RU2123526C1 - Активатор растворимой формы гуанилатциклазы - Google Patents
Активатор растворимой формы гуанилатциклазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2123526C1 RU2123526C1 RU97121605A RU97121605A RU2123526C1 RU 2123526 C1 RU2123526 C1 RU 2123526C1 RU 97121605 A RU97121605 A RU 97121605A RU 97121605 A RU97121605 A RU 97121605A RU 2123526 C1 RU2123526 C1 RU 2123526C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- guanylate cyclase
- soluble form
- dioxide
- general formula
- effect
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биохимии, может быть использовано для изучения механизма регуляции растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ). Сущность изобретения заключается в применении производных бензотетразин-1,3-диоксида общей формулы I, где R1=Н и R2=NO2 или R2=H или NO2, в качестве активаторов растворимой формулы гуанилатциклазы (рГЦ). Производные бензотетразин-1,3-диоксида общей формулы I оказывают активирующее действие на рГЦ, более выраженное, чем эффект прототипа. Таким образом, применение указанных соединений в биохимии расширяет ассортимент специфических регуляторов активности рГЦ.
Description
Изобретение относится к биохимии, в частности к применению известных производных бензотетразин-1,3-диоксида общей формулы I
где
R1=H и R2=NO2 или R1= NO2 и R2=H или NO2,
в качестве активаторов растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ).
где
R1=H и R2=NO2 или R1= NO2 и R2=H или NO2,
в качестве активаторов растворимой формы гуанилатциклазы (рГЦ).
Гуанилатциклаза /КФ 4.6.1.2. ; гунозин-5'-трифосфат-пирофосфатлиаза (циклизующая)/является ферментом, катализирующим биосинтез гуанозин-3',5'-циклофосфата (цГМФ) - универсального регулятора внутриклеточного метаболизма [1].
ГЦ существует в двух формах - мембранной и растворимой. В настоящее время установлено, что рГЦ является основной мишенью фармакологического действия наиболее распространенных нитровазодилятаторов (нитроглицерина, нитросорбида, нитропруссида натрия) и играет ключевую роль в регуляции таких физиологических процессов, как сокращение и расслабление гладких мышц кровеносных сосудов и агрегация тромбоцитов. Показано, что лечебный эффект вышеуказанных фармпрепаратов связан со стимуляцией активности рГЦ в результате взаимодействия оксида азота, образующегося при их биотрансформации, с атомом железа гема, входящего в состав фермента, и образования комплекса нитрозил-гем.
Существенным недостатком известных вазодилятаторов на основе органических нитратов является возникновение толерантности при их длительном применении. В связи с этим, изучение молекулярного механизма регуляции активности рГЦ с помощью новых соединений, способных генерировать NO в живом организме и/или вызывать активацию фермента NO-независимым путем, является перспективным подходом для потока и создания новых более эффективных антигипертензивных и антиагрегантных фармпрепаратов.
Известны нитрозамещенные фуроксаны, в частности, 3-нитро-4-фенил- и 4-нитро-3-фенил-1,2,5-оксадиазол-2-оксиды вышеуказанной общей формулы II
где
R1=C6H5 и R2=NO2 или R1-NO2 и R2=C6H5,
соответственно, в качестве активаторов рГЦ [2].
где
R1=C6H5 и R2=NO2 или R1-NO2 и R2=C6H5,
соответственно, в качестве активаторов рГЦ [2].
Однако данные соединения оказывали активирующее действие на фермент в специально подобранных условиях в присутствии высоких концентраций L-цистеина (5 mM). При более низких концентрациях L-цистеина влияние вышеуказанных соединений на активность рГЦ исследовалось. Кроме того, нитрофуроксаны обладают высокой реакционноспособностью по отношению к различным нуклеофильным реагентам [3], что затрудняет их применение в биохимических исследованиях.
Известен 4-нитрохинолин-1-оксид, оказывающий активирующее действие на рГЦ [4] . . Недостатком данного соединения является проявление активирующих свойств при высокой концентрации (5 mM).
Наиболее близкими к производным бензотетразин-1,3-диоксида вышеуказанной общей формулы I являются 3,5-дизамещенные пиразол-3-он-1,2-диоксиды общей формулы III
где
R - алкил(CH3), арил (C6H5),
замещенный арил и др., являющиеся тиолзависимыми донорами NO и активаторами рГЦ[5].
где
R - алкил(CH3), арил (C6H5),
замещенный арил и др., являющиеся тиолзависимыми донорами NO и активаторами рГЦ[5].
Недостатками данных соединений, в частности, 3,5-дифенилпиразол-3-он-1,2-диоксида, являются невысокая степень активации рГЦ (в 2,5 раза в концентрации 10 мкМ, см. пример 1).
В литературе описаны производные бензотетразин-1,3-диоксида вышеуказанной общей формулы I [6]. Биохимические свойства данных соединений, в частности, влияние на активность рГЦ, не изучены.
Задачей настоящего является выявление нового активатора рГЦ с повышенной активирующей способностью.
Поставленная задача достигается применением известных производных бензотетразин-1,3-диоксида вышеуказанной общей формулы I, где R1=H и R2=NO2 или R1=NO2 и R2=H или NO2, в качестве активаторов рГЦ.
Соединения общей формулы I были получены известным способом - нитрованием бензотетразин-1,3-диоксида азотной кислотой в среде серной кислоты или 20%-ного олеума [6].
Изобретение иллюстрируется следующим примером.
Пример. Активирующее действие производных бензотетразин-1,3-диоксида общей формулы I на рГЦ.
Препарат рГЦ получали из тромбоцитов человека, выделенных из венозной крови доноров известным способом. Активность фермента определяли по количеству образовавшегося цГМФ иммуноферментным способом с использованием наборов реактивов для количественного определения цГМФ АО "Биоиммуноген" (Россия).
Инкубационная смесь для определения активности (общий объем пробы 150 мкл) приготавливалась при 0 - 4oC и содержала 50 мМ Трис-HCl (pH 7,6), 1 мМ ГТФ, 4 мМ MgCl2, 4 мМ креатинфосфат, 100 мкг (50 ед/мг) креатинфосфокиназы, 10 мМ теофиллин, ферментный препарат (супернатант 105000 g, 10 - 20 мкг белка). При определении активирующего действия в среду инкубации вносили изучаемое соединение в виде раствора в водном диметилсульфоксиде (DMCO). Концентрация соединения в пробе составляла 1•10-5 М, DMCO - 0,02% об. Контрольная проба показала отсутствие влияния DMCO в указанной концентрации на базальную активность рГЦ. Пробы инкубировали в водяном термостате при 37oC в течение 15 минут. Реакцию останавливали перенесением проб на 2 минуты в кипящую водяную баню с последующим охлаждением в ледяной бане. После отделения денатурированного белка центрифугированием (10 минут при 1500 g) в полученном супернатанте определяли количество образовавшегося цГМФ вышеуказанным способом.
Определение белка проводили по способу Лоури, в качестве стандарта использовали бычий сывороточный альбумин.
Активирующее действие соединений общей формулы I в концентрации 1•10-5 М оценивали в сравнении с аналогичным эффектом наиболее близкого по структуре известного активатора рГЦ-3,5-дифенилпиразол-4-он-1,2-диоксида. Степень активации рГЦ в вышеописанных условиях для 5-нитробензотетразин-1,3-диоксида составила 510%, для 7-нитробензотетразин-1,3-диоксида - 1750%, для 5,7-динитробензотетразин-1,3-диоксида - 650% (ср. для известного активатора 3,5-дифенилпиразол-4-он-1,2-диоксида - 250%).
Сравнение вышеприведенных данных позволяет сделать вывод о том, что производные бензотетразин-1,3-диоксида общей формулы I оказывают активирующее действие на рГЦ более выраженное, чем эффект прототипа. Таким образом, применение указанных соединений в биохимии расширяет ассортимент специфических регуляторов активности рГЦ.
Источники информации
1. Murad, F. "Regulation of cytosolic guanylyl cyclase by nitric oxide: The NO-cGMP signal transduction system" Adv. Pharmacol. 1994, v. 26, p. 19 - 33.
1. Murad, F. "Regulation of cytosolic guanylyl cyclase by nitric oxide: The NO-cGMP signal transduction system" Adv. Pharmacol. 1994, v. 26, p. 19 - 33.
2. Ferioli R., Folco G.C. et al. "A new class of furoxan derivatives as NO donors: mechanism of action and biological activity" Brit. J. Pharmacol. 1995, v. 114, p. 816 - 820.
3. Л.И.Хмельницкий, С.С.Новикова, Т.И.Годовикова. Химия фуроксанов. Реакции и применение, М.: Наука, 1996, с. 303.
4. P. A. Craven, F. R. DeRubertis "Inhibition by retinol and butylated hydroxyanisole of carcinogen-mediated increases in guanylate cyclase activitu and guanosine 3:5 - monophosphate accumulation" Cancer Res. 1977, v. 37, p. 4088 - 4097.
5. Выложенная заявка ФРГ N 422545, кл. C 07 D 231/18, оп. 1995 - прототип.
6. Churakov, A.M., Ioffe, S.L., Tartakovskii, V.A. "The first synthesis of 1,2,3,4-tetrazine-1,3-di-N-oxides" Mend. Commun., 1991, p. 101 - 103.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU97121605A RU2123526C1 (ru) | 1997-12-26 | 1997-12-26 | Активатор растворимой формы гуанилатциклазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU97121605A RU2123526C1 (ru) | 1997-12-26 | 1997-12-26 | Активатор растворимой формы гуанилатциклазы |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2123526C1 true RU2123526C1 (ru) | 1998-12-20 |
RU97121605A RU97121605A (ru) | 1999-03-27 |
Family
ID=20200477
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU97121605A RU2123526C1 (ru) | 1997-12-26 | 1997-12-26 | Активатор растворимой формы гуанилатциклазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2123526C1 (ru) |
-
1997
- 1997-12-26 RU RU97121605A patent/RU2123526C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
2. Ferioli R., Folco G.C. et al. "A new class of furoxan derivatives as NO donors: mechanism of action and biological activity" Brit. J. Pharmacol. 1995, v.114, p.816 - 820. 3. P.A.Craven, F.R.DeRubertis 'Inhibition by retinol and butylated hydroxyanisole of carcinogen-mediated increases in guanylate cyclase activity and guanosine 3 : 5 - monophosphate accumulation' Cancer Res. 1977, V.37, p.4088 - 4097. 4. Churakov, A.M., Ioffe, S.L., Tartakovskii, V.A. "The first synthesis of 1,2,3,4-tetrazine-1,3-di-N-oxides" Mend. Commun., 1991, p.101 - 103. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Talalay et al. | On a coenzymatic function of estradiol-17β | |
Sörbo | Enzymic transfer of sulfur from mercaptopyruvate to sulfite or sulfinates | |
Mudd | Enzymatic cleavage of S-adenosylmethionine | |
Fujioka et al. | S-Adenosylhomocysteine hydrolase from rat liver. Purification and some properties. | |
Sharon et al. | Reactivity of analogs with pancreatic tryptophan-activating enzyme | |
Soderling et al. | Inactivation of glycogen synthetase and activation of phosphorylase kinase by muscle adenosine 3', 5'-monophosphate-dependent protein kinases | |
Carbonell et al. | Pyruvate kinase: Classes of regulatory isoenzymes in mammalian tissues | |
Trovati et al. | Insulin increases guanosine-3′, 5′-cyclic monophosphate in human platelets: a mechanism involved in the insulin anti-aggregating effect | |
Ishihama et al. | The Role of Deoxyribonucleic Acid in Ribonucleic Acid Synthesis: XVII. MULTIPLE ACTIVE SITES OF ESCHERICHIA COLI RIBONUCLEIC ACID POLYMERASE | |
Price et al. | Kinetic and chemical mechanisms of the sheep liver 6-phosphogluconate dehydrogenase | |
Pehlke et al. | Inosinic acid dehydrogenase activity in the Lesch-Nyhan syndrome | |
Kun et al. | Regulation of mitochondrial metabolism by specific cellular substances. II. The nature of stimulation of mitochondrial glutamate metabolism by a cytoplasmic component | |
RU2123526C1 (ru) | Активатор растворимой формы гуанилатциклазы | |
Tweedie et al. | ATP-Sulfurylase From Penicillivm Chbysogenum. I. Purification and Characterization | |
Crane et al. | Rise of Coenzyme A‐Glutathione Mixed Disulfide during Hydroperoxide Metabolism in Perfused Rat Liver | |
Hahn et al. | Properties of a methionyl-tRNA systhetase from Sarcina lutea | |
Singh et al. | Yeast fatty acid synthase: structure to function relationship | |
Curthoys et al. | Glutamate and glutamine distribution in the rat nephron in acidosis and alkalosis | |
RU2139932C1 (ru) | Донор оксида азота и активатор растворимой формы гуанилатциклазы | |
Brown et al. | Role of metal cofactors in enzyme regulation. Differences in the regulatory properties of the Escherichia coli nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-specific malic enzyme, depending on whether magnesium ion or manganese (2+) ion serves as divalent cation | |
EP0045122B1 (en) | Stabilization of creatine kinase (ck) and its application as a reference standard | |
Blomquist | Partial purification and characterization of nicotinamide adenine dinucleotide kinase from sea urchin eggs | |
RU2123046C1 (ru) | Донор оксида азота и активатор растворимой формы гуанилатциклазы | |
RU2122582C1 (ru) | Активатор растворимой формы гуанилатциклазы | |
US6329162B1 (en) | Biological fluid assay methods |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20071227 |