RU2129279C1 - Diagnosticum for identification of legionelles in clinical material and ambient objects and method for preparation thereof - Google Patents
Diagnosticum for identification of legionelles in clinical material and ambient objects and method for preparation thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2129279C1 RU2129279C1 RU95119336A RU95119336A RU2129279C1 RU 2129279 C1 RU2129279 C1 RU 2129279C1 RU 95119336 A RU95119336 A RU 95119336A RU 95119336 A RU95119336 A RU 95119336A RU 2129279 C1 RU2129279 C1 RU 2129279C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diagnosticum
- latex
- sensitin
- specific
- suspension
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для эпидемиологического надзора за объектами внешней среды и лабораторной диагностики легионеллеза. The invention relates to medicine, namely to microbiology, and can be used for epidemiological surveillance of environmental objects and laboratory diagnosis of legionellosis.
Симптомы или сочетания симптомов, которые были бы специфичны исключительно для болезней легионеров, неизвестны. Правильный диагноз необходим для эффективного лечения и изучения легионеллезных вспышек. Важное значение имеет профилактический, эпидемиологический контроль за объектами внешней среды (водоисточники, кондиционеры) с целью обнаружения и идентифицирования легионелл в водной среде. Это представляет основную проблему в профилактике легионеллеза, так как источником инфицирования является вода, используемая для кондиционеров промышленных и бытовых объектов. Поскольку лабораторные критерии идентификации легионелл во внешней среде являются основной частью определения случая болезни, метод лабораторной идентификации легионелл заслуживает особого внимания. Чувствительность культуральных методов выделения легионелл из материала, полученного из органов дыхания и объектов внешней среды, значительно возросла после создания агара с рыбокостным гидролизатом с добавлением стимуляторов роста легионелл (1), который может быть использован также в качестве полуселективной среды в случае добавления полимиксина В и апизомицина (1). При наличии в материале большого количества контаминирующих микроорганизмов значительно затрудняется выделение изолятов и довольно много времени (до 4-5 сут) тратится на культивирование легионелл. В настоящее время по-прежнему чаще всего применяются иммунохимические методы для идентификации легионеллеза в клиническом материале и в объектах внешней среды. Конструирование таких систем включает создание диагностикумов. Symptoms or combinations of symptoms that are specific to legionnaire diseases are not known. A correct diagnosis is necessary for the effective treatment and study of legionella outbreaks. Of great importance is the preventive, epidemiological monitoring of environmental objects (water sources, air conditioners) in order to detect and identify legionella in the aquatic environment. This represents the main problem in the prevention of legionellosis, as the source of infection is water used for air conditioning of industrial and domestic facilities. Since laboratory criteria for identifying Legionella in the external environment are the main part of determining the case of a disease, the method for laboratory identification of Legionella deserves special attention. The sensitivity of cultural methods for the isolation of legionella from material obtained from the respiratory system and environmental objects increased significantly after the creation of agar with a fish-bone hydrolyzate with the addition of Legionella growth stimulants (1), which can also be used as a semi-selective medium in the case of the addition of polymyxin B and apisomycin (1). In the presence of a large number of contaminating microorganisms in the material, isolation of isolates is much more difficult and quite a lot of time (up to 4-5 days) is spent on cultivating legionella. Currently, immunochemical methods are still most often used to identify legionellosis in clinical material and in environmental objects. The design of such systems includes the creation of diagnostic kits.
Известен иммуноферментный анализ легионелл (ИФА), который утвержден только для идентификации Legionella Pneumophila серогруппы 1(2). Недостатком его является нестандартность и трудоемкость выполнения анализа. Получение такого диагностикума во многом зависит от качества конъюгата (специфические иммуноглобулины с пероксидазой хрена). Следует отметить, что постановка данной реакции затруднительна из-за большого количества дополнительных реагентов (чаще всего импортных), времени постановки (24 ч) и наличия высококвалифицированного персонала. An enzyme-linked immunosorbent assay of Legionella (ELISA) is known, which is approved only for the identification of Legionella Pneumophila serogroup 1 (2). Its disadvantage is the non-standard and the complexity of the analysis. Obtaining such a diagnosticum largely depends on the quality of the conjugate (specific immunoglobulins with horseradish peroxidase). It should be noted that the formulation of this reaction is difficult due to the large number of additional reagents (most often imported), the formulation time (24 hours) and the availability of highly qualified personnel.
Известна тест-система для идентификации легионелл в реакции прямой иммунофлюоресценции (3). Количество микроорганизмов L. pneumophila в прямой иммунофлюоресценции, определяемое как 25 в поле зрения, дает основание считать результаты реакции положительными. Такого рода препараты представляют собой специфические иммуноглобулины, полученные к целой клетке Legionella pneumophila с меченными флюоресцинизоцианатом натрия (ФИТЦ). Результаты этой реакции учитываются только при люминисцентной микроскопии. Способ приготовления такого диагностикума включает следующие этапы. A known test system for the identification of legionella in the direct immunofluorescence reaction (3). The number of microorganisms L. pneumophila in direct immunofluorescence, defined as 25 in the field of view, gives reason to consider the reaction results to be positive. Such preparations are specific immunoglobulins obtained for a whole Legionella pneumophila cell with labeled sodium fluoresceinisocyanate (FITC). The results of this reaction are taken into account only with luminescent microscopy. A method for preparing such a diagnosticum includes the following steps.
1. Приготовление специфической антисыворотки L. pneumophila с ФИТЦ. Реакционную смесь инкубируют 1 ч при 27oC и затем центрифугируют 30 мин 1500g.1. Preparation of specific L. pneumophila antiserum with FITC. The reaction mixture was incubated for 1 h at 27 o C and then centrifuged for 30 min 1500g.
2. Очистка конъюгационной смеси от не связавшихся иммуноглобулинов и ФИТЦ с помощью гель-фильтрации на Сефадексе G-25. 2. Purification of the conjugation mixture from unbound immunoglobulins and FITC using gel filtration on Sephadex G-25.
Недостатком описанного диагностикума является его низкая специфичность, обусловленная тем, что иммуноглобулины получены к целой клетке легионелл, на наружной мембране которой находятся антигенные эпитопы, общие с антигенными эпитопами других микроорганизмов, таких как: F. tularensis, М. pneumophila, Str. pneumoniae, Н. influenzae. Кроме того, данный диагностикум обладает низкой чувствительностью из-за высокой аутофлюоресценции тканей в клиническом материале и в образцах внешней среды, такие микроорганизмы, как стафилококки, пневмококки и стрептококки дают неспецифическую флюоресценцию. The disadvantage of the described diagnosticum is its low specificity, due to the fact that immunoglobulins are obtained for a whole legionella cell, on the outer membrane of which there are antigenic epitopes common with antigenic epitopes of other microorganisms, such as: F. tularensis, M. pneumophila, Str. pneumoniae, H. influenzae. In addition, this diagnosticum has low sensitivity due to the high autofluorescence of tissues in the clinical material and in environmental samples, such microorganisms as staphylococci, pneumococci and streptococci give nonspecific fluorescence.
Недостатками диагностикума для прямой иммунофлюоресценции является также большое количество времени, необходимое для постановки реакции и трудности при стандартизации диагностических препаратов. The disadvantages of the diagnosticum for direct immunofluorescence is also the large amount of time required for the formulation of the reaction and the difficulty in standardizing diagnostic preparations.
Задача изобретения - повысить специфичность, чувствительность, стандартность диагностикума и уменьшить трудоемкость при его использовании. The objective of the invention is to increase the specificity, sensitivity, standardness of the diagnosticum and reduce the complexity of its use.
Для этого легионеллезный диагностикум содержит носитель и сенситин, в качестве носителя - окрашенный синим антрахиноновым жирорастворимый полистирольный латекс с активированными аминогруппами с размером частиц 0,804 мкм, с коэффициентом вариации 4,1-4,5% и коэффициентом дисперсии 1,003-1,006 и концентрацией аминогрупп 2,5•(104-105)моль/г, в качестве сенситина - специфические иммуноглобулины кролика к группоспецифическому белковому антигену внешних мембран L. pneumophila с мол. м. 45 kD. For this, the Legionella diagnosticum contains a carrier and sensitin, as a carrier, a blue-colored anthraquinone-fat-soluble polystyrene latex with activated amino groups with a particle size of 0.804 μm, with a coefficient of variation of 4.1-4.5% and a dispersion coefficient of 1.003-1.006 and an amino group concentration of 2, 5 • (104-105) mol / g, as sensitin - specific rabbit immunoglobulins to the group-specific protein antigen of the outer membranes of L. pneumophila with mol. m. 45 kD.
Приготовление диагностикума проводят путем предварительной отмывки носителя, сенсибилизации, при этом латекс нагружают путем ковалентного связывания, причем предварительно отмытые частицы полистирольного латекса сшивают в концентрации 1% с раствором специфических иммуноглобулинов, реагирующих в реакции диффузной преципитации (РДП), с белковым антигеном с мол. м. 45 kD в разведении 1: 128, и перед повторной отмывкой его обрабатывают глициновым буфером при pH 8.2 для инактивации оставшихся аминогрупп, затем проводят повторную отмывку. The diagnosticum is prepared by preliminary washing of the carrier and sensitization, while the latex is loaded by covalent binding, and the pre-washed polystyrene latex particles are crosslinked at a concentration of 1% with a solution of specific immunoglobulins that react in the diffuse precipitation (RDP) reaction with a protein antigen from mol. m. 45 kD at a dilution of 1: 128, and before re-washing it is treated with glycine buffer at pH 8.2 to inactivate the remaining amino groups, then re-washing.
Получение специфических иммуноглобулинов к группоспецифическому белковому антигену внешних мембран L. pneumophila с мол.м. 45 kD. Obtaining specific immunoglobulins to a group-specific protein antigen of the outer membranes of L. pneumophila with a mol.m. 45 kD.
1. Ферментация культуры L. pneumophila. 1. Fermentation of a culture of L. pneumophila.
Рабочую культуру легионелл размораживают при комнатной температуре и засевают чашки Петри с твердой питательной средой. Выращивают при температуре (37±0,5)oC в течение 3 сут. Биомассу легионелл (объем 1500 см3) инкубируют со 100 см3, 0,5 мг/см3 формалина в течение 1 ч.The working Legionella culture is thawed at room temperature and Petri dishes with solid nutrient medium are seeded. Grown at a temperature of (37 ± 0.5) o C for 3 days. Legionella biomass (volume 1500 cm 3 ) is incubated with 100 cm 3 , 0.5 mg / cm 3 formalin for 1 h.
2. Осаждение биомассы. 2. Precipitation of biomass.
Осаждение биомассы проводят на центрифуге при 10000 g в течение 10 мин при комнатной температуре. Отмывку биомассы проводят в физиологическом растворе pH 7,2 при 10000 g в течение 5 мин. Выход - 10 г сырой вес биомассы (из объема 1500 см3).Biomass precipitation is carried out in a centrifuge at 10,000 g for 10 min at room temperature. Biomass washing is carried out in physiological saline with a pH of 7.2 at 10,000 g for 5 minutes. Yield - 10 g wet weight of biomass (from a volume of 1500 cm 3 ).
3. Разрушение биомассы. 3. The destruction of biomass.
10 г биомассы суспендируют в 2000 см3 буферного раствора (ТРИС-10 мг/см3 сернокислый магний - 10 мг/см3, pH 7,6). Порциями по 200 см3 суспензию обрабатывают с помощью ультразвукового дезинтегратора мощностью 60 Вт, пятикратно по 1 мин с интервалом по 2 мин. Осаждение неразрушенных клеток проводят путем центрифугирования при 10000 g в течение 10 мин при комнатной температуре. Дезинтеграт подвергают ультрафильтрации под давлением азота в ячейках объемом 1000 см3 до конечного объема 200 см3. Концентрат разводят буфером (ТРИС-10 мг/см3, сернокислый магний - 10 мг/см3, Тритон Х-100-4%, pH 7.6) до объема 400 см3. Инкубируют 1 г при комнатной температуре с перемешиванием. Суспензию мембран осаждают центрифугированием при 50000 g в течение 1 ч при комнатной температуре. Выход фракции внешних мембран - 1 г влажного осадка.10 g of biomass are suspended in 2000 cm 3 of a buffer solution (TRIS-10 mg / cm 3 magnesium sulfate - 10 mg / cm 3 , pH 7.6). In portions of 200 cm 3, the suspension is treated with an ultrasonic disintegrator with a power of 60 W, five times for 1 minute with an interval of 2 minutes. Precipitation of undisturbed cells is carried out by centrifugation at 10,000 g for 10 min at room temperature. The disintegrate is subjected to ultrafiltration under nitrogen pressure in cells with a volume of 1000 cm 3 to a final volume of 200 cm 3 . The concentrate is diluted with buffer (TRIS-10 mg / cm 3 , magnesium sulfate - 10 mg / cm 3 , Triton X-100-4%, pH 7.6) to a volume of 400 cm 3 . Incubate 1 g at room temperature with stirring. A suspension of membranes is precipitated by centrifugation at 50,000 g for 1 h at room temperature. The output of the outer membrane fraction is 1 g of wet sediment.
4. Выделение белковой фракции с мол. массой 45 kD. 4. Isolation of protein fraction from mol. weighing 45 kD.
Фракцию внешних мембран суспендируют в 100 см3 буфера (ТРИС HCL-50 мМ, Тритон Х-100-0,1%, pH 7,6) и инкубируют при температуре +10oC с перемешиванием. Осаждение внешних мембран проводят центрифугированием при 50000 g в течение 1 часа. Выход - 200 мг белка в 100 мл буфера. Комплекс белков внешних мембран фракционируют на ДЕАЕ-сефарозе. Элюцию проводят линейным градиентом 0,5%-1,5%, 0,9% раствора NaCl. Первая фракция содержит 20 мг белка с мол. массой 45 kD.The outer membrane fraction was suspended in 100 cm 3 of buffer (TRIS HCL-50 mM, Triton X-100-0.1%, pH 7.6) and incubated at a temperature of + 10 ° C with stirring. The precipitation of the outer membranes is carried out by centrifugation at 50,000 g for 1 hour. Yield - 200 mg of protein in 100 ml of buffer. The complex of proteins of the outer membranes is fractionated on DEAE-Sepharose. Elution is carried out by a linear gradient of 0.5% -1.5%, 0.9% NaCl solution. The first fraction contains 20 mg of protein per mol. weighing 45 kD.
5. Иммунизация кроликов группоспецифическим белковым антигеном внешних мембран L. pneumophila с мол. массой 45 kD. 5. Immunization of rabbits with a group-specific protein antigen of the outer membranes of L. pneumophila mol. weighing 45 kD.
Для иммунизации берут кроликов весом 2,5-3 кг (пол безразличен). В качестве антигена используют белок с мол. массой 45 kD в концентрации 2,5 мг на 1 мл в физиологическом растворе pH 7,2. For immunization take rabbits weighing 2.5-3 kg (gender does not matter). As an antigen use protein with mol. weighing 45 kD at a concentration of 2.5 mg per 1 ml in physiological saline pH 7.2.
Схема иммунизации. Первая иммунизация - в подушечки задних лап кролика подкожно вводят белковый антиген в объеме 1 см3 полного адъюванта Фрейда ("Difco" США).Immunization schedule. The first immunization - protein antigen is subcutaneously injected into the pads of the hind legs of a rabbit in a volume of 1 cm 3 of Freud's complete adjuvant (Difco USA).
Вторую, третью, четвертую иммунизации проводят внутривенно (в правую вену уха кролика) белковым антигеном в объеме 1 см3 с интервалом в два дня. После четвертой иммунизации через семь дней берут из вены правого уха кровь для выделения иммуноглобулинов.The second, third, fourth immunizations are carried out intravenously (in the right vein of the rabbit ear) with a protein antigen in a volume of 1 cm 3 with an interval of two days. After the fourth immunization, seven days later, blood is taken from the vein of the right ear to isolate immunoglobulins.
6. Выделение специфических иммуноглобулинов. 6. Isolation of specific immunoglobulins.
Кровь объемом 100 см3 инкубируют при t - +4oC 18 ч. Отбирают надосадочную жидкость (сыворотка) объемом 40 см3 и добавляют 40% насыщенный раствор сульфата аммония pH 7,4 объемом 20 см3 при постоянном перемешивании. Инкубируют при t - 0 oC 18 ч. После инкубации осаждают иммуноглобулины центрифугированием 10000 g в течение 5 мин. Образовавшийся осадок растворяют в 2 см3 дистиллированной воды и проводят диализ против 400 см3 физиологического раствора pH 7,2 в течение 3 ч.Blood with a volume of 100 cm 3 is incubated at t - + 4 ° C for 18 hours. A supernatant (serum) of 40 cm 3 is taken and a 40% saturated solution of ammonium sulfate pH 7.4 with a volume of 20 cm 3 is added with constant stirring. Incubated at t - 0 o C for 18 hours. After incubation, immunoglobulins are precipitated by centrifugation at 10,000 g for 5 minutes. The precipitate formed is dissolved in 2 cm 3 of distilled water and dialyzed against 400 cm 3 of physiological saline pH 7.2 for 3 hours.
Иммуноглобулины должны соответствовать следующим требованиям:
pH белкового раствора 7,0-7,2
реакция диффузной преципитации-одна линия преципитации в разведении
1:128 с белковым антигеном внешних мембран L. pneumophila с мол. мас. 45 kD.Immunoglobulins must meet the following requirements:
pH of protein solution 7.0-7.2
diffuse precipitation reaction - one line of precipitation in breeding
1: 128 with a protein antigen of the outer membranes of L. pneumophila mol. wt. 45 kD.
Диагностикум готовится следующим образом. Diagnosticum is prepared as follows.
1. 2 мл 1%-ной взвеси латексных частиц отмывают ЗФР pH 8,0 два раза, осадок латекса центрифугируют в течение 20 мин при 4000 g. 1. 2 ml of a 1% suspension of latex particles are washed with PBS pH 8.0 twice, the latex precipitate is centrifuged for 20 min at 4000 g.
2. К 2 мл 1%-ной взвеси латекса добавляют 2 мл специфических иммуноглобулинов, реагирующих в РДП в разведении 1:128, после чего получается 4 мл 0,5%-ной взвеси латекса в растворе иммуноглобулинов с титром в РДП 1:64, которую инкубируют в течение 2 ч в термостате при 37oC.2. To 2 ml of a 1% suspension of latex add 2 ml of specific immunoglobulins that react in an RDP at a dilution of 1: 128, after which 4 ml of a 0.5% suspension of latex in a solution of immunoglobulins with a titer in an RDP of 1:64 are obtained, which is incubated for 2 hours in a thermostat at 37 o C.
3. После инкубации частицы латекса центрифугируют в течение 20 мин при 4000 g. 3. After incubation, the latex particles are centrifuged for 20 min at 4000 g.
4. К осадку латекса добавляют 2 мл глицинового буфера pH 8,2 для блокирования оставшихся связей на частицах латекса. Инкубация латекса в глициновом буфере длится 1 ч в термостате при 37oC.4. To the latex precipitate add 2 ml of glycine buffer pH 8.2 to block the remaining bonds on the latex particles. Incubation of latex in glycine buffer lasts 1 hour in a thermostat at 37 o C.
5. После инкубации латекс центрифугируют в течение 30 мин при 600 g и отмывают фосфатным буфером pH 8,0. После этого готовят конечную концентрацию латекса 0,5% (4 мл). Хранят при 4oC с добавлением азида натрия.5. After incubation, the latex is centrifuged for 30 min at 600 g and washed with pH 8.0 phosphate buffer. After this, a final latex concentration of 0.5% (4 ml) is prepared. Store at 4 o C with the addition of sodium azide.
Пример использования. Usage example.
Приготовлено три вида диагностикумов. Three types of diagnosticum are prepared.
1. Диагностикум для реакции прямой иммунофлюоресценции на основе специфических иммуноглобулинов к целым бактериальным клеткам L. pneumophila (прототип). 1. Diagnosticum for the direct immunofluorescence reaction based on specific immunoglobulins to whole bacterial cells of L. pneumophila (prototype).
2. Латексный диагностикум на основе специфических иммуноглобулинов к целым бактериальным клеткам L. pneumophila. 2. Latex diagnosticum based on specific immunoglobulins to whole bacterial cells of L. pneumophila.
3. Латексный диагностикум на основе специфических иммуноглобулинов к поверхностному белковому антигену L. pneumophila с мол. массой 45 kD. 3. Latex diagnosticum based on specific immunoglobulins to the surface protein antigen of L. pneumophila mol. weighing 45 kD.
Первый тип диагностикума исследован в реакции прямой иммунофлюоресценции, а латексные диагностикумы в реакции латекс-агглютинациисо стандартной живой культурой L. pneumophila, Philodelphia 1(1 серогруппа). The first type of diagnosticum was studied in the direct immunofluorescence reaction, and latex diagnosticums in the latex-agglutination reaction with a standard living culture of L. pneumophila, Philodelphia 1 (1 serogroup).
Прототип диагностикума давал положительную реакцию с данной культурой в концентрации 2,8•106 KoE/мл, второй тип диагностикума -7,2•105 KoE/мл, третий -1,4•105 KoE/мл. Это указывает на более высокую чувствительность латексного диагностикума, приготовленного на основе специфических иммуноглобулинов к поверхностному антигену с мол. массой 45 kD.The prototype diagnosticum gave a positive reaction with this culture at a concentration of 2.8 • 10 6 KoE / ml, the second type of diagnosticum -7.2 • 10 5 KoE / ml, the third -1.4 • 10 5 KoE / ml. This indicates a higher sensitivity of the latex diagnosticum prepared on the basis of specific immunoglobulins to the surface antigen with mol. weighing 45 kD.
Результаты опыта приведены в таблице 1. The results of the experiment are shown in table 1.
На следующем этапе была исследована специфичность диагностикумов в реакции прямой иммунофлюоресценции и реакции латекс-агглютинации. С этой целью раститровали референс-штаммы L. pneumophila, Philadelphia 1 (1 серогруппа), Togus (серогруппа 2), Bloominghton (серогруппа 3), L. maсdadia, Fr. tularensis, штамм 503. Mc. pneumoniae, Str. pneumoniae, H. influenzae тип b до концентрации 105 KoE/мл. Из каждого разведения на предметное стекло внесли стандартное количество микроорганизмов в объеме 0,02 мл, а затем к каждому объему микроорганизмов добавляли соответствующий диагностикум в объеме 0,02 мл. После 5 мин инкубации в термостате учитывали реакцию по образованию видимого агглютината, а в реакции прямой иммунофлюоресценции учитывали реакцию при наличии в поле зрения 25 флюоресцирующих микроорганизмов. Результаты опыта приведены в таблице 2.At the next stage, the specificity of diagnosticums in the direct immunofluorescence reaction and the latex-agglutination reaction was investigated. For this purpose, reference strains of L. pneumophila, Philadelphia 1 (1 serogroup), Togus (serogroup 2), Bloominghton (serogroup 3), L. masdadia, Fr. tularensis strain 503. Mc. pneumoniae, Str. pneumoniae, H. influenzae type b to a concentration of 10 5 KoE / ml. From each dilution, a standard amount of microorganisms in a volume of 0.02 ml was introduced onto a glass slide, and then an appropriate diagnosticum in a volume of 0.02 ml was added to each volume of microorganisms. After 5 min of incubation in the thermostat, the reaction for the formation of visible agglutinate was taken into account, and in the reaction of direct immunofluorescence, the reaction was taken into account in the presence of 25 fluorescent microorganisms in the field of view. The results of the experiment are shown in table 2.
Из приведенных данных следует, что латексный диагностикум на основе специфических иммуноглобулинов к поверхностному белковому антигену с мол. массой 45 kD образует агглютинаты только с культурой L. pneumophila, а диагностикум для реакции прямой иммунофлюоресценции реагирует с другими микроорганизмами. From the above data it follows that a latex diagnosticum based on specific immunoglobulins to a surface protein antigen with mol. weighing 45 kD forms agglutinates only with a culture of L. pneumophila, and the diagnosticum for the direct immunofluorescence reaction reacts with other microorganisms.
Таким образом, показано, что специфические иммуноглобулины к поверхностному белковому антигену с мол. массой 45 kD являются оптимальным сенситином для нагрузки носителя
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.Thus, it was shown that specific immunoglobulins to a surface protein antigen with mol. weighing 45 kD are optimal sensitin for load media
Sources of information taken into account during the examination.
1. Авторское свидетельство СССР N 1614494, 1990 г. 1. USSR author's certificate N 1614494, 1990
2. Control of legionellosis. Proposals for statutory action. London, Health and Safety Commussion, 1989 г. 2. Control of legionellosis. Proposals for statutory action. London, Health and Safety Commussion, 1989
3. Эпидемиология, профилактика легионеллеза и борьба с ним: Меморандум совещания ВОЗ-Бюллетень ВОЗ, т. 68, N 2, 1990, с. 7. 3. Epidemiology, prevention and control of legionellosis: Memorandum of the meeting WHO-Bulletin of the WHO, t. 68, N 2, 1990, p. 7.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95119336A RU2129279C1 (en) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Diagnosticum for identification of legionelles in clinical material and ambient objects and method for preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95119336A RU2129279C1 (en) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Diagnosticum for identification of legionelles in clinical material and ambient objects and method for preparation thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95119336A RU95119336A (en) | 1998-01-10 |
| RU2129279C1 true RU2129279C1 (en) | 1999-04-20 |
Family
ID=20173809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95119336A RU2129279C1 (en) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Diagnosticum for identification of legionelles in clinical material and ambient objects and method for preparation thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2129279C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009048350A1 (en) | 2007-10-12 | 2009-04-16 | Gosudarstvennoe Uchrezhdenie Nauchny Tsentr Serdechno-Sosudistoi Khirurgii Im. A.N. Bakuleva Rossiiskoi Academii Meditsinskikh Nauk | Diagnosticum for determining the presence of total endotoxin (lipopolysaccharide-lps) of gram-negative bacteria and also the genus and type of gram-negative bacteria producing endotoxin, method for producing said diagnosticum and a set |
| RU2505819C1 (en) * | 2012-12-07 | 2014-01-27 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | METHOD FOR POLYMER IMMUNOGLOBULIN DIAGNOSTICUM ENGINEERING FOR DETECTING SEROGROUP 1, 3 AND 6 Legionella pneumophila (VERSIONS) |
-
1995
- 1995-11-23 RU RU95119336A patent/RU2129279C1/en active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Воспаление. Руководство для врачей/Под ред. В.В.Серова. - М.: Медицина, 25.08.95, с.384. * |
| Эпидемиология, профилактика легионеллеза и борьба с ним, Меморандум совещания ВОЗ, Бюллетень ВОЗ, 1990, vol. 68, N 2, с.7. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009048350A1 (en) | 2007-10-12 | 2009-04-16 | Gosudarstvennoe Uchrezhdenie Nauchny Tsentr Serdechno-Sosudistoi Khirurgii Im. A.N. Bakuleva Rossiiskoi Academii Meditsinskikh Nauk | Diagnosticum for determining the presence of total endotoxin (lipopolysaccharide-lps) of gram-negative bacteria and also the genus and type of gram-negative bacteria producing endotoxin, method for producing said diagnosticum and a set |
| RU2505819C1 (en) * | 2012-12-07 | 2014-01-27 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | METHOD FOR POLYMER IMMUNOGLOBULIN DIAGNOSTICUM ENGINEERING FOR DETECTING SEROGROUP 1, 3 AND 6 Legionella pneumophila (VERSIONS) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4683196A (en) | Method and materials for the identification of lipopolysaccharide producing microorganisms | |
| CA1086224A (en) | Neisseria meningitides antigens sorbent compositions for neisseria gonorrhoeae test | |
| JPH03504412A (en) | Method for preparing high-molecular cell-associated protein of Campylobacter pylori and its use for serological detection of Campylobacter pylori infection | |
| KR100756117B1 (en) | Monoclonal antibody, hybridoma, i?unoassay method and diagnosis kit | |
| US5098826A (en) | Detection, isolation and purification of Clostridium difficile toxin A with toxin receptors | |
| Haimovich et al. | Immunocytochemical localization of the mammalian voltage-dependent sodium channel using polyclonal antibodies against the purified protein | |
| WO1985002685A1 (en) | Method and materials for the identification of lipopolysaccharide producing microorganisms | |
| JP2001505525A (en) | Method for purifying Clostridium difficile toxin A and monospecific antibody | |
| RU2129279C1 (en) | Diagnosticum for identification of legionelles in clinical material and ambient objects and method for preparation thereof | |
| US5210019A (en) | Pseudomonas screening assay | |
| Hryniewicz et al. | Nature of the interaction between M protein of Streptococcus pyogenes and fibrinogen | |
| US3992516A (en) | Direct fluorescent antibody composition and method for P. Pneumocystis carinii | |
| Lind | Protein A production in different strains of Staphylococcus aureus under varied growth conditions | |
| US7179611B2 (en) | Mono-specific polyclonal antibodies and methods for detecting Clostridium difficile Toxin A | |
| JPS60259966A (en) | Method of rapidly detecting microbe and fungi infection | |
| Cuevas et al. | Latex particle agglutination tests as an adjunct to the diagnosis of bacterial meningitis: a study from Malawi | |
| EP1053474B1 (en) | Method for the determination of prosthetic infections | |
| RU2124208C1 (en) | Legionella diagnosticum and method for producing it | |
| RU2189253C1 (en) | Diagnosticum for identification of escherichia coli 0157:h7 and method of its preparing | |
| US4882425A (en) | Receptor specific proteins and their use in receptor typing | |
| JPH06502723A (en) | Method for determining the sensitivity and/or specificity of an analytical system for detecting antibodies | |
| JPH0664065B2 (en) | Immunological assay for outer membrane-bearing bacteria | |
| RU2800470C1 (en) | Method of obtaining a monoclonal peroxidase conjugate for the identification of typical and atypical strains of vibrio cholerae o1, including r-variants in dot-elisa | |
| SU1762242A1 (en) | Method of diagnosticum preparing for antigens detecting in coagglutinating reaction | |
| WO1990000614A1 (en) | Receptor specific proteins and their use in receptor typing |