzidan) allows you to compare the initial resistance of the sample with imitation of its in vitro state under stress.
Дискретная автоматическая фоторегистрация гемолиза с частотой 1/с исключает риск пропуска деталей процесса, обеспечивая надежность анализа, и избавляет оператора от постоянного и утомительного слежения за временем протекания процесса. Свойственные прототипу громоздкие расчеты результатов, ручное построение по ним эритрограмм и идентификацию на последних фракций эритроцитов заменяет автоматизированное редактирование файлов анализов с последующим автоматическим дифференцированием графиков фоторегистрации обеих частей пробы. Оно не только обеспечивает визуализацию эритрограмм и выявление на них в виде пиков фракций низко-, средне- и высокостойких эритроцитов, но и позволяет идентифицировать ретикулоциты, которые обычно выявляют после специальной окраски и последующей микроскопии. Discrete automatic photo-registration of hemolysis with a frequency of 1 / s eliminates the risk of missing parts of the process, ensuring the reliability of the analysis, and saves the operator from constant and tedious tracking of the process time. The prototype cumbersome calculation of the results, the manual construction of erythrograms from them and the identification of the last fractions of red blood cells in place of the prototype replaces the automated editing of analysis files, followed by the automatic differentiation of photo-recording graphs of both parts of the sample. It not only provides visualization of erythrograms and reveals on them in the form of peaks fractions of low-, medium- and high-resistant red blood cells, but also allows you to identify reticulocytes, which are usually detected after special staining and subsequent microscopy.
Автоматизация процесса обработки результатов позволяет дополнить эритрограммы обеих частей пробы регистрацией по их прямым и дифференциальным графикам параметров кинетики гемолиза, а также описать весь процесс и выявляемые при нем фракции рядом количественных характеристик. Последние непосредственно заносятся в компьютер, пополняя базу данных лаборатории результатами текущего анализа, и позволяют судить о состоянии мембран во фракциях эритроцитов как при исходном, так и стрессированном состояниях пациента а калибровочный график обеспечивает пересчет относительного содержания клеток в них в абсолютное. Процесс роста содержания клеток в низкостойких фракциях эритрограммы фиксируют, как правило, накануне месячных, у новорожденных, при донорстве, приеме адаптогенов, отдыхе после тяжелой работы и тренировок, а также различных анемиях, кровотечениях, ожогах, сеансах лазеротерапии, гипербарической оксигенации, дистанционной ударно-волновой литотрипсии и т.д. Любой стрессор (патоген), изменяя структуру мембран эритроцитов, усиливает распад клеток и создает неспецифическое напряжение в системе эритрона. Однако компенсирующий его эритропоэз (новообразование эритроцитов) выявляется не всегда. Его отсутствие при терминальных состояниях, запущенных онкозаболеваниях и слабая выраженность при хроническом дефиците пищи позволяет проводить по эритрограммам дифференциальную диагностику и прогнозирование исхода болезней. Automation of the processing of the results makes it possible to supplement the erythrograms of both parts of the sample by recording the hemolysis kinetics parameters according to their direct and differential graphs, as well as to describe the whole process and the fractions revealed by it with a number of quantitative characteristics. The latter are directly entered into the computer, replenishing the laboratory database with the results of the current analysis, and make it possible to judge the state of the membranes in the erythrocyte fractions in both the initial and stressed states of the patient, and the calibration graph provides a conversion of the relative content of cells in them into absolute. The process of increasing the cell content in low-resistant erythrogram fractions is recorded, as a rule, on the eve of menstruation, in newborns, during donation, taking adaptogens, resting after hard work and training, as well as various anemia, bleeding, burns, laser therapy sessions, hyperbaric oxygenation, remote shock wave lithotripsy, etc. Any stressor (pathogen), changing the structure of the membranes of red blood cells, enhances the breakdown of cells and creates a non-specific tension in the erythron system. However, erythropoiesis compensating for it (erythrocyte neoplasm) is not always detected. Its absence in terminal conditions, advanced oncological diseases and poor severity in chronic food deficiency allows differential diagnostics and prediction of disease outcome according to erythrograms.
Полученные кинетические характеристики гемолиза и количественная оценка фракций эритрограмм обеспечивают возможность расчетов вероятности типов кроветворения в организмах обследуемых, тогда как направленность и степень сдвига графиков в пробе с пропранололом относительно контроля допускает оценку состояния β2-адренорецепторов на мембранах эритроцитов, позволяя судить о степени возбуждении их симпатоадреналовой системы. В частности, сразу после отлова диких животных и птиц у студентов перед экзаменами, при тяжелой работе, физических тренировках и других формах резкого возбуждения организмов сдвига графика в пробе с пропранололом не происходит.The obtained kinetic characteristics of hemolysis and a quantitative assessment of erythrogram fractions provide the possibility of calculating the probability of hematopoiesis in the organisms of the subjects, while the direction and degree of graph shift in the sample with propranolol relative to the control allows an assessment of the state of β 2 -adrenoreceptors on the erythrocyte membranes, making it possible to judge the degree of their sympathoadrenal excitation system. In particular, immediately after the capture of wild animals and birds from students before exams, during hard work, physical training and other forms of sharp excitation of organisms, a graph shift in the sample with propranolol does not occur.
Кроме того, наработанный ряд алгоритмов позволяет автоматически рассчитывать по параметрам гемолиза содержание лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и концентрацию гемоглобина в крови, что, в свою очередь, обеспечивает расчет таких эритроцитарных индексов как средний объем эритроцитов, цветовой показатель и содержание гемоглобина в эритроците (СГЭ). Тем же способом рассчитываются концентрации в плазме тиротропного гормона гипофиза (ТТГ) и гормонов щитовидной железы три- и тетрайодтиронинов (Т3 и Т4). В связи с участившимися в РФ йоддефицитными состояниями данные показатели необходимы терапевтам и эндокринологам, работу которых затрудняет дороговизна (сотни рублей), длительность исполнения (месяцы) и низкая надежность результатов их определения традиционными методами.In addition, the developed series of algorithms allows you to automatically calculate the content of leukocytes, the erythrocyte sedimentation rate (ESR) and the concentration of hemoglobin in the blood using hemolysis parameters, which, in turn, provides the calculation of red blood cells such as the average volume of red blood cells, the color index and the hemoglobin content in red blood cells (SGE). In the same way, plasma concentrations of thyrotropic pituitary hormone (TSH) and thyroid hormones of tri- and tetraiodothyronines (T 3 and T 4 ) are calculated. In connection with the increasing iodine deficiency states, these indicators are necessary for therapists and endocrinologists, whose work is complicated by the high cost (hundreds of rubles), the duration of execution (months) and the low reliability of the results of their determination by traditional methods.
Предлагаемый способ осуществляется в соответствии с блок-схемой его алгоритма, представленной на фиг. 1. Для анализа берут 5 или 10 мкл пробы крови с антикоагулянтом (гепарин или Трилон Б) и разводят ее в 2001 раз изотоническим (0,85%) раствором хлорида натрия с pH 7,4 - блок 1. Берут из разбавленной пробы крови 2 равных части, одну из которых (контрольную) помещают в кювету фотометра толщиной 5 или 10 мм. Фотометр предварительно калибруют на подсчет эритроцитов, а выводы его гальванометра подключают через АЦП к PC-совместимой ПЭВМ, снабженной программным обеспечением. Измерив исходную оптическую плотность контрольной части пробы в диапазоне длин волн 670-750 нм, в кювету добавляют 1/20 исходного объема 0,1 н. раствора соляной кислоты, после чего проводят ее повторную фотометрию, измеряя убыль оптической плотности через каждую секунду, до установления ее постоянного значения - блок 2. Вторую (обзидановую) часть пробы в это время инкубируют при комнатной температуре и периодическом помешивании с добавкой 1/20 ее исходного объема 270 миллимолярного раствора пропранолола. По окончании фоторегистрации первой части пробы в том же режиме фотометрируют ее вторую часть - блок 3. Измерения убыли оптической плотности частей пробы - блоки 2 и 3 - проводят в автоматическом режиме, занося полученные результаты в базу данных (БД). По завершении процессов фоторегистрации контрольной и обзидановой частей пробы крови полученные файлы БД редактируют для удаления механических и электрических помех и проводят их обработку с помощью программного обеспечения, содержащего комбинацию графических и вычислительных методов расчета. Первая подпрограмма строит и визуализирует прямые и дифференцированные (эритрограммы) графики, выделяет и рассчитывает на них низко- (А), средне- (Б) и высокостойкие (В) фракции эритроцитов, количество и процентные доли (WmK и WmO) которых зависят от свойств исследуемого образца крови. Одновременно идентифицируют наиболее резистентную к кислоте фракцию ретикулоцитов (Ртц) - блок 4. Следующая подпрограмма регистрирует стабильные параметры кинетики гемолиза по прямым и дифференцированным графикам контрольной (К) и обзидановой (О) частей пробы, включая: время (в секундах) его начала (ТнК и ТнО) и окончания (ТоК и ТоО), продолжительности (LK и LO) процесса гемолиза и общее количество (NK и NO) выявляемых при этом на эритрограммах пиков (фракций эритроцитов). Каждая из фракций характеризуется максимальной скоростью (VмК и VмО) и временем ее развития (ТмК и ТмО) на эритрограмме. Затем с помощью подпрограммы рассчитывают лабильные параметры кинетики гемолиза как разности между соответствующими парами стабильных параметров двух частей пробы - блок 5. Далее с помощью подпрограммы по калибровочному графику определяют количество эритроцитов в крови (ЧЭ), а по параметрам кинетики гемолиза рассчитывают такие гематологические показатели, как гематокрит (Ht), скорость оседания эритроцитов (СОЭ), содержание в крови лейкоцитов (ЧЛ) и гемоглобина (Hb). Это позволяет дополнительно рассчитать такие эритроцитарные индексы, как средний объем эритроцита (СрОЭ, фл), цветовой показатель (ЦП) и среднее содержание гемоглобина в эритроците (СГЭ, пг), а также вероятность (%) "замедленного", нормального или шунтирующего типа кроветворения (ВТК) - блок 6а. Затем с помощью подпрограммы определяют относительный сдвиг прямого графика гемолиза обзидановой части пробы по сравнению с контрольной, по соотношению площадей под которыми рассчитывают (в %) индекс свободных β2- адренорецепторов (БАР) - блок 6б. Далее вводят подпрограмму и рассчитывают по стабильным параметрам кинетики гемолиза обеих частей пробы концентрации тиротропина (ТТГ), три- (Т3) и тетрайодтиронина (Т4) в плазме крови - блок 6в. С помощью экспертной системы все полученные показатели нормируют и сравнивают с накопленными в базе данных результатами анализов крови, соответственно, людей или животных - блок 7. Программное обеспечение выдает на экран дисплея и принтер бланк анализа, характеризующий состояние организма обследуемого прямым и дифференцированным (эритрограмма) графиками гемолиза и группами количественных и качественных диагностических показателей. Последние позволяют экспрессно судить о состоянии системы крови и кроветворения - блок 8, симпатоадреналовой активности - блок 9 и функции щитовидной железы - блок 10, давая в совокупности представление о функциональном состоянии организма - блок 1.The proposed method is carried out in accordance with the flowchart of its algorithm shown in FIG. 1. For analysis, take 5 or 10 μl of a blood sample with an anticoagulant (heparin or Trilon B) and dilute it 2001 times with an isotonic (0.85%) sodium chloride solution with a pH of 7.4 -
Примеры конкретного осуществления способа. Examples of specific implementation of the method.
Пример 1. У практически здорового мужчины 23 лет Р.Г.Д., ежедневно получавшего фармакопейные дозы настойки женьшеня, трижды с интервалом в 7 суток взято из пальца по 1 капле капиллярной крови. Из ячейки иммунологического планшета, смоченной 5% раствором гепарина, 10 мкл образца крови переносят в бюкс с 20 мл 0,85% раствора хлорида натрия pH 7,4 и тщательно перемешивают суспензию до однородного состояния (разведение в 2001 раз). Контрольную пробу объемом 4 мл разбавленной крови фотометрируют при длине волны 670 нм в 10 мм кювете предварительно калиброванного на подсчет эритроцитов фотометра (ФЭК марки КФК-2), выводы гальванометра которого подключены через цифровой вольтметр к PC-совместимой ПЭВМ, снабженной программным обеспечением (ПО). Еще 410 мл той же разбавленной пробы крови переносят в бюкс с 0,2 мл 270 мкМ раствора пропранолола (обзидана). За время инкубации обзидановой части пробы при комнатной температуре и периодическом помешивании в кювету с контрольной частью пробы добавляют 200 мкл 0,1 н. раствора соляной кислоты и проводят в автоматическом режиме повторную фоторегистрацию с дискретностью в 1 секунду до достижения постоянного значения величины оптической плотности. Закончив процесс регистрации контрольной части пробы и удалив гемолизат из кюветы, фотометрию повторяют в том же режиме с обзидановой частью пробы. По завершении процесса фоторегистрации полученные файлы базы данных редактируют и, обработав с помощью ПО, получают бланк анализа, характеризующий состояние организма пациента прямыми графиками и эритрограммами кинетики гемолиза (фиг. 2), а также регистрируемыми и расчетными показателями анализа крови (табл. 1). Такие расчетные параметры кинетики гемолиза (ПКГ), как время развития максимальных скоростей гемолиза для каждого пика (ТмК и ТмО), продолжительности всего процесса (LK и LO) и проявления отдельных фракций, а также разности (Δ) между соответствующими стабильными ПКГ (лабильные ПКГ), содержатся в файле анализа и используются для расчетов. Но поскольку стандартный бланк анализа их не содержит, то в табл. 1 они отсутствуют. Example 1. In a practically healthy 23-year-old man, RGD, who received daily pharmacopoeial doses of ginseng tincture, 1 drop of capillary blood was taken from a finger three times with an interval of 7 days. From a cell of an immunological tablet moistened with 5% heparin solution, 10 μl of a blood sample is transferred to a bottle with 20 ml of a 0.85% sodium chloride solution pH 7.4 and the suspension is thoroughly mixed until homogeneous (dilution 2001 times). A control sample with a volume of 4 ml of diluted blood is photographed at a wavelength of 670 nm in a 10 mm cuvette of a photometer pre-calibrated for counting red blood cells (FEC of the KFK-2 brand), whose galvanometer leads are connected via a digital voltmeter to a PC-compatible PC equipped with software (software) . Another 410 ml of the same diluted blood sample is transferred to a bottle with 0.2 ml of a 270 μM propranolol solution (obzidan). During incubation of the obzidan part of the sample at room temperature and periodically stirring, 200 μl of 0.1 N is added to the cuvette with the control part of the sample. hydrochloric acid solution and carry out automatic re-registration with a resolution of 1 second until a constant value of the optical density is achieved. After completing the registration process of the control part of the sample and removing the hemolysate from the cell, photometry is repeated in the same mode with the obzidan part of the sample. Upon completion of the photo-registration process, the obtained database files are edited and processed with the help of software, they receive an analysis form characterizing the condition of the patient’s body with direct graphs and erythrograms of hemolysis kinetics (Fig. 2), as well as recorded and calculated indicators of blood analysis (Table 1). Such calculated parameters of hemolysis kinetics (PCG) as the time of development of maximum hemolysis rates for each peak (TmK and TmO), the duration of the whole process (LK and LO) and the manifestation of individual fractions, as well as the difference (Δ) between the corresponding stable PCG (labile PCG ), are contained in the analysis file and are used for calculations. But since the standard analysis form does not contain them, then in table. 1 they are absent.
На всех графиках сплошной линией (-) обозначена кинетика контрольных частей проб, а пунктиром (---) - кинетика гемолиза обзидановых частей пробы. Из эритрограмм (фиг. 2) и данных табл. 1 (анализ от 25.11.98) видно, что исходно у пациента снижено количество лейкоцитов (ЧЛ) и повышена скорость оседания эритроцитов (СОЭ), что говорит об ослаблении защитных сил организма. Также существенно снижены кислотная резистентность крови, содержание гемоглобина (Hb) и эритроцитов (ЧЭ), а ретикулоциты (Ртц) не выявились. Обнаруженной легкой степени анемии, вероятно, алиментарного происхождения соответствуют довольно высокие значения среднего объема эритроцита (СрОЭ) и других эритроцитарных индексов (ЦП и СГЭ), а оценка типа кроветворения указывает на относительно высокую вероятность его затруднений в момент взятия крови для анализа. Показатели активности симпатоадреналовой (индекс БАР) и тироидной функций находятся в пределах нормальных величин БД лаборатории, хотя количество тетрайодтиронина несколько повышено. On all graphs, the solid line (-) indicates the kinetics of the control parts of the samples, and the dotted line (---) indicates the kinetics of hemolysis of the obzidanovy parts of the sample. From erythrograms (Fig. 2) and the data of the table. 1 (analysis from 11.25.98) it is seen that initially the patient has a reduced number of leukocytes (HL) and an increased erythrocyte sedimentation rate (ESR), which indicates a weakening of the body's defenses. The acid resistance of the blood, the content of hemoglobin (Hb) and erythrocytes (ChE), as well as reticulocytes (RTC), were not significantly reduced. The detected mild anemia, probably of nutritional origin, corresponds to rather high values of the average volume of red blood cells (SROE) and other erythrocyte indices (CP and SGE), and an assessment of the type of hematopoiesis indicates a relatively high probability of its difficulties at the time of taking blood for analysis. The activity indicators of sympathoadrenal (BAR index) and thyroid functions are within the normal laboratory DB values, although the amount of tetraiodothyronine is slightly increased.
Недельный прием адаптогена (фиг. 2, анализ от 02.12.98) повысил количество низкостойких (изношенных) фракций эритроцитов. При этом резко усилилось шунтовое кроветворение, появились Ртц, возросли ЧЛ и ЧЭ в крови. Однако количество Hb и ЦП изменились незначительно, а СОЭ, Ht, СГЭ и, особенно СрОЭ, снизились, сделав основную (среднестойкую) часть эритроцитов более резистентной к кислоте. Также нормализовалось содержание Т4 и в 1,5 раза от исходной повысилась симпатоадреналовая активность. К концу обследования (фиг. 2, анализ от 09.12.98) большинство вышеуказанных показателей, за исключением ЧЛ, ЦП и Т3, стало возвращаться к исходным величинам. Полученные результаты и, в частности, рост затруднений кроветворения в 1,5 раза от исходного, по-видимому, можно объяснить утомлением организма из-за его избыточной стимуляции при ограниченных ресурсах.A weekly intake of adaptogen (Fig. 2, analysis from 12/12/98) increased the number of low-resistance (worn) fractions of red blood cells. At the same time, shunt hematopoiesis sharply increased, Rtz appeared, and ChL and CE in blood increased. However, the amount of Hb and CP changed insignificantly, and ESR, Ht, SGE and, especially, SROE, decreased, making the main (medium-resistant) part of red blood cells more resistant to acid. The content of T 4 was also normalized and sympathoadrenal activity increased 1.5 times from the initial one. By the end of the survey (Fig. 2, analysis dated 12/9/98), most of the above indicators, with the exception of ChL, CPU, and T 3 , began to return to their original values. The results obtained, and, in particular, the growth of blood formation difficulties by 1.5 times from the initial one, can apparently be explained by the tiredness of the body due to its excessive stimulation with limited resources.
Пример 2. Образцы крови больного А.К.В. 12 лет, с диагнозом "Токсическая гемолитическая анемия", поступали в лабораторию в ячейках термостатированного иммунологического планшета из отделения детской реанимации областной клинической больницы 5 раз за неделю. Дальнейшие операции способа проводились аналогично примеру 1. При этом 5 мкл образца крови переносят в бюкс с 10 мл 0,85% раствора хлорида натрия с pH 7,4, а для фотометрии в кювете толщиной 5 мм (ФЭК марки КФК-3) используют по 2 мл разбавленной пробы, соответственно добавляя к ним соляную кислоту и пропранолол в объеме 0,1 мл. Example 2. Blood samples of a patient A.K. 12 years old, with a diagnosis of Toxic Hemolytic Anemia, were admitted to the laboratory in the cells of a thermostated immunological tablet from the pediatric resuscitation department of the regional
На фиг. 3 приведены эритрограммы проб, а количественные показатели анализов помещены в табл. 2. Динамика эритрограмм позволяет судить о воспроизводимости предлагаемого способа и возможности его применения для мониторинга. При этом заметно, что если в первые дни гемолиз начинается вскоре после добавки кислоты, то на 5 и 7 сутки это происходит гораздо позже. В процессе наблюдений все более заметны различия между графиками контрольной (К) и обзидановой (О) частей пробы, что свидетельствует о снижении степени стрессированности и нормализации симпатоадреналовой активности организма. Очевидно, что новообразованные эритроциты отличаются от прочих циркулирующих фракций, по крайней мере, неделю. Наконец, если в первые дни наблюдений на эритрограммах хорошо выражены 3 типа эритроцитарных фракций, обозначенные буквами А, Б и В, то по мере снижения тяжести болезни минорные фракции заметно уменьшаются в размерах. Это указывает на то, что по мере лечения у больного угасает распад поврежденных эритроцитов (А) и, соответственно, тормозится компенсирующее его новообразование эритроцитов (В). In FIG. 3 shows erythrograms of samples, and quantitative indicators of analyzes are placed in table. 2. The dynamics of erythrograms allows us to judge the reproducibility of the proposed method and the possibility of its application for monitoring. At the same time, it is noticeable that if in the first days hemolysis begins shortly after the addition of acid, then on
При сопоставлении эритрограмм (фиг. 3) с количественными результатами анализов (табл. 2) видно, что в начале мониторинга общее ЧЭ в крови пациента в 2-2,5 раза меньше нормального для этого возраста. При этом относительное содержание низкостойких (распадающихся) эритроцитов повышено до 11,0%, а количество среднестойких - снижено до 78%. Этому соответствуют очень низкий гематокрит и крайне высокие величины эритроцитарных индексов (СрОЭ, ЦП и СГЭ), а также отрицательный индекс БАР и вдвое повышенная концентрация Т3, свидетельствующие о стрессовом состоянии организма. Видно также, что вероятность затруднений кроветворения во всех случаях крайне низка, а выявленная тяжелая степень анемии вызвана признаками усиленного эритродиереза. Попытки организма компенсировать его проявляются увеличенным вдвое количеством Ртц, ростом до 10% содержания высокостойких эритроцитов и усиленным до 50% кроветворением шунтирующего типа, повышающим параметры кислотной резистентности крови. При устранении причин заболевания усиление новообразования эритроцитов резко снизило большинство признаков его тяжести, вследствие чего состояние больного заметно улучшилось и после недели лечения он был выписан из больницы как выздоровевший. Таким образом, в примере представлены возможности предлагаемого способа оценивать малодоступный для обычных анализов процесс кроветворения и отслеживать по динамике эритрограмм недавнее прошлое пациентов.When comparing erythrograms (Fig. 3) with quantitative analysis results (Table 2), it can be seen that at the beginning of monitoring, the total SE in the patient's blood is 2-2.5 times less than normal for this age. At the same time, the relative content of low-resistance (decaying) erythrocytes is increased to 11.0%, and the number of medium-resistant erythrocytes is reduced to 78%. This corresponds to a very low hematocrit and extremely high values of erythrocyte indices (SROE, CP and SGE), as well as a negative BAR index and a twice-increased concentration of T 3 , indicating a stressful state of the body. It is also seen that the probability of hemopoiesis in all cases is extremely low, and the revealed severe degree of anemia is caused by signs of increased erythrodieresis. The body’s attempts to compensate for it are manifested by a doubled amount of Rtz, an increase of up to 10% in the content of highly resistant red blood cells and an increase of up to 50% in hematopoiesis of the shunt type, which increases the parameters of blood acid resistance. When eliminating the causes of the disease, an increase in erythrocyte neoplasm dramatically reduced most of the signs of its severity, as a result of which the patient's condition improved markedly and after a week of treatment he was discharged from the hospital as recovered. Thus, the example presents the possibilities of the proposed method to evaluate the blood formation process, which is inaccessible for ordinary analyzes, and to monitor the recent past of patients by the dynamics of erythrograms.
Пример 3. Берут по 5 мкл образцов крови белой лабораторной крысы, таких диких видов мелких млекопитающих, как полевка-экономка из отряда грызунов, бурозубка обыкновенная из отряда насекомоядных или сизый голубь. Дальнейшие операции способа проводят аналогично примерам 1 и 2. Эритрограммы мелких млекопитающих и птиц, выполненных предлагаемым способом, приведены на фиг. 4, а количественная оценка их морфофункционального состояния - в табл. 3. Очевидно, что у всех особей отчетливо выражена разница между эритрограммами контрольных и обзидановых частей проб, позволяющая судить об активности симпатоадреналовой системы в момент взятия крови. Суженное основание и большая заостренность главного пика эритрограммы крыс при меньшей, чем у человека, выраженности минорных фракций свидетельствуют о большей гомогенности эритроцитов в их циркуляции, что обычно объясняют их меньшим диаметром и большей сферичностью, чем у эритроцитов людей. По эритрограммам полевки-экономки и бурозубки видно, что гемолиз у них начинается гораздо раньше и заканчивается позже, чем у лабораторной крысы, причем асимметрия эритрограмм свидетельствует о большей гетерогенности эритроцитов в их крови. При этом у полевок отчетливо выражены несколько фракций эритроцитов, тогда как у бурозубок различия между ними более сглажены. Также видно, что кислотная резистентность ядерных эритроцитов голубей в 2,5 - 3 раза выше, чем у млекопитающих, что замедляет анализ образцов их крови до 15-20 мин. Сложная картина получаемых эритрограмм обусловлена завершением эритропоэза непосредственно в циркуляции птиц. Example 3. Take 5 μl of blood samples from a white laboratory rat, such wild species of small mammals as the housekeeper vole from the rodent order, the common shrew from the insectivore order, or the gray pigeon. Further operations of the method are carried out analogously to examples 1 and 2. Erythrograms of small mammals and birds made by the proposed method are shown in FIG. 4, and a quantitative assessment of their morphofunctional state is given in table. 3. Obviously, in all individuals, the difference between the erythrograms of the control and obzidanovye parts of the samples is clearly expressed, which makes it possible to judge the activity of the sympathoadrenal system at the time of blood collection. The narrowed base and greater sharpening of the main peak of rat erythrogram with lesser than in humans expression of minor fractions indicate a greater homogeneity of red blood cells in their circulation, which is usually explained by their smaller diameter and greater sphericity than in human red blood cells. The erythrograms of the vole-housekeeper and shrew erythrograms show that their hemolysis begins much earlier and ends later than the laboratory rat, and the asymmetry of erythrograms indicates a greater heterogeneity of red blood cells in their blood. At the same time, several fractions of erythrocytes are clearly expressed in voles, while in shrews, the differences between them are more smooth. It is also seen that the acid resistance of nuclear pigeon erythrocytes is 2.5 to 3 times higher than that of mammals, which slows down the analysis of their blood samples up to 15-20 minutes. The complex picture of the resulting erythrograms is due to the completion of erythropoiesis directly in the circulation of birds.
Предлагаемый способ технически прост и экономичен, а также отличается воспроизводимостью, высокой чувствительностью, экспрессностью и информативностью. При длительности анализа в 10-15 мин, что сравнимо с прототипом, способ визуально характеризует обследуемый организм двумя эритрограммами (исходного состояния и имитации стресса in vitro) и дополняет их более чем 40 количественными морфофункциональными показателями, из которых 14 расчетных. Автоматическое нормирование, экспертная оценка и группировка диагностических показателей дают информацию о функциях симпатоадреналовой системы, щитовидной железы и особенно подробно - системы крови. Последняя включает 7 стандартных гематологических величин, а также оценку кислотной резистентности мембран эритроцитов и вероятности типов кроветворения. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает не только получение обычных диагностических показателей крови, но и интеграцию параметров в "системный портрет" обследованного организма. The proposed method is technically simple and economical, and is also characterized by reproducibility, high sensitivity, expressness and information content. With a duration of analysis of 10-15 minutes, which is comparable with the prototype, the method visually characterizes the examined organism with two erythrograms (initial state and stress simulation in vitro) and supplements them with more than 40 quantitative morphological and functional indicators, of which 14 are calculated. Automatic rationing, expert assessment and grouping of diagnostic indicators provide information on the functions of the sympathoadrenal system, thyroid gland and, in particular, the blood system. The latter includes 7 standard hematological values, as well as an assessment of the acid resistance of erythrocyte membranes and the likelihood of hematopoiesis. Thus, the proposed method provides not only the usual diagnostic blood parameters, but also the integration of parameters into the "system portrait" of the examined organism.
Способ сравнительно легко реализуется в обычных химических, клинических и сельскохозяйственных лабораториях, так как требует лишь сетевого электропитания, стандартного оборудования, ПЭВМ, класса PC 286 DX и 4-х видов распространенных реактивов. Требуемые для анализа 5-10 мкл крови людей можно брать из отходов крови с антикоагулянтом, которые обычно остаются в клинических лабораториях после ряда стандартных анализов, или получать проколом кожи людей, мелких лабораторных, домашних, сельскохозяйственных и диких животных и птиц. Важно лишь, чтобы они хранились без замораживания при температуре 4-6oC и анализировались не позже 24 ч после их изъятия из организма. Предлагаемый способ позволяет анализировать за рабочую смену 50-70 образцов крови.The method is relatively easily implemented in conventional chemical, clinical and agricultural laboratories, since it requires only mains power, standard equipment, a PC, PC 286 DX class and 4 types of common reagents. The 5-10 μl of human blood required for analysis can be taken from blood wastes with an anticoagulant, which usually remain in clinical laboratories after a series of standard tests, or obtained by piercing the skin of people, small laboratory, domestic, agricultural and wild animals and birds. It is only important that they be stored without freezing at a temperature of 4-6 o C and analyzed no later than 24 hours after they are removed from the body. The proposed method allows you to analyze for a shift of 50-70 blood samples.
Сочетание информативности и экспрессности предлагаемого способа обеспечивает поточный скрининг и мониторинг морфофункционального состояния организмов людей и животных. Это позволяет использовать его показатели в ветеринарной и клинической экспресс-диагностике как критерии тяжести состояний при болезнях, чрезвычайных ситуациях и оценках эффективности лечебных мероприятий. Высокая чувствительность предлагаемого способа допускает применение этих диагностических показателей для оценки степени адаптированности людей и животных к условиям деятельности и среды обитания, а также функциональных резервов организма. При условии разработки портативного прибора возможно применение способа в полевых условиях для решения конкретных задач экологической физиологии человека и животных, также медицины катастроф. The combination of information and expressiveness of the proposed method provides in-line screening and monitoring of the morphological and functional state of humans and animals. This allows you to use its indicators in veterinary and clinical rapid diagnostics as criteria for the severity of conditions in diseases, emergencies and evaluations of the effectiveness of treatment measures. The high sensitivity of the proposed method allows the use of these diagnostic indicators to assess the degree of adaptation of people and animals to the conditions of activity and the environment, as well as the functional reserves of the body. Given the development of a portable device, it is possible to use the method in the field to solve specific problems of the ecological physiology of humans and animals, as well as disaster medicine.
Claims (9)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000122001/14A RU2179315C1 (en) | 2000-08-17 | 2000-08-17 | Method to determine functional body state by blood resistance degree to acidic hemolysis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000122001/14A RU2179315C1 (en) | 2000-08-17 | 2000-08-17 | Method to determine functional body state by blood resistance degree to acidic hemolysis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2179315C1 true RU2179315C1 (en) | 2002-02-10 |
Family
ID=20239346
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000122001/14A RU2179315C1 (en) | 2000-08-17 | 2000-08-17 | Method to determine functional body state by blood resistance degree to acidic hemolysis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2179315C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2542434C1 (en) * | 2013-12-30 | 2015-02-20 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) | Method for prediction of degree of risk of haemolytic complications following coronary bypass surgery |
| RU2571081C1 (en) * | 2014-09-10 | 2015-12-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "ДАГЕСТАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" | Method for determining acid stability of erythrocytes cold-blooded animals |
-
2000
- 2000-08-17 RU RU2000122001/14A patent/RU2179315C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2542434C1 (en) * | 2013-12-30 | 2015-02-20 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) | Method for prediction of degree of risk of haemolytic complications following coronary bypass surgery |
| RU2571081C1 (en) * | 2014-09-10 | 2015-12-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "ДАГЕСТАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" | Method for determining acid stability of erythrocytes cold-blooded animals |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Morgan et al. | Measurements of stressed states in the field | |
| Ackert‐Bicknell et al. | Aging research using mouse models | |
| Tavares‐Dias et al. | Haematological and biochemical reference intervals for farmed channel catfish | |
| Paepe et al. | Routine health screening: findings in apparently healthy middle-aged and old cats | |
| Shaw et al. | 'Routine urinalysis': Is the dipstick enough? | |
| Andreani et al. | Reference values for hematology and plasma biochemistry variables, and protein electrophoresis of healthy Hermann's tortoises (Testudo hermanni ssp.) | |
| Vyt et al. | Motility assessment of porcine spermatozoa: a comparison of methods | |
| Shek Vugrovečki et al. | Establishing reference intervals for haematological and biochemical blood variables in Lika pramenka sheep | |
| Khatri‐Chhetri et al. | Reference intervals for hematology, serum biochemistry, and basic clinical findings in free‐ranging chinese pangolin (Manis pentadactyla) from Taiwan | |
| Stacy et al. | Plasma chemistry in nesting leatherback sea turtles (Dermochelys coriacea) from Florida: understanding the importance of sample hemolysis effects on blood analytes | |
| Wright et al. | Biological variation of routine haematology and biochemistry measurands in the horse | |
| Rahmat et al. | Automated color classification of urine dipstick image in urine examination | |
| Rosenberg et al. | Reference intervals for erythrocyte sedimentation rate, lactate, fibrinogen, hematology, and plasma protein electrophoresis in clinically healthy captive gopher tortoises (Gopherus polyphemus) | |
| Williams et al. | Improving anemia assessment in clinical and public health settings | |
| Rosenberg et al. | Diagnostic performance of inflammatory markers in gopher tortoises (Gopherus polyphemus) | |
| Ferriani et al. | Haematological and biochemical reference intervals in healthy Ragdoll cats | |
| RU2179315C1 (en) | Method to determine functional body state by blood resistance degree to acidic hemolysis | |
| Mösch et al. | Influence of preanalytic and analytic variables in canine and feline urine specific gravity measurement by refractometer | |
| Sharkey et al. | Breed‐associated variability in serum biochemical analytes in four large‐breed dogs | |
| ES2944110T3 (en) | Maturity Classification of Stained Reticulocytes Using Light Microscopy | |
| Soma et al. | Prerace venous blood acid‐base values in Standardbred horses | |
| Alberghina et al. | Study of some blood parameters in Caretta caretta during a recovery period | |
| Riley | Clinical pathology: Preanalytical variation in preclinical safety assessment studies-effect on predictive value of analyte tests | |
| CN110320358A (en) | Diabetic nephropathy biomarker detection device and method | |
| Miasaki et al. | Comparative evaluation of the glucose level in dogs and cats obtained by portable glucometer and colorimetric automated method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050818 |