RU2166201C1 - Fluorescent microscope - Google Patents
Fluorescent microscope Download PDFInfo
- Publication number
- RU2166201C1 RU2166201C1 RU99127793/28A RU99127793A RU2166201C1 RU 2166201 C1 RU2166201 C1 RU 2166201C1 RU 99127793/28 A RU99127793/28 A RU 99127793/28A RU 99127793 A RU99127793 A RU 99127793A RU 2166201 C1 RU2166201 C1 RU 2166201C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lasers
- sample
- angle
- fluorescence microscope
- fluorescence
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к оборудованию для научных исследований, в частности к флуоресцентным микроскопам, предназначенным для получения изображения люминесцирующих объектов, иммобилизованных на стекле или другой плоской поверхности, точнее к люминесцентно-микроскопическому анализу объектов, обладающих флуоресценцией при освещении возбуждающим светом. The invention relates to equipment for scientific research, in particular to fluorescence microscopes, designed to image luminescent objects immobilized on glass or another flat surface, more specifically, to luminescent microscopic analysis of objects having fluorescence when illuminated with exciting light.
В настоящее время для наблюдения люминесцирующих объектов применяются различные по конструкции устройства. В одном из них источником света служит мощная дуговая лампа или лампа накаливания. Свет от источника света с помощью системы линз направляется на объект, возбуждая его флуоресценцию (иногда применяется схема освещения объекта через объектив с использованием светоделительного дихроичного зеркала). Свет флуоресценции объекта собирается объективом, который передает изображение объекта на детектор света, а именно в глаз при визуальном наблюдении, на фотопленку или ПЗС камеру для регистрации изображения. Недостатком данной системы является необходимость применения в качестве источника света высокомощных ламп, которые дают свет в широкой области спектра, включая инфракрасную область, так что более 90% излучения лампы является паразитным, и с ним необходимо бороться установкой специальных теплозащитных и интерференционных фильтров. Осветитель требует мощного источника питания, обычно располагающегося в отдельном блоке. ("Каталог люминесцентных микроскопов фирмы LEITZ", 1977) [1]. Currently, devices of various construction are used to observe luminescent objects. In one of them, a powerful arc lamp or incandescent lamp serves as a light source. The light from the light source is directed through the lens system to the object, exciting its fluorescence (sometimes the scheme of lighting the object through the lens using a beam-splitting dichroic mirror is used). The fluorescence light of the object is collected by the lens, which transmits the image of the object to the light detector, namely to the eye during visual observation, to film or to a CCD camera for image registration. The disadvantage of this system is the need to use high-power lamps as a light source, which give light in a wide spectral region, including the infrared region, so that more than 90% of the lamp radiation is spurious, and it is necessary to deal with it by installing special heat-shielding and interference filters. The illuminator requires a powerful power source, usually located in a separate unit. ("Catalog of luminescent microscopes from LEITZ", 1977) [1].
Известно также устройство, в котором возбуждение люминесценции объекта осуществляют лазером и регистрируют изображение люминесцирующего объекта с помощью ПЗС камеры. Лазер помещается сбоку от образца и освещает его под углом Брюстера. Изображение образца создается с помощью двух одинаковых фотографических объективов, расположенных навстречу друг другу, и передающих изображение объекта в масштабе 1:1. Особенностью данной схемы является то, что она необходима для создания параллельного пучка света между объективами, что позволяет расположить между ними интерференционный светофильтр. Вместе с тем, эта схема резко ограничивает области применения системы и уменьшает ее чувствительность. Система дает увеличение 1:1 и позволяет анализировать объекты, размеры которых сопоставимы с размерами чипа ПЗС камеры. Одним из недостатков системы является ее недостаточная чувствительность, что заставляет использовать длительные (порядка 10 минут) экспозиции при записи изображения. Увеличение экспозиции приводит к выцветанию образца во время анализа, а также требует охлаждения ПЗС камеры жидким азотом (-196oC) для снижения темнового тока. Другой существенный недостаток системы вызван тем фактом, что луч лазера неоднороден в своем сечении (в нем имеются так называемые "спеклы"), в результате чего разные места объекта освещаются с разной интенсивностью. ("Fluorescence Array Detector for Large-Field Quantitative Fluorescence Cytometry" K.D.Wittrup, R.J.Westerman, R.Desai, Cytometry" v. 16, p. 206-213, 1994) [2].A device is also known in which the luminescence of an object is excited by a laser and an image of the luminescent object is recorded using a CCD camera. The laser is placed on the side of the sample and illuminates it at a Brewster angle. The image of the sample is created using two identical photographic lenses located towards each other, and transmitting the image of the object in a 1: 1 scale. The peculiarity of this scheme is that it is necessary to create a parallel beam of light between the lenses, which allows you to arrange an interference filter between them. However, this scheme sharply limits the scope of the system and reduces its sensitivity. The system gives a 1: 1 magnification and allows you to analyze objects whose dimensions are comparable to the size of the CCD camera chip. One of the drawbacks of the system is its insufficient sensitivity, which makes it necessary to use long (about 10 minutes) exposures when recording images. Increasing the exposure leads to fading of the sample during analysis, and also requires cooling the CCD camera with liquid nitrogen (-196 o C) to reduce the dark current. Another significant drawback of the system is caused by the fact that the laser beam is inhomogeneous in its cross section (there are so-called “speckles” in it), as a result of which different places of the object are illuminated with different intensities. ("Fluorescence Array Detector for Large-Field Quantitative Fluorescence Cytometry" KDWittrup, RJWesterman, R. Desai, Cytometry "v. 16, p. 206-213, 1994) [2].
Наиболее близким аналогом данного изобретения может служить флуоресцентный микроскоп, в котором образец освещается сфокусированным лазерным лучом, двигающимся по отношению к образцу. В каждый момент времени освещается небольшой участок препарата (обычно, освещаемая площадь имеет диаметр 0,1-1,0 мкм), флуоресценция которого возбуждается, и интенсивность объекта измеряется высокочувствительным фотодетектором (фотоумножителем или фотодиодом). С помощью специальных устройств лазерный луч сканирует объект (либо объект двигается по отношению к лазерному лучу). Основными недостатками этой системы являются: необходимость применения высокоточных и быстродействующих механических узлов, отвечающих за перемещение лазерного луча по отношению к объекту (или объекта - по отношению к лазерному лучу), невозможность визуального наблюдения объекта, необходимость использования компьютера и соответствующего программного обеспечения, как правило, более длительное время анализа (объект анализируется "точка за точкой"). Кроме того, этот метод требует обязательного знания оператором (исследователем) хотя бы основ компьютерных программ анализа изображения. ("Каталог микроскопов фирмы CARL ZEISS", Confocal Laser Scan Microscope (LSM). 1994) [3]. The closest analogue of the present invention can serve as a fluorescence microscope, in which the sample is illuminated by a focused laser beam moving relative to the sample. At each time point, a small portion of the drug is illuminated (usually, the illuminated area has a diameter of 0.1-1.0 μm), the fluorescence of which is excited, and the intensity of the object is measured by a highly sensitive photodetector (photomultiplier or photodiode). Using special devices, the laser beam scans an object (or the object moves relative to the laser beam). The main disadvantages of this system are: the need to use high-precision and high-speed mechanical units responsible for moving the laser beam in relation to the object (or the object in relation to the laser beam), the inability to visually observe the object, the need to use a computer and appropriate software, as a rule, longer analysis time (the object is analyzed "point by point"). In addition, this method requires the knowledge of the operator (researcher) at least the basics of computer image analysis programs. ("Catalog of microscopes from CARL ZEISS", Confocal Laser Scan Microscope (LSM). 1994) [3].
Задачей настоящего изобретения, наряду с расширением арсенала технических средств для люминесцентно-микроскопического анализа объектов, является разработка микроскопа, позволяющего использовать преимущества бокового лазерного освещения (весь свет излучателя используется для возбуждения флуоресценции объекта, находящегося в поле зрения объектива оптической системы) в сочетании с такими достоинствами флуоресцентного микроскопа, как возможность визуального наблюдения объекта, возможность смены увеличения, возможность регистрации изображения на фотопленку. The objective of the present invention, along with expanding the arsenal of technical means for luminescent microscopic analysis of objects, is the development of a microscope that allows you to take advantage of the side laser light (all the light from the emitter is used to excite fluorescence of an object in the field of view of the lens of the optical system) in combination with such advantages fluorescence microscope, as the ability to visually observe an object, the ability to change magnification, the ability to register images on film.
Спецификой изучения объектов, например типа "биочип", является сравнение с высокой точностью интенсивностей люминесценции отдельных его элементов (ячеек), при этом разница в яркостях люминесценции различных ячеек может быть велика. В этой связи желательно, чтобы анализирующий прибор обладал одинаковой чувствительностью в различных участках поля зрения и большим динамическим диапазоном. В случае неравномерного по яркости освещения объекта, обычно используют математические программы для выравнивания чувствительности (нормализация). Недостатком этих программ является то, что они снижают анализируемый динамический диапазон, причем это снижение тем выше, чем больше неравномерность освещенности. Поэтому во всех случаях целесообразно добиваться максимальной равномерности освещенности объекта. Эта задача не является тривиальной, в частности, при использовании лазера. A specific feature of studying objects, for example, a biochip type, is a high accuracy comparison of the luminescence intensities of its individual elements (cells), and the difference in the luminescence brightnesses of different cells can be large. In this regard, it is desirable that the analyzing device has the same sensitivity in different parts of the field of view and a large dynamic range. In the case of illumination of an object that is uneven in brightness, mathematical programs are usually used to equalize sensitivity (normalization). The disadvantage of these programs is that they reduce the analyzed dynamic range, and this decrease is higher, the greater the unevenness of illumination. Therefore, in all cases it is advisable to achieve maximum uniformity of illumination of the object. This task is not trivial, in particular, when using a laser.
Данная задача решается за счет того, что во флуоресцентном микроскопе, содержащем оптическую систему для наблюдения и/или фиксирования изображения образца на носителе информации, держатель образца, расположенного напротив объектива оптической системы, источник возбуждения флуоресцентного излучения, набор сменных запирающих фильтров для выделения света люминесценции образца, источник возбуждения флуоресцентного излучения содержит по меньшей мере два лазера, установленных сбоку от держателя образца и под углом к нему, при этом угол установки лазеров и/или угол фокусировки лазерных лучей выбраны из условия обеспечения требуемой интенсивности и равномерности освещенности поля зрения объектива оптической системы. This problem is solved due to the fact that in a fluorescence microscope containing an optical system for observing and / or fixing an image of a sample on an information carrier, a sample holder located opposite the objective of the optical system, a fluorescence radiation excitation source, a set of interchangeable blocking filters for emitting sample luminescence light , the source of excitation of fluorescent radiation contains at least two lasers mounted on the side of the sample holder and at an angle to it, while the angle SETTING lasers and / or the angle of the focusing laser beams selected to provide the desired intensity and uniformity of illumination of the field of view of the objective optical system.
Использование двух и более лазеров, установленных как описано выше, позволяет существенно уменьшить неравномерность освещенности за счет распределения спеклов лазеров, что необходимо для получения количественных характеристик люминесценции объекта в большом динамическом диапазоне, а также увеличить яркость освещения объекта. The use of two or more lasers installed as described above, can significantly reduce the irregularity of illumination due to the distribution of speckle lasers, which is necessary to obtain quantitative characteristics of the luminescence of the object in a large dynamic range, as well as increase the brightness of the illumination of the object.
Кроме того, в ряде случаев, анализирующее устройство должно определять интенсивность люминесценции каждой ячейки микрочипа в двух разных длинах волн при различном возбуждении. На практике это можно осуществить либо с помощью последовательного измерения интенсивности люминесценции ячеек микрочипа в нескольких длинах волн при последовательном освещении различными лазерами, либо параллельным измерением интенсивности люминесценции этих же ячеек в различных длинах волн разными детекторами при одновременном освещении разными лазерами. В соответствии с изложенным, в настоящем изобретении лазеры могут различаться длиной волны излучения. In addition, in some cases, the analyzing device must determine the luminescence intensity of each cell of the microchip at two different wavelengths with different excitations. In practice, this can be done either by sequentially measuring the luminescence intensity of microchip cells at several wavelengths under sequential illumination by different lasers, or by simultaneously measuring the luminescence intensity of the same cells at different wavelengths by different detectors while simultaneously illuminating with different lasers. In accordance with the foregoing, in the present invention, lasers can differ in radiation wavelength.
Для обеспечения тонкой настройки системы лазеры могут быть установлены с возможностью регулировки угла наклона по отношению к образцу. To ensure fine tuning of the system, lasers can be installed with the possibility of adjusting the angle of inclination with respect to the sample.
С целью устранения недостатков, связанных с неоднородностью лазерного луча, лазеры устанавливают с возможностью вращения относительно их оптических осей. При этом лазеры могут быть снабжены приводами вращения. In order to eliminate the disadvantages associated with the heterogeneity of the laser beam, the lasers are installed with the possibility of rotation relative to their optical axes. In this case, the lasers can be equipped with rotation drives.
Лазеры флуоресцентного микроскопа могут быть установлены с возможностью вращения относительно оптической оси системы. Это позволяет свести практически на нет влияние неравномерности светового луча лазера в поперечнике при увеличении экспозиции и интегрировании светового потока от участков объекта, освещаемых с разной интенсивностью в разные моменты времени. При этом они также могут снабжаться приводом вращения лазеров относительно оптической оси системы. The fluorescence microscope lasers can be mounted rotatable about the optical axis of the system. This makes it possible to minimize the effect of the nonuniformity of the laser light beam across with an increase in exposure and integration of the light flux from parts of the object illuminated with different intensities at different times. Moreover, they can also be equipped with a laser rotation drive relative to the optical axis of the system.
Однако для специалиста является очевидным, что изобретение, охарактеризованное в прилагаемой формуле изобретения, может быть модифицировано различными способами без отхода от основной идеи изобретения. However, it will be apparent to those skilled in the art that the invention described in the appended claims may be modified in various ways without departing from the basic idea of the invention.
На представленном чертеже изображена схема флуоресцентного микроскопа согласно данному изобретению. The drawing shows a diagram of a fluorescence microscope according to this invention.
Флуоресцентный микроскоп, как показано на чертеже, имеет держатель образца 1, объектив 2, призму 3, окуляр для визуального наблюдения 4, окуляр для фотографирования 5, промежуточную линзу 6 для согласования размера изображения с размером детектора света, фотопленку 7, ПЗС камеру 8, запирающий фильтр 9, лазеры 10 (с целью упрощения дальнейших пояснений на схеме изображен один из лазеров). The fluorescence microscope, as shown in the drawing, has a sample holder 1, lens 2, a prism 3, an eyepiece for visual observation 4, an eyepiece for photographing 5, an intermediate lens 6 for matching the size of the image with the size of the light detector, film 7, CCD camera 8, locking filter 9, lasers 10 (in order to simplify further explanations, one of the lasers is shown in the diagram).
Устройство работает следующим образом. Луч лазера 10 освещает образец, при этом величина и форма освещаемой площади зависят от величины расходимости луча лазера и от угла, под которым луч освещает образец. Обычно площадь, освещаемая лазером на объекте, составляет несколько квадратных миллиметров. Излучение люминесценции образца после прохождения через объектив 2 и фильтр 9 либо направляется с помощью призмы 3 и окуляра 4 в глаз для визуального наблюдения, либо при выведенной призме направляется объективом 5 на фотопленку или промежуточной линзой 6 на фотопленку 7 или ПЗС камеру 8 для регистрации изображения. The device operates as follows. The laser beam 10 illuminates the sample, while the size and shape of the illuminated area depend on the divergence of the laser beam and on the angle at which the beam illuminates the sample. Typically, the area illuminated by a laser at an object is a few square millimeters. After passing through the lens 2 and the filter 9, the luminescence radiation of the sample is either directed using a prism 3 and an eyepiece 4 into the eye for visual observation, or when the prism is removed, it is directed by a lens 5 to a film or an intermediate lens 6 to a film 7 or a CCD camera 8 for image registration.
Для увеличения равномерности освещенности анализируемого объекта используются описанные выше варианты в любых комбинациях. To increase the uniformity of illumination of the analyzed object, the above options are used in any combination.
Примеры
По изложенной схеме была собрана установка для изучения люминесценции биологических микрочипов.Examples
According to the above scheme, a facility was assembled to study the luminescence of biological microarrays.
Источником света служил гелий-неоновый лазер с длиной волны 594 нм, и мощностью 2,5 мВт. Диаметр лазерного луча около 1,5 мм в диаметре, при падении на объект под углом около 75o освещал эллипс с осями 1,5 и 3,5 мм. Диаметр поля зрения примененного объектива составлял 4,3 мм, апертура объектива 0,4. В качестве анализируемого флуорохрома использовали Техасский красный. Люминесценцию объекта наблюдали либо с помощью визуальной насадки, либо регистрировали на фотопленку с помощью фотонасадки с черно-белой фотопленкой чувствительностью 3000 ед. ISO.The light source was a helium-neon laser with a wavelength of 594 nm and a power of 2.5 mW. The diameter of the laser beam is about 1.5 mm in diameter, when incident on an object at an angle of about 75 o illuminated an ellipse with axes of 1.5 and 3.5 mm. The diameter of the field of view of the applied lens was 4.3 mm; the lens aperture was 0.4. Texas red was used as the analyzed fluorochrome. The luminescence of the object was observed either using a visual nozzle or recorded on photographic film using photographic nozzle with a black and white film sensitivity of 3000 units. ISO
Пример 1. Специфичность, чувствительность и работоспособность установки проверяли с помощью биологических микрочипов, представляющих собой предметное микроскопное стекло с упорядоченно нанесенными на его поверхность ячейками геля размером 60 х 60 мкм и толщиной 20 мкм. В каждой ячейке геля иммобилизована индивидуальная проба - олигонуклеотид определенной структуры. Микрочип инкубируется с раствором, содержащим исследуемые фрагменты ДНК, меченные флуоресцентным красителем. ДНК взаимодействует с олигонуклеотидами, вызывая специфическую люминесценцию некоторых ячеек. Интенсивность люминесценции и взаимное расположение люминесцирующих ячеек позволяет судить о структуре анализируемого фрагмента. Example 1. The specificity, sensitivity and performance of the installation was checked using biological microchips, which are a microscope slide with an orderly gel cell deposited on its surface with a size of 60 x 60 μm and a thickness of 20 μm. In each cell of the gel an individual sample is immobilized - an oligonucleotide of a certain structure. The microchip is incubated with a solution containing the studied DNA fragments labeled with a fluorescent dye. DNA interacts with oligonucleotides, causing specific luminescence of some cells. The luminescence intensity and the relative position of the luminescent cells allows us to judge the structure of the analyzed fragment.
В качестве объекта был выбран микрочип, в разных ячейках которого было иммобилизовано различное количество меченного Техасским красным олигонуклеотида. Микрочип освещался лазером и его люминесценция оценивалась на глаз и регистрировалась на фотопленку. При визуальном наблюдении адаптированным к темноте глазом были видны ячейки геля, содержащие 100 амоль метки на одну ячейку и больше. При регистрации на фотопленку и выдержке 20 с, была получена такая же чувствительность, то есть были видны ячейки геля с содержанием вещества 30 амоль на ячейку размером 60 х 60 мкм. При проекции этой ячейки на ПЗС матрицу, обычно она анализируется 64 пикселями, то есть на один пиксель попадает изображение 1/64 ячейки, или 0,2 амоль. Таким образом, чувствительность системы составляет менее, чем 2 х 104 молекул флуорохрома на пиксель. Эта чувствительность легко может быть повышена самыми разными способами, например, применением более высокоапертурного объектива, использованием более мощного лазера или нескольких лазеров, увеличением времени экспозиции.A microchip was chosen as an object, in different cells of which a different amount of Texas red-labeled oligonucleotide was immobilized. The microchip was illuminated by a laser and its luminescence was evaluated by eye and recorded on photographic film. Upon visual observation with an eye adapted to the dark, gel cells containing 100 amol tags per cell or more were visible. When recording on film and holding for 20 s, the same sensitivity was obtained, that is, gel cells with a substance content of 30 amol per cell 60 x 60 μm in size were visible. When projecting this cell onto a CCD matrix, it is usually analyzed with 64 pixels, that is, an image of 1/64 cell, or 0.2 amol, gets to one pixel. Thus, the sensitivity of the system is less than 2 x 10 4 fluorochrome molecules per pixel. This sensitivity can easily be increased in a variety of ways, for example, using a higher aperture lens, using a more powerful laser or several lasers, and increasing the exposure time.
Пример 2. Был изготовлен микрочип для выявления бактериального заражения, то есть микрочип, содержащий ячейки геля с иммобилизованными в них олигонуклеотидами, специфичными к различным бактериям. Этот микрочип был обработан (проведена гибридизация со специфической РНК, выделенной из бактерий и меченной Техасским красным). Распределение интенсивности люминесценции между ячейками геля наблюдали визуально и регистрировали на фотопленку. Визуальный анализ микрочипа показал, что распределение интенсивности люминесценции между ячейками геля соответствует ожидаемому. Изображение микрочипа было зарегистрировано на фотопленку при выдержке 2,5 мин. Example 2. A microchip was made to detect bacterial infection, that is, a microchip containing gel cells with immobilized oligonucleotides specific for various bacteria in them. This microchip was processed (hybridization was performed with specific RNA isolated from bacteria and tagged with Texas Red). The distribution of luminescence intensity between the gel cells was observed visually and recorded on photographic film. Visual analysis of the microchip showed that the distribution of the luminescence intensity between the gel cells is as expected. The image of the microchip was recorded on photographic film at a shutter speed of 2.5 minutes.
Эти опыты показали, что данный микроскоп обладает достаточной чувствительностью и специфичностью, он гораздо проще и компактнее, чем существующие устройства, не требует от исследователя специальных знаний. These experiments showed that this microscope has sufficient sensitivity and specificity, it is much simpler and more compact than existing devices, it does not require special knowledge from the researcher.
Выше приведены предпочтительные примеры осуществления изобретения, допускающие различные изменения и дополнения, не выходящие за пределы существа и объема изобретения. Соответственно следует понимать, что данное описание настоящего изобретения имеет лишь иллюстративное, а не ограничивающее назначение. The above are preferred embodiments of the invention, subject to various changes and additions, not going beyond the essence and scope of the invention. Accordingly, it should be understood that this description of the present invention is for illustrative purposes only and not limiting.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99127793/28A RU2166201C1 (en) | 1999-12-28 | 1999-12-28 | Fluorescent microscope |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99127793/28A RU2166201C1 (en) | 1999-12-28 | 1999-12-28 | Fluorescent microscope |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2166201C1 true RU2166201C1 (en) | 2001-04-27 |
Family
ID=20228855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99127793/28A RU2166201C1 (en) | 1999-12-28 | 1999-12-28 | Fluorescent microscope |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2166201C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003046221A1 (en) * | 2001-11-26 | 2003-06-05 | Institut Molekulyarnoi Biologii Im.V.A.Engelgardta Rossiiskoi Akademii Nauk | Method for the specific identification of orthopoxvirus with the aid of a miniature biological chip. |
| WO2006123967A3 (en) * | 2005-05-18 | 2007-03-22 | Andrey Alexeevich Klimov | Fluorescent nanoscopy method |
| WO2011096835A1 (en) * | 2010-02-03 | 2011-08-11 | УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ им. В. А. ЭНГЕЛЬГАРДТА РАН (ИМБ РАН) | Device for analyzing luminescent bio-microchips |
| RU2498298C1 (en) * | 2012-08-21 | 2013-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный университет" (СПбГУ) | Apparatus for imaging biological objects with nano-labels |
-
1999
- 1999-12-28 RU RU99127793/28A patent/RU2166201C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| "Каталог микроскопов фирмы CARL ZEISS". Confocal Laser Scan Microscope (LSM) 1994. * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003046221A1 (en) * | 2001-11-26 | 2003-06-05 | Institut Molekulyarnoi Biologii Im.V.A.Engelgardta Rossiiskoi Akademii Nauk | Method for the specific identification of orthopoxvirus with the aid of a miniature biological chip. |
| WO2006123967A3 (en) * | 2005-05-18 | 2007-03-22 | Andrey Alexeevich Klimov | Fluorescent nanoscopy method |
| US7803634B2 (en) | 2005-05-18 | 2010-09-28 | Andrey Alexeevich Klimov | Fluorescent nanoscopy method |
| US8110405B2 (en) | 2005-05-18 | 2012-02-07 | Stereonic International, Inc. | Fluorescent nanoscopy method |
| CN101228428B (en) * | 2005-05-18 | 2012-11-07 | 斯蒂尔奥尼克国际公司 | Fluorescent nanoscopy method |
| US8334143B2 (en) | 2005-05-18 | 2012-12-18 | Stereonic International, Inc. | Fluorescent nanoscopy method |
| US8668872B2 (en) | 2005-05-18 | 2014-03-11 | Super Resolution Technologies Llc | Fluorescent nanoscopy device and method |
| US9028757B2 (en) | 2005-05-18 | 2015-05-12 | Super Resolution Technologies Llc | Fluorescent nanoscopy device and method |
| WO2011096835A1 (en) * | 2010-02-03 | 2011-08-11 | УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ им. В. А. ЭНГЕЛЬГАРДТА РАН (ИМБ РАН) | Device for analyzing luminescent bio-microchips |
| RU2510959C2 (en) * | 2010-02-03 | 2014-04-10 | Учреждение Российской Академии Наук Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Ран (Имб Ран) | Device for analysing luminescent biological microchips |
| RU2498298C1 (en) * | 2012-08-21 | 2013-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный университет" (СПбГУ) | Apparatus for imaging biological objects with nano-labels |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11988604B2 (en) | Optical microscopy with phototransformable optical labels | |
| US6654119B1 (en) | Scanning spectrophotometer for high throughput fluroescence detection | |
| US5982534A (en) | Specimen illumination apparatus with optical cavity for dark field illumination | |
| CN106461540B (en) | System and method for automated imaging of chromophore-labeled samples | |
| US7352459B2 (en) | Scanning Spectrophotometer for high throughput fluorescence detection and fluorescence polarization | |
| US20130126755A1 (en) | Method and device for simultaneous multi-channel and multi-method acquisition of synchronized parameters in cross-system fluorescence lifetime applications | |
| EP2594983A1 (en) | Low-light specimen image pickup unit and low-light specimen image pickup apparatus | |
| US8450703B2 (en) | Method and system for imaging samples | |
| Garty et al. | An automated imaging system for radiation biodosimetry | |
| US7297961B2 (en) | Fluorescence microscope and observation method using the same | |
| JP2001512875A (en) | Digital imaging system for assays in well plates, gels and blots | |
| WO2005113832A2 (en) | Wide field imager for quantitative analysis of microarrays | |
| US20130087718A1 (en) | Confocal fluorescence lifetime imaging system | |
| CN110114709A (en) | Determine the method and microscope of fluorescence intensity | |
| RU2166201C1 (en) | Fluorescent microscope | |
| CN110161671B (en) | Dark field, bright field, phase contrast and fluorescence multimode synchronous imaging microscopic imaging device | |
| Wampler et al. | Quantitative fluorescence microscopy using photomultiplier tubes and imaging detectors | |
| US20230221178A1 (en) | Apparatus and a method for fluorescence imaging | |
| JP2000131236A (en) | Concentration deciding system for substance mixed with fluorescent material and its using method | |
| Stimson et al. | A unique optical arrangement for obtaining spectrally resolved confocal images | |
| US20230103509A1 (en) | Confocal microscopy system | |
| US20230085045A1 (en) | Microscope for high-resolution and specific analysis of biological substances, and method of analysis | |
| Dunsby | Optically sectioned imaging by oblique plane microscopy | |
| White et al. | Fundamentals of fluorescence microscopy | |
| Agroskin et al. | Luminescence video analyzer of biological microchips |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20031229 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent | ||
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20080909 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20100210 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20100212 |
|
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20100210 |
|
| QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20100210 Effective date: 20110202 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20111229 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20140110 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181229 |