RU2101352C1 - Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов - Google Patents
Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2101352C1 RU2101352C1 RU95119734A RU95119734A RU2101352C1 RU 2101352 C1 RU2101352 C1 RU 2101352C1 RU 95119734 A RU95119734 A RU 95119734A RU 95119734 A RU95119734 A RU 95119734A RU 2101352 C1 RU2101352 C1 RU 2101352C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- strain
- water
- petroleum products
- soil
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: микробиология, очистка почвы, пресной и морской воды от нефти и нефтепродуктов. Сущность изобретения: штамм бактерий Rhodococcus species 56Д выделен из пробы ила с территории нефтебазы, расположенной в Архангельской области, полученный штамм нетоксичен, развивается из посевного материала на минеральной среде, используя в качестве источника углерода углеводороды нефти и нефтепродуктов. 3 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерий, пригодного для очистки почвы, пресной и морской воды от нефти и нефтепродуктов в течение 7-14 суток, в широком диапазоне температур 12-30oC.
Известен штамм Pseudomonas aeruginosa 123, несущий OCT, OAM, NAM плазмиды и используемый при биологической очистке воды от нефти и нефтепродуктов (авт. св. СССР 612958, кл.C 12 N 15/09).
Недостатком штамма является избирательность действия. Данный микроорганизм осуществляет только резорбцию нефтяной пленки и не способен к утилизации остаточной замазученности.
Широко применяется штамм Pseudomonas putida 36 (авт.св.СССР 1076446, кл. C 12 N 15/00), обладающий высокими характеристиками по биодеградации нефти и нефтепродуктов, однако этот штамм способен к утилизации нефти лишь при сравнительно высокой температуре 28-30oC в течение длительного времени.
Наиболее близким к предлагаемому является штамм Rhodococcus erythropoeis BKM AC-1339D, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов [1] Однако этот штамм не используют для очистки загрязненной нефтепродуктами морской воды, а также не применяют в качестве биоэмульгатора нефти.
Предметом изобретения является получение штамма бактерий, обладающего биоэмульгирующей активностью и высокой утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам в широком диапазоне температур 12-30oC в относительно короткие сроки (7-14 суток).
Полученный штамм Rhodococcus species 56Д выделен из пробы или с территории нефтебазы, расположенной в Архангельской области. Штамм депонирован Центральной коллекцией микроорганизмов Государственного концерна "Биопрепарат". Регистрационный номер ЦКМ В-61Б.
Полученный штамм Rhodococcus sp 56д нетоксичен, развивается из посевного материала на минеральной среде, используя в качестве источника углерода углеводороды нефти и нефтепродуктов.
Полученный штамм характеризуется следующими морфологическими, культуральными и физиологическими признаками. В мазке видны грамположительные полиморфные палочки, при делении клеток наблюдается характерное расположение клеток под углом друг к другу. На мясопептонном агаре (МПА) через 48 ч появляются мелкие, шероховатые, нежно оранжевого цвета, пастообразной консистенции выпуклые колонки со складчатым центром. В мясопептонном бульоне (МПБ) наблюдаются легкое помутнение, осадок и образование пленки и пристеночного кольца при старении культуры.
Rhodococcus species 56д за исключением глюкозы не сбраживает и не окисляет углеводы. Использует в качестве источника углерода цитраты, малонаты, нитраты не восстанавливает, фенилаланин не дезаминирует. В дополнительных факторах роста микроорганизм не нуждается.
Предлагаемая культура каталозоположительна, оксидазоотрицательна, желатин не разжижает, обладает урезаной активностью, сероводород и индол не выделяет. Штамм является факультативным аэробом, развивается в широкотемпературном диапазоне от 10 до 37oC с оптимумом 28oC при pH 7,2.
В опытах на белых мышах штамм невирулентен и нетоксичен.
Культура хранится в лиофилизованном виде в ампулах при 4oC. Жизнеспособность штамма можно поддерживать регулярным пересевом (1 раз в две недели) на МПА или МПБ, а также на минеральной среде 8E (NH4)2HPO4 1,5 г/л; KH2PO4 0,7 г/л; NaCl 0,5 г/л; MgSO4 7 H2O 0,8 г/л; pH 72), содержащий 0,1-0,5% нефти.
Способность предлагаемого штамма к биодеструкции нефти и нефтепродуктов изучали применительно к загрязненной морской и пресной воде, почве в широком диапазоне температур, о чем свидетельствуют следующие примеры.
Пример 1. Штамм Rhodococcus sp 56д выращивают в 250 мл колбах, содержащих 50 мл стерильной минеральной среды, приготовленной на водопроводной воде (содержащей 0,75 г/л двузамещенного фосфата аммония) или морской воде (3,5% морской соли). Стерильную нефть и нефтепродукты вносят по весу с точностью 0,05 мг, варьируя концентрацию субстрата от 0,5 до 1% Среды инфицируют двухсуточной культурой из расчета 107 кл/мл и экспонируют колбы при 12oC или 26oC в течение 7-14 суток на качалке (80 об/мин). В качестве контроля используют неинфицированную колбу со средой нефтью или нефтепродуктами. По истечении срока инкубации долю утилизированного субстрата определяют весовым методом после экстракции нефтепродуктов хлороформом в опытной и контрольной колбах. Результаты опытов, проведенных при 26oC и представленных в табл. 1, свидетельствуют о высокой эффективности очистки пресной (87,1%) и морской (75,1%) воды от нефтяного загрязнения. Очистка пресной воды от легких фракций нефти идет еще более эффективно и составляет для керосина 93,8% и дизельного топлива 98,8% Загрязнение мазутом снимается менее эффективно (52,8%). При понижении температуры до 12oC эффективность очистки остается на достаточно высоком уровне применительно к таким субстратам как керосин 70,3% и дизельное топливо 65,5% но снижается для нефти (до 47,7%) и мазута 28,5% соответственно.
Пример 2. Опыт, имитирующий нефтяной розлив на поверхности воды, проводят в эксикаторах, наполненных 3 л пресной и морской воды. Размер нефтяного пятна составляет 490 см2 1 мм. Следует заметить, что толщина нефтяной пленки на колбочках (пример 1) не превышает 0,5 мм. Среду инфицируют двухсуточной культурой из расчета 1,8•106 кл/мл и экспонируют при комнатной температуре 22oC в течение 14 суток. По окончании эксперимента остатки субстрата экстрагируют хлороформом и определяют эффективность очистки нефтяного загрязнения. Как видно из табл. 1, эффективность очистки поверхности пресной и морской воды составила 68,85 и 69,2% соответственно.
Пример 3. Очистку замазученной почвы с помощью штамма Rhodococcus sp. 56д изучают следующим образом. В 100 мл колбы помещают по 20 г загрязненной почвы, увлажняют ее минеральной средой (0,75 г/л двузамещенного фосфата аммония), инфицируют двухсуточной культурой из расчета 107 кл/г. В качестве контроля используют неинфицированные пробы. Колбы помещают в эксикатор с небольшим количеством воды на дне для поддержания влажной атмосферы и экспонируют при комнатной температуре (22oC) в течение 14 суток. Долю утилизированного субстрата определяют весовым методом.
Концентрация нефтепродуктов в исходном образце почвы 0,5% а после очистки 0,18% Таким образом эффективность очистки почвы 67,5%
Пример 4. Способность штамма Rhodococcus sp. 56д к эмульгации углеводородов нефти изучают в следующих опытах. Штамм выращивают в 250 мл колбах, содержащих 25 мл стерильной среды. Состав среды: 4,8 г K2HPO4 3 H2O 1,5 г KH2PO4; 1 г (NH4)SO4 цитрата натрия; 2 г глюкозы, 0,1 г дрожжевого экстракта; 2 мг CaCl2 6 H2O 0,4 мг MnCl2 4H2O; 0,2 мг Na2MnO4 2H2O; 0,2 MgSO4 7H2O на 1000 мл дистиллированной воды; pH 7,2.
Пример 4. Способность штамма Rhodococcus sp. 56д к эмульгации углеводородов нефти изучают в следующих опытах. Штамм выращивают в 250 мл колбах, содержащих 25 мл стерильной среды. Состав среды: 4,8 г K2HPO4 3 H2O 1,5 г KH2PO4; 1 г (NH4)SO4 цитрата натрия; 2 г глюкозы, 0,1 г дрожжевого экстракта; 2 мг CaCl2 6 H2O 0,4 мг MnCl2 4H2O; 0,2 мг Na2MnO4 2H2O; 0,2 MgSO4 7H2O на 1000 мл дистиллированной воды; pH 7,2.
Среду инфицируют агаровой культурой из расчета 107 кл/мл, колбы экспонируют при 25oC в течение 5 суток при дополнительной аэрации на качалке (100 об/мин). Наличие эмульгирующей активности определяют по методике, основанной на материалах статьи "A drop collapsing test for screening surfactant-producing microorganisms" (D.K.Jain, D.L.Collins-Thompson, H.Lee and J.T.Trevors Journal of microbiological methods. N 13, p. 271-279-1991). Культуральную жидкость (кж), дважды освобожденную от клеток, центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 мин на центрифуге типа G 2-21, фирма "Бекман", к 0,4 мл кж добавляют 3,5 мл 0,02 М трис буфера pH 7,0 и 0,08 мл гексадекана (C16), смесь встряхивают вручную 10 с. По истечении 10 и 30 мин замеряют оптическую плотность (ОД) нижнего слоя при 540 нм. Контролем служит образец трис HCl буфера с гексадеканом. Разница между значениями ОД опытного и контрольного образцов указывает на наличие эмульгирующей активности.
Результаты опыта (табл.2) свидетельствуют об образовании стойкой эмульсии.
Таким образом предлагаемый штамм Rhodococcus sp. 56д демонстрирует высокую биодеструктирующую активность в отношении нефти и нефтепродуктов в условиях загрязнения почвы, пресной и морской воды, в широком диапазоне температуры (12-30oC) в сравнительно короткие сроки (7-14 суток).
Согласно данным, представленным в табл.3, предлагаемый штамм по эффективности биодеструкции нефти и дизельного топлива не уступает своему аналогу Rhodococcus erythropoeis BKM AC-1339D.
Сопоставить способность к биодеструкции мазута и керосина не представляется возможным ввиду отсутствия в литературе данных.
Следует отметить, что патентуемый штамм в отличие от аналога пригоден для эффективной очистки от нефтепродуктов морской воды.
Кроме того, предлагаемый штамм Rhodococcus sp. 56д обнаруживает высокую эмульгирующую активность по отношению к углеводородам. Последнее обстоятельство выгодно отличает предлагаемый штамм от уже известных биодеструкторов нефти и позволяет расширить сферу его применения. Микроорганизм с биоэмульгирующей активностью может применяться при очистке загрязненных нефтепродуктами резервуаров, при добыче нефти для усиления отдачи пластов, а также в очистных сооружениях и при очистке промстоков.
Claims (1)
- Штамм Rhodococcus species ЦКМ В-61Б (Центральная коллекция микроорганизмов Государственного концерна "Биопрепарат"), используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95119734A RU2101352C1 (ru) | 1995-11-30 | 1995-11-30 | Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95119734A RU2101352C1 (ru) | 1995-11-30 | 1995-11-30 | Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2101352C1 true RU2101352C1 (ru) | 1998-01-10 |
RU95119734A RU95119734A (ru) | 1998-02-27 |
Family
ID=20174042
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95119734A RU2101352C1 (ru) | 1995-11-30 | 1995-11-30 | Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2101352C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2558299C1 (ru) * | 2014-09-22 | 2015-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | ШТАММ БАКТЕРИЙ Rhodococcus sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ |
-
1995
- 1995-11-30 RU RU95119734A patent/RU2101352C1/ru active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2558299C1 (ru) * | 2014-09-22 | 2015-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | ШТАММ БАКТЕРИЙ Rhodococcus sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Izaguirre et al. | Degradation of 2-methylisoborneol by aquatic bacteria | |
WO2020009097A1 (ja) | 石油関連物質により汚染された環境の除染方法および使用する資材 | |
CN101974446A (zh) | 一种产生生物乳化剂和降解烷烃的耐盐红球菌及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用 | |
RU2482179C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus atropheus - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
RU2509150C2 (ru) | Ассоциация штаммов бактерий-нефтедеструкторов и способ ремедиации нефтезагрязненных объектов | |
RU2300561C1 (ru) | Штамм rhodococcus globerulus h-42 для разложения нефти и нефтепродуктов | |
RU2101352C1 (ru) | Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов | |
JP3728721B2 (ja) | 新規微生物及び排水の処理方法 | |
RU2401298C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Achromobacter sp.-ДЕСТРУКТОР ОРГАНОФОСФОНАТОВ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ БИОРЕМЕДИАЦИИ ПОЧВ | |
RU2093478C1 (ru) | Способ очистки воды и почвы от нефти, нефтепродуктов и полимерных добавок в буровой раствор | |
CN105483026A (zh) | 卷枝毛霉h3及其在降解芘中的应用 | |
US5342778A (en) | Microorganism belonging to the genus flavobacterium designated ferm BP-4010 | |
RU2142997C1 (ru) | Штамм arthrobacter sp. для разложения сырой нефти и нефтепродуктов | |
RU2560272C1 (ru) | Штамм бактерий serratia plymuthica -деструктор нефти и нефтепродуктов | |
RU2257409C1 (ru) | Штамм rhodococcus erythropolis для разложения нефти и нефтепродуктов | |
RU2311237C1 (ru) | Способ микробиологической очистки нефтяных шламов и загрязненного нефтепродуктами грунта (варианты) | |
RU2228952C2 (ru) | Штамм бактерий pseudomonas stutzeri mev-s1, используемый для очистки почв, грунтовых и поверхностных вод от нефти и продуктов ее переработки | |
RU2142996C1 (ru) | Штамм arthrobacter sp. для разложения сырой нефти и нефтепродуктов | |
RU2299239C1 (ru) | Штамм rhodococcus globerulus для разложения нефти и нефтепродуктов | |
RU2228953C2 (ru) | Штамм бактерий pseudomonas alcaligenes mev, используемый для очистки почв, грунтовых и поверхностных вод от нефти и продуктов ее переработки | |
RU2257410C1 (ru) | Штамм rhodococcus erythropolis для разложения нефти и нефтепродуктов | |
JP5303176B2 (ja) | 新規水草根圏微生物 | |
TWI518180B (zh) | 具有乳化能力以及對於苯和/或萘的清除能力的桃園假單胞菌s03分離株及其用途 | |
JP4542230B2 (ja) | 重油分解方法 | |
RU2560279C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Kocuria sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ |