RU2130647C1

RU2130647C1 - Method for modeling herpetic chorioretinitis

Info

Publication number: RU2130647C1
Application number: RU94044742A
Authority: RU
Inventors: В.Б. Мальханов; М.А. Деребизова; Г.Г. Хафизов; Т.С. Иванова
Original assignee: Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней
Priority date: 1994-12-19
Filing date: 1994-12-19
Publication date: 1999-05-20
Also published as: RU94044742A

Abstract

FIELD: medicine, in particular, ophthalmology. SUBSTANCE: method involves infecting white non-breed mature rats by herpes simplex virus HSV-1, culture L₂ in amount of 10000-100000 TCD₅₀, and examination of vascular membrane and retina of eye starting from second week. EFFECT: possibility to design model which is close to respective human decease with high reproduction rate and low rate of deaths caused by encephalitis. 7 ex, 4 dwg

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии. The invention relates to medicine, in particular to ophthalmology, and can be used to create disease models in experimental ophthalmology.

Известен способ создания экспериментальных моделей герпетического хориоретинита путем внутримозгового введения вируса простого герпеса новорожденным крысятам и мышам, после чего наблюдаются двусторонний передний увеит с диффузным отеком и некрозом сетчатки, ретинальные поражения, отличающиеся инфильтрацией воспалительных клеток, рубцеванием, метаплазией и дистрофией пораженной ретинальной ткани, передняя и задняя кортикальная катаракта (Percy D.H., Gabil K.A., Hatch L.A. et al. Experimental type 2 herpes simplex ophthalmisin the newborn rat, 1980). Однако при использовании дорогостоящих новорожденных крысят линии Вистар введение в мозг является травматическим для животных, низка (20%) воспроизводимость герпетического хориоретинита, а также применение вируса простого герпеса 2 типа редко у больных вызывает хориоретинит герпетической этиологии. При заражении в мозг белых мышей одновременно отмечается развитие катаракты, увеита и низка воспроизводимость герпетического хориетинита. There is a method of creating experimental models of herpetic chorioretinitis by intracerebral injection of herpes simplex virus to newborn rats and mice, after which bilateral anterior uveitis with diffuse edema and retinal necrosis, retinal lesions characterized by inflammatory cell infiltration, scarring, metaplasia and dystrophy of the affected retinal tissue are observed, anterior posterior cortical cataract (Percy DH, Gabil KA, Hatch LA et al. Experimental type 2 herpes simplex ophthalmisin the newborn rat, 1980). However, when using expensive newborn Wistar rat pups, the introduction into the brain is traumatic for animals, the reproducibility of herpetic chorioretinitis is low (20%), and the use of the herpes simplex virus type 2 rarely causes herpes etiology chorioretinitis. When infected in the brain of white mice, the development of cataracts, uveitis and the low reproducibility of herpetic chorietinitis are simultaneously observed.

Известен также способ заражения кроликов в вену (Sery T.W., Foster L. Viremia induction of herpes simplez uveitis, 1977), но при этом отмечается изолированное поражение только сосудистой оболочки - хориоидит, при этом поражения сетчатки не наблюдается, т.е. хориоретинит не развивается. There is also a known method for infecting rabbits in a vein (Sery T.W., Foster L. Viremia induction of herpes simplez uveitis, 1977), but there is an isolated lesion of only the choroid — choroiditis, with no retinal damage, i.e. chorioretinitis does not develop.

Наиболее близким по технической сущности является способ моделирования герпетического хориоретинита путем заражения кроликов в переднюю камеру глаза (Л. Н.Тарасова Цитологические и гистологические исследования при герпетической болезни глаз // Автореферат диссертации кандидата мед.наук, Ашхабад, 1968, стр. 25). В данном случае поражались все оболочки глаза. Были использованы два штама вируса (N 994 и 303), которые пассировали путем внутримозгового заражения мышей, что вызывало неспецифические воспалительные изменения самой тканью мозга мышей. Кроме того, отмечалась большая гибель животных от энцефалита, изменения в сетчатке характеризовались грубыми нарушениями ее структуры, что не соответствует такому герпетическому поражению (хориоретиниту) у человека. Эта модель не может быть использована для воспроизведения также и хронической стадии герпетического хориоретинита, так как по данным автора специфические изменения отмечались лишь в течение 3-4 месяцев. The closest in technical essence is the method of modeling herpetic chorioretinitis by infection of rabbits in the anterior chamber of the eye (L. N. Tarasova Cytological and histological studies in case of herpetic eye disease // Abstract of the dissertation of the candidate of medical science, Ashgabat, 1968, p. 25). In this case, all the membranes of the eye were affected. Two virus strains were used (N 994 and 303), which were passaged by intracerebral infection of mice, which caused nonspecific inflammatory changes in the mouse brain tissue itself. In addition, there was a large death of animals from encephalitis, changes in the retina were characterized by gross violations of its structure, which does not correspond to such a herpetic lesion (chorioretinitis) in humans. This model cannot be used to reproduce the chronic stage of herpetic chorioretinitis either, since according to the author, specific changes were noted only within 3-4 months.

Нами была поставлена задача создать модель герпетического хориоретинита с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенную к указанному заболеванию у человека, уменьшающую гибель животных от энцефалита. We set the task to create a model of herpetic chorioretinitis with a high frequency of its reproduction, which is closest to the indicated disease in humans, which reduces the death of animals from encephalitis.

Для решения поставленной задачи предложен способ, заключающийся в заражении экспериментальных животных вирусом простого герпеса, для чего в переднюю камеру глаза белых беспородных половозрелых крыс вводят культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса типа 1 штамм L₂ в дозе 10000 - 100000 ТЦД₅₀, и исследуют сосудистую и сетчатую оболочки глаза, начиная со второй недели. Введение дозы вируса простого герпеса типа 1 штамм L₂ менее 10000 ТЦД₅₀ не приводит к специфическим изменениям.To solve this problem, a method is proposed consisting in infecting experimental animals with the herpes simplex virus, for which a culture fluid containing the herpes simplex virus type 1 strain L ₂ at a dose of 10,000 - 100,000 TCD ₅₀ is injected into the anterior chamber of the eye and the vascular and the retina starting from the second week. The introduction of a dose of herpes simplex virus type 1 strain L ₂ less than 10,000 TCD ₅₀ does not lead to specific changes.

Пример 1. Белым беспородным крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На 8 день производят забой животных и проводят гистологические исследования сетчатой оболочки глаза. В сетчатой оболочке появлялась диффузная инфильтрация лимфоидного характера в слое нервных волокон и ганглиозном слое, а также периваскулярные инфильтраты. Сосуды сетчатой оболочки во внутренних слоях были расширены, в просветах имелись форменные элементы типа плазмацитов и сегментоядерных нейтрофилов, вокруг сосудов отмечали периваскулиты. Имелись ретроретинальные кровоизлияния.Example 1. White outbred rats in the anterior chamber of both eyes injected with 0.01 ml of culture fluid containing 10,000 TCD ₅₀ HSV-1 strain L ₂ . On day 8, animals are slaughtered and histological studies of the retina of the eye are performed. In the retina appeared diffuse lymphoid infiltration in the layer of nerve fibers and the ganglion layer, as well as perivascular infiltrates. The vessels of the retina in the inner layers were dilated, in the gaps there were shaped elements such as plasmacytes and segmented neutrophils, perivasculitis was noted around the vessels. There were retroretinal hemorrhages.

Проведенные вирусологические исследования при ЭГКУ крыс подтвердили специфичность вызываемых морфологических изменений: вирус простого герпеса обнаруживали в ткани их сосудов и сетчатой оболочек глаза в острый и хронический периоды заболевания, а также в периферической крови (табл.1 и 2). Частота воспроизведения хориоретинита составляет 64 ± 13%. Conducted virological studies with EGCU rats confirmed the specificity of the caused morphological changes: herpes simplex virus was detected in the tissue of their vessels and the retina of the eye in the acute and chronic periods of the disease, as well as in peripheral blood (Tables 1 and 2). The frequency of chorioretinitis is 64 ± 13%.

Пример 2. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 15000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На третьей неделе частота воспроизведения составила 43 ± 20%. Морфологические изменения аналогичны описанным в 1 примере. Они свидетельствовали о воспроизведении хориоретинита.Example 2. White outbred adult rats in the anterior chamber of both eyes injected with 0.01 ml of culture fluid containing 15000 TCD ₅₀ HSV-1 strain L ₂ . In the third week, the reproduction rate was 43 ± 20%. Morphological changes are similar to those described in 1 example. They testified to the reproduction of chorioretinitis.

Пример 3. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На четвертой неделе частота воспроизведения составила 50 ± 29%. Морфологические изменения аналогичны описанным в 1 примере, что говорит о воспроизведении хориоретинита.Example 3. White outbred adult rats in the anterior chamber of both eyes injected with 0.01 ml of culture fluid containing 100,000 TCD ₅₀ HSV-1 strain L ₂ . In the fourth week, the reproduction rate was 50 ± 29%. Morphological changes are similar to those described in example 1, which indicates the reproduction of chorioretinitis.

Пример 4. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На 2 и 5 месяце хронической инфекции животных забивают и проводят гистологические исследования сетчатой оболочки глаз. Гистологические исследования выявили очаговую инфильтрацию сетчатой оболочки лимфоцитами, плазматическими клетками, отек и появление экссудатов в преретинальной зоне. Изменения в сосудистой оболочке глаза варьировали от небольшого ее отека до выраженного воспалительного процесса. Выявленные морфологические изменения свидетельствуют о воспроизведении хронического герпетического хориоретинита, сходного с таковым у человека.Example 4. White outbred adult rats in the anterior chamber of both eyes injected with 0.01 ml of culture fluid containing 100,000 TCD ₅₀ HSV-1 strain L ₂ . At 2 and 5 months of chronic infection, animals are killed and histological studies of the retina of the eyes are performed. Histological studies revealed focal retinal infiltration by lymphocytes, plasma cells, edema and the appearance of exudates in the preretinal zone. Changes in the choroid of the eye ranged from a small edema to a pronounced inflammatory process. The revealed morphological changes indicate the reproduction of chronic herpetic chorioretinitis, similar to that in humans.

Пример 5. В переднюю камеру обоих глаз половозрелых животных - кроликов, белых крыс, петухов и морских свинок вводят культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса типа 1 штамм L₂ в дозе 10000 ТЦД₅₀. В динамике герпетической инфекции на 1, 2, 3 и 4 неделях проводят гистологические исследования сетчатой оболочки глаз. Результаты представлены в табл. 3.Example 5. In the front chamber of both eyes of mature animals - rabbits, white rats, roosters and guinea pigs, culture fluid containing the herpes simplex virus type 1 strain L ₂ at a dose of 10,000 TCD _{50 is} injected. In the dynamics of herpetic infection at 1, 2, 3 and 4 weeks, histological studies of the retina of the eye are performed. The results are presented in table. 3.

Как видно из таблицы, у птиц (петухи) сетчатая оболочка не поражалась. У морских свинок и кроликов ее воспаление отмечалось в небольшом числе случаев. Максимальная частота герпетических хориоретинитов наблюдалась у белых крыс, причем начиная только со 2-й недели. Кроме того, наиболее часто развитие энцефалитов при офтальмогерпесе обнаруживали у кроликов и наиболее редко - у белых крыс (табл. 4). As can be seen from the table, in birds (roosters), the retina was not affected. In guinea pigs and rabbits, its inflammation was noted in a small number of cases. The maximum frequency of herpetic chorioretinitis was observed in white rats, and starting only from the 2nd week. In addition, the development of encephalitis during ophthalmic herpes was most often found in rabbits and most rarely in white rats (Table 4).

Как видно из таблицы, частота развития герпетического энцефалита у белых крыс составляет 3 ± 3%, тогда как у кроликов - 88 ± 6%. Это также свидетельствует о предпочтительности данного вида лабораторных животных для создания модели герпетических хориоретинитов. As can be seen from the table, the incidence of herpetic encephalitis in white rats is 3 ± 3%, while in rabbits it is 88 ± 6%. This also indicates the preference of this type of laboratory animals for creating a model of herpetic chorioretinitis.

Пример 6. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. На неделе специфические воспалительные изменения в сосудистой и сетчатой оболочках, описанные в вышеприведенных примерах, находили у небольшого числа животных (18 ± 12%).Example 6. White outbred adult rats in the anterior chamber of both eyes injected with 0.01 ml of culture fluid containing 10,000 TCD ₅₀ HSV-1 strain L ₂ . In the week, specific inflammatory changes in the choroid and retina described in the above examples were found in a small number of animals (18 ± 12%).

Пример 7. Белым беспородным половозрелым крысам в переднюю камеру обоих глаз вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей 1000 ТЦД₅₀ ВПГ-1 штамм L₂. Специфических воспалительных изменений в сосудистой и сетчатой оболочках, описанных в 1 примере, не находили.Example 7. White outbred adult rats in the anterior chamber of both eyes injected with 0.01 ml of culture fluid containing 1000 TCD ₅₀ HSV-1 strain L ₂ . Specific inflammatory changes in the vascular and retinal membranes described in example 1 were not found.

Таким образом, предложенный способ моделирования герпетического хориоретинита позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, при предложенном способе моделирования наблюдается высокая частота воспроизведения (64%), а также низкая гибель от энцефалитов (3%). Thus, the proposed method for modeling herpetic chorioretinitis allows you to create a model that is closest to this disease in humans. In addition, with the proposed modeling method, a high reproduction frequency (64%), as well as low death from encephalitis (3%), are observed.

Claims

A method for modeling herpetic chorioretinitis, which consists in infecting experimental animals with the herpes simplex virus in the anterior chamber of the eye, characterized in that the infection of white outbred adult rats with the herpes simplex virus type I strain L ₂ at a dose of 10,000-100,000 TCD ₅₀ and the choroid and retina are examined starting from the second week.