RU2157699C2

RU2157699C2 - Peptides with affinity for parathyroid hormone and activity- stimulating adenylcyclases

Info

Publication number: RU2157699C2
Application number: RU98102406A
Authority: RU
Inventors: Ксин Донг Зенг
Original assignee: Биомежер Инкорпорэйтед
Priority date: 1996-03-29
Filing date: 1996-07-03
Publication date: 2000-10-20

Abstract

FIELD: endocrinology. SUBSTANCE: peptide variants of 1-34 fragment of parathyroid hormone, in which at least one residue in positions 7, 11, 23, 24. 27, 28, and 31 is cyclohehylaniline residue or at least one residue in positions 3, 16, 17, 18, 19, and 34 is alpha-aminobutyric acid, or also, alternately, at least amino acid residue in position 1 is alpha,beta-diaminopropionic acid residue and those in position 27 homoarginine residue and in position 31 norleucine residue. EFFECT: widened choice of drugs for treatment of parathyroid gland disorders. 32 cl, 1 tbl

Description

Паратиреоидный гормон (ПТГ) представляет собой полипептид, вырабатываемый паращитовидными железами. Зрелая циркулирующая форма гормона включает 84 аминокислотных остатка. Биологическое действие ПТГ может воспроизводиться пептидным фрагментом его N-концевых групп (например, аминокислотными остатками 1-34). Родственный паратиреоидному гормону протеин (ПТГрП) содержит 139 - 179 аминокислотных групп, обладающих N-концевой гомологичностью к ПТГ. Биологическая эффективность ПТГ обусловлена ПТГрП, в том числе связыванием с общим рецептором ПТГ/ПТГрП [Tregear et al. Endocrinol., 93, 1349, (1983)]. Осуществлена характеристика ПТГ пептидов различных особей, например человека, коров, крыс, цыплят [Nissenson et al., Receptor, 3, 193, (1993)]. Parathyroid hormone (PTH) is a polypeptide produced by the parathyroid glands. The mature circulating form of the hormone includes 84 amino acid residues. The biological effect of PTH can be reproduced by a peptide fragment of its N-terminal groups (for example, amino acid residues 1-34). A protein related to parathyroid hormone (PTGrP) contains 139 - 179 amino acid groups that have N-terminal homology to PTH. The biological efficacy of PTH is due to PTHrP, including binding to the common PTH / PTHrr receptor [Tregear et al. Endocrinol., 93, 1349, (1983)]. Characterization of the PTH of peptides of various individuals, for example, humans, cows, rats, chickens, has been performed [Nissenson et al., Receptor, 3, 193, (1993)].

ПТГ вызывает как нарастание костной массы, так и улучшение ее качества [Dempster et al. Endocrine Rev., 14, 690, (1993); Riggs, Amer. J. Med., 91 (Suppl. 5В.): 37S (1991)]. Анаболический эффект у мужчин и женщин с заболеванием остеопорозом отмечается при периодическом приеме ПТГ независимо от того, получают ли они или нет одновременно антирезорпционную терапию [Slovic et al., J. Bone Miner. Res., 1, 377 (1986); Reeve et al., Br. Med. J., 301, 314 (1990); и Hesch R. D. et al., Calcif. Tissue Int'l, 44, 176 (1989)]. PTH causes both an increase in bone mass and an improvement in its quality [Dempster et al. Endocrine Rev., 14, 690, (1993); Riggs, Amer. J. Med. 91 (Suppl. 5B.): 37S (1991)]. The anabolic effect in men and women with osteoporosis is observed with periodic PTH administration, regardless of whether or not they receive antiresorptive therapy at the same time [Slovic et al., J. Bone Miner. Res., 1, 377 (1986); Reeve et al., Br. Med. J., 301, 314 (1990); and Hesch R. D. et al., Calcif. Tissue Int'l, 44, 176 (1989)].

В соответствии с одним из аспектов изобретения оно относится к разновидностям пептидов ПТГ (1-34) общей формулы:

где A₁ означает Ser, Ala или Dap;
A₃ означает Ser, Thr или Aib;
A₅ означает Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe или napa-X-Phe,
где X, в свою очередь, представляет собой гидроксил, галоген или метил;
A₇ означает Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe,
где X, в свою очередь, представляет собой гидроксил, галоген или метил;
A₈ означает Met, Nva, Leu, Val, Ile, Cha или Nle;
A₁₁ означает Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe,
где X, в свою очередь, представляет собой гидроксил, галоген или метил;
A₁₂ означает Gly или Aib;
A₁₅ означает Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe,
где X, в свою очередь, представляет собой гидроксил, галоген или метил;
A₁₆ означает Ser, Asn, Ala или Aib;
A₁₇ означает Ser, Thr или Aib;
A₁₈ означает Met, Nva, Leu, Val, Ile, Nle, Cha или Aib;
A₁₉ означает Glu или Aib;
A₂₁ означает Val, Cha или Met;
A₂₃ означает Trp или Cha;
A₂₄ означает Leu или Cha;
A₂₇ означает Lys, Aib, Leu, hArg, Gln или Cha;
A₂₈ означает Leu или Cha;
A₃₀ означает Asp или Lys;
A₃₁ означает Val, Nle, Cha или дилетирован;
A₃₂ означает His или дилетирован;
A₃₃ означает Asn или дилетирован;
A₃₄ означает Phe, Туг, Amp, Aib или дилетирован;
каждый из R₁ и R₂ независимо друг от друга означают водород, C(1-12)алкил, C(2-12)алкенил, C(7-20)фенилалкил, C(11-20)нафтилалкил, C(1-12)гидроксиалкил, C(2-12)гидроксиалкенил, C(7-20)гидроксифенилалкил или C(11-20)гидроксинафтилалкил; или один и только один из R₁ и R₂ представляет собой группу COE₁, где E₁ означает C(1-12)алкил, C(2-12)алкенил, C(7-20)фенилалкил, C(11-20)нафтилалкил, C(1-12)гидроксиалкил, C(2-12)гидроксиалкенил, C(7-20)гидроксифенилалкил или C(11-20)гидроксинафтилалкил; и
R₃ означает гидроксил, амино-, C(1-12) алкокси- или -NH-Y-CH₂-Z группу, где Y в свою очередь означает C(1-12)углеводородный остаток, и Z означает водород, гидроксил, карбоксил или CONH₂;
при условии, что (i) по крайней мере одна из A₅, A₇, A₈, A₁₁, A₁₅, A₁₈, A₂₁, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha, или по крайней мере одна из A₃, A₁₂, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ и A₃₄ означает Aib; или (ii) по крайней мере A₁ означает Dap, A₇ означает β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe, A₁₅ означает β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe, A₂₇ означает hArg или A₃₁ означает Nle; или их фармацевтически приемлемой соли.In accordance with one aspect of the invention, it relates to varieties of PTH peptides (1-34) of the general formula:

where A ₁ means Ser, Ala or Dap;
A ₃ means Ser, Thr or Aib;
A ₅ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or napa-X-Phe,
where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₇ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe,
where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile, Cha or Nle;
A ₁₁ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe,
where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₁₂ means Gly or Aib;
A ₁₅ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe,
where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₁₆ means Ser, Asn, Ala or Aib;
A ₁₇ means Ser, Thr or Aib;
A ₁₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile, Nle, Cha or Aib;
A ₁₉ means Glu or Aib;
A ₂₁ means Val, Cha or Met;
A ₂₃ means Trp or Cha;
A ₂₄ means Leu or Cha;
A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg, Gln or Cha;
A ₂₈ means Leu or Cha;
A ₃₀ means Asp or Lys;
A ₃₁ means Val, Nle, Cha or dilete;
A ₃₂ means His or diluted;
A ₃₃ means Asn or diluted;
A ₃₄ means Phe, Tug, Amp, Aib or Dileted;
each of R ₁ and R ₂ independently of one another means hydrogen, C (1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1- 12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxy-naphthylalkyl; or one and only one of R ₁ and R ₂ represents a COE ₁ group, where E ₁ is C (1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20 ) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl; and
R ₃ means hydroxyl, amino, C (1-12) alkoxy or —NH — Y — CH ₂ —Z group, where Y in turn means C (1-12) hydrocarbon residue, and Z means hydrogen, hydroxyl, carboxyl or CONH ₂ ;
provided that (i) at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₁ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, or at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib; or (ii) at least A ₁ is Dap, A ₇ is β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, A ₁₅ is β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, A ₂₇ means hArg or A ₃₁ means Nle; or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Подгруппа соединений, охватываемых указанной выше формулой, включает те, у которых по крайней мере одна из A₅, A₇, A₁₁, A₁₅, A₁₈, A₂₁, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha. Например, A₃ означает Ser, A₅ означает Ile, A₇ означает Leu или Cha; A₈ означает Met, Nva, Leu, Val, Ile или Nle; A₁₁ означает Leu или Cha; A₁₂ означает Gly; A₁₅ означает Leu или Cha; A₁₆ означает Asn или Aib; A₁₇ означает Ser; A₁₈ означает Met или Nle; A₂₁ означает Val; A₂₇ означает Lys, hArg или Cha; A₃₁ означает Val, Nle или Cha; A₃₂ означает His; A₃₃ означает Asn: A₃₄ означает Phe, Tyr, Amp или Aib; R₁ означает водород; R₂ означает водород; и R₃ означает аминогруппу;
при условии, что по крайней мере одна из A₅, A₇, A₈, A₁₁, A₁₅, A₁₈, A₂₁, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha, или по крайней мере одна из A₃, A₁₂, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ и A₃₄ означает Aib. При необходимости, по крайней мере, одна из A₇ и A₁₁ может быть Cha; или по крайней мере одна из A₁₅, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha.A subgroup of compounds encompassed by the above formula includes those in which at least one of A ₅ , A ₇ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₁ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A _28, and A ₃₁ means Cha. For example, A ₃ means Ser, A ₅ means Ile, A ₇ means Leu or Cha; A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₁ means Leu or Cha; A ₁₂ means Gly; A ₁₅ means Leu or Cha; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₇ means Ser; A ₁₈ means Met or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn: A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; and R ₃ is an amino group;
provided that at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₁ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, or at least at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib. If necessary, at least one of A ₇ and A ₁₁ may be Cha; or at least one of A ₁₅ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha.

В другой подгруппе соединений по крайней мере одна из A₃, A₁₂, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ и A₃₄ означает Aib. Например, A₃ означает Ser или Aib; A₅ означает Ile; A₇ означает Leu или Cha; A₈ означает Met, Nva, Leu, Val, Ile или Nle; A₁₁ означает Leu или Cha; A₁₅ означает Leu или Cha; A₁₆ означает Asn или Aib: A₁₈ означает Met, Aib или Nle; A₂₁ означает Val; A₂₇ означает Lys, Aib, Leu, hArg или Cha; A₃₁ означает Val, Nle или Cha; A₃₂ означает His; A₃₃ означает Asn; A₃₄ означает Phe, Tyr, Amp или Aib; R₁ означает водород; R₂ означает водород; и R₃ означает аминогруппу; при условии, что по крайней мере одна из A₅, A₇, A₈, A₁₁, A₁₅, A₁₈, A₂₁, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha, или по крайней мере одна из A₃, A₁₂, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ и A₃₄ означает Aib. Если необходимо, по крайней мере одна из A₇ и A₁₁ может быть Cha; или по крайней мере одна из A₁₅, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha.In another subgroup of compounds, at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib. For example, A ₃ means Ser or Aib; A ₅ means Ile; A ₇ means Leu or Cha; A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₁ means Leu or Cha; A ₁₅ means Leu or Cha; A ₁₆ means Asn or Aib: A ₁₈ means Met, Aib or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn; A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; and R ₃ is an amino group; provided that at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₁ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, or at least at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib. If necessary, at least one of A ₇ and A ₁₁ may be Cha; or at least one of A ₁₅ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha.

В еще одной подгруппе соединений по крайней мере одна из A₅, A₇, A₈, A₁₁, A₁₅, A₁₈, A₂₁, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ и A₃₁ означает Cha, или по крайней мере одна из A₃, A₁₂, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ и A₃₄ означает Aib. Например, A₃ означает Ser или Aib; A₅ означает Ile; A₇ означает Leu или Cha; A₈ означает Met, Nva, Leu, Val, Ile или Nle; A₁₁ означает Leu или Cha; A₁₅ означает Leu или Cha; A₁₆ означает Asn или Aib; A₁₈ означает Met, Aib или Nle; A₂₁ означает Val; A₂₇ означает Lys, Aib, Leu, hArg или Cha; A₃₁ означает Val, Nle или Cha; A₃₂ означает His; A₃₃ означает Asn; A₃₄ означает Phe, Tyr, Amp или Aib; R₁ означает водород; R₂ означает водород; и R₃ означает аминогруппу. При необходимости, по крайней мере одна из A₇ и A₁₁ означает Cha, и по крайней мере одна из A₁₆, A₁₉ и A₃₄ означает Aib; или по крайней мере одна из A₂₄, A₂₈ и A₃₁ означает Cha, и по крайней мере одна из A₁₆ и A₁₇ означает Aib.In yet another subgroup of compounds, at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₁ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, or at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib. For example, A ₃ means Ser or Aib; A ₅ means Ile; A ₇ means Leu or Cha; A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₁ means Leu or Cha; A ₁₅ means Leu or Cha; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₈ means Met, Aib or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn; A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; and R ₃ means an amino group. If necessary, at least one of A ₇ and A ₁₁ means Cha, and at least one of A ₁₆ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib; or at least one of A ₂₄ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, and at least one of A ₁₆ and A ₁₇ means Aib.

Еще в одной подгруппе по крайней мере A₁ означает Dap, A₇ означает β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe, A₁₃ означает β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe. Например, A₁ означает Ser, Gly или Dap; A₃ означает Ser или Aib; A₈ означает Met, Nva, Leu, Val, Ile или Nle; A₁₆ означает Asn или Aib; A₁₈ означает Met, Aib или Nle; A₂₁ означает Val; A₂₇ означает Lys, Aib, Leu, hArg или Cha; A₃₁ означает Val, Nle или Cha; A₃₂ означает His, A₃₃ означает Asn, A₃₄ означает Phe, Tyr, Amp или Aib; R₁ означает водород; R₂ означает водород; и R₃ означает аминогруппу.In another subgroup, at least A ₁ means Dap, A ₇ means β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, A ₁₃ means β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe. For example, A ₁ means Ser, Gly or Dap; A ₃ means Ser or Aib; A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₈ means Met, Aib or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His, A ₃₃ means Asn, A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; and R ₃ means an amino group.

Примеры пептидов по настоящему изобретению, соответствующих указанной формуле, приведены в приложении 1. Examples of peptides of the present invention corresponding to the specified formula are shown in Appendix 1.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к пептидам, отвечающим следующей формуле:

где A₁ означает Ala, Ser или Dap;
A₃ означает Ser или Aib;
A₅ означает His, Ile или Cha;
A₇ означает Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pal, Phe или пара-X-Phe, где X в свою очередь означает H, OH, галоген или метил;
A₈ означает Leu, Met или Cha;
A₁₀ означает Asp или Asn;
A₁₁ означает Lis, Leu, Cha, Phe или β-Nal;
A₁₂ означает Gly или Aib;
A₁₄ означает Ser или His;
A₁₅ означает Ile или Cha;
A₁₆ означает Gln или Aib;
A₁₇ означает Asp или Aib;
A₁₈ означает Leu, Aib или Cha;
A₁₉ означает Arg или Aib;
A₂₂ означает Phe, Glu, Aib или Cha;
A₂₃ означает Phe, Leu, Lys или Cha;
A₂₄ означает Leu, Lys или Cha;
A₂₅ означает His, Aib или Glu;
A₂₆ означает His, Aib или Lys;
A₂₇ означает Leu, Lys или Cha;
A₂₈ означает Ile, Leu, Lys или Cha;
A₂₉ означает Ala, Glu или Aib;
A₃₀ означает Glu, Cha, Aib или Lys;
A₃₁ означает Ile, Leu, Cha, Lys или дилетирован;
A₃₂ означает His или дилетирован;
A₃₃ означает Tyr или дилетирован;
A₃₄ означает Ala или дилетирован;
каждый из R₁ и R₂ независимо друг от друга означает водород, C(1-12)алканил, C(7-20)фенилалкил, C(11-20)нафтилалкил, C(1-12)гидроксиалкил, C(2-12)гидроксиалкенил, C(7-20)гидроксифенилалкил или C(11-20)гидроксинафтилалкил; или один и только один из R₁ и R₂ представляет собой группу COE₁, где E₁ означает C(1-12)алкил, C(2-12)алкил, C(2-12)алкенил, C(7-20)фенилалкил, C(11-20)нафтилалкил, C(1-12)гидроксиалкил, C(2-12)гидроксиалкенил, C(7-20)гидроксифенилалкил или C(11-20)гидроксинафтилалкил; и
R₃ означает гидроксил, амино-, C(1-12)алкокси- или NH-Y-CH₂-Z-группу, где Y в свою очередь означает C(1-12)углеводородный остаток, и Z означает водород, гидроксил, карбоксил или CONH₂;
при условии, что (i) по крайней мере одна из A₅, A₇, A₈, A₁₁, A₁₅, A₁₈, A₂₂, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈, A₃₀ или A₃₁ означает Cha, или по крайней мере одна из A₃, A₁₂, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉, A₂₂, A₂₅, A₂₆, A₂₉, A₃₀ или A₃₄ означает Aib; или (ii) по крайней мере одна из A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ или A₃₁ означает Lys; или к их фармацевтически приемлемой соли. В одном из примеров осуществления по крайней мере одна из A₇ и A₁₁ означает Cha. В другом примере по крайней мере одна из A₁₆ и A₁₉ означает Aib. Конкретные примеры пептидов приведенной выше формулы (см. приложение 2) включают, но не ограничиваются ими.In accordance with another aspect, the present invention relates to peptides corresponding to the following formula:

where A ₁ means Ala, Ser or Dap;
A ₃ means Ser or Aib;
A ₅ means His, Ile or Cha;
A ₇ means Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X in turn means H, OH, halogen or methyl;
A ₈ means Leu, Met or Cha;
A ₁₀ means Asp or Asn;
A ₁₁ means Lis, Leu, Cha, Phe or β-Nal;
A ₁₂ means Gly or Aib;
A ₁₄ means Ser or His;
A ₁₅ means Ile or Cha;
A ₁₆ means Gln or Aib;
A ₁₇ means Asp or Aib;
A ₁₈ means Leu, Aib or Cha;
A ₁₉ means Arg or Aib;
A ₂₂ means Phe, Glu, Aib or Cha;
A ₂₃ means Phe, Leu, Lys or Cha;
A ₂₄ means Leu, Lys or Cha;
A ₂₅ means His, Aib or Glu;
A ₂₆ means His, Aib or Lys;
A ₂₇ means Leu, Lys or Cha;
A ₂₈ means Ile, Leu, Lys or Cha;
A ₂₉ means Ala, Glu or Aib;
A ₃₀ means Glu, Cha, Aib or Lys;
A ₃₁ means Ile, Leu, Cha, Lys or dileted;
A ₃₂ means His or diluted;
A ₃₃ means Tyr or diluted;
A ₃₄ means Ala or diluted;
each of R ₁ and R ₂ independently of one another means hydrogen, C (1-12) alkanyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2- 12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl; or one and only one of R ₁ and R ₂ represents a COE ₁ group, where E ₁ is C (1-12) alkyl, C (2-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20 ) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl; and
R ₃ means hydroxyl, amino, C (1-12) alkoxy or NH-Y-CH ₂ -Z group, where Y in turn means C (1-12) hydrocarbon residue, and Z means hydrogen, hydroxyl, carboxyl or CONH ₂ ;
provided that (i) at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₂ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ , A ₃₀ or A ₃₁ means Cha, or at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ , A ₂₂ , A ₂₅ , A ₂₆ , A ₂₉ , A ₃₀ or A ₃₄ means Aib; or (ii) at least one of A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ or A ₃₁ is Lys; or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, at least one of A ₇ and A ₁₁ is Cha. In another example, at least one of A ₁₆ and A ₁₉ means Aib. Specific examples of the peptides of the above formula (see Appendix 2) include, but are not limited to.

За исключением N-концевых аминокислот все сокращения аминокислот (например, Ala или A₁), используемые в настоящем описании, обозначают структуру -NH-CH(R)-CO-, где R означает боковую цепь аминокислоты (например, CH₃ для Ala). В случае N-концевой аминокислоты сокращения обозначают структуру = N-CH(R)-CO-, где R - боковая цепь аминокислоты. β-Nal, Nle, Dap, Cha, Nva, Amp, Pal и Aib представляют собой соответственно сокращения следующих α-аминокислот: β-(2-нафтил)аланин, норлейцин, α, β-диаминопропионовой кислоты, циклогексилаланин, норвалин, 4-аминофенилаланин, 3- пиридинилаланин и α-аминоизомасляной кислоты. В приведенной выше формуле гидроксиалкил, гидроксифенилалкил и гидроксинафтилалкил могут содержать 1-4 гидроксильных заместителей. Также COE₁ означает группу -C=O•E₁. Примеры -C=O•E₁ включают, но не ограничиваются ими, ацетил и фенилпропионил.With the exception of the N-terminal amino acids, all amino acid abbreviations (e.g., Ala or A ₁ ) used in the present specification indicate the structure -NH-CH (R) -CO-, where R is the amino acid side chain (e.g., CH ₃ for Ala) . In the case of the N-terminal amino acid, abbreviations denote the structure = N-CH (R) -CO-, where R is the amino acid side chain. β-Nal, Nle, Dap, Cha, Nva, Amp, Pal and Aib are respectively abbreviations of the following α-amino acids: β- (2-naphthyl) alanine, norleucine, α, β-diaminopropionic acid, cyclohexylalanine, norvaline, 4- aminophenylalanine, 3-pyridinylalanine and α-aminoisobutyric acid. In the above formula, hydroxyalkyl, hydroxyphenylalkyl and hydroxy-naphthylalkyl may contain 1-4 hydroxyl substituents. Also, COE ₁ means the group —C = O • E ₁ . Examples of —C = O • E ₁ include, but are not limited to, acetyl and phenylpropionyl.

Пептид по настоящему изобретению обозначают в тексте также иным способом, например [Cha^7,11]hПТГрП(1-34)NH₂, с замещенными аминокислотами в естественной последовательности, указанными в квадратных скобках (например, Cha⁷ вместо Leu⁷ и Cha¹¹ вместо Leu¹¹ в hПТГ). Сокращение hПТГ используется для обозначения ПТГ человека, hПТГрП означает ПТГрП человека, rПТГ означает крысиный ПТГ и bПТГ означает коровий ПТГ. Цифры в круглых скобках указывают число аминокислот, присутствующих в пептиде (например, hПТГ(1-34) означает аминокислоты от 1 до 34 в пептидной последовательности ПТГ человека). Последовательности для hПТГ(1-34), hПТГрП(1-34), bПТГ(1-34), rПТГ(1-34) указаны у Ниссенсена с сотр. [Nissenson et al., Receptor, 3, 193 (1993)]. Обозначение "NH₂" в ПТГ(1-34)NH₂ указывает, что концевой атом углерода у пептида амидирован. С другой стороны, ПТГ(1-34) имеет концевой атом углерода свободной кислоты.The peptide of the present invention is also indicated in the text in a different way, for example, [Cha ^7,11 ] hPTGrP (1-34) NH ₂ , with substituted amino acids in the natural sequence indicated in square brackets (for example, Cha ⁷ instead of Leu ⁷ and Cha ¹¹ instead Leu ¹¹ in hPTG). The abbreviation hPTH is used to denote human PTH, hPTGrP means human PTHrP, rPTG means rat PTH and bPTH means cow PTH. The numbers in parentheses indicate the number of amino acids present in the peptide (for example, hPTH (1-34) means amino acids 1 to 34 in the human PTH peptide sequence). Sequences for hPTG (1-34), hPTGrP (1-34), bPTG (1-34), rPTG (1-34) are indicated by Nissens et al. [Nissenson et al., Receptor, 3, 193 (1993)]. The designation "NH ₂ " in PTH (1-34) NH ₂ indicates that the terminal carbon atom of the peptide is amidated. On the other hand, PTH (1-34) has a terminal carbon atom of a free acid.

Каждый из пептидов по настоящему изобретению способен стимулировать рост костей у субъектов (то есть у млекопитающих, таких как человек). Так, они эффективны при лечении остеопороза и переломов костей, при этом терапия может осуществляться с использованием одних пептидов или одновременно с антирезорпционной терапией, например, бисфосфонатами и кальцитонином. Each of the peptides of the present invention is capable of stimulating bone growth in subjects (i.e., mammals, such as humans). So, they are effective in the treatment of osteoporosis and bone fractures, while therapy can be carried out using peptides alone or simultaneously with anti-resorption therapy, for example, bisphosphonates and calcitonin.

Пептиды по настоящему изобретению могут изготовляться в виде фармацевтически приемлемых солей. Примерами таких солей могут служить, но не ограничиваясь только ими, соли органических кислот (например, уксусной, молочной, малеиновой, лимонной, яблочной, аскорбиновой, янтарной, бензойной, метансульфокислоты, толуолсульфокислоты или пальмитиновой кислоты), соли неорганических кислот (например, соляной кислоты, серной кислоты или фосфорной кислоты) и соли полимерных кислот (например, дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы, полимолочной кислоты, полигликолевой кислоты или сополимеры полимолочной-гликолевой кислот). The peptides of the present invention can be prepared in the form of pharmaceutically acceptable salts. Examples of such salts include, but are not limited to, salts of organic acids (e.g., acetic, lactic, maleic, citric, malic, ascorbic, succinic, benzoic, methanesulfonic acid, toluenesulfonic acid or palmitic acid), salts of inorganic acids (e.g. hydrochloric acid , sulfuric acid or phosphoric acid) and salts of polymeric acids (e.g. tannic acid, carboxymethyl cellulose, polylactic acid, polyglycolic acid or polylactic-glycolic acid copolymers).

Терапевтически эффективное количество пептида по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель (например, карбонат магния, лактоза или фосфолипид, с которым терапевтическое соединение может образовывать мицеллы) вместе образуют терапевтический состав (например, пилюли, таблетки, капсулы или жидкости) для введения пациентам (например, через рот, внутривенно, через кожу, подкожно, через легкие, вагинально, назально, йонофоретически или через трахею). Вводимые через рот пилюли, таблетки или капсулы могут покрываться веществом, которое защищает активный состав от желудочного сока или кишечных ферментов в желудке в течение промежутка времени, достаточного, чтобы поступить в тонкий кишечник непереваренным. Терапевтический состав также может быть в форме биорасщепляемого или бионерасщепляемого состава пролонгированного действия для подкожного или внутримышечного введения. Смотри, например, патенты СШA 3773919 и 4767628 и PCT Заявку N WO 94/15587. Продолжительное введение может также обеспечиваться при применении имплантируемого или наружного насоса (например, насоса марки INFUSAID). Введение лекарства может осуществляться одномоментно, например в виде разовой суточной инъекции, или длительно с низкой дозировкой, например состав пролонгированного действия. A therapeutically effective amount of the peptide of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier (e.g., magnesium carbonate, lactose or phospholipid, with which the therapeutic compound can form micelles) together form a therapeutic composition (e.g., pills, tablets, capsules or liquids) for administration to patients (e.g., through the mouth, intravenously, through the skin, subcutaneously, through the lungs, vaginally, nasal, ionophoretic or through the trachea). Orally administered pills, tablets or capsules may be coated with a substance that protects the active compound from the gastric juice or intestinal enzymes in the stomach for a period of time sufficient to enter the small intestine undigested. The therapeutic composition may also be in the form of a sustained release biodegradable or biodegradable composition for subcutaneous or intramuscular administration. See, for example, US Pat. Nos. 3,773,919 and 4,767,628 and PCT Application Nos. WO 94/15587. Prolonged administration can also be achieved with an implantable or external pump (for example, an INFUSAID pump). The introduction of the drug can be carried out simultaneously, for example in the form of a single daily injection, or for a long time with a low dosage, for example, a composition of prolonged action.

Дозировка пептида по настоящему изобретению при лечении вышеупомянутых заболеваний или нарушений меняется в зависимости от принятой схемы лечения, возраста и массы пациента и его состояния и в конечном счете будет определяться лечащим врачом или ветеринаром. The dosage of the peptide of the present invention in the treatment of the aforementioned diseases or disorders varies depending on the treatment regimen adopted, the age and weight of the patient and his condition, and will ultimately be determined by the attending physician or veterinarian.

В объем притязаний по настоящему изобретению также включается пептид, соответствующий приведенной выше общей формуле, для применения при лечении заболеваний или нарушений, связанных с недостатком роста костей или аналогичными причинами, например остеопорозом или переломами. The scope of the claims of the present invention also includes a peptide according to the above general formula for use in the treatment of diseases or disorders associated with lack of bone growth or similar causes, for example osteoporosis or fractures.

Остальные признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из подробного описания и формулы патентных притязаний. Other features and advantages of the present invention will become apparent from the detailed description and claims.

На основе настоящего описания заявляемое изобретение может использоваться исключительно широко. Следующие конкретные примеры рассматриваются лишь в качестве иллюстрации и ни в коей мере как ограничение прав на изобретение. Based on the present description, the claimed invention can be used exclusively widely. The following specific examples are considered only as an illustration and in no way as a restriction on the rights to an invention.

Структура
Известно, что ПТГ(1-34) имеет две амфолитические альфа-спиральные зоны. Смотри, например, Бардена [Barden et al. Biochem., 32, 7126 (1992)]. Первая α-спираль образуется между аминокислотными остатками 4-13, вторая α-спираль образуется между 21-29 остатками аминокислот. У некоторых пептидов по настоящему изобретению Cha замещено одним или несколькими остатками в пределах или вблизи этих двух зон ПТГ(1-34), например Cha⁷ и Cha¹¹ в пределах первой α-спирали или Cha²⁷ и Cha²⁸ в пределах второй α-спирали.Structure
It is known that PTH (1-34) has two ampholytic alpha-helical zones. See, for example, Barden [Barden et al. Biochem. 32, 7126 (1992)]. The first α-helix is formed between amino acid residues 4-13, the second α-helix is formed between 21-29 amino acid residues. In some peptides of the present invention, Cha is substituted with one or more residues in or near these two PTH zones (1-34), for example, Cha ⁷ and Cha ¹¹ within the first α-helix or Cha ²⁷ and Cha ²⁸ within the second α-helix .

Также настоящее изобретение включает производные ПТГ(1-34) с замещенными Aib на остаток, смежный с α-спиралями, например, Aib¹⁶, Aib¹⁹ и Aib³⁴; hArg²⁷ и Nle³¹; или с замещенными Dpa на N-концевой остаток.Also, the present invention includes PTH derivatives (1-34) with substituted Aib at the residue adjacent to α-helices, for example, Aib ¹⁶ , Aib ¹⁹ and Aib ³⁴ ; hArg ²⁷ and Nle ³¹ ; or with substituted Dpa at the N-terminal residue.

Синтез
Пептиды по настоящему изобретению могут получаться стандартным синтезом в твердой фазе [см. например, Stewart J.M. et al., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co. , 2d ed. 1984] . Ниже приводится описание получения [Aib³⁴] hПТГ(1-34)NH₂. Получение других пептидов по настоящему изобретению аналогично описанному выше и не представляет какой-либо сложности для специалистов в данной области.Synthesis
The peptides of the present invention can be obtained by standard synthesis in the solid phase [see e.g., Stewart JM et al., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co. , 2d ed. 1984]. The following is a description of the preparation of [Aib ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ . Obtaining other peptides of the present invention is similar to that described above and does not pose any difficulty for specialists in this field.

Пептид синтезирован на Прикладных Биосистемах (Фостер Сити, Калифорния) в пептидном синтезаторе модели 430A, который усовершенствовали для ускорения синтеза пептида в твердой фазе трет-бутилоксикарбонилом (Boc) [см. Schnoize et al. , Int.J.Peptide Protein Res. 90, 180 (1992)]. Использовали 4-метилбензгидриламиновую (MBHA) смолу (Пенинсула, Белмонт, Калифорния) с замещением 0,93 ммоля/г. Применяли Boc-аминокислоты (Бэчем, Калифорния, Торренс, Калифорния; Nova Biochem., ЛаДжолла, Калифорния), имеющие следующую защиту боковых цепей: Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx1)-ОН, Boc-Asn(Xan)-OH, Boc-Glu(OсHx1)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Asn-GH, Boc-Val-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Ser-OH, Boc-Gly-OH, Boc-Met-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH и Boc-Trp(Fm)-ОН. Синтез проводили на 0,14 ммоля. Boc-группы удаляли обработкой 100%-ной трифторуксусной кислотой (TFA) дважды по одной минуте. Boc-аминокислоты (2,5 ммоля) предварительно активировали 2,0 ммолями гексафторфосфата 2- (1H-бензтриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) и 1,0 мл диизопропилэтиламина (DIEA) в 4 мл диметилформамида (DMF) и сочетали без предварительной нейтрализации полипептидной соли трифторуксусной кислоты (TFA). Продолжительность сочетания составляла 5 мин, за исключением Boc-Aib(Xan)-OH, и следующего остатка, Boc-Asn(Xan)-OH, для которых длительность сочетания равна 20 мин. The peptide was synthesized on Applied Biosystems (Foster City, California) in a Model 430A peptide synthesizer, which was improved to accelerate solid-phase peptide synthesis with tert-butyloxycarbonyl (Boc) [see Schnoize et al. , Int. J. Peptide Protein Res. 90, 180 (1992)]. A 4-methylbenzhydrylamine (MBHA) resin (Peninsula, Belmont, California) with a substitution of 0.93 mmol / g was used. Boc amino acids (Bechem, California, Torrens, California; Nova Biochem., La Jolla, California) having the following side chain protection were used: Boc-Arg (Tos) -OH, Boc-Asp (OcHx1) -OH, Boc-Asn ( Xan) -OH, Boc-Glu (OcHx1) -OH, Boc-His (DNP) -OH, Boc-Asn-GH, Boc-Val-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Ser-OH, Boc-Gly -OH, Boc-Met-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Lys (2CIZ) -OH, Boc-Ser (Bzl) -OH and Boc-Trp (Fm) -OH. The synthesis was carried out at 0.14 mmol. Boc groups were removed by treatment with 100% trifluoroacetic acid (TFA) twice in one minute. Boc amino acids (2.5 mmol) were preactivated with 2.0 mmol of 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) and 1.0 ml of diisopropylethylamine (DIEA) in 4 ml of dimethylformamide (DMF) and combined without prior neutralization of the polypeptide salt of trifluoroacetic acid (TFA). The duration of the combination was 5 minutes, with the exception of Boc-Aib (Xan) -OH, and the next residue, Boc-Asn (Xan) -OH, for which the duration of the combination was 20 minutes.

В конце построения пептидной цепи смолу обрабатывали раствором 20% меркаптоэтанола/10% диизопропилэтиламина в диметилформамиде (DMF) дважды по 30 мин для удаления динитрофенил-группы (DNP) в His-боковой цепи. N-концевую трет-бутилоксикарбонильную (Boc)-группу затем удаляли двукратной обработкой 100%-ной трифторуксусной кислотой (TFA) по две минуты. После нейтрализации пептидной смолы 10% диизопропилэтиламином в диметилформамиде (1 х 1 мин) формил-группу в боковой цепи Trp удаляли двукратной обработкой по 30 мин раствором 15% этаноламина/15% воды/70% диметилформамида. Частично депротектинированную пептидную смолу промывали в диметилформамиде и метиленхлориде и сушили под вакуумом. Окончательное удаление достигали перемешиванием пептидной смолы в 10 мл фтористого водорода, содержащего 1 мл анизола, при 0^oC в течение 75 мин. HF удаляли в токе азота. Остаток промывали эфиром (6 раз по 10 мл) и экстрагировали 4N уксусной кислотой (6 раз по 10 мл).At the end of the peptide chain construction, the resin was treated with a solution of 20% mercaptoethanol / 10% diisopropylethylamine in dimethylformamide (DMF) twice for 30 minutes to remove the dinitrophenyl group (DNP) in the His side chain. The N-terminal tert-butyloxycarbonyl (Boc) group was then removed by double treatment with 100% trifluoroacetic acid (TFA) for two minutes. After neutralizing the peptide resin with 10% diisopropylethylamine in dimethylformamide (1 x 1 min), the formyl group in the Trp side chain was removed by double treatment for 30 min with a solution of 15% ethanolamine / 15% water / 70% dimethylformamide. The partially deprotectinated peptide resin was washed in dimethylformamide and methylene chloride and dried under vacuum. Final removal was achieved by mixing the peptide resin in 10 ml of hydrogen fluoride containing 1 ml of anisole at 0 ^° C for 75 minutes. HF was removed in a stream of nitrogen. The residue was washed with ether (6 times 10 ml) and was extracted with 4N acetic acid (6 times 10 ml).

Смесь пептида в водном экстракте очищали на препаративном жидкостном хроматографе высокого давления (ПЖX) с обращаемой фазой, используя колонку C₁₈ Vydac (Nest Group, Southborough, MA). Колонку элюировали с линейным градиентом (10% - 45%) раствора B в течение 130 мин при скорости потока 10 мл/мин. Раствор A - 0,1% водный трифторуксусной кислоты TFA; раствор B - ацетонитрил, содержащий 0,1% трифторуксусной кислоты TFA. Фракции собирали и проверяли на аналитическом жидкостном хроматографе высокого давления. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизовали досуха. Получали 62,3 мг белого твердого вещества. Чистота продукта по данным аналитической ГЖХ выше 99%. По данным электронной масс-спектрометрии установлено, что молекулярная масса продукта равна 4054,7 (что совпадает с расчетной молекулярной массой 4054,7).The peptide mixture in the aqueous extract was purified on a reverse phase preparative liquid chromatograph (PLC) using a C ₁₈ Vydac column (Nest Group, Southborough, MA). The column was eluted with a linear gradient (10% - 45%) of solution B for 130 min at a flow rate of 10 ml / min. Solution A - 0.1% aqueous trifluoroacetic acid TFA; solution B - acetonitrile containing 0.1% trifluoroacetic acid TFA. Fractions were collected and tested on a high pressure analytical liquid chromatograph. The fractions containing the pure product were combined and lyophilized to dryness. Received 62.3 mg of a white solid. The purity of the product according to analytical GLC above 99%. According to electronic mass spectrometry, it was found that the molecular weight of the product is 4054.7 (which coincides with the calculated molecular weight of 4054.7).

Синтез и очистку [Cha^7,11] hПТГ(1-34)NH₂ осуществляли по аналогии с [Aib³⁴] hПТГ(1-34)NH₂. Защищенная аминокислота трет-бутилоксикарбонил-Cha-OH поступала из Baсhem, шт. Калифорния. Чистота конечного продукта выше 98%, молекулярная масса продукта по данным масс-спектрометрии равна 4197,0 (расчетная величина равна 4196,9).The synthesis and purification of [Cha ^7.11 ] hPTH (1-34) NH _{2 was} carried out by analogy with [Aib ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ . The protected amino acid tert-butyloxycarbonyl-Cha-OH was obtained from Bahem, pc. California. The purity of the final product is above 98%, the molecular weight of the product according to mass spectrometry is 4197.0 (calculated value is 4196.9).

Ниже приводится полная расшифровка использованных выше сокращений: Boc означает трет-бутилоксикарбонил; HF означает фтористый водород, Fm означает формил; Xan означает ксантил; Bzl означает бензил; Tos означает тозил; DNP означает 2,4- динитрофенил, DMF означает диметилформамид, DCM означает дихлорметан; HBTU означает гексафторфосфат 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония; DIAE означает диизопропилэтиламин; HOAc означает уксусную кислоту; TFA означает трифторуксусную кислоту; 2CIZ означает 2-хлорбензилоксикарбонил и OcHx1 означает О-циклогексил. The following is a complete explanation of the abbreviations used above: Boc means tert-butyloxycarbonyl; HF means hydrogen fluoride, Fm means formyl; Xan means xanthyl; Bzl means benzyl; Tos means tosyl; DNP means 2,4-dinitrophenyl, DMF means dimethylformamide, DCM means dichloromethane; HBTU means 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate; DIAE means diisopropylethylamine; HOAc means acetic acid; TFA means trifluoroacetic acid; 2CIZ means 2-chlorobenzyloxycarbonyl and OcHx1 means O-cyclohexyl.

Заместители R₁ и R₂ в общей формуле могут быть присоединены к свободному амину N-концевой аминокислоты стандартными приемами, хорошо известными в химии. Например, алкильные группы, такие как C(1-12)алкилы, могут быть присоединены восстановительным алкилированием. Гидроксиалкильные группы, например C(1-12)гидроксиалкил, также могут быть присоединены восстановительным алкилированием при условии, если свободная гидроксильная группа экранирована трет-бутиловым сложным эфиром. Ацильные группы, например COE₁, могут присоединяться по реакции сочетания свободной кислоты, например E₁COOH, к свободному амину N-концевой аминокислоты при смешении полученной смолы с 3 молярными эквивалентами как свободной кислоты, так и диизопропилкарбодиимида в метиленхлориде в течение одного часа и прохождении полученной смолы через стадии вышеописанной программы промывки от (a) до (f). Если свободная кислота содержит свободную гидроксильную группу, например пара-гидроксифенилпропионовая кислота, то сочетание будет протекать с дополнительными 3 молярными эквивалентами HOBT.The substituents R ₁ and R ₂ in the general formula can be attached to the free amine of the N-terminal amino acid by standard techniques well known in chemistry. For example, alkyl groups, such as C (1-12) alkyls, may be attached by reductive alkylation. Hydroxyalkyl groups, for example C (1-12) hydroxyalkyl, can also be attached by reductive alkylation, provided that the free hydroxyl group is shielded by tert-butyl ester. Acyl groups, for example COE ₁ , can be coupled via the free acid coupling reaction, for example E ₁ COOH, to the free amine of the N-terminal amino acid by mixing the resulting resin with 3 molar equivalents of both free acid and diisopropylcarbodiimide in methylene chloride for one hour and passing the obtained resin through the stages of the above washing program from (a) to (f). If the free acid contains a free hydroxyl group, for example, para-hydroxyphenylpropionic acid, then the combination will proceed with an additional 3 molar equivalents of HOBT.

Специалистам в данной области не составит труда аналогичным образом синтезировать другие пептиды по настоящему изобретению. Specialists in this field will not be difficult to similarly synthesize other peptides of the present invention.

Функциональные анализы
A. Связывание с рецептором паратиреоидного гормона
Пептиды по настоящему изобретению испытаны на их способность присоединяться к рецептору ПТГ, присутствующему в SaOS-2 (человеческие клетки остеосаркомы). SaOS-2 клетки (Американская коллекция культур, Роквилл, шт. Мэриленд; ATCC#HTB 85) сохраняли в среде RPMI 1640 (Сигма, Сан-Луис, шт. Монтана) с добавкой 10% плодной сыворотки коров (FBS) и 2 мМ глутамина при 37^oC в увлажненной атмосфере воздуха с 5% углекислого газа. Среду меняли каждые три-четыре дня и клетки субкультурировали каждую неделю путем трипсинизации.Functional analyzes
A. Binding to the parathyroid hormone receptor
The peptides of the present invention have been tested for their ability to bind to the PTH receptor present in SaOS-2 (human osteosarcoma cells). SaOS-2 cells (American Culture Collection, Rockville, PA; ATCC # HTB 85) were stored in RPMI 1640 medium (Sigma, San Luis, Montana) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and 2 mM glutamine at 37 ^o C in a humidified atmosphere of air with 5% carbon dioxide. The medium was changed every three to four days and the cells were subcultured every week by trypsinization.

SaOS-2 клетки выдерживали в течение четырех дней до слияния. Среду заменяли на 5% FBS в RPMI 1640 и инкубировали в течение двух часов при комнатной температуре с 10 х 10 cpm моно-¹²⁵I- [Nle^8,18,Tyr³⁴(3-¹²⁵I)]bПТГ(1-34)NH₂ в присутствии совместимых пептидов по настоящему изобретению при разных концентрациях в интервале от 10^-11 М до 10^-4 М. Клетки промывали четыре раза PBS, охлажденным льдом, и лизировали 0,1 М едкого натра и подсчитывали радиоактивность клеток с помощью счетчика излучения. Синтез моно-¹²⁵I-[Nle^8,18, Tyr³⁴(3- ¹²⁵I)]bПТГ(1-34)NH₂ проводили по Гольдману М.Е. с сотр. [Goldman М.Е. et al., Endocrinol., 123, 1468 (1988)].SaOS-2 cells were incubated for four days prior to fusion. The medium was replaced with 5% FBS in RPMI 1640 medium and incubated for two hours at room temperature with 10 x 10 cpm mono- ¹²⁵ I- [Nle ^8,18, Tyr ³⁴ (3- ¹²⁵ I)] bPTG (1-34) NH ₂ in the presence of the compatible peptides of the present invention at various concentrations ranging from 10 ^-11 M to 10 ^-4 M. The cells were washed four times with PBS, ice-cold, and 0.1 M sodium hydroxide was lysed and the cell radioactivity was counted using a radiation counter. Synthesis of mono- ¹²⁵ I- [Nle ^8,18, Tyr ³⁴ (3- ¹²⁵ I)] bPTG (1-34) NH ₂ was carried out by Goldman ME with sotr. [Goldman M.E. et al., Endocrinol., 123, 1468 (1988)].

Опыты по определению связывания проводили с разными пептидами по настоящему изобретению и для каждого пептида рассчитывали значения IC₅₀ (половина максимального ингибирования связывания моно-¹²⁵I-[Nle^8,18,Tyr³⁴(3-¹²⁵I)]bПТГ (1-34)NH₂.Experiments were performed to determine the binding with various peptides of the present invention and for each peptide was calculated IC ₅₀ values (half maximal inhibition of binding of mono- ¹²⁵ I- [Nle ^8,18, Tyr ³⁴ (3- ¹²⁵ I)] bPTG (1-34) NH ₂ .

Как следует из таблицы 1, все испытанные пептиды обладают высоким сродством связывания относительно рецептора ПТГ на SaOS-2 клетке. As follows from table 1, all tested peptides have a high affinity for binding relative to the PTH receptor on the SaOS-2 cell.

Б. Стимулирование активности аденилатциклазы
Измерена способность пептидов по настоящему изобретению вызывать в SaOS-2 клетках биологическую реакцию. Более конкретно, определяли любое стимулирование аденилатциклазы по уровню синтеза cAMP (аденозин 3',5'-монофосфата) в соответствии с Родэном и Голдманом [Rodan et al., J.Clin. Invest, 72, 1511 (1983); Goldman, et al., Endocrinol., 123, 1468 (1988)].B. Stimulation of adenylate cyclase activity
The ability of the peptides of the present invention to elicit a biological response in SaOS-2 cells was measured. More specifically, any stimulation of adenylate cyclase was determined by the level of cAMP synthesis (adenosine 3 ′, 5′-monophosphate) in accordance with Roden and Goldman [Rodan et al., J. Clin. Invest, 72, 1511 (1983); Goldman, et al., Endocrinol., 123, 1468 (1988)].

Конфлюэнтные SaOS-2 клетки в 24 бюксах выдерживали с [³H]аденином, имеющим радиоактивность 1,85•10⁴ с^-1 (0,5 мкКюри) (26,9 Кюри/ммоль, New England Nuclear, Бостон, Массачусетс) в свежей среде при 37^oC в течение двух часов и дважды промывали солевым раствором Хэнкса (Гибко, Гайтерсбург, шт. Мэриленд). Клетки обрабатывали 1 мМ IBMX [изобутилметилксантин. Сигма, Сан-Луис, шт. Монтана] в свежей среде в течение 15 мин, и пептиды по настоящему изобретению добавляли в среду и выдерживали в течение 5 мин. Реакцию обрывали добавлением 1,2 М трихлоруксусной кислоты (TCA) (Сигма, Сан-Луис, Монтана) с последующей нейтрализацией образца 4N KOH. cAMP выделяли методом двухколоночной хроматографии [Salmon et al. Anal. Blochem. 58, 541 (1974)]. Радиоактивность подсчитывали сцинцилляционным счетчиком (Жидкостной Сцинцилляционный Счетчик 2200CA, Паккард. Доунерс Грув, шт. Иллинойс).Confluent SaOS-2 cells in 24 bucks were incubated with [ ³ H] adenine having a radioactivity of 1.85 • 10 ⁴ s ^-1 (0.5 μCi) (26.9 Curie / mmol, New England Nuclear, Boston, Mass.) In fresh medium at 37 ^o C for two hours and washed twice with Hanks saline (Flexo, Gaithersburg, pc. Maryland). Cells were treated with 1 mM IBMX [isobutylmethylxanthine. Sigma, San Luis, pc. Montana] in fresh medium for 15 minutes, and the peptides of the present invention were added to the medium and kept for 5 minutes. The reaction was terminated by the addition of 1.2 M trichloroacetic acid (TCA) (Sigma, San Luis, Montana), followed by neutralization of the 4N KOH sample. cAMP was isolated by double column chromatography [Salmon et al. Anal. Blochem. 58, 541 (1974)]. Radioactivity was counted by a scintillation counter (Liquid Scintillation Counter 2200CA, Packard. Downers Grove, Illinois).

В Таблице 1 приведены соответствующие величины EC₅₀ (половина максимального стимулирования аденилатциклазы). Было установлено, что все испытанные пептиды являются эффективными стимуляторами активности аденилатциклазы, которая является биохимическим указателем, непосредственным сигналом относительно пролиферации остеобластных клеток (например, роста костей).Table 1 shows the corresponding EC ₅₀ values (half the maximum stimulation of adenylate cyclase). It was found that all tested peptides are effective stimulants of adenylate cyclase activity, which is a biochemical indicator, a direct signal for the proliferation of osteoblastic cells (for example, bone growth).

Необходимо иметь в виду, что, хотя изобретение описывается с подробными ссылками на конкретные примеры его осуществления, их описание имеет своей целью проиллюстрировать изобретение без ограничения объема патентных притязаний. Патентные притязания охватывают другие стороны, преимущества и модификации. It should be borne in mind that although the invention is described with detailed references to specific examples of its implementation, their description is intended to illustrate the invention without limiting the scope of patent claims. Patent claims cover other aspects, advantages and modifications.

Claims

1. A peptide having a high affinity for the parathyroid hormone receptor (PTH) and having the ability to stimulate the activity of adenylate cyclase, the General formula

where A ₁ means Ser, Ala or Dap;
And ₃ means Ser, Thr or Aib;
And ₅ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₇ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile, Cha or Nle;
And ₁₁ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₁₂ means Gly or Aib;
And ₁₅ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₁₆ means Ser, Asn, Ala or Aib;
And ₁₇ means Ser, Thr or Aib;
And ₁₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile, Nle, Cha or Aib;
A ₁₉ means Glu or Aib;
A ₂₁ means Val, Cha or Met;
A ₂₃ means Trp or Cha;
A ₂₄ means Leu or Cha;
A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg, Gln or Cha;
A ₂₈ means Leu or Cha;
A ₃₀ means Asp or Lys;
A ₃₁ means Val, Nle, Cha or dilete;
A ₃₂ means His or diluted;
A ₃₃ means Asn or diluted;
A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp, Aib or dilete;
each of R ₁ and R ₂ independently of one another means hydrogen, C (1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1- 12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxy-naphthylalkyl or one and only one of R ₁ and R ₂ represents a group of SOE ₁ , where E ₁ means C ( 1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7- 20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl;
R ₃ means hydroxyl, amino, C (1-12) alkoxy or NH-Y-CH ₂ -Z group, where Y, in turn, means C (1-12) hydrocarbon residue, and Z means hydrogen, hydroxyl or CONH ₂ , provided that at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₁ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha or at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib; if A _{12 is} not Aib, A ₃₄ is Tyr,
or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

2. The peptide according to claim 1, characterized in that at least one of A ₇ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

3. The peptide according to claim 2, characterized in that A ₃ means Ser; A ₅ means Ile; A ₇ means Leu or Cha; And ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₁ means Leu or Cha; And ₁₂ means Gly; A ₁₅ means Leu or Cha; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₇ means Ser; A ₁₈ means Met or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn; A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen and R ₃ means an amino group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

4. The peptide according to claim 3, characterized in that at least one of A ₇ and A ₁₁ means Cha, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

5. The peptide according to claim 4, characterized in that said peptide is [Cha ^7, ¹¹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^7, ¹¹ , Nle ^8, ¹⁸ , Tyr ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ¹¹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^7, ^11, ¹⁵ ] hPTH (1-34) NH ₂ or [Cha ⁷ ] hPTH (1-34) NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

6. The peptide according to claim 3, characterized in that at least one of A ₁₅ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

7. The peptide according to claim 6, characterized in that said peptide is [Cha ²³ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ²⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Nle ^8, ¹⁸ , Cha ²⁷ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ²⁸ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ³¹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^24, ^28, ³¹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^24, ^28, ³¹ , Lys ³⁰ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^28, ³¹ ] hPTH (1-34) NH ₂ or [Cha ¹⁵ ] hPTH (1-34) NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

8. The peptide according to claim 1, characterized in that at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

9. The peptide of claim 8, wherein A ₃ means Ser or Aib; A ₅ means Ile; A ₇ means Leu or Cha; And ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₁ means Leu or Cha; A ₁₅ means Leu or Cha; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₈ means Met, Aib or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn; A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; R ₃ means an amino group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

10. The peptide according to claim 9, characterized in that at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

11. The peptide according to claim 4, characterized in that said peptide is [Aib ¹⁶ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Aib ¹⁹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Aib ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Aib ^16, ¹⁹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Aib ³ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Aib ¹⁷ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Aib ¹² ] hPTH (1-34) NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

12. The peptide according to claim 1, characterized in that at least one of A ₇ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ or A ₃₁ means Cha, or at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

13. The peptide according to claim 2, characterized in that A ₃ means Ser or Aib; A ₅ means Ile; A ₇ means Leu or Cha; And ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₁ means Leu or Cha; A ₁₅ means Leu or Cha; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₈ means Met, Aib or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn; A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; R ₃ means an amino group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

14. The peptide according to item 13, wherein at least one of A ₇ and A ₁₁ means Cha, and at least one of A ₁₆ , A ₁₉ and A ₃₄ means Aib or its pharmaceutically acceptable salt.

15. The peptide according to claim 14, characterized in that said peptide is [Cha ^7, ¹¹ , Nle ^8, ¹⁸ , Aib ^16, ¹⁹ , Tyr ³⁴ ] hPTG (1-34) NH ₂ ; [Cha ^7, ¹¹ , Nle ^8, ^18, ³¹ , Aib ^16, ¹⁹ , Tyr ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^7, ¹¹ , Aib ¹⁹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^7, ¹¹ , Aib ¹⁶ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [Cha ^7, ¹¹ , Nle ^8, ¹⁸ , Aib ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; or [Cha ^7, ¹¹ , Aib ¹⁹ , Lys ³⁰ ] hPTH (1-34) NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

16. The peptide according to item 13, wherein at least one of A ₂₄ , A ₂₈ and A ₃₁ means Cha, and at least one of A ₁₆ and A ₁₇ means Aib, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

17. The peptide according to claim 16, characterized in that the peptide is [Cha ²⁸ , Nle ^8, ¹⁸ , Aib ^16, ¹⁹ , Tyr ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ or [Cha ²⁸ , Aib ^16, ¹⁹ ] hPTH (1-34) NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

18. A peptide having a high affinity for the parathyroid hormone receptor (PTH) and having the ability to stimulate the activity of adenylate cyclase of the General formula

where A ₁ means Dap;
And ₃ means Ser, Thr or Aib;
And ₅ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
And ₇ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, represents H, OH, halogen or methyl;
A ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile, Cha or Nle;
And ₁₁ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₁₂ means Gly or Aib;
And ₁₅ means Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₁₆ means Ser, Asn, Ala or Aib;
And ₁₇ means Ser, Thr or Aib;
And ₁₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile, Nle, Cha or Aib;
A ₁₉ means Glu or Aib;
A ₂₁ means Val, Cha or Met;
A ₂₃ means Trp or Cha;
A ₂₄ means Leu or Cha;
A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg, Gln or Cha;
A ₂₈ means Leu or Cha;
A ₃₀ means Asp or Lys;
A ₃₁ means Val, Nle, Cha or deleted;
A ₃₂ means His or deleted;
A ₃₃ means Asn or deleted;
A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp, Aib or deleted;
each of R ₁ and R ₂ independently of one another means hydrogen, C (1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1- 12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxy-naphthylalkyl or one and only one of R ₁ and R ₂ represents a group of SOE ₁ , where E ₁ means C ( 1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7- 20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl;
R ₃ means hydroxyl, amino, C (1-12) alkoxy or NH-Y-CH ₂ -Z group, where Y, in turn, means C (1-12) hydrocarbon residue, and Z means hydrogen, hydroxyl , carboxyl or CONH ₂ group,
with the proviso that at least A ₁ is Dap, A ₇ is β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe; And ₁₅ means β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe; A ₂₇ means hArg, or A ₃₁ means Nle, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

19. The peptide according to p, characterized in that A ₁ means Ser, Gly or Dap; And ₃ means Ser or Aib; And ₈ means Met, Nva, Leu, Val, Ile or Nle; A ₁₆ means Asn or Aib; A ₁₈ means Met, Aib or Nle; A ₂₁ means Val; A ₂₇ means Lys, Aib, Leu, hArg or Cha; A ₃₁ means Val, Nle or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Asn; A ₃₄ means Phe, Tyr, Amp or Aib; R ₁ means hydrogen; R ₂ means hydrogen; R ₃ means an amino group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

20. The peptide according to claim 19, wherein said peptide is [Nle ³¹ ] hPTH (1-34) NH ₂ ; [hArg ²⁷ ] hPTH (1-34) NH ₂ or [Dap ¹ , Nle ^8, ¹⁸ , Tyr ³⁴ ] hPTH (1-34) NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt.

21. A peptide having a high affinity for the parathyroid hormone receptor (PTH) and having the ability to stimulate the activity of adenylate cyclase, the General formula

where A ₁ means Ala, Ser or Dap;
And ₃ means Ser or Aib;
And ₅ means His, Ile or Cha;
A ₇ means Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₈ means Leu, Met or Cha;
And ₁₀ means Asp or Asn;
And ₁₁ means Lys, Leu, Cha, Phe or β-Nal;
A ₁₂ means Gly or Aib;
A ₁₄ is Ser or His;
A ₁₅ means Ile or Cha;
A ₁₆ means Gln or Aib;
A ₁₇ means Asp or Aib;
And ₁₈ means Leu, Aib or Cha;
A ₁₉ means Arg or Aib;
A ₂₂ means Phe, Glu, Aib or Cha;
A ₂₃ means Phe, Leu, Lys or Cha;
A ₂₄ means Leu, Lys or Cha;
A ₂₅ means His, Aib or Glu;
A ₂₆ means His, Aib or Lys;
A ₂₇ means Leu, Lys or Cha;
A ₂₈ means Ile, Leu, Lys or Cha;
A ₂₉ means Ala, Glu or Aib;
And ₃₀ means Glu, Cha, Aib or Lys;
A ₃₁ means Ile, Leu, Cha, Lys or deleted;
A ₃₂ means His or deleted;
A ₃₃ means Thr or deleted;
A ₃₄ means Ala, Aib or deleted;
each of R ₁ and R ₂ independently of one another means hydrogen, C (1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1- 12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxy-naphthylalkyl or one and only one of R ₁ and R ₂ represents a group of SOE ₁ , where E ₁ means C ( 1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7- 20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl; and
R ₃ means hydroxyl, amino, C (1-12) alkoxy or NH-Y-CH ₂ -Z group, where Y, in turn, means C (1-12) hydrocarbon residue, and Z means hydrogen, hydroxyl , carboxyl or CONH ₂ group; provided that at least one of A ₅ , A ₇ , A ₈ , A ₁₁ , A ₁₅ , A ₁₈ , A ₂₂ , A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ , A ₃₀ or A ₃₁ means Cha, or at least one of A ₃ , A ₁₂ , A ₁₆ , A ₁₇ , A ₁₈ , A ₁₉ , A ₂₂ , A ₂₅ , A ₂₆ , A ₂₉ , A ₃₀ or A ₃₄ means Aib, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

22. The peptide according to item 21, wherein A ₂₂ means Phe or Cha; A ₂₃ means Phe or Cha; A ₂₅ means His; A ₂₆ means His; A ₂₇ means Leu or Cha; A ₂₈ means Ile or Cha; A ₂₉ means Ala; A ₃₀ means Glu or Lys; A ₃₁ means Ile or Cha; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Thr; A ₃₄ means Ala, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

23. The peptide according to item 22, wherein at least one of A ₇ and A ₁₁ means Cha, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

24. The peptide according to item 22, wherein at least one of A ₁₆ and A ₁₉ means Aib, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

25. The peptide according to item 21, wherein A ₂₂ means Glu, Aib or Cha; A ₂₃ means Leu, Lys or Cha; A ₂₅ means Aib or Glu; A ₂₆ means Aib or Lys; A ₂₈ means Leu, Lys or Cha; A ₂₉ means Glu or Aib; And ₃₀ means Cha, Aib or Lys; A ₃₁ means Leu, Cha or Lys; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Thr; A ₃₄ means Ala, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

26. The peptide according A.25, characterized in that at least one of A ₇ and A ₁₁ means Cha, or its pharmaceutically acceptable salt.

27. The peptide according A.25, characterized in that at least one of A ₁₆ and A ₁₉ means Aib, or its pharmaceutically acceptable salt.

28. A peptide having a high affinity for the parathyroid hormone receptor (PTH) and having the ability to stimulate the activity of adenylate cyclase, the General formula

where A ₁ means Ala, Ser or Dap;
And ₃ means Ser or Aib;
And ₅ means His, Ile or Cha;
A ₇ means Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pal, Phe or para-X-Phe, where X, in turn, is hydroxyl, halogen or methyl;
A ₈ means Leu, Met or Cha;
And ₁₀ means Asp or Asn;
And ₁₁ means Lys, Leu, Cha, Phe or β-Nal;
A ₁₂ means Gly or Aib;
A ₁₄ is Ser or His;
A ₁₅ means Ile or Cha;
A ₁₆ means Gln or Aib;
A ₁₇ means Asp or Aib;
And ₁₈ means Leu, Aib or Cha;
A ₁₉ means Arg or Aib;
A ₂₂ means Phe, Glu, Aib or Cha;
A ₂₃ means Phe, Leu, Lys or Cha;
A ₂₄ means Leu, Lys or Cha;
A ₂₅ means His, Aib or Glu;
A ₂₆ means His, Aib or Lys;
A ₂₇ means Leu, Lys or Cha;
A ₂₈ means Ile, Leu, Lys or Cha;
A ₂₉ means Ala, Glu or Aib;
And ₃₀ means Glu, Cha, Aib or Lys;
A ₃₁ means Ile, Leu, Cha, Lys or deleted;
A ₃₂ means His or deleted;
A ₃₃ means Thr or deleted;
A ₃₄ means Ala, Aib or deleted;
each of R ₁ and R ₂ independently of one another means hydrogen, C (1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1- 12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7-20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxy-naphthylalkyl or one and only one of R ₁ and R ₂ represent a group of SOE ₁ , where E ₁ means C ( 1-12) alkyl, C (2-12) alkenyl, C (7-20) phenylalkyl, C (11-20) naphthylalkyl, C (1-12) hydroxyalkyl, C (2-12) hydroxyalkenyl, C (7- 20) hydroxyphenylalkyl or C (11-20) hydroxynaphthylalkyl;
R ₃ means hydroxyl, amino, C (1-12) alkoxy or NH-Y-CH ₂ -Z group, where Y, in turn, means C (1-12) hydrocarbon residue, and Z means hydrogen, hydroxyl , carboxyl or CONH ₂ group; with the proviso that at least one of A ₂₃ , A ₂₄ , A ₂₇ , A ₂₈ or A ₃₁ is Lys, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

29. The peptide according to p. 28, wherein A ₂₂ means Glu, Aib or Cha; A ₂₃ means Leu, Lys or Cha; A ₂₅ means Aib or Glu; A ₂₆ means Aib or Lys; A ₂₈ means Leu, Lys or Cha; A ₂₉ means Glu or Aib; And ₃₀ means Cha, Aib or Lys; A ₃₁ means Leu, Cha or Lys; A ₃₂ means His; A ₃₃ means Thr; A ₃₄ means Ala, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

30. The peptide according to clause 29, wherein at least one of A ₇ and A ₁₁ means Cha, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

31. The peptide according to clause 29, wherein at least one of A ₁₆ and A ₁₉ means Aib, or its pharmaceutically acceptable salt.

32. The compound of the formula [Glu ^22, ²⁵ , Leu ^23, ^28, ³¹ , Aib ²⁹ , Lys ^26, ³⁰ ] hPTGpP (1-34) NH ₂ .