RU2139348C1 - Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов - Google Patents
Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2139348C1 RU2139348C1 RU97116922/13A RU97116922A RU2139348C1 RU 2139348 C1 RU2139348 C1 RU 2139348C1 RU 97116922/13 A RU97116922/13 A RU 97116922/13A RU 97116922 A RU97116922 A RU 97116922A RU 2139348 C1 RU2139348 C1 RU 2139348C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gram
- positive
- lysoamidase
- cells
- polymyxin
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 18
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 title abstract description 16
- 108010013286 lysoamidase Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 claims description 30
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 claims description 30
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 claims description 30
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 230000001420 bacteriolytic effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 108090000988 Lysostaphin Proteins 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 2
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 210000004262 dental pulp cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 239000006391 Luria-Bertani Medium Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001277 chronic periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 229960003346 colistin Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Chemical compound CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O.CCC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004261 periodontium Anatomy 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N polymyxin E1 Natural products CCC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KNIWPHSUTGNZST-UHFFFAOYSA-N polymyxin E2 Natural products CC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O KNIWPHSUTGNZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000857 poor renal function Toxicity 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения ферментных средств широкого спектра действия, используемых в медицине для лечения наружных инфекционных заболеваний, а также в генетике, молекулярной биологии и биохимии в лабораторной практике. Предложено средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, включающее лизоамидазу, полимиксин В и буферный раствор при следующем соотношении компонентов, мкг/мл: лизоамидаза 1000-3000, полимиксин В 20-50, буферный раствор остальное. Предлагаемое средство способно лизировать клетки представителей как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий, в том числе и патогенных, способных вызывать серьезные инфекционные заболевания, в частности заболевания полости рта. 3 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения ферментных средств широкого спектра действия, используемых в медицине для лечения наружных инфекционных заболеваний, а также в генетике, молекулярной биологии и биохимии в лабораторной практике.
Экзоклеточные бактериолитические ферменты широко распространены в природе. Они обнаружены у бактерий, грибов, насекомых, растений, животных и человека. Бактериолитические ферменты имеют различные функции: защитные функции у высших организмов, завоевание экологической ниши и снабжение клеток энергией у микроорганизмов. Защитные функции осуществляются путем лизиса патогенных микроорганизмов [1] . Субстратом бактериолитических ферментов являются пептидогликаны, входящие в состав клеточных стенок грамотрицательных и грамположительных бактерий, но подавляющее количество бактериолитических ферментов не способны самостоятельно лизировать нативные клетки грамотрицательных бактерий.
Известны ферментные препараты на основе бактериолитических ферментов, лизирующие клетки грамположительных микроорганизмов: лизоцим яичного белка [2]. лизостафин [3] и лизоамидаза [4].
Лизоцим используют в медицине для лечения наружных инфекционных заболеваний. Недостатком лизоцима является то, что он лизирует узкий спектр грамположительных микроорганизмов. Он нестабилен и дорог.
Лизостафин используется только в лабораторной практике для получения внутриклеточного содержимого грамположительных бактерий [5]. Он также недостаточно стабилен при хранении.
Лизоамидаза - комплексный ферментный препарат, содержащий бактериолитические, протеолитические ферменты и полисахарид [4]. Этот ферментный препарат лизирует широкий спектр грамположительных, в том числе антибиотикоустойчивых микроорганизмов. Препарат очень стабилен, так как присутствующий в нем полисахарид стабилизирует активность ферментов. Лизоамидаза, так же как и другие бактериолитические ферменты, не лизирует нативные клетки грамотрицательных микроорганизмов из-за наличия в их клеточной стенке внешней мембраны, которая защищает пептидогликановый слой от действия бактериолитических ферментов лизоамидазы.
Известно, что при совместном действии бактериолитического фермента из бактерии Bacillus subtilis IT-25 и полимиксина B (колистин) наблюдается лизис грамотрицательного микроорганизма Pseudomonas aeruginosa [6]. Не известно действуют ли указанные вещества на другие грамотрицательные микроорганизмы, не показано использование действия фермента и антибиотика в медицине.
Полимиксин B - антибиотик, действующий на грамотрицательные микроорганизмы - дезорганизует клеточную мембрану, следствием чего является гибель клеток микроорганизмов [7]. Полимиксин B оказывает слабое действие на грамположительные микроорганизмы. Он используется в очень редких случаях при тяжелых инфекциях, вызываемых грамотрицательными бактериями рода Pseudomonas, так как применение средства связано с большим риском из-за возможного нарушения функции почек. Лизирующего действия на клетки полимиксин B не оказывает.
Средство для осуществления лизиса грамположительных и грамотрицательных бактерий, пригодное для использования в медицине, не известно. Но известно использование лизоцима в сочетании с ЭДТА для лизиса грамположительных и грамотрицательных бактерий [8].
Задачей данного изобретения является создание средства для осуществления лизиса грамположительных и грамотрицательных бактерий, пригодное для использования в медицине.
Технический результат от использования изобретения - одновременный лизис грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Сущность предлагаемого объекта - предложено средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных бактерий, включающее лизоамидазу и полимиксин B в эффективном количестве.
Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов содержит компоненты в следующем соотношении, мкг/мл:
Лизоамидаза - 1000 - 3000,
Полимиксин B - 20 - 50,
Буферный раствор - Остальное
Указанное средство может быть получено двумя способами.
Лизоамидаза - 1000 - 3000,
Полимиксин B - 20 - 50,
Буферный раствор - Остальное
Указанное средство может быть получено двумя способами.
1. К раствору лизоамидазы в 0.01 молярном буферном растворе, pH 8, добавляют раствор полимиксина B в том же буфере до определенной конечной концентрации полимиксина B.
Концентрации лизоамидазы в средстве - от 1000 до 3000 мкг/мл, конечная концентрация полимиксина B - 20 - 50 мкг/мл (156 - 390 Е/мл).
Для получения раствора лизоамидазы растворяют порцию лиофилизированного фермента в буфере.
Раствор полимиксина B готовят непосредственно перед применением путем разведения в буфере порции порошка с активностью 250000 Е/мл.
В качестве буфера могут быть использованы в частности Na-фосфатный и трис-HCl буферы.
2. Порошки лизоамидазы и полмиксина B смешивают в соотношении лизоамидаза: полимиксин B 1000 - 3000 : 20 - 50 (мкг), затем добавляют буферный раствор до 1 мл.
Концентрация лизоамидазы определяется тем, что при значениях меньше 1000 мкг/мл не достигается нужный эффект, а при концентрациях больших 3000 мкг/мл из-за наличия в средстве полисахарида наблюдается стабилизация протопластов, получаемых при лизисе клеток, и как следствие - рост микроорганизмов.
Концентрация полимиксина B определяется тем, что при значениях меньших 20 мкг/мл не достигается нужный эффект, а при концентрациях больших 50 мкг/мл наблюдается ингибирование действия лизоамидазы. Это подтверждается на примере действия лизоамидазы на клетки золотистого стафилококка данными таблицы 1.
Предполагается, что полимиксин B, дезорганизуя внешнюю мембрану, создает для лизоамидазы возможность проникнуть к пептидогликановому слою и разрушить его.
Возможность осуществления предложенного изобретения показана в следующих примерах, но не исчерпывается ими.
Пример 1. Получение средства для лизиса.
К 1 мл раствора лизоамидазы в 0.01 молярном растворе Na-фосфатного буфера в концентрации 3000 мкг/мл добавляют 17 мкл раствора полимиксина B в концентрации 8000 мкг/мл (62500 Е/мл) в том же буфере, конечная концентрация полимиксина при этом будет составлять 40 мкг/мл (312 Е/мл).
Пример 2. Получение средства для лизиса.
3000 мкг лизоамидазы смешивают с 40 мкг полимиксина B, к полученной смеси добавляют 1 мл 0,01 молярного трис-HCl буфера, pH 8.0.
Пример 3. Лизис условно патогенных лабораторных штаммов бактерий.
К 2 мл микробной взвеси в 0,01 М Na-фосфатном буфере, pH 8,0 (оптическая плотность 0,7 при длине волны 590 нм) добавляют 500 мкл раствора средства, содержащего лизоамидазу и полимиксин B, полученного в примере 1.
Смесь инкубируют 30 минут при 37 град. С. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора хлористого натрия.
За единицу бактериолитической активности принимают такое количество фермента, которое приводит к снижению оптической плотности бактериальной суспензии на 0,01 оптическую ед. в 1 мин.
В качестве контроля вместо предлагаемого средства используют 500 мкл раствора лизоамидазы в буфере в концентрации 3000 мкг/мл или 500 мкл полимиксина B в буфере в концентрации 40 мкг/мл (312 Е/мл) или в концентрации 80 мкг/мл (625 Е/мл).
Данные, представленные в таблице 2, подтверждают, что предложенное средство может быть использовано для лизиса грамотрицательных бактерий.
Пример 4. Лизис патогенных штаммов бактерий.
К 1 мл взвеси микробных клеток в 0,01М Na-фосфатном буфере pH 8,0 в стерильных пробирках добавляют стерильно:
1,5 мл раствора лизоамидазы с полимиксином B в том же буфере (конечная концентрация лизоамидазы 1000 мкг/мл (10 ЛЕ/мл), конечная концентрация полимиксина - 40 мкг/мл (312 Е/мл).
1,5 мл раствора лизоамидазы с полимиксином B в том же буфере (конечная концентрация лизоамидазы 1000 мкг/мл (10 ЛЕ/мл), конечная концентрация полимиксина - 40 мкг/мл (312 Е/мл).
Полученную смесь инкубируют в термостате при 37 град. C в течение 24 часов. Затем делают десятикратные разведения и высевают на чашки со средой Луриа-Бертани [8] по 0,1 мл из каждого разведения.
После инкубации чашек в термостате проводят учет результатов. Положительным (+) считают результат, когда при высеве на чашки из пробирок, содержащих 10 - 10 клеток/мл, наблюдают отсутствие роста колоний. Отрицательным (-) - в случае роста колоний. Количество микробных клеток в исходной взвеси определяют, используя контрольный вариант, в котором вместо предлагаемого средства к микробной взвеси добавляют стерильный буфер.
В качестве контроля вместо средства, содержащего лизоамидазу и полимиксин B, используют:
1,5 мл раствора лизоамидазы в том же буфере в конечной концентрации 1000 мкг/мл (10 ЛЕ/мл);
1,5 мл 0,01 М трис-HCl буфера, pH 8,0.
1,5 мл раствора лизоамидазы в том же буфере в конечной концентрации 1000 мкг/мл (10 ЛЕ/мл);
1,5 мл 0,01 М трис-HCl буфера, pH 8,0.
Данные представлены в таблице 3.
Полимиксин B не использовали в данном примере в качестве контроля в связи с тем, что после действия предлагаемого средства на клеточную суспензию визуализизацию количества нелизированных клеток проводят методом их инкубации на твердой питательной среде. Известно, что полимиксин B подавляет рост грамотрицательных микроорганизмов и их нелизированные при инкубации в жидкой среде с полимиксином B клетки не прорастают в присутствии полимиксина B на твердой питательной среде. Положительный эффект действия самого полимиксина B связан не с лизисом клеток, а с подавлением их роста.
Пример 5. Применение лизоамидазы с полимиксином B для лечения заболеваний периодонта.
Лизоамидазу с полимиксином B использовали для лечения 25 больных с хроническим фиброзным, гранулематозным, гранулирующим периодонтитом и хроническим периодонтитом в стадии обострения. В первые 3 - 5 часов после обработки корневых каналов у пациентов исчезали боли, уменьшалась гиперимия и отек слизистой оболочки. Герметизация корневых каналов с препаратом под временной пломбой переносилась безболезненно. В течение месяца полностью исчезали свищевые ходы. Клинико-рентгенологический контроль отдаленных результатов лечения воспалительных процессов в периодонте показал, что полное и частичное восстановление костной ткани у верхушки зуба отмечается в 89%.
Таким образом показано, что предлагаемое средство, включающее лизоамидазу в сочетании с полимиксином B, способно лизировать клетки представителей как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий, в том числе и патогенных, способных вызывать серьезные инфекционные заболевания: в частности заболевания полости рта.
Литература
1. Imoto T., Johnson L.N., North A.C.T., Phillips D.C. and Rupley J.A. In The Enzymes, 1972. Academic Press, New York, London, pp. 665 - 868.
1. Imoto T., Johnson L.N., North A.C.T., Phillips D.C. and Rupley J.A. In The Enzymes, 1972. Academic Press, New York, London, pp. 665 - 868.
2. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. 1979, "Высшая школа", стр. 347 - 349.
3. Schindler C.A., Schuhardt V.T. Lysostaphin: a new bacteriolytic agent for the Staphylococcus. 1964, Proc. of the Nation. Acad. Sci. USA, v. 51, N 3, pp. 415 - 421.
4. Кулаев И. С. Бактериолитические ферменты микробного происхождения в биологии и медицине. В сборнике: "Бактериолитический препарат лизоамидаза. Физиологические, биохимические и клинические аспекты", 1989, Пущино, стр. 3 - 9.
5. Mulder R.R., Brennen C., Wagener M.M., Viskers R.M., Rihs J.D., Hancock G.A., Yee Y.C., Miller J.M., Yu V.J. Methicillin-Resistant Staphylococcal Colonization and Infection in a Long-Term Care Facility. Annals of Internal Medicine, 1991, v. 114, N 2, pp. 107 - 112.
6. Takahara, Y. Hurose, N. Yasuda, K. Mitsugi, S. Murao. Effect of peptidolipids produced by Bacillus on the enzymatic lysis of Gram-negative bacterial cells. 1976, Agr. Biol. Chem., v. 40, N 9, pp. 1901-1903.
7. Франклин Т. , Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия. 1984, М., "Мир", стр. 78 - 80.
8. Osborn M. I. , Munson R. Separation of the inner (cytoplasmic) and outer membranes of gram-negative bacteria. 1974, Meth. Enzymol., v. 31, p. 642 - 653.
9. Девис Р. , Ботстайн Д., Рот Дж. Методы генетической инженерии. М.: Мир, 1984, стр. 142.
Claims (1)
- Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, включающее ферментный препарат, содержащий фермент, лизирующий грамположительные микроорганизмы, и вещество, нарушающее структуру мембран грамотрицательных микроорганизмов, отличающееся тем, что в качестве ферментного препарата оно содержит лизоамидазу, а в качестве вещества, нарушающего структуру мембран грамотрицательных микроорганизмов, - полимиксин В и дополнительно буферный раствор при следующем соотношении компонентов, мкг/мл:
Лизоамидаза - 1000 - 3000
Полимиксин В - 20 - 50
Буферный раствор - Остальное
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97116922/13A RU2139348C1 (ru) | 1997-10-06 | 1997-10-06 | Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97116922/13A RU2139348C1 (ru) | 1997-10-06 | 1997-10-06 | Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU97116922A RU97116922A (ru) | 1999-08-10 |
| RU2139348C1 true RU2139348C1 (ru) | 1999-10-10 |
Family
ID=20197973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97116922/13A RU2139348C1 (ru) | 1997-10-06 | 1997-10-06 | Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2139348C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2216313C2 (ru) * | 2000-12-25 | 2003-11-20 | Савченков Сергей Николаевич | Лечебно-профилактическое косметическое средство |
| CN1315532C (zh) * | 2004-10-19 | 2007-05-16 | 上海新药研究开发中心 | 复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂及制备方法 |
| RU2367456C2 (ru) * | 2007-05-23 | 2009-09-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Фармацевтическая композиция для местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием |
| RU2367455C2 (ru) * | 2007-05-23 | 2009-09-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Фармацевтическая композиция для наружного и местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием |
| RU2367457C2 (ru) * | 2007-05-23 | 2009-09-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Фармацевтическая композиция для наружного и местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием, на основе лизоамидазы |
| US7951913B2 (en) | 2006-06-02 | 2011-05-31 | Biotika A.S. | Method of polymyxin B recovery from fermentation broth |
| US8119371B2 (en) | 2006-06-15 | 2012-02-21 | Biotika A.S. | Process for the preparation of polymyxin B employing (PAENI) Bacillus polymyxa |
-
1997
- 1997-10-06 RU RU97116922/13A patent/RU2139348C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Osborn M.I., Munson R. Separation of the inner (cytoplasmic) and outer membranes of gram-negative bacteria. 1974, Meth. Enzymol., v.31, p.642-653. Takahara, Y.Hurose, N.Yasuda, K.Mitsugi, S.Murao. Effect of peptidolipids produced by Bacillus on the enzymatic lysis of Gram-negative bacterial cells. 1976, Agr. Biol. Chem., v.40, No9, pp.1901-1903. Франклин Т., Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия. - М.: Мир, 1984, с.78-80. Кулаев И.С. Бактериологические ферменты микробного происхождения в биологии и медицине. В сб. Бактериологический препарат лизоамидаза. Физиологические, биохимические и клинические аспекты, 1989, Пущино, с.3-9. Кислухина О.В. и др. Ферментативный лизис микроорганизмов. А.-А. "Фаутан", 1990, с.30-44. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2216313C2 (ru) * | 2000-12-25 | 2003-11-20 | Савченков Сергей Николаевич | Лечебно-профилактическое косметическое средство |
| CN1315532C (zh) * | 2004-10-19 | 2007-05-16 | 上海新药研究开发中心 | 复合溶菌酶Lysoamidase喷雾剂及制备方法 |
| US7951913B2 (en) | 2006-06-02 | 2011-05-31 | Biotika A.S. | Method of polymyxin B recovery from fermentation broth |
| US8119371B2 (en) | 2006-06-15 | 2012-02-21 | Biotika A.S. | Process for the preparation of polymyxin B employing (PAENI) Bacillus polymyxa |
| RU2367456C2 (ru) * | 2007-05-23 | 2009-09-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Фармацевтическая композиция для местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием |
| RU2367455C2 (ru) * | 2007-05-23 | 2009-09-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Фармацевтическая композиция для наружного и местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием |
| RU2367457C2 (ru) * | 2007-05-23 | 2009-09-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Фармацевтическая композиция для наружного и местного применения, обладающая антибактериальным и некролитическим действием, на основе лизоамидазы |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5858962A (en) | Composition for treating mastitis and other staphylococcal infections | |
| Bryan | General mechanisms of resistance to antibiotics | |
| US6056955A (en) | Topical treatment of streptococcal infections | |
| US20050158253A1 (en) | Compositions for treating biofilm | |
| EP0359873A1 (en) | Method of treating mastitis and other staphylococcal infections | |
| Paine Jr et al. | Observations on bacteria sensitive to, resistant to, and dependent upon streptomycin | |
| Adler et al. | Development of an improved selective medium for isolation of leptospires from clinical material | |
| RU2139348C1 (ru) | Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов | |
| Maraki et al. | Surgical wound infection caused by Rahnella aquatilis | |
| Meerovitch | Some Biological Requirements and HOST–PARASITE Relations of Entamoeba Invadens | |
| Murphy | Elastase production by oral staphylococci | |
| Livermore et al. | Behaviour of TEM-1 β-lactamase as a resistance mechanism to ampicillin, mezlocillin and azlocillin in Escherichia coli | |
| WO2004022048A1 (en) | Fosfomycin and n-acetylcysteine for the treatment of biofilms caused by escheric ia coli and other pathogens of the urinary tract | |
| Pollock et al. | In vitro and in vivo studies of cellular lysis of oral bacteria by a lysozyme-protease-inorganic monovalent anion antibacterial system | |
| Sabath | Biochemical and physiologic basis for susceptibility and resistance of Pseudomonas aeruginosa to antimicrobial agents | |
| RU2127310C1 (ru) | Консорциум штаммов микроорганизмов-деструкторов: aeromonas species, alcaligenes denitrificans, arthrobacter species, используемый для очистки почв, почвогрунтов, вод от нефти, нефтепродуктов и остаточной замазученности | |
| Rosenberg et al. | Autocides and a paracide, antibiotic TA, produced by Myxococcus xanthus | |
| RU2193063C2 (ru) | Бактериолитический комплекс, способ его получения и штамм для осуществления способа | |
| Watanakunakorn et al. | Staphylococcal spheroplasts and L-colonies. III. Induction by lysostaphin | |
| Lam et al. | Therapeutic relevance of penicillin-induced hypersensitivity of Staphylococcus aureus to killing by polymorphonuclear leukocytes | |
| Ved et al. | Synergism between penicillin G and the antimicrobial ether lipid, rac‐1‐dodecylglycerol, acting below its critical micelle concentration | |
| Marina et al. | Bilophila wadsworthiain brain abscess: case report | |
| Devriese | Hemin-dependent mutants isolated from methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains | |
| Flynn et al. | Penicillins and Cephalosporins | |
| Garcia et al. | Penicillin post-antibiotic effects on the biology of group A streptococci |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20031202 |