RU2101030C1

RU2101030C1 - Method of antibrucellosis serum preparing

Info

Publication number: RU2101030C1
Application number: RU93020806A
Authority: RU
Inventors: Е.А. Драновская; М.М. Желудков
Original assignee: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии, им.Н.Ф.Гамалеи РАМН
Priority date: 1993-04-21
Filing date: 1993-04-21
Publication date: 1998-01-10

Abstract

FIELD: biotechnology, medicine, veterinary science. SUBSTANCE: method involves the use of brucellosis antigen prepared by chemical procedure. Antigen at the dose 1.0 mg/ml is administrated by intravenous route twofold followed by blood taking off in 9 and 14 days that ensures to obtain high active and specific antibrucellosis serum. Method can be used for diagnosticum preparing also. EFFECT: improved method of preparing. 1 tbl

Description

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицине и ветеринарии и может быть использовано для получения антибруцеллезной сыворотки и производства диагностикумов. The invention relates to biotechnology, in particular to medicine and veterinary medicine and can be used to obtain anti-brucellosis serum and the production of diagnosticums.

Известен способ получения антибруцеллезной сыворотки, включающий введение кроликам живых бруцелл 4•10⁹ микробных клеток/мл штамма B.abortus 19-BA внутривенно, однократно с последующим взятием крови через 14 сут. (ФС 42-315 ВС-90 на диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный).A known method for producing anti-brucellosis serum, comprising administering to the rabbits of live brucella 4 • 10 ⁹ microbial cells / ml of B. abortus 19-BA strain intravenously, once, followed by blood collection after 14 days. (FS 42-315 BC-90 for diagnostic erythrocyte brucellosis antigenic).

Однако сыворотка, полученная известным способом недостаточно активна и специфична, и биологически опасна, так как для иммунизации используются живые бруцеллы. However, serum obtained in a known manner is not sufficiently active and specific, and biologically dangerous, since live brucellas are used for immunization.

Предлагаемый способ направлен на повышение активности и специфичности антибруцеллезной сыворотки, а также на предотвращение биологической опасности при ее получении. The proposed method aims to increase the activity and specificity of anti-brucellosis serum, as well as to prevent biological hazard in its preparation.

Это достигается путем использования бруцеллезного антигена, полученного химическим способом. This is achieved by using a brucellosis antigen obtained chemically.

Пример 1. Бруцеллезный антиген для получения антибруцеллезной сыворотки готовят из вакцинного штамма B.abortus 19, путем обработки бактериальной суспензии в концентрации 200 млрд. м. кл. в 1 мл раствором 1N NaOH в течение 30 мин, последующей нейтрализации 2N уксусной кислотой и осаждением целевого продукта ацетоном (или спиртом) в соотношении 1:5 и последующим высушиванием осадка. Example 1. Brucellosis antigen to obtain anti-brucellosis serum is prepared from a vaccine strain of B. abortus 19, by treating a bacterial suspension at a concentration of 200 billion m. in 1 ml with a solution of 1N NaOH for 30 min, followed by neutralization with 2N acetic acid and precipitation of the target product with acetone (or alcohol) in a ratio of 1: 5 and subsequent drying of the precipitate.

0,2 мг бруцеллезного антигена вводят внутривенно однократно кроликам весом 2,5 3,0 кг. Забор крови проводят через 9 сут. с последующим отделением сыворотки и добавлением к ней мертиолята или азида натрия и конечной концентрации 1: 10.000 в качестве консерванта. Полученную сыворотку исследуют на активность и специфичность. Активность сыворотки проверяют в реакции агглютинации (РА) и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Специфичность антибруцеллезной сыворотки проверяют с гетерологичными антигенами с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). 0.2 mg of brucellosis antigen is administered intravenously once to rabbits weighing 2.5 to 3.0 kg. Blood sampling is carried out after 9 days. followed by separation of the serum and adding to it merthiolate or sodium azide and a final concentration of 1: 10.000 as a preservative. The resulting serum is tested for activity and specificity. Serum activity is checked in the agglutination reaction (RA) and indirect hemagglutination reaction (RNGA). The specificity of anti-brucellosis serum is checked with heterologous antigens using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

Пример 2. 1,0 мг/мл антигена вводят внутривенно, двукратно с интервалом 7 сут. и последующим забором крови через 9 и 14 сут. Полученная сыворотка испытана на активность и специфичность. Данные представлены в таблице. Example 2. 1.0 mg / ml of antigen is administered intravenously, twice with an interval of 7 days. and subsequent blood sampling after 9 and 14 days. The resulting serum was tested for activity and specificity. The data are presented in the table.

Как видно из таблицы, сыворотка, полученная по примеру 1 по активности слабее, но однако обладает более высокой специфичностью, по сравнению с прототипом. As can be seen from the table, the serum obtained in example 1 in activity is weaker, but however, has a higher specificity compared to the prototype.

Изменение схемы иммунизации кроликов химически очищенным антигеном в более высоких дозах (пример 2) выявило повышение титра специфических антител в РА и РНГА, при сохранении их активности в течение 91-4 сут. после последней инъекции, по сравнению с примером 1. A change in the immunization schedule for rabbits with higher doses of chemically purified antigen (Example 2) revealed an increase in the titer of specific antibodies in RA and RNGA, while maintaining their activity for 91-4 days. after the last injection, compared with example 1.

Таким образом, двукратное внутривенное введение в дозе 1,0 кг химически очищенного антигена позволило получить высокоактивную и специфическую антибруцеллезную сыворотку. Thus, double intravenous administration at a dose of 1.0 kg of chemically purified antigen made it possible to obtain highly active and specific anti-brucellosis serum.

Использование предлагаемого способа обеспечивает безопасную технологию получения высокоспецифичного и активного препарата. Using the proposed method provides a safe technology for obtaining a highly specific and active drug.

Claims

A method of producing anti-brucellosis serum, including intravenous administration to rabbits of brucellosis antigen, followed by blood sampling and separation of serum, characterized in that they use brucellosis antigen isolated from the vaccine strain B. abortus 19 by treatment with a solution of alkali and acetic acid, followed by precipitation, injected in a dose 1 mg twice and blood sampling is carried out 9-14 days after the second injection.