RU2129270C1

RU2129270C1 - Method of determining toxicity of fish blood

Info

Publication number: RU2129270C1
Application number: RU96108150A
Authority: RU
Original assignee: Тахтаев Фарид Халиуллич; Тахтаева Асия Фаридовна; Горобец Лиля Ивановна
Priority date: 1995-04-26
Filing date: 1996-04-24
Publication date: 1999-04-20

Abstract

FIELD: toxicology. SUBSTANCE: method intended to reveal man-made pollution of natural reservoirs consists in photocalorimetrically detecting level of polypeptide components in fish blood serum and, when this level is superior to 0.051 conditional units, toxicity of fish blood is diagnosed. EFFECT: simplified determination. 1 tbl

Description

Изобретение относится к области токсикологии и позволяет установить токсичность жидких сред организма рыб и может быть использовано для выявления антропогенного загрязнения водоемов. The invention relates to the field of toxicology and allows you to establish the toxicity of the liquid media of the fish organism and can be used to detect anthropogenic pollution of water bodies.

Согласно инструкции по физиолого-биохимическому анализу рыбы /Инструкция Министерства рыбного хозяйства СССР и Всесоюзного научно-производственного объединения по рыбоводству, 1986 г./ токсические изменения организма рыб выявляются после проведения органолептического, физиолого-биохимического, бактериологического исследований. Однако такой комплексный подход определения токсичности требует использования больших количеств методик, сложного оборудования, дорогостоящих реактивов, квалифицированного персонала. According to the instructions for physiological and biochemical analysis of fish / Instruction of the USSR Ministry of Fisheries and the All-Union Scientific and Production Association for Fish Breeding, 1986 / toxic changes in the fish organism are detected after organoleptic, physiological, biochemical, and bacteriological studies. However, such an integrated approach to determining toxicity requires the use of large quantities of techniques, sophisticated equipment, expensive reagents, and qualified personnel.

Известен метод определения полипептидных компонентов средней молекулярной массы крови, который исследуют для диагностики патологических состояний теплокровных животных и человека /авторское свидетельство СССР N 1532877, опублик. 30.12.89/. Исследования осуществляют путем осаждения сывороточных белков IM ацетатным буфером с последующей инкубацией пробы на кипящей водяной бане. Недостатком способа является невозможность применения его с целью определения токсичности крови рыб в полевых условиях. A known method for determining the polypeptide components of the average molecular weight of the blood, which is investigated for the diagnosis of pathological conditions of warm-blooded animals and humans / USSR copyright certificate N 1532877, published. 12/30/89 /. Studies are carried out by precipitation of serum proteins IM with acetate buffer, followed by incubation of the sample in a boiling water bath. The disadvantage of this method is the inability to use it in order to determine the toxicity of blood fish in the field.

Известен способ определения токсичности жидких сред организма рыб путем определения содержания гистамина в рыбопродуктах, в основе которого лежит измерение интенсивной флюоресценции производного, полученного при взаимодействии гистамина с о-фталевым альдегидом /Временные гигиенические нормативы и метод определения содержания гистамина в рыбопродуктах. Министерство здравоохранения. Москва, 1986/. Недостатком этого способа является техническая сложность исполнения /требуется длительное время для подготовки образца, высококвалифицированный персонал, сложная аппаратура и остродефицитные реактивы/. A known method for determining the toxicity of liquid media of the fish organism by determining the histamine content in fish products, which is based on measuring the intense fluorescence of the derivative obtained by the interaction of histamine with o-phthalaldehyde / Temporary hygiene standards and a method for determining the histamine content in fish products. Ministry of Health. Moscow, 1986 /. The disadvantage of this method is the technical complexity of the performance / it takes a long time to prepare the sample, highly qualified personnel, sophisticated equipment and severely deficient reagents /.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ определения токсичности крови рыб путем биохимического исследования белков сыворотки крови (Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. -М. : Легкая и пищевая промышленность, 1983, с. 133 - 134; Метлев В.В. и др. Водная токсикология. -М.: Колос, 1971, с. 72). The closest in technical essence and the achieved result is a method for determining the toxicity of blood fish by biochemical studies of serum proteins (Lukyanenko V.I. General ichthyotoxicology. -M.: Light and food industry, 1983, S. 133 - 134; Metlev V.V. . and other Water toxicology. -M .: Kolos, 1971, p. 72).

Задачей изобретения является разработка способа определения токсичности крови рыбы, который упрощает и ускоряет исследование проб. Указанный результат достигается путем фотокалориметрии сыворотки крови рыб и уровня полипептидных компонентов с молекулярной массой 300 - 3000 дальтон и при его значении выше 0,051 условных единиц определяют токсичность крови рыб. The objective of the invention is to develop a method for determining the toxicity of blood fish, which simplifies and speeds up the study of samples. This result is achieved by photocalorimetry of fish blood serum and the level of polypeptide components with a molecular weight of 300 - 3000 daltons, and when its value is above 0.051 conventional units, the toxicity of the blood of fish is determined.

Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.

Сыворотку, взятую из хвостовой вены, обрабатывают 10%-ным раствором трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:0,5, проводят осветление смеси центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Детекцию надосадка, освобожденного от грубодисперсных белков, осуществляют после предварительного разделения, при котором к 0,5 мл надосадочной жидкости добавляли 4,5 мл дистиллята. Измерение проводят в фотокалориметре ФКЭ - 26 М при красном светофильтре. В качестве контроля используется дистиллированная вода. Уровень выявленных в сыворотке крови полипептидных компонентов выражают в условных единицах /УЕ/, количественно равных показателям экстинкций. За норму уровня полипептидных компонентов принята величина, равная 0,051 УЕ, полученная при статической обработке результатов исследования 5 проб крови рыб /карп/, выловленных в водоеме Чиликского прудхоза. Этот водоем посчитан условно не загрязненным соединениями антропогенного происхождения - вода в нем обновляется каждый год. Serum taken from the tail vein is treated with a 10% trichloroacetic acid solution in a ratio of 1: 0.5, the mixture is clarified by centrifugation at 3000 rpm for 30 minutes. Detection of the supernatant freed from coarse proteins is carried out after preliminary separation, in which 4.5 ml of distillate was added to 0.5 ml of the supernatant. The measurement is carried out in a FKE-26 M photo-calorimeter with a red filter. Distilled water is used as a control. The level of polypeptide components detected in blood serum is expressed in arbitrary units / UE /, which are quantitatively equal to extinction indices. For the norm of the level of polypeptide components, a value of 0.051 UE was obtained by static processing of the results of the study of 5 blood samples of fish / carp / caught in the reservoir of the Chilik pond farm. This reservoir is considered conditionally not contaminated with compounds of anthropogenic origin - the water in it is updated every year.

Для доказательства токсического действия на организм рыб веществ антропогенного происхождения было проведено определение уровня содержания полипептидных компонентов в сыворотке крови рыб, выловленных весной и осенью 1994 г. в Чардарьинском водохранилище. Чардарьинское водохранилище, по данным лаборатории токсикологии Каз. НИИ АСХН Республики Казахстан, характеризуется значительным уровнем загрязнения пестицидами, гербицидами, инсектицидами, среди которых значительную долю составляют гексахлорциклогексан, дихлордиметилтрихлорэтан, уровень осаждения которых в водоеме в последние 5 лет сохраняется постоянно. Уровень токсических соединений в воде водохранилища может меняться в зависимости от количества воды в водоеме /которое весной увеличивается в связи с паводками вод, осенью резко падает/. To prove the toxic effect of substances of anthropogenic origin on the fish organism, the level of polypeptide components in the blood serum of fish caught in the spring and autumn of 1994 in the Chardarya reservoir was determined. Chardarya reservoir, according to the laboratory of toxicology Kaz. The Scientific Research Institute of Agricultural Sciences of the Republic of Kazakhstan is characterized by a significant level of contamination with pesticides, herbicides, insecticides, among which a significant proportion are hexachlorocyclohexane, dichlorodimethyltrichloroethane, the level of deposition of which in the reservoir over the past 5 years has been maintained continuously. The level of toxic compounds in the water of the reservoir can vary depending on the amount of water in the reservoir / which increases in spring due to floods of water, sharply falls in autumn /.

Для исследования взяли половозрелые особи рыб. Содержание полипептидных компонентов весной в сыворотке крови связана 0,143 ± 0,02 УЕ, карася 0,143 ± 0,037 УЕ, чехони 0,272 ± 0,06 УЕ /таблица/. Содержание полипептидных компонентов в крови рыб осенью составило: у сазана 0,283 ± 0,32 УЕ, у карася 0,242 ± 0,022 УЕ. У карася, зараженного лигулезом, 0,205 ± 0,021 УЕ. В крови же леща уровень полипептидных компонентов достигал 0,320 ± 0,029 УЕ. Видно, что в крови сазана, карася количество полипептидных компонентов весной значительно ниже, чем осенью, что связано с уровнем воды в водохранилище и содержанием в воде токсичных веществ. В то же время из данных таблицы видно, что содержание полипептидных компонентов в крови у каждого вида рыб разное. На основании полученных данных можно заключить, что сыворотка обследованных видов рыб токсична по сравнению с сывороткой крови карпа, принятой за условную норму. Весной уровень полипептидных компонентов в сыворотке крови рыб выловленных в Чардарьинском водохранилище выше условной нормы в 3 раза, а выловленных осенью в 5 - 6 раз. For research, we took sexually mature fish. The content of polypeptide components in the spring in blood serum is related to 0.143 ± 0.02 UE, crucian 0.143 ± 0.037 UE, Chekhony 0.272 ± 0.06 UE / table /. The content of polypeptide components in the blood of fish in autumn amounted to 0.283 ± 0.32 UE for common carp, 0.242 ± 0.022 UE for crucian carp. In crucian carp infected with ligulosis, 0.205 ± 0.021 UE. In the blood of the bream, the level of polypeptide components reached 0.320 ± 0.029 UE. It can be seen that in the blood of carp, the amount of polypeptide components in carp is significantly lower in spring than in autumn, which is associated with the water level in the reservoir and the content of toxic substances in the water. At the same time, it can be seen from the table that the content of polypeptide components in the blood of each fish species is different. Based on the data obtained, it can be concluded that the serum of the examined fish species is toxic compared to the blood serum of carp, taken as a conditional norm. In spring, the level of polypeptide components in the blood serum of fish caught in the Chardarya reservoir is 3 times higher than the conventional norm, and 5–6 times higher in the autumn.

Таким образом, способ определения токсичности крови рыб является информативным, репрезентативным, экономичным, позволяет быстро и просто определять токсическое действие антропогенного загрязнения воды в водохранилище. Thus, the method for determining the toxicity of blood fish is informative, representative, economical, allows you to quickly and easily determine the toxic effect of anthropogenic pollution of water in the reservoir.

Claims

A method for determining fish blood toxicity by biochemical examination of blood serum proteins, in which the level of polypeptide components is detected, characterized in that the level of polypeptide components is detected by photocalorimetry and when the peptide content is above 0.051 conventional units, blood toxicity is diagnosed.