RU2126052C1 - Method of detecting tuberculosis mycobacteria - Google Patents
Method of detecting tuberculosis mycobacteria Download PDFInfo
- Publication number
- RU2126052C1 RU2126052C1 RU98104885A RU98104885A RU2126052C1 RU 2126052 C1 RU2126052 C1 RU 2126052C1 RU 98104885 A RU98104885 A RU 98104885A RU 98104885 A RU98104885 A RU 98104885A RU 2126052 C1 RU2126052 C1 RU 2126052C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- smears
- solution
- mycobacteria
- cytolysis
- treated
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и медицинской микробиологии и может быть использовано в диагностике туберкулеза. The invention relates to the field of biotechnology and medical microbiology and can be used in the diagnosis of tuberculosis.
Туберкулез, являясь инфекционным заболеванием, вызывается специфическим возбудителем - микобактерией туберкулеза. При образовании в легких или других тканях микроколоний возбудителя в организме развивается клиническая форма специфического процесса. Поэтому обнаружение в мокроте или другом материале микобактерий является основным диагностическим критерием у пациента туберкулеза. Tuberculosis, being an infectious disease, is caused by a specific pathogen - mycobacterium tuberculosis. With the formation of microcolonies of the pathogen in the lungs or other tissues, the clinical form of a specific process develops in the body. Therefore, the detection of mycobacteria in sputum or other material is the main diagnostic criterion for a patient with tuberculosis.
Известен способ обнаружения микобактерий туберкулеза, включающий взятие лимфоидной ткани, измельчение и обработку ее искусственным желудочным соком для максимального высвобождения возбудителя из биоматериала с последующим исследованием обогащенного материала бактериологическим методом (SU 1734699, A 61 B 10/00, 23.05.92). A known method for the detection of mycobacterium tuberculosis, including taking lymphoid tissue, crushing and processing it with artificial gastric juice to maximize the release of the pathogen from the biomaterial, followed by the study of the enriched material by the bacteriological method (SU 1734699, A 61 B 10/00, 05/23/92).
Однако известный способ не обеспечивает высокой точности диагностики туберкулеза. However, the known method does not provide high accuracy for the diagnosis of tuberculosis.
Известен также способ выявления микобактерий при внеклеточных формах туберкулеза, включающий внесение в исследуемый материал (кровь, соскоб эндометрия) гемолизатора, последующую обработку ультразвуком, приготовление мазков из полученного осадка и флотационного кольца, окраску люминофором и выявление микобактерий по люминесценции клеток (SU 1286933, A 61 B 10/00, 30.01.87). There is also a method for detecting mycobacteria in extracellular forms of tuberculosis, including introducing a hemolyzer into the test material (blood, endometrial scraping), subsequent sonication, preparation of smears from the resulting precipitate and flotation ring, staining with phosphor and detection of mycobacteria by cell luminescence (SU 1286933, A 61 B 10/00, 01.30.87).
Однако известный способ используется только для диагностики туберкулеза женских половых органов. However, the known method is used only for the diagnosis of tuberculosis of the female genital organs.
Наиболее близким аналогом является способ обнаружения микобактерий туберкулеза, заключающийся в том, что нативный исследуемый материал или отцентрифугированный посевной осадок наносят на предметное стекло, фиксируют, окрашивают флуорохромами и производят микроскопию мазка (Шесточенко М.А., Кузьмин Н. А. Люминесцентный анализ в ветеринарии. -М.: Колос, 1979, с.96-98). The closest analogue is a method for the detection of mycobacterium tuberculosis, which consists in the fact that the native test material or centrifuged inoculum is deposited on a glass slide, fixed, stained with fluorochromes and smear microscopy (Shestochenko MA, Kuzmin N.A. Luminescent analysis in veterinary medicine .-M .: Kolos, 1979, pp. 96-98).
К недостаткам аналога относят следующее:
- при наличии в препарате обильного клеточного пула часть микобактерий либо вовсе не окрашивается, находясь в толще мазка, либо, окрашиваясь, не определяется микроскопистом, оказываясь прикрытыми клеточными пластами;
- большая плотность популяции при внутриклеточном размножении возбудителя не позволяет детально идентифицировать форму кислотоустойчивых микобактерий;
- в традиционно приготовленном мазке невозможно определить соотношение внутри- и внеклеточно расположенных форм возбудителя, что снижает информативность исследования.The disadvantages of the analogue include the following:
- in the presence of an abundant cell pool in the preparation, part of mycobacteria either does not stain at all, being in the thickness of the smear, or, staining, is not determined by the microscope, being covered with cell layers;
- a high population density during intracellular reproduction of the pathogen does not allow to identify in detail the form of acid-resistant mycobacteria;
- in a traditionally prepared smear, it is impossible to determine the ratio of the intra- and extracellularly located forms of the pathogen, which reduces the information content of the study.
Техническим результатом изобретения является повышение точности способа за счет более полного выявления микобактерий в пробах, в том числе L-трансформированных, а также возможности детальной идентификации формы внутриклеточного расположения кислотоустойчивых образований и определения внутри- и внеклеточно расположенных форм возбудителя. The technical result of the invention is to increase the accuracy of the method due to a more complete identification of mycobacteria in samples, including L-transformed ones, as well as the possibility of detailed identification of the shape of the intracellular location of acid-resistant formations and determination of the intracellular and extracellularly located forms of the pathogen.
Сущность изобретения заключается в следующем: из исследуемого материала (мокрота, мазок с надгортанника или миндалин) готовят парные мазки, один из которых обрабатывают в течение не менее 24 часов раствором, вызывающим осмотический цитолиз, а другой используют как контрольный. После окраски флуорохромами микроскопируют оба мазка. Обнаружение типичных, морфологически сохранных микобактерий позволяет считать препарат позитивным, а пациента опасным. Обнаружение отличий в популяции обнаруженных микобактерий туберкулеза в контрольном (без обработки дезинтегрирующим раствором) и в опытном (обработанном) мазках-отпечатках позволяет идентифицировать видоизмененные (L-трансформированные) клетки. The essence of the invention is as follows: from the test material (sputum, smear from the epiglottis or tonsils), paired smears are prepared, one of which is treated for at least 24 hours with a solution that causes osmotic cytolysis, and the other is used as a control. After staining with fluorochromes, both smears are microscopic. Detection of typical, morphologically safe mycobacteria allows us to consider the drug positive and the patient dangerous. The detection of differences in the population of detected tuberculosis mycobacteria in the control (without treatment with a disintegrating solution) and in the experimental (processed) smear-imprints allows the identification of modified (L-transformed) cells.
В качестве раствора, вызывающего осмотический цитолиз, используют раствор следующего состава:
Сахароза - 2,0-16,0 г
Натрий хлорид - 0,1-0,8 г
Динатрий этилендиаминтетраацетат - 0,1-0,8 г
Натрий фосфат двузамещенный - 0,1-0,8 г
Натрий фосфат однозамещенный - 0,05-0,4 г
Натрий ортофосфат - 0,05-0,4 г
Кислота лимонная - 0,05-0,4 г
Диметилсульфоксид - 0,02-0,2 мл
Вода бидистиллированная - До 1 л
Способ позволяет максимально освободить микобактерии из клеточного пула и тем самым повысить эффективность бактериовыделения при туберкулезе.As a solution that causes osmotic cytolysis, use a solution of the following composition:
Sucrose - 2.0-16.0 g
Sodium chloride - 0.1-0.8 g
Disodium ethylenediaminetetraacetate - 0.1-0.8 g
Disubstituted sodium phosphate - 0.1-0.8 g
Sodium phosphate monosubstituted - 0.05-0.4 g
Sodium orthophosphate - 0.05-0.4 g
Citric acid - 0.05-0.4 g
Dimethyl sulfoxide - 0.02-0.2 ml
Double-distilled water - Up to 1 l
The method allows the maximum release of mycobacteria from the cell pool and thereby increase the effectiveness of bacterial excretion in tuberculosis.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами. The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Для исследования отбирают мокроту и/или мазки с надгортанника и миндалин. Забор мазков производит квалифицированный отоларинголог. Из полученного материала готовят парные мазки-отпечатки известным методом. Один из парных мазков-отпечатков служит контролем. После фиксации на один из мазков (опытный) наносят 0,1 мл раствора, вызывающего осмотический цитолиз, и помещают во влажную камеру на 24 часа. После этого мазок высушивают и повторно фиксируют. Контрольный мазок - идентичный, но без добавления дезинтегрирующего раствора. После окраски флуорохромами микроскопируют оба мазка. При обнаружении типичных, морфологически сохранных микобактерий препарат считают позитивным, а пациента - эпидемиологически опасным. При обнаружении внутриклеточно или внеклеточно расположенных кислотоустойчивых зернистых или иных форм (L-трансформированных) идентифицируют "клеточный" или "тканевый" туберкулез или их сочетание. Example 1. For the study, sputum and / or smears from the epiglottis and tonsils are taken. A smear collection is performed by a qualified otolaryngologist. Paired smears-prints are prepared from the obtained material by a known method. One of the paired fingerprint smears serves as a control. After fixation, one of the smears (experimental) is applied with 0.1 ml of a solution that causes osmotic cytolysis, and placed in a moist chamber for 24 hours. After that, the smear is dried and re-fixed. The control smear is identical, but without the addition of a disintegrating solution. After staining with fluorochromes, both smears are microscopic. If typical, morphologically safe mycobacteria are detected, the drug is considered positive, and the patient is epidemiologically dangerous. If intracellular or extracellularly located acid-resistant granular or other forms (L-transformed) are detected, “cell” or “tissue” tuberculosis or a combination thereof is identified.
Пример 2. Обследовано 42 больных стационара и поликлиники. Контингент обследованных состоял как из подтвержденных ранее бацилловыделителей, составивших 20% исследований, так и лиц, бацилловыделение у которых ранее не отмечалось, - 80% исследований. Example 2. Surveyed 42 patients of the hospital and clinic. The contingent of the examined consisted of both previously confirmed bacilli excipients, who made up 20% of the studies, and those who did not previously have bacillus excretion - 80% of the studies.
У всех больных, относящихся к категории бацилловыделителей, микобактерии туберкулеза были обнаружены согласно изобретению как в мазке с надгортанника, так и в мазке с миндалин. Известным методом (Циль - Нильсона) микобактерии были обнаружены только дважды и только в мазках с надгортанника. Среди пациентов, не относящихся к категории бацилловыделителей, микобактерии туберкулеза были обнаружены заявленным изобретением в 32 мазках с миндалин, что составило 60% от всех произведенных исследований, в мазках с надгортанника - в 5 случаях, в мокроте - в одном. При этом методом Циля - Нильсона микобактерии у указанного контингента не обнаруживались ни разу. In all patients belonging to the category of bacilli, mycobacterium tuberculosis was found according to the invention both in a smear from the epiglottis, and in a smear from the tonsils. By the known method (Ziel - Nielson), mycobacteria were detected only twice and only in smears from the epiglottis. Among patients not belonging to the category of bacilli, mycobacterium tuberculosis was detected by the claimed invention in 32 smears from tonsils, which accounted for 60% of all studies, in smears from the epiglottis - in 5 cases, in sputum - in one. In this case, the Ziehl-Nielson method did not reveal mycobacteria in the indicated contingent even once.
Наряду с обнаружением морфологически сохранных форм у ряда пациентов способом согласно изобретению находили шаровидные варианты L-форм. Интенсивность свечения L-форм была меньше выраженной в сравнении с палочковидными микобактериями (яркая рубиново-оранжевая окраска). Окраска L-форм варьировала от умеренно-лимонной до слабо-желтой с зеленоватым оттенком. Along with the discovery of morphologically intact forms in a number of patients, spherical L-forms were found by the method according to the invention. The luminescence intensity of L-forms was less pronounced in comparison with rod-shaped mycobacteria (bright ruby-orange color). The color of L-forms ranged from moderate lemon to slightly yellow with a greenish tint.
У двух больных при наличии типичных палочковидных микобактерий в мазках с надгортанника в препаратах с миндалины были найдены зернистые формы, расположенные вне- и внутриклеточно. У двух других больных при неоднократных исследованиях каждый раз выявлялись кислотоустойчивые зернистые формы в мазках как с надгортанника, так и с миндалин. In two patients with the presence of typical rod-shaped mycobacteria, granular forms located extra- and intracellular were found in smears from the epiglottis in preparations from the tonsil. In two other patients, with repeated studies, acid-resistant granular forms in smears were detected each time from the epiglottis and tonsils.
Таким образом, изобретение позволяет значительно увеличить процент выявления микобактерий туберкулеза в исследуемом материале и идентифицировать их L-трансформацию. Thus, the invention allows to significantly increase the percentage of detection of Mycobacterium tuberculosis in the test material and to identify their L-transformation.
Claims (2)
Сахароза - 2,0 - 16,0 г
Натрий хлорид - 0,1 - 0,8 г
Динатрий этилендиаминтетраацетат - 0,1 - 0,8 г
Натрий фосфат двузамещенный - 0,1 - 0,8 г
Натрий фосфат однозамещенный - 0,05 - 0,4 г
Натрий ортофосфат - 0,05 - 0,4 г
Кислота лимонная - 0,05 - 0,4 г
Диметилсульфоксид - 0,02 - 0,2 мл
Вода бидистиллированная - До 1 л.2. The method according to claim 1, characterized in that as a solution causing osmotic cytolysis, use a solution of the following composition:
Sucrose - 2.0 - 16.0 g
Sodium chloride - 0.1 - 0.8 g
Disodium ethylenediaminetetraacetate - 0.1 - 0.8 g
Disubstituted sodium phosphate - 0.1 - 0.8 g
Sodium phosphate monosubstituted - 0.05 - 0.4 g
Sodium orthophosphate - 0.05 - 0.4 g
Citric acid - 0.05 - 0.4 g
Dimethyl sulfoxide - 0.02 - 0.2 ml
Double-distilled water - Up to 1 liter.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98104885A RU2126052C1 (en) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Method of detecting tuberculosis mycobacteria |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98104885A RU2126052C1 (en) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Method of detecting tuberculosis mycobacteria |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2126052C1 true RU2126052C1 (en) | 1999-02-10 |
RU98104885A RU98104885A (en) | 1999-04-20 |
Family
ID=20203492
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98104885A RU2126052C1 (en) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Method of detecting tuberculosis mycobacteria |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2126052C1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2530574C2 (en) * | 2013-01-28 | 2014-10-10 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Амурская Государственная Медицинская Академия" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Method for accelerated staining of histological specimen for identifying tuberculosis mycobacteria |
-
1998
- 1998-03-03 RU RU98104885A patent/RU2126052C1/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
М.А.Шесточенко, Н.А.Кузьмин. Люминесцентный анализ в ветеринарии. - М.; Колос, 1979, с. 96 - 98. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2530574C2 (en) * | 2013-01-28 | 2014-10-10 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Амурская Государственная Медицинская Академия" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Method for accelerated staining of histological specimen for identifying tuberculosis mycobacteria |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Edward | The pleuropneumonia group of organisms: a review, together with some new observations | |
Alderete et al. | Pathogenic Trichomonas vaginalis cytotoxicity to cell culture monolayers. | |
Befus et al. | Mast cell heterogeneity in man: I. Histologic studies of the intestine | |
Colebrook | The mycelial and other micro-organisms associated with human actinomycosis | |
JP2011087589A (en) | Aglyco product and method of use | |
Simán et al. | Fern spore extracts can damage DNA | |
Homburger | Evaluation of diagnostic tests for cancer. I. Methodology of evaluation and review of suggested diagnostic procedures | |
Sigler et al. | Maxillary sinusitis caused by Schizophyllum commune and experience with treatment | |
Vahidova et al. | Intensification of Pecilomyces Spherules in Patients with Echinococcosis | |
KR20150084629A (en) | Luterial and Method for Isolating and Culturing the Same | |
RU2126052C1 (en) | Method of detecting tuberculosis mycobacteria | |
Kreutzmann et al. | Fluorescence-polarization changes in mononuclear blood leucocytes after PHA incubation: differences in cells from patients with and without neoplasia | |
Cochran et al. | Bone involvement after vaccination against smallpox | |
Hironaga et al. | Cerebral phaeohyphomycosis caused by Cladosporium bantianum: a case in a female who had cutaneous alternariosis in her childhood | |
Bezjak et al. | Two human infections caused by Pasteurella multocida | |
Stanley | Isolation and properties of virus proteins | |
Vorwald et al. | BCG Vaccination in Silicosis, II. An Experimental Study of the Influence of Inhaled Quartz Dust upon Infection by BCG (Aronson), H37Ra, and M. Marinum Strains of Tubercle Bacilli | |
Makino et al. | Chromosome aberrations in leucocytes of patients with aseptic meningitis | |
TW211039B (en) | ||
Lundgren et al. | Exfoliative cytology in laryngology: Comparison of cytologic and histologic diagnoses in 350 microlaryngoscopic examinations–A prospective study | |
Van Rooyen et al. | A laboratory test for diagnosis of smallpox | |
Karlsson et al. | Demonstration of Francisella tularensis (syn. Pasteurella tularensis) in sylvan animals with the aid of fluorescent antibodies | |
Graczyk et al. | Oocysts of Cryptosporidium from snakes are not infectious to ducklings but retain viability after intestinal passage through a refractory host | |
FI84300B (en) | FOERFARANDE FOER ATT PAOVISA ELAKARTAD CELLDELNING. | |
SAWYER et al. | Acanthamoeba comandoni and A. astronyxis: Taxonomic characteristics of mitotic nuclei,“centrosomes” and cysts |