RU2098483C1 - Method of avermectin preparing, strain streptomyces avermitilis - a producer of avermectin - Google Patents
Method of avermectin preparing, strain streptomyces avermitilis - a producer of avermectin Download PDFInfo
- Publication number
- RU2098483C1 RU2098483C1 RU95113973A RU95113973A RU2098483C1 RU 2098483 C1 RU2098483 C1 RU 2098483C1 RU 95113973 A RU95113973 A RU 95113973A RU 95113973 A RU95113973 A RU 95113973A RU 2098483 C1 RU2098483 C1 RU 2098483C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- avermectins
- colonies
- avermectin
- strain
- producer
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается получения антибиотиков авермектинов, обладающих высокой антипаразитарной активностью и находящих применение в ветеринарии для профилактики и лечения домашних животных и птицы. The invention relates to biotechnology and for the production of antibiotics avermectins with high antiparasitic activity and finding application in veterinary medicine for the prevention and treatment of pets and birds.
Авермектины суммарный препарат, продуцируемый культурой Streptomyces avermitilis и состоящий из структурно родственных соединений, называемых авермектином A и авермектином B, которые, в свою очередь, также подразделяются на несколько групп. Avermectins are the total preparation produced by the Streptomyces avermitilis culture and consisting of structurally related compounds called avermectin A and avermectin B, which, in turn, are also divided into several groups.
Наиболее активными являются авермектины B, на основе которых в основном и созданы коммерческие ветеринарные препараты. The most active are avermectins B, on the basis of which commercial veterinary drugs are mainly created.
Соотношение биосинтезируемых микробной культурой авермектинов A и авермектинов B зависит от особенностей штамма-продуцента и от условий, в которых проводят процесс культивирования. The ratio of avermectins A and avermectins B biosynthesized by microbial culture depends on the characteristics of the producer strain and on the conditions under which the cultivation process is carried out.
Известен, например, способ получения авермектинов, предусматривающий выращивание штамма-продуцента Streptomyces avermitilis АТСС 31267 или АТСС 31271 или АТСС 31272 на питательной среде, содержащей в качестве источников углерода и азота простые и комплексные органические субстраты, в оптимальных для данной культуры условиях. A method for producing avermectins is known, for example, by growing a producer strain of Streptomyces avermitilis ATCC 31267 or ATCC 31271 or ATCC 31272 on a nutrient medium containing simple and complex organic substrates as carbon and nitrogen sources under optimal conditions for a given culture.
Суммарное содержание в культуральной жидкости авермектинов достигает 500 мг/л [1] из которых на долю авермектинов группы B приходится до 50 70% от общего количества биосинтезируемых авермектинов [2]
При использовании других штаммов-продуцентов соотношение продуцируемых авермектинов может быть иным.The total content of avermectins in the culture fluid reaches 500 mg / l [1] of which up to 50–70% of the group B avermectins account for the total amount of biosynthetic avermectins [2]
When using other producer strains, the ratio of avermectins produced may be different.
В частности, запатентован способ получения авермектинов B, заключающийся в том, что в качестве продуцента используют мутантный штамм Streptomyces avermitilis АТСС 53692, который выращивают на питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота, неорганических солей и карбоновую кислоту-предшественник, в оптимальных условиях. В зависимости от используемой кислоты-предшественника могут быть получены как природные, так и неприродные авермектины группы B, в некоторых случаях совсем не содержащие примесей авермектинов группы F. Однако, абсолютное накопление авермектинов B ферментационной среде, как вытекает из приводимых примеров осуществления способа, не превышает 100 200 мг/л культуральной жидкости [3]
Описан способ получения авермектинов, предусматривающий выращивание мутантных штаммов Streptomyces avermitilis K475 или K655 на комплексной питательной среде, который обеспечивает накопление в культуральной жидкости до 1200 мг авермектина в 1 л среды после 7 суток культивирования. Максимальное накопление авермектина наблюдалось после 10 суток культивирования штамма Strepomyces avermitilis K655 при дополнительном введении в питательную среду 3% глюкозы к 5-суточной культуре и достигало при этом 2500 мг/л. Однако, каких-либо сведений об относительном содержании отдельных компонентов авермектинового комплекса в упоминаемой работе не приводится [4]
Существуют, однако, технологические приемы, позволяющие повысить общий выход авермектинов или долю авермектинов B в общем количестве биосинтезируемых авермектинов при использовании продуцентов, образующих и авермектины группы A и авермектины группы B.In particular, a method for producing avermectins B is patented, which consists in the use of a mutant strain of Streptomyces avermitilis ATCC 53692, which is grown on a nutrient medium containing assimilable sources of carbon, nitrogen, inorganic salts and a precursor carboxylic acid under optimal conditions. Depending on the precursor acid used, both natural and non-natural group Avermectins can be obtained, in some cases completely free of Group F avermectins. However, the absolute accumulation of Avermectins B in a fermentation medium, as follows from the given examples of the method, does not exceed 100 200 mg / l of culture fluid [3]
A method for producing avermectins is described, which involves the cultivation of mutant strains of Streptomyces avermitilis K475 or K655 on a complex nutrient medium that provides for the accumulation in the culture fluid of up to 1200 mg of avermectin in 1 liter of medium after 7 days of cultivation. The maximum accumulation of avermectin was observed after 10 days of cultivation of the Strepomyces avermitilis K655 strain with the additional introduction of 3% glucose into the nutrient medium by a 5-day culture and reached 2500 mg / l. However, no information on the relative content of individual components of the avermectin complex in the cited work is given [4]
However, there are technological methods that can increase the total yield of avermectins or the proportion of avermectins B in the total amount of biosynthetic avermectins when using producers that form both avermectins of group A and avermectins of group B.
Например, сообщалось, что дополнительное введение в ферментационную среду DL-триптофана в концентрации 0,5 мг/мл или DL-метионина в концентрации 2,5 мг/мл стимулирует образование авермектинов культурой Streptomyces avermitilis NRRL 8165, в то время, как другие из изученных 18 аминокислот подобного эффекта не проявляли. For example, it was reported that the additional introduction of DL-tryptophan at a concentration of 0.5 mg / ml or DL-methionine at a concentration of 2.5 mg / ml into the fermentation medium stimulates the formation of avermectins by the Streptomyces avermitilis NRRL 8165 culture, while others from the studied 18 amino acids did not show a similar effect.
Однако, степень влияния эффективных аминокислот на биосинтез авермектинов не приводится, равно как и соотношение отдельных компонентов авермектинового комплекса. Продуктивности культуры без дополнительного внесения аминокислот не превышает 500 мг/л [1]
Было установлено, что при внесении в ферментационную среду антиметаболита синефунгина, ингибирующего превращения авермектинов B в авермектины A, доля авермектинов B, продуцируемых культурой Streptomyces avermitilis NRRL 8165, достигает 77% от общей суммы авермектинов.However, the degree of influence of effective amino acids on the biosynthesis of avermectins is not given, as well as the ratio of the individual components of the avermectin complex. The productivity of the culture without additional amino acids does not exceed 500 mg / l [1]
It was found that when synefungin antimetabolite is introduced into the fermentation medium that inhibits the conversion of avermectins B to avermectins A, the proportion of avermectins B produced by the Streptomyces avermitilis NRRL 8165 culture reaches 77% of the total amount of avermectins.
Однако, абсолютное содержание в культуральной жидкости авермектинов в этом случае остается лишь на уровне 88 105% от контроля, поскольку в присутствии синефунгина синтез авермектинов A снижается [5]
Наиболее близким к предложенному можно признать способ получения авермектина, заключающийся в том, что изолят MA 4990 штамма Streptomyces avermitilis ATCC 31271 выращивают на питательной среде, в состав которой включен L-изолейцин в концентрации 1 г/л, в оптимальных для данной культуры условиях.However, the absolute content of avermectins in the culture fluid in this case remains only at the level of 88 105% of the control, since in the presence of synefungin the synthesis of Avermectins A decreases [5]
Closest to the proposed one can recognize the method of producing avermectin, which consists in the fact that the isolate MA 4990 strain Streptomyces avermitilis ATCC 31271 is grown on a nutrient medium, which includes L-isoleucine at a concentration of 1 g / l, under optimal conditions for this culture.
Доля авермектинов B в этом случае составляет 69% от общей суммы биосинтезируемых авермектинов. The proportion of avermectins B in this case is 69% of the total amount of biosynthetic avermectins.
В то же время, общий уровень накопления авермектинов в культуральной жидкости под влиянием L-изолейцина не увеличивается и его абсолютная величина не приводится [6]
Цель изобретения повысить уровень накопления авермектинов в культуральной жидкости культуры Streptomyces avermitilis при высоком содержании авермектинов B в комплексе биосинтезируемых авермектинов.At the same time, the total accumulation of avermectins in the culture fluid under the influence of L-isoleucine does not increase and its absolute value is not given [6]
The purpose of the invention is to increase the accumulation of avermectins in the culture fluid of the Streptomyces avermitilis culture with a high content of avermectins B in the complex of biosynthetic avermectins.
Поставленная цель была достигнута в результате того, что посевной материал культуры Streptomyces avermitilis готовят путем выращивания споровой культуры этого штамма в присутствии L-лизина, а в оптимальном варианте осуществления изобретения в качестве продуцента используют штамм актиномицета Streptomyces avemitilis 103. The goal was achieved as a result of the fact that the seed of the Streptomyces avermitilis culture is prepared by growing a spore culture of this strain in the presence of L-lysine, and in the optimal embodiment of the invention, the Streptomyces avemitilis 103 actinomycete strain is used as a producer.
Сущность предложенного способа заключается в следующем. The essence of the proposed method is as follows.
В качестве продуцента авермектина используют штамм Sterptomyces avermitilis 103, полученный из исходного штамма Streptomyces avermitilis ATCC 31271 трехступенчатой селекцией. As a producer of avermectin, a Sterptomyces avermitilis 103 strain obtained from the original Streptomyces avermitilis ATCC 31271 strain by three-stage selection is used.
Штамм Str. avermitilis 103 обладает всеми типичными для вида Str. avermitilis признаками, основные из которых указаны ниже. Strain Str. avermitilis 103 has all the typical for the species Str. avermitilis signs, the main of which are listed below.
Морфологические признаки
На среде с соевой мукой на 14 сутки образует колонии диаметром до 7 мм почти круглой формы. Контур края бахромчатый. Колонии плоские, в центре имеется небольшая складчатость. Поверхность колонии сухая, шероховатая, без опущения. Цвет колоний кремовый. Структура колоний однородная, консистенция плотная, кожистая. В среду выделяется коричневый пигмент.Morphological features
On a medium with soy flour for 14 days forms colonies with a diameter of up to 7 mm of almost round shape. The edge contour is fringed. The colonies are flat, in the center there is a slight folding. The surface of the colony is dry, rough, without dropping. The color of the colonies is cream. The structure of the colonies is homogeneous, the texture is dense, leathery. Brown pigment is released on Wednesday.
На среде Хопвуда на 14 сутки образует колонии неправильной формы диаметром до 6 мм. Контур края лопастной. Колонии выпуклые. Поверхность колоний сухая, шероховатая, опущенная, складчатость бородавчатая. Колонии серого цвета с участками белого цвета. Структура колоний неоднородная, консистенция кожистая. Пигмент не образуется. On Wednesday, Hopwood on the 14th day forms colonies of irregular shape with a diameter of up to 6 mm. The contour of the edge of the lobed. The colonies are convex. The surface of the colonies is dry, rough, lowered, warty folding. Colonies of gray with patches of white. The structure of the colonies is heterogeneous, the consistency is leathery. No pigment is formed.
На среде Гаузе с глюкозой на 14 сутки образует колонии диаметром до 8 мм неправильной формы с волнистым краем. Рельеф колоний конусообразный. Часть колоний имеет радиальную складчатость. Поверхность колоний сухая, шероховатая, опущенная, но есть участки без опущения. Цвет колоний светло-серый и темно-серый. Структура колоний неоднородная, консистенция плотная. В среду выделяется светло-коричневый пигмент. On Wednesday, Gause with glucose for 14 days forms colonies with a diameter of up to 8 mm of irregular shape with a wavy edge. The relief of the colonies is conical. Some colonies have radial folding. The surface of the colonies is dry, rough, lowered, but there are areas without omission. The color of the colonies is light gray and dark gray. The structure of the colonies is heterogeneous, the consistency is dense. A light brown pigment is released on Wednesday.
На среде YME на 5 сутки образует колонии двух морфологических типов: I - колонии белого цвета с кремовым оттенком, хорошо опущенные, II колонии выпуклые почти круглой формы с ровным краем и небольшой складчатостью. Цвет колоний серый, в центре более светлый участок. Диаметр колоний 2,0 2,5 мм. Поверхность колоний сухая, шероховатая, неопущенная. Оба типа колоний с обратной стороны коричневого цвета. Выделяют в среду коричневый пигмент. Колонии слегка заглублены в агар. На 14 сутки образует колонии неправильной формы с волнистым краем диаметром до 10 мм. Рельеф колоний конусообразный. Поверхность колоний сухая, шероховатая, хорошо опущенная. Складчатость гирозная. Цвет колоний серый с белыми вкраплениями. Структура неоднородная, консистенция плотная. On the YME medium, on the 5th day it forms colonies of two morphological types: I - colonies of white color with a cream shade, well-lowered, II colonies are convex almost round in shape with a smooth edge and slight folding. The color of the colonies is gray, in the center is a lighter area. The diameter of the colonies is 2.0 2.5 mm. The surface of the colonies is dry, rough, undescended. Both types of colonies are brown on the back. Brown pigment is isolated on Wednesday. Colonies are slightly buried in agar. On the 14th day it forms colonies of irregular shape with a wavy edge with a diameter of up to 10 mm. The relief of the colonies is conical. The surface of the colonies is dry, rough, well lowered. Folding gyro. The color of the colonies is gray with white spots. The structure is heterogeneous, the texture is dense.
На среде CP-6 на 5 сутки образует колонии почти круглой формы серовато-коричневого цвета, диаметром 2 мм. Рельеф колоний куполообразный. Складчатость плохо выражена. В среду выделят темно-коричневый пигмент. Поверхность колоний сухая, шероховатая, опущение отсутствует. На 11 сутки колонии почти круглой формы со слегка волнистым краем, выпуклые с радиальной складчатостью серовато-коричневого цвета и с немного более темным центром. Поверхность сухая, шероховатая, без опущения. Выделяет темно-коричневый пигмент. On Wednesday, CP-6 on the 5th day forms colonies of an almost round grayish-brown color with a diameter of 2 mm. The relief of the colonies is domed. Folding is poorly expressed. Dark brown pigment will be isolated on Wednesday. The surface of the colonies is dry, rough, omission is absent. On day 11, colonies were almost round in shape with a slightly wavy edge, convex with a radial folding of a grayish-brown color and with a slightly darker center. The surface is dry, rough, without dropping. Emits a dark brown pigment.
На среде YMS на 5 сутки образует светло-серые и почти белые колонии примерно в равном соотношении. Форма колоний кратерообразная, диаметр 3,0 - 3,5 мм. Поверхность хорошо опущенная, складчатая. Колонии слегка заглублены в агар, выделяют темно-коричневый пигмент. На 11 сутки колонии почти круглой формы, с волнистым краем, диаметром 5,5 6,0 мм, с выпуклым рельефом. Цвет колоний серый, поверхность сухая, шероховатая, с гирозной складчатостью. В среду выделяет коричневый пигмент. On the YMS medium, on day 5 forms light gray and almost white colonies in approximately equal proportions. The shape of the colonies is crater-shaped, diameter 3.0 - 3.5 mm. The surface is well lowered, folded. The colonies are slightly buried in agar, secrete a dark brown pigment. On the 11th day, the colonies were almost round in shape, with a wavy edge, a diameter of 5.5 6.0 mm, with a convex relief. The color of the colonies is gray, the surface is dry, rough, with gyro folding. On Wednesday, it releases brown pigment.
Хорошая споруляция наблюдается на средах CP-6, минимальной Хопвуда и YMS. Спорофоры образуют спирали в виде разветвлений воздушного мицелия. Компактные вначале спирали раскрываются по мере старения культуры. Количество спор в цепочках не более 15, споры обычно сферической и овальной формы. Good sporulation is observed on CP-6, minimal Hopwood and YMS environments. Sporophores form spirals in the form of branches of the aerial mycelium. Compact at first spirals open as the culture ages. The number of spores in the chains is no more than 15; spores are usually spherical and oval in shape.
Физиологические признаки. В минимальной среде Хопвуда с 1% источника углерода растет, используя в качестве единственного источника углерода глюкозу, фруктозу, маннозу, маннит, инозит, рамнозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, арабинозу и ксилозу. Physiological signs. In a minimal Hopwood environment, with 1% carbon source it grows using glucose, fructose, mannose, mannitol, inositol, rhamnose, sucrose, lactose, maltose, arabinose and xylose as the sole carbon source.
Гидролизует желатину и казеин, свертывает молоко. Hydrolyzes gelatin and casein, coagulates milk.
Хорошо растет и образует воздушный мицелий в интервале температур от 27 до 37 градусов, не растет при температуре 50 градусов. It grows well and forms an air mycelium in the temperature range from 27 to 37 degrees, does not grow at a temperature of 50 degrees.
При культивировании на обычных средах штамм Str. avermitilis 103 характеризуется общей продуктивностью на уровне 1200 1400 мг авермектинов в 1 л культуральной жидкости. Этот уровень сохраняется после трех пассажей при пересеве культуры с косяка на среде YMS. При стандартных условиях культивирования доля авермектинов B в сумме синтезированных авермектинов составляет 40 50%
Выращенная в течение 8 10 суток при температуре 28+1 градусов на агаризованной среде YMS культура штамма хранится под слоем 40%-ного глицерина при температуре 20 градусов в течение 6 месяцев.When cultured on ordinary media, the Str.
Grown for 8-10 days at a temperature of 28 + 1 degrees on YMS agar medium, the strain culture is stored under a layer of 40% glycerol at a temperature of 20 degrees for 6 months.
Для хранения штамма используют стандартную агаризованную среду, имеющую pH 7,5 и содержащую (г/100 мл дистиллированной воды): крахмал растворимый (0,5), дрожжевой экстракт Дифко (0,5), мальт-экстракт Дифко (1,5), мел (0,3) и агар-агар (2,0). To store the strain, use a standard agar medium with a pH of 7.5 and containing (g / 100 ml of distilled water): soluble starch (0.5), Difco yeast extract (0.5), Difco malt extract (1.5) , chalk (0.3) and agar-agar (2.0).
Штамм Streptomyces avermitilis 103 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ-S1440. The
По сравнению с исходным, штамм 103 морфологически более стабилен, образуя в основном лишь 2 типа колоний, в то время, как исходный штамм образует до 6 типов колоний. Compared to the original,
Штамм Str. avermitilis 103 обладает стабильностью антибиотикообразования и обеспечивает высокий процент ферментаций с высоким уровнем накопления антибиотика, что показано в табл.1. Strain Str.
Для получения посевного материала штамма Streptomyces avermitilis 103 споровым материалом инокулируют жидкую среду, содержащую источники углерода, азота, ростовые факторы, минеральные соли и микроэлементы, дополненную L-лизином в количестве от 0,02 до 0,4% Предпочтительная концентрация L-лизина составляет от 0,1 до 0,2%
Выращивание посевного материала проводят при температуре 28±1 градусов в течение 48 72 ч.To obtain seeds of the
The cultivation of seed is carried out at a temperature of 28 ± 1 degrees for 48 72 hours
Посевным материалом инокулируют ферментационную среду и ферментацию ведут при температуре 28±1 градусов в течение 6 суток. Fermentation medium is inoculated with seed and fermentation is carried out at a temperature of 28 ± 1 degrees for 6 days.
Содержание авермектинов в культуральной жидкости после завершения ферментации достигает 2200 2500 мг/л, а доля авермектинов B составляют 50 - 56% от этого количества. The content of avermectins in the culture fluid after completion of fermentation reaches 2200 2500 mg / l, and the proportion of avermectins B is 50 - 56% of this amount.
Уровень биосинтеза авермектинов в присутствии L- лизина, вводимого в посевную и в ферментационную среды, показан в табл. 2. The biosynthesis of avermectins in the presence of L-lysine introduced into the inoculum and fermentation medium is shown in Table. 2.
Обращает на себя внимание тот факт, что внесение L-лизина в ферментационную среду приводит к значительному снижению общего уровня антибиотикообразования и относительного содержания авермектинов B. It is noteworthy that the introduction of L-lysine into the fermentation medium leads to a significant decrease in the overall level of antibiotic formation and the relative content of B. avermectins.
Сравнительные данные по влиянию L-лизина, дополнительно вносимого в посевную среду, на биосинтез авермектинов некоторыми штаммами Streptomyces avermitilis, представлены в табл. 3. Comparative data on the effect of L-lysine, additionally introduced into the inoculum, on the biosynthesis of avermectins by some strains of Streptomyces avermitilis, are presented in table. 3.
Представленные данные свидетельствуют о стимулирующем влиянии K-лизина, вносимого в посевную среду, на продуктивность исследованных культур, но наиболее благоприятный результат достигается при использовании штамма Streptomyces avermmitilis 103, дающего наивысший отклик: образование авермектинов превышает уровень накопления антибиотика в условиях контроля (при использовании посевного материала, выращенного без лизина) на 76% и одновременно повышение доли авермектинов группы B с 46% до 56%
Следующие Примеры более подробно поясняют сущность изобретения.The presented data indicate the stimulating effect of K-lysine introduced into the seed medium on the productivity of the studied cultures, but the most favorable result is achieved using the Streptomyces avermmitilis 103 strain, which gives the highest response: the formation of avermectins exceeds the level of antibiotic accumulation under control conditions (when using seed grown without lysine) by 76% and at the same time increasing the proportion of group B avermectins from 46% to 56%
The following Examples explain in more detail the essence of the invention.
Пример 1. Споровой суспензией штамма Streptomyces avermitilis 103 засевают 5 колб емкостью 750 мл, заполненных 50 мл посевной среды, содержащей (мас.): глюкозу (2,0), соевую муку (1,5), дрожжевой экстракт (0,5), L-лизин (0,1) и водопроводную воду (до 100,0). Значение pH среды составляет 7,3. Example 1. A spore suspension of strain Streptomyces avermitilis 103 is seeded with 5 flasks with a capacity of 750 ml, filled with 50 ml of inoculum medium containing (wt.): Glucose (2.0), soy flour (1.5), yeast extract (0.5) , L-lysine (0.1) and tap water (up to 100.0). The pH of the medium is 7.3.
Вегетативный инокулят выращивают при температуре 28±1 градусов на круговой качалке (230 250 об/мин) в течение 48 ч. Vegetative inoculum is grown at a temperature of 28 ± 1 degrees on a circular rocking chair (230 250 rpm) for 48 hours
Инокулятом засевают 50 колб емкостью 750 мл, заполненных 50 мл ферментационной среды, содержащей (мас. ): глюкозу (4,5), соевую муку (1,4), дрожжевой экстракт (0,25), хлористый натрий (0,1) и водопроводную воду (до 100,0). Значение pH среды составляет 7,4. Inoculum is seeded with 50 flasks with a capacity of 750 ml, filled with 50 ml of a fermentation medium containing (wt.): Glucose (4,5), soy flour (1,4), yeast extract (0.25), sodium chloride (0.1) and tap water (up to 100.0). The pH of the medium is 7.4.
Ферментацию осуществляют при температуре 28+1 градусов на круговой качалке (230-250 об/мин) в течение 6 суток. Fermentation is carried out at a temperature of 28 + 1 degrees on a circular rocking chair (230-250 rpm) for 6 days.
После завершения ферментации содержание авермектинов в культуральной жидкости составляло 2520 мг/л, из которых на долю авермектинов B приходилось 56%
Пример 2. Споровой суспензией штамма Streptomyces avermitilis 103 засевают 5 колб емкостью 750 мл, заполненных 50 мл посевной среды содержащей (мас. ): глюкозу (1,0), лактозу (1,0), хлопковую муку (1,5), дрожжевой экстракт (0,5), L-лизин (0,1) и водопроводную воду. Значение pH среды составляет 7,2.After fermentation, the content of avermectins in the culture fluid was 2520 mg / l, of which 56% was avermectins B
Example 2. A spore suspension of a strain of Streptomyces avermitilis 103 is seeded with 5 flasks with a capacity of 750 ml, filled with 50 ml of inoculum medium containing (wt.): Glucose (1.0), lactose (1.0), cotton flour (1.5), yeast extract (0.5), L-lysine (0.1) and tap water. The pH of the medium is 7.2.
Вегетативный инокулят выращивают при температуре 28±1 градусов на круговой качалке (230 250 об/мин) в течение 48 ч. Vegetative inoculum is grown at a temperature of 28 ± 1 degrees on a circular rocking chair (230 250 rpm) for 48 hours
Инокулятом засевают 50 колб емкостью 750 мл, заполненных 50 мл ферментационной среды, содержащей (мас.): глюкозу (4,5), хлопковую муку (1,4), дрожжевой экстракт (0,25), хлористый натрий (0,1) водопроводную воду (до 100,0). Значение pH составляет 7,4. Inoculum is seeded with 50 flasks with a capacity of 750 ml, filled with 50 ml of a fermentation medium containing (wt.): Glucose (4,5), cotton flour (1,4), yeast extract (0.25), sodium chloride (0.1) tap water (up to 100.0). The pH value is 7.4.
Ферментацию осуществляют при температуре 28±1 градусов на круговой качалке (230 250 об/мин в течение 5 суток. Fermentation is carried out at a temperature of 28 ± 1 degrees on a circular rocking chair (230 250 rpm for 5 days.
После завершения ферментации содержание авермектинов в культуральной жидкости составляло 2350 мг/л, из которого на долю авермектинов B приходилось 55%
Существенные отличия предложенного способа от способа -прототипа состоят в том, что
в предложенном способе в качестве агента, способствующего увеличению биосинтеза авермектинов, используют L-лизин, а не L-изолейцин;
в предложенном способе стимулятор образования авермектинов вводят в состав посевной, а не ферментационной среды.After fermentation, the content of avermectins in the culture fluid was 2350 mg / l, of which 55% was avermectins B
Significant differences of the proposed method from the prototype method are that
in the proposed method, as an agent to increase the biosynthesis of avermectins, use L-lysine, and not L-isoleucine;
in the proposed method, the stimulator of the formation of avermectins is introduced into the composition of the inoculum, and not the fermentation medium.
в оптимальном варианте осуществления предложенного способа в качестве продуцента авермектина используют штамм Streptomyces avermitilis 103, дающий наивысший отклик на введение L-лизина и обладающий высокой генетической стабильностью и высокой стабильностью антибиотикообразования. in an optimal embodiment of the proposed method, a Streptomyces avermitilis 103 strain is used as the producer of avermectin, which gives the highest response to the administration of L-lysine and has high genetic stability and high antibiotic stability.
Отличительные приемы предложенного способа с очевидностью не вытекает из известного уровня знаний, поскольку заявителю не известны источники информации, из которых можно было бы сделать вывод о стимулирующем эффекте L-лизина на биосинтез авермектинов и особенно на уровень биосинтеза авермектинов группы B. The distinctive techniques of the proposed method does not obviously follow from a known level of knowledge, since the applicant does not know the sources of information from which it would be possible to draw a conclusion about the stimulating effect of L-lysine on the biosynthesis of avermectins and especially on the biosynthesis of avermectins of group B.
Использование предложенного способа и предложенного нового штамма продуцента авермектинов позволяет без изменения технологической схемы производства повысить общий уровень антибиотикообразования до уровня максимальной продуктивности, известного по литературным данным, при высоком содержании авермектинов группы B, не увеличивая при этом продолжительности ферментации. Using the proposed method and the proposed new strain of the producer of avermectins allows, without changing the technological scheme of production, to increase the overall level of antibiotic formation to the level of maximum productivity known from the literature, with a high content of group B avermectins, without increasing the duration of fermentation.
Источники информации, принятые во внимание
1. Burg R. W. Miller B.M. Baker E.E. et al. Avermectins, new family of potent anthelmitic agents: producing organism and fermentation. "Anntimicrobical Agents and Chemotherapy", 1979. Vol.15, N 3, p. 361 367
2. Патент США 4.310.519, М. кл. A 61 K 31/71, 1982
3. Патент СССР 1.806.198, М. кл. C 12 P 17/08, 1993
4. Ikeda H. Kotaki H. Tanaka H. Omura S. Involvent of glucose catabolism in avermectin production by Streptomyces avermitilis. "Antimicrobial Agents and Chemotherapy", 1988, Vol. 32, N 2, p. 282 284
5. Schulman M.D. Valentino D. Streicher S. Ruby C. Streptomyces avermitilis mutants defective in methylation of avermectins. "Antimicrobial Agents and Chemotherapy" 1987, Vol. 31, N 5, p. 744 749
6. McConn-McCormic P.A. Monaghan R.L. Baker E.E. Goegelman R.T. Stapley E. O. Studies of the avermectin fermentation. "Advances in Biotechnology", 1981, Vol. 1, p. 69 74 (прототип)иSources of information taken into account
1. Burg RW Miller BM Baker EE et al. Avermectins, new family of potent anthelmitic agents: producing organism and fermentation. "Anntimicrobical Agents and Chemotherapy", 1979. Vol. 15, No. 3, p. 361 367
2. US patent 4.310.519, M. cl. A 61 K 31/71, 1982
3. USSR patent 1.806.198, M. cl. C 12 P 17/08, 1993
4. Ikeda H. Kotaki H. Tanaka H. Omura S. Involvent of glucose catabolism in avermectin production by Streptomyces avermitilis. "Antimicrobial Agents and Chemotherapy", 1988, Vol. 32, N 2, p. 282,284
5. Schulman MD Valentino D. Streicher S. Ruby C. Streptomyces avermitilis mutants defective in methylation of avermectins. "Antimicrobial Agents and Chemotherapy" 1987, Vol. 31, N 5, p. 744 749
6. McConn-McCormic PA Monaghan RL Baker EE Goegelman RT Stapley EO Studies of the avermectin fermentation. "Advances in Biotechnology", 1981, Vol. 1, p. 69 74 (prototype) and
Claims (2)
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют штамм Streptomyces avermitilis ВКПМ S-1440.1. A method of producing avermectins, comprising growing a producer of the species Streptomyces avermitilis in a seed medium, inoculating with seed material a nutrient medium containing carbon, nitrogen and mineral sources, culturing the producer under optimal conditions and isolating the product, characterized in that L- is introduced into the seed medium lysine at a concentration of 0.02 0.4%
2. The method according to claim 1, characterized in that as a producer using a strain of Streptomyces avermitilis VKPM S-1440.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95113973A RU2098483C1 (en) | 1995-08-21 | 1995-08-21 | Method of avermectin preparing, strain streptomyces avermitilis - a producer of avermectin |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95113973A RU2098483C1 (en) | 1995-08-21 | 1995-08-21 | Method of avermectin preparing, strain streptomyces avermitilis - a producer of avermectin |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95113973A RU95113973A (en) | 1997-08-10 |
RU2098483C1 true RU2098483C1 (en) | 1997-12-10 |
Family
ID=20170991
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95113973A RU2098483C1 (en) | 1995-08-21 | 1995-08-21 | Method of avermectin preparing, strain streptomyces avermitilis - a producer of avermectin |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2098483C1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110408668A (en) * | 2019-08-16 | 2019-11-05 | 齐鲁制药(内蒙古)有限公司 | A kind of fermentation process for improving abamectin fermented liquid and putting tank potency |
RU2819070C1 (en) * | 2022-12-27 | 2024-05-13 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный исследовательский центр "Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук" (ФИЦ ПНЦБИ РАН) | STREPTOMYCES ANTHOCYANICUS IPS92w PROMISING PRODUCER OF ANTIMICROBIAL COMPOUNDS |
-
1995
- 1995-08-21 RU RU95113973A patent/RU2098483C1/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Mc Conn - Mc Cormic P.A., Monaghan R.L., Baker E.E., Goegelman P.T., Stapley E.O. "Studies of the avermectin fermentation", Advances in Biotechhology", 1981, vol. 1, p. 69 - 74. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110408668A (en) * | 2019-08-16 | 2019-11-05 | 齐鲁制药(内蒙古)有限公司 | A kind of fermentation process for improving abamectin fermented liquid and putting tank potency |
CN110408668B (en) * | 2019-08-16 | 2023-01-03 | 齐鲁制药(内蒙古)有限公司 | Fermentation method for improving tank-discharging titer of abamectin fermentation liquor |
RU2819070C1 (en) * | 2022-12-27 | 2024-05-13 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный исследовательский центр "Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук" (ФИЦ ПНЦБИ РАН) | STREPTOMYCES ANTHOCYANICUS IPS92w PROMISING PRODUCER OF ANTIMICROBIAL COMPOUNDS |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230118242A1 (en) | Novel daptomycin-producing streptomyces strain and use thereof | |
JP6527521B2 (en) | Novel Streptomyces filamentous mutant and method for producing daptomycin using the same | |
US20080318289A1 (en) | Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus | |
RU2098483C1 (en) | Method of avermectin preparing, strain streptomyces avermitilis - a producer of avermectin | |
EP0482908B1 (en) | Process for producing streptovaricin | |
SU521849A3 (en) | The method of obtaining cephalosporin | |
US5137825A (en) | Process for producing streptovaricin | |
KR930008970B1 (en) | Vancomycin producing microorganism | |
KR100373510B1 (en) | Teicoplanin producing microorganism | |
US5177018A (en) | Microorganism employed for producing streptovaricin | |
SU1631083A1 (en) | Strain of actinomycet streptomyces lavendulae subsparuptini for producing aruptin | |
KR930008969B1 (en) | Vancomycin producing microorganism | |
RU2085077C1 (en) | Method of abscisic acid producing | |
RU2281332C2 (en) | Saccharopolyspora erythraea C-77 STRAIN AS PRODUCER OF ANTIBIOTIC ERYTHROMYCIN | |
RU2065878C1 (en) | Strain streptomyces fradiae - a producer of tylosin | |
RU2130262C1 (en) | Strain of bacterium pseudomonas species used for preparation against plant disease pathogens | |
RU2084520C1 (en) | Strain of bacterium brevibacterium flavum - a producer of l-glutamine (variants) | |
HU179912B (en) | Process for producing polyether antibiotics | |
RU2147320C1 (en) | Strain streptomyces avermitilis nitsb 132 - producer of avermectin | |
RU2064499C1 (en) | Fungus strain fusarium sambicinum - a producer of ubiquinone q-10 | |
KR100477165B1 (en) | Isolation of Bacillus licheniformis having antifungal activities against phytopathogens and determination of condition for producing antifungal substance | |
RU2110577C1 (en) | Strain of streptomyces cremeus 1979 - a producer of apramycin | |
SU1406156A1 (en) | Strain of aerococcus viridans bacteria for producing clones with oxidase and reductase activity | |
Marinelli et al. | Antibiotic GE37468A: A New Inhibitor of Bacterial Protein Synthesis III. Strain and Fermentation Study | |
KR100246094B1 (en) | Microorganism producing high titer vancomycin havig reduced contents of the impurities |