RU2128509C1 - Способ получения субкомпонента c1g комплемента человека - Google Patents
Способ получения субкомпонента c1g комплемента человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2128509C1 RU2128509C1 RU96113748/14A RU96113748A RU2128509C1 RU 2128509 C1 RU2128509 C1 RU 2128509C1 RU 96113748/14 A RU96113748/14 A RU 96113748/14A RU 96113748 A RU96113748 A RU 96113748A RU 2128509 C1 RU2128509 C1 RU 2128509C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- precipitation
- ciq
- preparing
- complement
- edta
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской иммунологии и может быть использовано в медицине и биохимии для создания тест-систем, а также для исследовательных целей. Способ осуществляется последовательным осаждением С1q из сыворотки крови путем диализа в присутствии ЭДТА против растворов с низкой ионной силой, содержащих δ-аминокапроновую кислоту при первом осаждении и гексаметилендиамин - при втором, окончательное осаждение сульфатом аммония приводит к получению препарата С1q. Технический результат: препарат не содержит примесей и является высокоактивным.
Description
Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к области получения высокоочищенных и высокоактивных препаратов белков иммунной системы организма, которые могут быть использованы в медицине и биохимии для создания тест-систем, а также для исследовательских целей.
Препараты субкомпонента C1q первого компонента комплемента человека используются для создания тест-систем для определения циркулирующих иммунных комплексов, содержания анти-C1q в крови больных ревматическими заболеваниями, а также для создания гемосорбентов для удаления иммунных комплексов из кровотока.
В большинстве методов получения C1q используются хроматографические и аффиннохроматографические методы, что является часто сложным, дорогим и не обеспечивает, тем не менее, достаточную чистоту препаратов. Наиболее близким к предлагаемому способу выделения и очистки является метод Yonemasu K., Stroud R.M. [1], состоящий из трех последовательных осаждений выделяемого из сыворотки C1q с помощью диализа против раствора ЭГТА (со сменой буфера) и дважды против растворов ЭДТА. К недостаткам метода следует отнести большой расход дефицитного и дорогого ЭГТА, а также наличие примесей в конечном продукте, о чем указывалось в работе Conradi J.D., Volanakis J.F., Stroud R. M. [2].
Нами разработан способ, позволяющий простыми средствами получить препарат субкомпонента C1q комплемента человека, не содержащий примесей.
Способ осуществляется следующим образом: проводят последовательные осаждения C1q из сыворотки крови диализом в присутствии ЭДТА против растворов с низкой ионной силой, содержащих ε -аминокапроновую кислоту при первом осаждении и гексаметилендиамин - при втором, окончательное осаждение сульфатом аммония приводит к получению препарата C1q, который по данным иммуноэлектрофореза не содержит примесей, а по данным определения функциональной активности C1q является высокоактивным.
Пример. К 100 мл нормальной донорской сыворотки добавляют 1 мл 0,1 М ε -аминокапроновой кислоты и 2,06 мл 0,5 М ЭДТА. Доводят pH сыворотки до 8,8 (8,6 или 9,0) с помощью 0,15 М NaOH и проводят диализ против 10 л 0,01 М мединалового буфера, pH 8,8, содержащего 1 мМ ε -аминокапроновую кислоту и 1 мМ ЭДТА, 20 ч при +4oC. Осадок промывают 10 мл дистиллированной воды и осаждают центрифугированием при 10000 об./мин, +4oC. Процедуру отмывки повторяют трижды. Осадок растворяют в 2 мл буферного раствора состава: 0,05 М ЭДТА, 0,75 М NaCl, pH 7,5 (7,0 или 8,0), и диализуют против 1 л 5 мМ гексаметилендиамина, pH 7,5 (7,0 или 8,0). Осадок трижды промывают дистиллированной водой, каждый раз отделяя его центрифугированием. Осадок растворяют в 2 мл буферного раствора, pH 7,5, содержащего 1 мМ ЭДТА и 1 М NaCl. К раствору после центрифугирования добавляют 0,44 мл насыщенного раствора сульфата аммония до 18% насыщения и оставляют на 12 ч при +4oC. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием и трижды промывают дистиллированной водой. Выход C1q из 100 мл сыворотки по белку составляет 6,5 мг, что составляет 80%. По данным иммуноэлектрофореза с антисыворотками против IgG, IgM и всех белков плазмы крови человека дает только одну линию преципитации, соответствующую C1q, против антисыворотки ко всем белкам.
Источники информации
1. Yonemasu K., Stroud R.M. C1q: rapid purification method for preparation of monospecific antisera and for biochemical studies//J. Immunol. 1971. V. 106, P. 304 -314.
1. Yonemasu K., Stroud R.M. C1q: rapid purification method for preparation of monospecific antisera and for biochemical studies//J. Immunol. 1971. V. 106, P. 304 -314.
2. Conradi J.D., Volanakis J.F., Stroud R.M. Evidence for serum inhibitor of C1q//Immonochemistry. 1975. V. 12. P. 967 - 971.
Claims (1)
- Способ получения субкомпонента C1q комплемента человека, включающий последовательное осаждение его из сыворотки крови диализом против растворов с низкой ионной силой в присутствии ЭДТА, отличающийся тем, что в качестве растворов с низкой ионной силой используют для первого осаждения 1мМ раствор ε-аминокапроновой кислоты, рН 8,6 - 9,0, а для второго осаждения 5 мМ гексаметилендиамин, рН 7,0 - 8,0.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU96113748/14A RU2128509C1 (ru) | 1996-07-08 | 1996-07-08 | Способ получения субкомпонента c1g комплемента человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU96113748/14A RU2128509C1 (ru) | 1996-07-08 | 1996-07-08 | Способ получения субкомпонента c1g комплемента человека |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU96113748A RU96113748A (ru) | 1998-12-27 |
RU2128509C1 true RU2128509C1 (ru) | 1999-04-10 |
Family
ID=20182961
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU96113748/14A RU2128509C1 (ru) | 1996-07-08 | 1996-07-08 | Способ получения субкомпонента c1g комплемента человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2128509C1 (ru) |
-
1996
- 1996-07-08 RU RU96113748/14A patent/RU2128509C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
3. Ionemasu K. Et al C1q: rapid purification method for preparation of monospecific antisera and for biochemical studies J.Jmmunol., 1971, v.106, p.304-314. 4. Ройт А. Основы иммунологии. М.: Мир, 1991, с.18-26. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Jackson et al. | Iminodipeptiduria: a genetic defect in recycling collagen; a method for determining prolidase in erythrocytes. | |
Ward et al. | Further studies on the chemotactic factor of complement and its formation in vivo | |
Linder et al. | Assay of tissue ferritin | |
US3646193A (en) | Iga antibody from lacteal fluids | |
US4254021A (en) | Tissue specific protein and process for preparing same | |
Muszbek et al. | Glycoprotein Ib and glycoprotein IX in human platelets are acylated with palmitic acid through thioester linkages | |
US4746731A (en) | Isolated tissue protein PP18 | |
US4977246A (en) | High recovery process for antihemophilic factor | |
Zittle et al. | Use of butanol in the purification of the alkaline phosphatase of bovine milk | |
Deichmiller et al. | The metabolism of serum proteins in neonatal rabbits | |
RU2128509C1 (ru) | Способ получения субкомпонента c1g комплемента человека | |
Howe et al. | Antigenic components of human erythrocytes | |
Vella et al. | Haemoglobin O Arab in Sudanese | |
US4594328A (en) | Tissue protein PP21, a process for obtaining it and its use | |
US4018885A (en) | Steroid-binding globulin and process for preparing it and antibodies thereto | |
JPH06135996A (ja) | アンジオジェニンの単離方法 | |
US4599318A (en) | Tissue protein PP19, a process for obtaining it, and its use | |
Greenblatt et al. | Identity of trypanosome growth factors in serum II. Active globulin components | |
RU2144365C1 (ru) | Способ получения компонента cз комплемента человека | |
WO1983001899A1 (en) | Process for the production of human gamma-interferon | |
US4169139A (en) | Glyco/proteinaceous materials derivable from beef liver and other tissues useful for the treatment of toxic and allergic conditions | |
JP2913221B2 (ja) | 抗血漿型グルタチオンパーオキシダーゼ抗体及びこれを用いた診断薬 | |
MORIYA et al. | Biochemical Studies on Kallikreins and Their Related Substances III. Preliminary Experiment of Studies on Human Plasma Kallikrein | |
Peanasky et al. | Proteinase inhibitors from Ascaris lumbricoides: Properties and their physiological role | |
Yamamoto et al. | In vitro production of a chemotactic factor by inflammatory SH-dependent protease from rabbit and human immunoglobulin G subclasses |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050709 |