RU2110579C1 - Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa - Google Patents

Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa Download PDF

Info

Publication number
RU2110579C1
RU2110579C1 RU94026116A RU94026116A RU2110579C1 RU 2110579 C1 RU2110579 C1 RU 2110579C1 RU 94026116 A RU94026116 A RU 94026116A RU 94026116 A RU94026116 A RU 94026116A RU 2110579 C1 RU2110579 C1 RU 2110579C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
hospital
aeruginosa
antibiotics
serotype
Prior art date
Application number
RU94026116A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU94026116A (en
Inventor
В.В. Шкарин
В.А. Никифоров
О.Н. Воробьева
Н.А. Давыдова
Е.С. Саргина
Original Assignee
Нижегородская государственная медицинская академия
Воробьева Ольга Николаевна
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нижегородская государственная медицинская академия, Воробьева Ольга Николаевна filed Critical Нижегородская государственная медицинская академия
Priority to RU94026116A priority Critical patent/RU2110579C1/en
Publication of RU94026116A publication Critical patent/RU94026116A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2110579C1 publication Critical patent/RU2110579C1/en

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, epidemiology, microbiology. SUBSTANCE: method involves the strain sensitivity assay to antibiotics, determination of its phagotype and serotype, resistance to disinfection agents, plasmid pattern, adhesion index to epithelial cells. Strain Pseudomonas aeruginosa is identified as hospital one in the case of absence of its sensitivity to nine and above antibiotics, at similar phagotype and serotype, resistance to five disinfecting substances, similar plasmid pattern and adhesion index 15 ± 0.2 and above. Precision of assay is 100%. EFFECT: improved method of assay.

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к эпидемиологии, и может быть использовано при диагностике госпитального штамма Ps aeruginosa. The invention relates to medicine, in particular to epidemiology, and can be used in the diagnosis of a hospital strain of Ps aeruginosa.

Проблема внутрибольничных инфекций, вызываемых госпитальными штаммами микроорганизмов, в последние годы приобрела исключительно большое значение для клиник всего мира. Укрупнение лечебных учреждений, создание новых видов медицинского оборудования, внедрение новых сложных операций, применение новейших препаратов, обладающих иммунодепрессивными свойствами, искусственное подавление иммунитета при пересадке органов и тканей - все это усиливает угрозу распространения госпитальных инфекций среди больных и персонала лечебных учреждений. Поэтому вполне понятно возрастание роли лабораторного контроля стационаров с целью выявления госпитального штамма микроорганизма в организме больного или персонала, а также на объектах окружающей среды, что позволит обосновать этиологическую значимость микроорганизма в возникновении заболевания или вспышки инфекции, а также установить принадлежность выделенного возбудителя к госпитальному штамму. The problem of nosocomial infections caused by hospital strains of microorganisms in recent years has become extremely important for clinics around the world. The enlargement of medical institutions, the creation of new types of medical equipment, the introduction of new complex operations, the use of the latest drugs with immunosuppressive properties, the artificial suppression of immunity in organ and tissue transplants - all this increases the risk of spreading hospital infections among patients and staff of medical institutions. Therefore, it is understandable that the role of laboratory monitoring of hospitals is increasing in order to identify a hospital strain of a microorganism in the patient’s body or staff, as well as on environmental objects, which will allow one to substantiate the etiological significance of the microorganism in the occurrence of a disease or an outbreak of infection, as well as to establish that the selected pathogen belongs to a hospital strain.

В настоящее время возрос удельный вес госпитальных инфекций. Среди госпитальных инфекций синегнойная инфекция занимает особое место из-за тяжести течения заболеваний, вызываемых ею, а также высокой устойчивости ее к лекарственным препаратам. Currently, the proportion of hospital infections has increased. Among hospital infections, Pseudomonas infection occupies a special place due to the severity of the course of the diseases caused by it, as well as its high resistance to drugs.

Поэтому диагностика штамма синегнойной палочки как госпитального является очень важной задачей. Therefore, the diagnosis of Pseudomonas aeruginosa as a hospital strain is a very important task.

Для такой диагностики используют изучение биологических и серологических свойств штамма Ps aeruginosa. For such diagnostics, the biological and serological properties of the Ps aeruginosa strain are used.

Известны способы диагностики госпитального штамма Ps aeruginosa путем определения ограниченного количества биологических и серологических свойств, таких как: чувствительность к антибиотикам, устойчивость к дезинфицирующим средствам, серо- или фаготип, плазмидный профиль, адгезивную способность к эпителиальным клеткам (1 - 6). Known methods for diagnosing a hospital strain of Ps aeruginosa by determining a limited number of biological and serological properties, such as: sensitivity to antibiotics, resistance to disinfectants, sero- or phagotype, plasmid profile, adhesive ability to epithelial cells (1 - 6).

Однако эти способы, основанные на определении и изучении только одного или двух свойств штамма, не позволяет диагностировать штамм как госпитальный с достаточной точностью. However, these methods, based on the determination and study of only one or two properties of the strain, do not allow to diagnose the strain as hospital with sufficient accuracy.

Известен способ диагностики госпитального штамма Ps aeruginosa, включающий определение его серотипа и чувствительности к антибиотикам [3], который позволяет повысить точность диагностики. A known method for the diagnosis of a hospital strain of Ps aeruginosa, including determining its serotype and sensitivity to antibiotics [3], which improves the accuracy of diagnosis.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому способу является способ диагностики госпитального штамма Ps aeruginosa, который авторами выбран в качестве прототипа. The closest in technical essence to the proposed method is a method for the diagnosis of a hospital strain of Ps aeruginosa, which the authors selected as a prototype.

Известный способ основан на определении таких свойств штамма, как его чувствительность к антибиотикам и бактериофагам, и заключается в следующем: выделенную культуру от различных источников, которая соответствует Ps aeruginosa по следующим тестам: образование сине-зеленого пигмента (пиоцианина); наличие специфического запаха; подвижность в среде; рост при температуре 42oC; ферментация нитратов до азота; положительный O/F тест; цитохромоксидаза положительная; дигидролиз аргинина.The known method is based on the determination of such properties of the strain as its sensitivity to antibiotics and bacteriophages, and consists in the following: isolated culture from various sources, which corresponds to Ps aeruginosa according to the following tests: the formation of a blue-green pigment (pyocyanin); the presence of a specific smell; mobility in the environment; growth at a temperature of 42 o C; fermentation of nitrates to nitrogen; positive O / F test; positive cytochrome oxidase; dihydrolysis of arginine.

Засевают культуру на питательную среду, накладывают на него 15 дисков, пропитанных различными антибиотиками, такими как стрептомицин, эритримицин, полимиксин, ампициллин, неомицин, ристомицин, фузидин, карбенициллин, оксациллин, цефалексин, линкомицин, олеандомицин, рифампицин. Воздействие осуществляют в течение 24 ч при температуре 37oC, после чего анализируют полученные результаты. Затем на газон воздействуют различными жидкими бактериофагами в течение 24 ч при температуре 37oC и регистрируют зону лизиса бактерий специфичным бактериофагом [4].The culture is inoculated on a nutrient medium, 15 discs impregnated with various antibiotics are applied on it, such as streptomycin, erythrimycin, polymyxin, ampicillin, neomycin, ristomycin, fusidine, carbenicillin, oxacillin, cefalexin, lincomycin, oleandomycin, rif. The impact is carried out for 24 hours at a temperature of 37 o C, after which analyze the results. Then, the lawn is exposed to various liquid bacteriophages for 24 hours at a temperature of 37 ° C and the bacteriophage specific lysis zone is recorded [4].

Диагностируют госпитальный штамм Ps aeruginosa при отсутствии чувствительности штамма к не менее 9-и антибиотикам и одинаковом фаготипе. A hospital strain of Ps aeruginosa is diagnosed in the absence of strain sensitivity to at least 9 antibiotics and the same phagotype.

Точность диагностики Ps aeruginosa госпитального штамма при этом является невысокой, поскольку чувствительность к антибиотикам даже не госпитального штамма Ps aeruginosa велика. The diagnostic accuracy of Ps aeruginosa of the hospital strain is low, since the antibiotic sensitivity of even the non-hospital strain of Ps aeruginosa is high.

Задачей предлагаемого способа является повышение точности диагностики госпитального штамма Ps aeruginosa. The objective of the proposed method is to increase the accuracy of diagnosis of the hospital strain of Ps aeruginosa.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики госпитального штамма Ps aeruginosa, включающем определение чувствительности штамма к антибиотикам и его фаготип, согласно изобретению, дополнительно определяет устойчивость штамма к дезинфицирующим средствам, его плазмидный профиль, серотип, адгезию к эпителиальным клеткам и диагностируют штаммы Ps aeruginosa как госпитальный при отсутствии чувствительности штамма к не менее 9-и антибиотикам, одинаковых фаго- и серотипе, устойчивости к не менее 5-и дезинфицирующим средствам, сходном плазмидном профиле и коэффициенте адгезии 15±0,2 и более. The problem is solved in that in the known method for the diagnosis of a hospital strain of Ps aeruginosa, including determining the sensitivity of the strain to antibiotics and its phagotype, according to the invention, additionally determines the resistance of the strain to disinfectants, its plasmid profile, serotype, adhesion to epithelial cells and diagnose Ps strains aeruginosa as hospital in the absence of strain sensitivity to at least 9 antibiotics, the same phage and serotype, resistance to at least 5 disinfectants, plasmid bottom profile and adhesion ratio of 15 ± 0,2 or more.

Отличительными признаками является то, что дополнительное определяют устойчивость штамма к дезинфицирующим средствам, его плазмидный профиль, серотип, адгезию к эпителиальным клеткам и диагностируют штамм Ps aeruginosa как госпитальный, при отсутствии чувствительности штамма к не менее 9-и антибиотикам, одинаковых фаго- и серотипе, устойчивости штамма к не менее 5-и дезинфицирующим средствам, сходном плазмидном профиле и коэффициенте адгезии 15±0,2 и более. Distinctive features are that the additional determine the resistance of the strain to disinfectants, its plasmid profile, serotype, adhesion to epithelial cells and diagnose the Ps aeruginosa strain as hospital, in the absence of sensitivity of the strain to at least 9 antibiotics, the same phage and serotype, the resistance of the strain to at least 5 disinfectants, a similar plasmid profile and an adhesion coefficient of 15 ± 0.2 or more.

Изучение таких свойств штамма Ps aeruginosa, как устойчивость к дезинфицирующим средствам, серотип, плазмидный профиль, адгезия к эпителиальным клеткам и оценка полученных результатов позволяет судить о штамме Ps aeruginosa как госпитальном большой точностью ≈100%, поскольку отсутствие чувствительности к не менее 9-ти антибиотикам, сходный плазмидный профиль, одинаковый серо- и фаготип, высокая устойчивость к не менее 5-и дезинфицирующим средствам, коэффициент адгезии 15±0,2 и более к эпителиальным клеткам появляются у штамма в результате селекции в больничных условиях. The study of the properties of the Ps aeruginosa strain, such as resistance to disinfectants, serotype, plasmid profile, adhesion to epithelial cells and assessment of the results obtained, makes it possible to judge the Ps aeruginosa strain as a hospital strain with high accuracy of ≈100%, since the lack of sensitivity to at least 9 antibiotics , a similar plasmid profile, the same sero- and phagotype, high resistance to at least 5 disinfectants, adhesion coefficient of 15 ± 0.2 or more to epithelial cells appear in the strain as a result of selection in more nichnyh conditions.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. The proposed method is as follows.

Выделенную культуру от различных источников (из организма больного или персонала, а также окружающих предметов), которая соответствует по своим признакам штамму Ps aeruginosa, засевают газоном на питательную среду, накладывают 15 дисков, пропитанных различными антибиотиками, такими как стрептомицин, эритромицин, полимиксин, ампициллин, неомицин, ристомицин, фузидин, карбенициллин, левомицитин, гентамицин, оксациллин, цефалексин, линкомицин, олеандомицин, рифампицин. Воздействие осуществляют в течение 24 ч при температуре 37oC, после чего оценивают полученные результаты. Затем на газон воздействуют различными бактериофагами в течение 24 ч при температуре 37oC и регистрируют зону лизиса бактерий специфичным бактериофагом.An isolated culture from various sources (from the patient’s body or staff, as well as surrounding objects), which corresponds in its characteristics to the Ps aeruginosa strain, is seeded with a lawn on a nutrient medium, 15 discs are impregnated with various antibiotics, such as streptomycin, erythromycin, polymyxin, ampicillin , neomycin, ristomycin, fusidine, carbenicillin, levomycetin, gentamicin, oxacillin, cephalexin, lincomycin, oleandomycin, rifampicin. The impact is carried out for 24 hours at a temperature of 37 o C, after which evaluate the results. Then, the lawn is exposed to various bacteriophages for 24 hours at a temperature of 37 ° C and the bacteriophage specific lysis zone is recorded.

Изучение чувствительности выделенных культур Ps aeruginosa к дезинфектантам осуществляют путем воздействия нормированной экспозицией рабочих концентраций дезинфектанта на изучаемые штаммы. В качестве дезинфектантов применяют хлорную известь, хлорцин, монохлорамин, полисепт и перекись водорода в различных концентрациях. Готовят стандартную взвесь Ps aeruginosa, соответствующую 5 ед. стандарта мутности, и растворы дезинфектантов. После этого в стандартную взвесь вносят раствор дезинфектанта до концентрации рабочего разведения: хлорная известь 1% и 0,5%, хлорцин 1% и 0,5%, монохлорамин 1% и 0,5%, полисепт 1%, перекись водорода 3% и 6%. Высев производят на мясопептонный агар в чашки Петри и на среду обогащения (сахарный бульон) одномоментно, мерно, после 10, 15, 30 - минут воздействия дезинфектанта на стандартную взвесь. Учет результатов проводят через 24 ч по количеству выросших колоний на чашках Петри. Культуры считают чувствительными при отсутствии роста или при росте единичных колоний. The sensitivity of the isolated Ps aeruginosa cultures to disinfectants is studied by exposure to the studied strains by normalized exposure of the working concentrations of the disinfectant. As disinfectants, bleach, chlorcin, monochloramine, polysept and hydrogen peroxide in various concentrations are used. Prepare a standard suspension of Ps aeruginosa, corresponding to 5 units. turbidity standard, and disinfectant solutions. After that, a disinfectant solution is added to a standard suspension to a concentration of working dilution: bleach 1% and 0.5%, chlorcin 1% and 0.5%, monochloramine 1% and 0.5%, polysept 1%, hydrogen peroxide 3% and 6% Sowing is carried out on meat-peptone agar in Petri dishes and on the enrichment medium (sugar broth) simultaneously, measuredly, after 10, 15, 30 minutes of exposure to a standard suspension of the disinfectant. Analysis of the results is carried out after 24 hours according to the number of grown colonies on Petri dishes. Cultures are considered sensitive in the absence of growth or in the growth of single colonies.

Для определения серотипа штамма на диагностируемый штамм воздействуют 13-ю групповыми и 27-ю факторными монорецепторными диагностическими "0" сыворотками в течение 30 мин при температуре 37oCo, после чего определяют серотип.To determine the strain serotype, the diagnosed strain is exposed to 13 group and 27 factor monoreceptor diagnostic "0" sera for 30 minutes at a temperature of 37 o C o , after which the serotype is determined.

Плазмидный профиль штамма определяют с помощью электрофоретического метода выделения плазмидной ДНК на слабе Bio-Rad. Для этого предварительно промытый трисборатным буфером штамм вводят в агарозный гель, размеры которого 140х120х3,2 мм с 10-ю и 11-ю ячейками, затем вводят гель в литическую смесь, содержащую 10 мкл лизоцима, и покрывающую смесь, содержащую 0,8-1% агарозы. Электрофорез осуществляют при температуре 20oC в течение 30 мин при напряжении 20 В, 150 мин при напряжении 120 В и силе тока 30 мА.The plasmid profile of the strain is determined using the electrophoretic method for isolating plasmid DNA on the weak Bio-Rad. To do this, the strain previously washed with trisborate buffer is injected into an agarose gel, the sizes of which are 140x120x3.2 mm with 10 and 11 cells, then the gel is introduced into the lytic mixture containing 10 μl of lysozyme and the coating mixture containing 0.8-1 % agarose. Electrophoresis is carried out at a temperature of 20 o C for 30 min at a voltage of 20 V, 150 min at a voltage of 120 V and a current strength of 30 mA.

После проведения электрофореза гель окрашивают бромистым этидием и фотографируют в ультрафиолетовом свете, подаваемом коротковолновым излучателем - ультрахимоскопом "Хроматоскоп-М" на фотоаппарате "Зенит-ТТЛ", фотографическая плена РФ-3, чувствительность 1500 ед, экспозиция 3 мин. Определение молекулярного веса плазмид проводят графически с использованием тесторных плазмид-реперов. After electrophoresis, the gel is stained with ethidium bromide and photographed in ultraviolet light supplied by a short-wavelength emitter - a Chromatoscope-M ultrasound microscope on a Zenit-TTL camera, RF-3 photographic captivity, sensitivity 1500 units, exposure 3 min. Determination of the molecular weight of plasmids is carried out graphically using test plasmids-reference.

Определение адгезивной способности культуры штамма осуществляют следующим образом: смешивают в разных объемах, предварительно 3 раза отмытые в фосфатном буфере взвесь эпителиоцитов и штамм Ps aeruginosa, и полученную смесь помещают в термостат, где ее выдерживают в течение 30 мин при температуре 37oC при постоянном встряхивании. Полученную взвесь отмывают от несвязавшихся клеток центрифугированием и из осадка готовят мазки с окраской по Романовскому. Затем рассчитывают индекс адгезии.The adhesive ability of the strain culture is determined as follows: a suspension of epithelial cells and a strain of Ps aeruginosa are preliminarily washed 3 times in phosphate buffer, and the resulting mixture is placed in a thermostat, where it is kept for 30 min at a temperature of 37 o C with constant shaking . The resulting suspension is washed from unbound cells by centrifugation and smears with Romanovsky staining are prepared from the pellet. Then calculate the adhesion index.

Полученные результаты анализируют и диагностируют штамм Ps aeruginosa как госпитальный: при отсутствии чувствительности штамма к не менее 9-и антибиотикам, одинаковых фаго- и серотипе, устойчивости к не менее 5-и дезинфицирующим средствам, сходным плазмидном профиле, коэффициента адгезии к эпителиальным клеткам 15-0,2 и более. The obtained results analyze and diagnose the Ps aeruginosa strain as hospital: in the absence of strain sensitivity to at least 9 antibiotics, the same phage and serotype, resistance to at least 5 disinfectants, a similar plasmid profile, and adhesion coefficient to epithelial cells 15- 0.2 and more.

Примеры конкретного исполнения предлагаемого способа. Examples of specific performance of the proposed method.

Предлагаемый способ был использован для диагностики штамма Ps aeruginosa как госпитального в Нижегородской специализированной кардиохирургической больнице. The proposed method was used to diagnose the strain Ps aeruginosa as a hospital in the Nizhny Novgorod specialized cardiac surgery hospital.

Для этого выделяли культуру от различных источников в отделении приобретенных пороков, отделении реанимации, операционном блоке, отделении врожденных пороков, которая по тестам соответствует штамму Ps aeruginosa. To do this, a culture was isolated from various sources in the department of acquired defects, intensive care unit, surgical unit, Department of congenital defects, which according to the tests corresponds to the strain Ps aeruginosa.

Выделенную культуру засевали газоном на питательную среду, накладывали 15 дисков, пропитанных различными антибиотиками, такими как стрептомицин, эритримицин, полимиксин, ампициллин, неомицин, ристомицин, фузидин, карбенициллин, левомицетин, гентамицин, оксациллин, цефалексин, ленкомицин, олеандомицин, рифампицин. Воздействие осуществляли в течение 24 ч при температуре 37oC, после чего оценивали полученные результаты. Затем на газон воздействовали различными бактериофагами в течение 24 ч при температуре 37oC и регистрировали зону лизиса бактерий специфическим бактериофагом.The isolated culture was sown with a lawn on a nutrient medium, 15 discs impregnated with various antibiotics were applied, such as streptomycin, erythrimycin, polymyxin, ampicillin, neomycin, ristomycin, fusidin, carbenicillin, chloramphenicol, gentamicin, oxacillin, cefalecin, rhenomene. The exposure was carried out for 24 hours at a temperature of 37 o C, after which the results were evaluated. Then, the lawn was exposed to various bacteriophages for 24 hours at a temperature of 37 ° C and the bacteriophage specific lysis zone was recorded.

Изучение чувствительности выделенных культур Ps aeruginosa к дезинфектантам осуществляли путем воздействия нормированной экспозицией рабочих концентраций дезинфектанта на изучаемые штаммы. В качестве дезинфектантов применяли хлорную известь, хлорцин, монохлорами, полисепт и перекись водорода в различных концентрациях. Готовили стандартную взвесь Ps aeruginosa, соответствующую 5 ед. стандарта мутности, и растворы дезинфектантов. После этого в стандартную взвесь вносили раствор дезинфектанта до концентрации рабочего разведения: хлорная известь 1% и 0,5%, хлорцин 1% и 0,5%, монохлорамин 1% и 0,5%, полисепт 1%, перекись водорода 3% и 5%. Высев производили на мясопептонный агар в чашки Петри и на среду обогащения (сахарный бульон) одномоментно, мерно, после 10, 15, 30 мин воздействия дезинфектанта на стандартную взвесь. Учет результатов проводили через 24 ч по количеству выросших колоний на чашках Петри. Культуры считали чувствительными при отсутствии роста или при росте единичных колоний. The sensitivity of the isolated Ps aeruginosa cultures to disinfectants was studied by exposure to the studied strains by normalized exposure of the working concentrations of the disinfectant. As disinfectants, bleach, chlorcin, monochlora, polysept and hydrogen peroxide in various concentrations were used. Prepared a standard suspension of Ps aeruginosa, corresponding to 5 units. turbidity standard, and disinfectant solutions. After that, a disinfectant solution was added to a standard suspension to a concentration of working dilution: bleach 1% and 0.5%, chlorcin 1% and 0.5%, monochloramine 1% and 0.5%, polysept 1%, hydrogen peroxide 3% and 5%. Sowing was performed on meat-peptone agar in Petri dishes and on the enrichment medium (sugar broth) at the same time, measured, after 10, 15, 30 minutes of exposure to a standard suspension of the disinfectant. Results were taken into account after 24 hours according to the number of grown colonies on Petri dishes. Cultures were considered sensitive in the absence of growth or in the growth of single colonies.

Для определения серотипа штамма на диагностируемый штамм воздействовали 13-ю групповыми и 27-ю факторными монорецепторными диагностическими "0" сыворотками в течение 30 мин при температуре 37oC, после чего определяли серотип.To determine the serotype of the strain, the diagnosed strain was exposed to 13 group and 27 factor monoreceptor diagnostic “0” sera for 30 min at a temperature of 37 o C, after which the serotype was determined.

Плазмидный профиль штамма определяли с помощью электрофоретического метода выделения плазмидных ДНК на слабе Bio-Red модель 220. Для этого предварительно промытый трисборатным буфером штамм вводили в агарозный гель, размеры которого 140х120х3,2 мм с 10-ю и 11-ю ячейками, затем вводили в гель литическую смесь содержащую 10 мкл лизоцима и покрывающую смесь, содержащую 0,8-1.0% агарозы. Электрофорез осуществляли при температуре 20oC в течение 30 мин при напряжении 20 В, 150 мин при напряжении 120 В и силе тока 30 мА.The plasmid profile of the strain was determined using the electrophoretic method for isolating plasmid DNA on the weak Bio-Red model 220. For this, the strain pre-washed with trisborate buffer was introduced into an agarose gel, the sizes of which were 140x120x3.2 mm with 10 and 11 cells, then introduced into gel lytic mixture containing 10 μl of lysozyme and coating mixture containing 0.8-1.0% agarose. Electrophoresis was carried out at a temperature of 20 o C for 30 min at a voltage of 20 V, 150 min at a voltage of 120 V and a current strength of 30 mA.

После проведения электрофореза гель окрашивали бромистым этидием и фотографировали в ультрафиолетовом свете, подаваемом коротковолновым излучателем ультрахимоскопом "Хроматоскоп-М", на фотоаппарате "Зенит ТТЛ". Фотографическая пленка РФ-3, чувствительность 1500 ед., экспозиция 3 мин. Определение молекулярного веса плазмид проводили графически с использованием тесторных плазмид-реперов. After electrophoresis, the gel was stained with ethidium bromide and photographed in ultraviolet light, supplied by a short-wavelength emitter with a Chromatoscope-M ultrachemoscope, on a Zenit TTL camera. Photographic film RF-3, sensitivity 1,500 units, exposure 3 min. The determination of the molecular weight of plasmids was carried out graphically using test plasmids-reference.

Определение адгезивной способности культуры штамма осуществляли следующим образом: смешивали в равных объемах, предварительно 3 раза отмытые в фосфатном буфере взвесь эпителиоцитов и штамм Ps aeruginosa и полученную смесь помещали в термостат, где ее выдерживали в течение 30 мин при температуре 37oC при постоянном встряхивании. Полученную взвесь отмывали от несвязавшихся клеток центрифугированием и из осадка готовили мазки с окраской по Романовскому. Затем рассчитывали индекс адгезии.The adhesive ability of the strain culture was determined as follows: mixed in equal volumes, suspension of epithelial cells and Ps aeruginosa strain previously washed 3 times in phosphate buffer, and the resulting mixture was placed in a thermostat, where it was kept for 30 min at a temperature of 37 ° C with constant shaking. The resulting suspension was washed from unbound cells by centrifugation and Romanowsky stained smears were prepared from the pellet. Then, the adhesion index was calculated.

Штамм Ps aeruginosa как госпитальный был диагностирован в отделении приобретенных пороков и отделении реанимации, поскольку в этих отделениях выделенная культура Ps aeruginosa была не чувствительна к 9-и антибиотикам, имела одинаковый фаго- и серотип, сходный плазмидный профиль и коэффициент адгезии к эпителиальным клеткам 15 - 0,2 и более, устойчива к 5-и дезинфицирующим средствам. The strain Ps aeruginosa as a hospital strain was diagnosed in the department of acquired defects and the intensive care unit, because in these departments the isolated culture of Ps aeruginosa was insensitive to 9 antibiotics, had the same phage and serotype, similar plasmid profile and coefficient of adhesion to epithelial cells 15 - 0.2 and more, resistant to 5 disinfectants.

Полученные результаты хорошо согласуются с данными расследования вспышки заболеваний синегнойной инфекции в этих отделениях. The results obtained are in good agreement with the data of the investigation of the outbreak of Pseudomonas infection in these departments.

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет диагностировать госпитальный штамм Ps aeruginosa с точностью ≈ 100%. As can be seen from the obtained results, the proposed method allows to diagnose a hospital strain of Ps aeruginosa with an accuracy of ≈ 100%.

Claims (1)

Способ диагностики госпитального штамма синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa, включающий определение чувствительности штамма к антибиотикам и его фаготипа, отличающийся тем, что дополнительно определяют устойчивость штамма к дезинфицирующим веществам, его плазмидный профиль, серотип, адгезию к эпителиальным клеткам и диагностируют штамм синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa как госпитальный при отсутствии чувствительного штамма к не менее девяти антибиотикам, одинаковых фаго- и серотипа, устойчивости к не менее пяти дезинфицирующим веществам, сходном плазмидном профиле и коэффициенте адгезии 15 ± 0,2. A method for the diagnosis of a hospital strain of Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa, comprising determining the sensitivity of the strain to antibiotics and its phagotype, characterized in that they further determine the strain resistance to disinfectants, its plasmid profile, serotype, adhesion to epithelial cells and diagnose Pseudomonas aeruginosa bacillus aeruginosa as Pseudomonas in the absence of a sensitive strain to at least nine antibiotics, the same phage and serotype, resistance to at least five disinfectants m, similar plasmid profile and adhesion coefficient of 15 ± 0.2.
RU94026116A 1994-07-14 1994-07-14 Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa RU2110579C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94026116A RU2110579C1 (en) 1994-07-14 1994-07-14 Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94026116A RU2110579C1 (en) 1994-07-14 1994-07-14 Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU94026116A RU94026116A (en) 1996-08-20
RU2110579C1 true RU2110579C1 (en) 1998-05-10

Family

ID=20158454

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU94026116A RU2110579C1 (en) 1994-07-14 1994-07-14 Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2110579C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2540501C1 (en) * 2014-01-24 2015-02-10 Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей" Министерства здравоохранения Российской Федерации Identification method of blue pus bacillus pseudomonas aeruginosa

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Мартиросян Г.Е. Микробиологическая характеристика госпитальных штаммов синегнойной палочки. В кн.: Актуальные проблемы назоколомиальных инфекций и лекарственной устойчивости микроорганизмов. - Минск, 1986, 99 - 100. (Тезисы докладов. 1-й Всесоюзной конференции). *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2540501C1 (en) * 2014-01-24 2015-02-10 Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей" Министерства здравоохранения Российской Федерации Identification method of blue pus bacillus pseudomonas aeruginosa

Also Published As

Publication number Publication date
RU94026116A (en) 1996-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kloos et al. Update on clinical significance of coagulase-negative staphylococci
JP3010565B2 (en) Apparatus and method for detecting microorganisms
DE602004011105T2 (en) METHODS, PEPTIDES AND BIOSENSORS SUITABLE FOR DETECTING A WIDE SPECTRUM OF BACTERIA
JPH05505522A (en) periodontal disease diagnostic device
Rajkumar et al. Evaluation of different phenotypic techniques for the detection of slime produced by bacteria isolated from clinical specimens
Hess et al. Interplay of antibiotics and bacterial inoculum on suture-associated biofilms
RU2110579C1 (en) Method of identification of hospital strain of pyocyanic bacterium, pseudomonas aeruginosa
US9927438B2 (en) Materials and methods for assessing and mapping microbes and microbial biofilms on wounds
RU2393229C1 (en) Method for estimating adhesion staphylococcus spp to haemoproteins
KR19990044657A (en) METHOD AND APPARATUS FOR MEASURING ANTIMICROBIAL SENSITIVITY OF RELATED PARAFFINAL BACTERIA
CN1178838A (en) Method for bacterial sensitivity test to medicine
US5372935A (en) Detection of candida
JP2006258803A (en) Determination method of peracute mastitis
Abasiubong et al. Enterococcus isolates in clinical samples from in-patients in Uyo, Nigeria
Mashaly et al. Adhesins encoding genes and biofilm formation as virulence determinants in methicillin resistant Staphylococcus aureus causing hospital acquired infections
Sande et al. Comparison of the Three Phenotypic Methods to Detect Biofilm Production in Coagulase Negative Staphylococci
RU2332461C1 (en) Method of pathogenic staphylococci detection by plasma coagulating activity
Millogo et al. Fecal excretion of Mycobacterium leprae, Burkina Faso
Al-Ouqaili et al. The Role of milleri Streptococci in the Formation of Cariogenic Biofilm: Bacteriological Aspects.
RU2785461C1 (en) Express method for determining the sensitivity of gram-negative bacteria to bacteriophages
EP4127207B1 (en) A lyophilized test kit for determination of antimicrobial biological activity of phage preparations against the bacteria staphylococcus aureus
RU2103368C1 (en) Nutrient medium for isolation and culturing meningococci (meningoagar)
US5721112A (en) Method of determining the presence or absence of a nonparaffinophilic microoganism in a specimen and an associated apparatus
Ismael et al. Detection of imipenem resistant hypervirulent klebsiella pneumonia in UTI patients
Reddy et al. ASSESSMENT OF DISTINCTIVE DISCOVERIES STRATEGIES OF BIOFILM ARRANGEMENT IN URINARY CONFINES