RU2092554C1 - Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b - Google Patents

Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b Download PDF

Info

Publication number
RU2092554C1
RU2092554C1 RU95106279A RU95106279A RU2092554C1 RU 2092554 C1 RU2092554 C1 RU 2092554C1 RU 95106279 A RU95106279 A RU 95106279A RU 95106279 A RU95106279 A RU 95106279A RU 2092554 C1 RU2092554 C1 RU 2092554C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
uniiev
aujeszky
cells
disease
Prior art date
Application number
RU95106279A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU95106279A (en
Inventor
Л.А. Глобенко
Т.В. Жбанова
Н.Е. Камалова
В.А. Мищенко
Е.П. Баборенко
Original Assignee
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных filed Critical Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных
Priority to RU95106279A priority Critical patent/RU2092554C1/en
Publication of RU95106279A publication Critical patent/RU95106279A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2092554C1 publication Critical patent/RU2092554C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

FIELD: veterinary biotechnology, virology. SUBSTANCE: invention relates to preparing the strain of the hybrid cultured cells Mus musculus L. producing antibodies raised to Aujeszky's disease virus, strain UNIIEV-18B. Strain is obtained by hybridization of murine myeloma cell (strain PAI) with splenocytes of murine strain Balb/c immunized with the strain UNIIEV-18B. Strain GVBAV-94/1 produces monoclonal antibodies of isotype IgG and their concentration in cultural and ascetic fluids - 10-20 mcg/ml and 20-30 mg/ml, respectively. Strain can be used for development of preparations used for diagnosis and prophylaxis of Aujeszky's disease. EFFECT: strain indicated above, enhanced effectiveness of antibodies. 1 tbl

Description

Изобретение относится к вирусологии, иммунологии и биотехнологии, а именно к гибридомной технологии и представляет собой новый штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L, продуцирующих в клеточных культурах и асцитических жидкостях моноклональные антитела (МАт) к вирусу болезни Ауески (ВБА), которые могут быть использованы для научных исследований и приготовления средств диагностики, профилактики и лечения болезни Ауески (БА). The invention relates to virology, immunology and biotechnology, in particular to hybridoma technology and is a new strain of hybrid cultured animal cells of Mus musculus L animals that produce monoclonal antibodies (Mabs) to Aujeszky's disease virus (WBA) in cell cultures and ascitic fluids, which can be used for scientific research and preparation of diagnostics, prevention and treatment of Aujeszky’s disease (BA).

БА остро протекающая в виде эпизоотий и спорадических случаев вирусная болезнь сельскохозяйственных животных всех видов, пушных зверей и грызунов. Характеризуется признаками поражения нервной системы и легких, сильным зудом и расчесами (у всех видов животных, кроме свиней, норок и собак). БА типичная герпесвирусная инфекция, имеющая множество форм течения, в том числе с длительной, практически пожизненной латенцией /1/. AD is acute in the form of epizootics and sporadic cases of viral disease of farm animals of all kinds, fur animals and rodents. It is characterized by signs of damage to the nervous system and lungs, severe itching and scratching (in all species of animals, except pigs, minks and dogs). AD is a typical herpes virus infection, which has many forms of the course, including with a long, almost lifetime latency / 1 /.

БА является одним из наиболее распространенных заболеваний свиней, наносящих серьезный материальный ущерб странам с развитым животноводством. В связи с интенсификацией свиноводства отмечена тенденция к широкому энзоотическому распространению БА по всей Европе, Северной и Южной Америке. Это заболевание причислено к особо опасным для свиноводства вирусным инфекциям. Все это вынуждает инфитенсифицировать работу по созданию более эффективных средств диагностики, профилактики и лечения БА. Проблема создания эффективных защитных препаратов остается весьма актуальной. Это обусловлено особенностями патологии, эпизоотологии и иммунологии герпесвирусных инфекций. AD is one of the most common diseases of pigs, causing serious material damage to countries with developed livestock. In connection with the intensification of pig breeding, there is a tendency toward a wide enzootic distribution of AD throughout Europe, North and South America. This disease is classified as a viral infection especially dangerous for pig farming. All this forces to intensify the work on creating more effective means of diagnosis, prevention and treatment of AD. The problem of creating effective protective drugs remains very relevant. This is due to the characteristics of the pathology, epizootology and immunology of herpes virus infections.

Одним из направлений исследований по созданию нового поколения вакцин против БА является поиск новых полевых и получение из них вакцинных штаммов ВБА, пригодных для изготовления эффективных вакцин. One of the areas of research to create a new generation of AD vaccines is the search for new field vaccines and the production of vaccine strains of IBA from them, suitable for the manufacture of effective vaccines.

Первым вакцинным штаммом ВБА, широко используемым в Европе, был штамм БУК, полученный серией пассажей на куриных фибробластах. The first VBA vaccine strain widely used in Europe was the BUK strain obtained by a series of passages on chicken fibroblasts.

В настоящее время имеются сведения о применении живых и аттенуированных, вирулентных и авирулентных штаммов ВБА: Барта К61, МК 25 и 35, Nia 3,4 и 14, Alfort 26, Арский, ВГНКИ, К и других /2, 3, 4, 5/. Currently, there is information about the use of live and attenuated, virulent and avirulent strains of BWA: Barta K61, MK 25 and 35, Nia 3.4 and 14, Alfort 26, Arsky, VGNKI, K and others / 2, 3, 4, 5 /.

Для выявления и идентификации ВБА и противовирусных антител наиболее перспективным является иммуноферментный анализ с применением моноклональных антител, которые широко используют зарубежные исследователи /6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13/. Моноклональные антитела это наиболее эффективный инструмент для изучения закономерностей взаимодействия вируса и клетки, выявления патологических, функциональных характеристик и биологических свойств возбудителя. С помощью моноклональных антител может быть изучено антигенное родство штаммов ВБА, что делает возможным прогнозирование защитных свойств вакцины, приготовленной из полевых изолятов. МАт имеют ряд преимуществ перед традиционно применяемыми поликлональными антисыворотками. Они характеризуются химической гомогенностью, строго определенной специфичностью к антигенным детерминантам вируса. Источники их получения (гибридомы) отличаются генетической стабильностью и могут длительное время сохраняться в жидком азоте. МАт могут быть наработаны в любых количествах в виде асцитической жидкости мышей или супернатантов культуры клеток. Для диагностики и идентификации ВБА широко применяются иммунофлуоресцентный и иммунопероксидазный методы с использованием моноклональных антител /7, 8, 9, 10, 11, 12, 14/. Enzyme-linked immunosorbent assay using monoclonal antibodies, which are widely used by foreign researchers / 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 /, is the most promising for the identification and identification of BVA and antiviral antibodies. Monoclonal antibodies are the most effective tool for studying the patterns of interaction between the virus and the cell, revealing the pathological, functional characteristics and biological properties of the pathogen. Monoclonal antibodies can be used to study the antigenic relationship of VBA strains, which makes it possible to predict the protective properties of vaccines prepared from field isolates. Mabs have several advantages over traditionally used polyclonal antisera. They are characterized by chemical homogeneity, strictly defined specificity for antigenic determinants of the virus. Sources of their production (hybridomas) are characterized by genetic stability and can be stored for a long time in liquid nitrogen. Mabs can be produced in any quantities in the form of ascitic fluid in mice or supernatants of cell culture. Immunofluorescence and immunoperoxidase methods using monoclonal antibodies / 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14 / are widely used for the diagnosis and identification of IBA.

В настоящее время уже известны штаммы гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L, продуцирующих монокдональные антитела к ВБА или к его основному иммунизирующему компоненту вириона Gp 50. В работах зарубежных исследователей приведены данные о получении моноклональных антител как на цельный вирион ВБА, так и на отдельные вирусспецифические белки вириона G I, G II, G III, Gp 50 /6, 8, 9, 10, 11, 13/. At present, strains of hybrid cultured animal cells of Mus musculus L animals that produce monocdonal antibodies to BWA or to its main immunizing component of the Gp 50 virion are already known. Foreign researchers report data on the preparation of monoclonal antibodies for both whole BVA virion and individual virus-specific Virion proteins GI, G II, G III, Gp 50/6, 8, 9, 10, 11, 13 /.

Ben-Porat T. и др. изучили роль различных гликопротеинов ВБА в индуцировании выработки нейтрализующих антител у свиней. Авторы провели анализ антигенных свойств и иммуногенной активности гликопротеинов ВБА, идентифицированных в реакции иммунопреципитации с МАт. Вирусные изоляты, выделенные в различных географических зонах США, существенно отличались по антигенным свойствам. Изменения отмечены в белках G I и G III. Вируснейтрализующая активность МАт связана преимущественно с G III /6/. Ben-Porat T. et al. Have studied the role of various BW glycoproteins in inducing the production of neutralizing antibodies in pigs. The authors analyzed the antigenic properties and immunogenic activity of BW glycoproteins identified in the immunoprecipitation reaction with Mab. Viral isolates isolated in different geographical areas of the United States, significantly differed in antigenic properties. Changes are noted in proteins G I and G III. The neutralizing activity of MAb is mainly associated with G III / 6 /.

У нас в России штамм УНИИЭВ 18В ВБА является производственным и используется при изготовлении вакцин и диагностических препаратов, однако в доступных нам источниках информации мы не обнаружили сведений о получении МАт к ВБА штамм УНИИЭВ 18В /15, 16, 17, 18, 19, 20, 21/. In Russia, the strain of UNIIEV 18V VBA is a production one and is used in the manufacture of vaccines and diagnostic preparations, however, we did not find information on the receipt of Mab for VBA strain UNIIEV 18V / 15, 16, 17, 18, 19, 20, which is available to us. 21 /.

В задачу создания изобретения входило получение штамма гибридных культивируемых клеток (гибридомы), продуцирующих МАт к ВБА штамм УНИИЭВ 18В, высокоактивных в иммуноферментном анализе и реакции нейтрализации с гомологичным вирусом. The objective of the invention was to obtain a strain of hybrid cultured cells (hybridomas) producing Mab to BWA strain UNIIEV 18B, highly active in enzyme immunoassay and neutralization reactions with a homologous virus.

Поставленная задача решена тем, что получен новый, ранее неизвестный штамм гибридных культивируемых клеток мыши (Mus musculus L). The problem is solved in that a new, previously unknown strain of hybrid cultured mouse cells (Mus musculus L) was obtained.

GV ВАИ-94/1 продуцент МАт к ВБА штамм УНИИЭВ 18В. Культура хранится в музее клеток ВНИИ защиты животных и на 17-20 пассаже в культуре клеток, выращиваемых в пластиковых матрасах, а также после перевивания на мышах линии BA L B/С, депонирована во Всероссийской коллекции клеточных культур Института Цитологии РАН (г. Санкт-Петербург) под регистрационным номером ВСКК(П) 647Д
Характеристика полученного штамма
1. Родословная штамма. Гибридный штамм N 1 ГВБАУ-94 (GVBAU-94/1) получен слиянием мышиных миеломных клеток линии ПАИ с клетками селезенки мыши линии BAL В/с предварительно иммунизированной ВБА штамм УНИИЭВ 18В.
GV VAI-94/1 producer of MAb for BWA strain UNIIEV 18B. The culture is stored in the cell museum of the All-Russian Research Institute of Animal Welfare and on passage 17-20 in the culture of cells grown in plastic mattresses, as well as after grafting on mice of the BA LB / C line, was deposited in the All-Russian Collection of Cell Cultures of the Institute of Cytology RAS (St. Petersburg ) under the registration number VSCK (P) 647D
Characterization of the obtained strain
1. The pedigree of the strain. The hybrid strain N 1 GVBAU-94 (GVBAU-94/1) was obtained by fusion of murine PAI line myeloma cells with mouse spleen cells of the BAL B / line of the previously immunized WBA strain UNIIEV 18B.

2. Число пассажей к моменту паспортизации и депонирования. Клетки заморожены на 17-20 пассаже в культуре клеток, выращиваемых в пластиковых матрасах, а также после перевивания на мышах линии ВА L В/С. 2. The number of passages at the time of certification and deposit. Cells were frozen at passage 17-20 in a culture of cells grown in plastic mattresses, as well as after transplantation on mice of the BA L B / C line.

3. Стандартные условия выращивания. Температура культивирования +37 oC. Среда культивирования ДМЕМ с добавлением 15 фетальной сыворотки КРС 50 мкг/мл гентамицина, pH 7,0-7,2.3. Standard growing conditions. The cultivation temperature is +37 o C. DEMEM cultivation medium supplemented with 15 fetal bovine serum 50 μg / ml gentamicin, pH 7.0-7.2.

4. Культурные свойства. Штамм растет на средах для культур клеток млекопитающих JMDM, DMEM,RPMJ-1640 с добавлением 10-20 фетальной сыворотки КРС с 50 мкг/мл гентамицина. При селекции гибридных клеток в питательную среду добавляют гипоксантин-аминоптеринтимидин (ГАТ) в рабочих разведениях. Оптимальная ростовая концентрация клеток 150000 кл/мл. Оптимальная pH среды 7,0-7,2 клетки инкубируют во влажной атмосфере с 5 СО2 при 37 oC. При посеве единичные клетки в процессе размножения образуют колонии округлой формы с ровными краями, затем колонии сливаются и формируют сплошной монослой. При посевной дозе 150000 кл/мл сплошной монослой формируется на 2-3 дня. Клетки обладают хорошей адгезивной способностью. Легко снимаются со стенок посуды встряхиванием без применения трипсина и версена. Жизнеспособность клеток поддерживают путем регулярных пересевов на свежую питательную среду. Частота пересева 3 раза в неделю. Краткость рассева составляет 1:2 1:5 Тип роста стационарная суспензия. При введении гибридом внутрибрюшинно у мышей линии BA L В/С образуется асцитная или твердая опухоли. Перед введением клеток за 5-20 дней этим животным вводят внутрибрюшинно 0,3-0,5 мл ангарского масла (ТУ-38-101 84-81). Титр антител в асцитической жидкости в ИФА составляет 103-105. От одной мыши получают 3-10 мл асцита. Асцит образуется через 14-20 дней.4. Cultural properties. The strain grows on mammalian cell culture media JMDM, DMEM, RPMJ-1640 supplemented with 10-20 fetal bovine serum with 50 μg / ml gentamicin. When hybrid cells are selected, hypoxanthine-aminopterinthymidine (GAT) is added to the culture medium in working dilutions. The optimal cell growth concentration is 150,000 cells / ml. The optimal pH of the medium is 7.0-7.2 cells are incubated in a humid atmosphere with 5 CO 2 at 37 o C. When inoculated, single cells during the propagation process form round-shaped colonies with smooth edges, then the colonies merge and form a continuous monolayer. At a sowing dose of 150,000 cells / ml, a continuous monolayer is formed for 2-3 days. Cells have good adhesive ability. Easily removed from the walls of the dishes by shaking without the use of trypsin and versene. Cell viability is maintained by regular reseeding on a fresh nutrient medium. The frequency of reseeding 3 times a week. The sieving shortness is 1: 2 1: 5 Type of growth stationary suspension. When hybridomas are administered intraperitoneally, ascitic or solid tumors form in BA L B / C mice. Before the introduction of cells for 5-20 days, these animals are injected intraperitoneally with 0.3-0.5 ml of Angarsk oil (TU-38-101 84-81). The titer of antibodies in ascitic fluid in ELISA is 10 3 -10 5 . From one mouse receive 3-10 ml of ascites. Ascites is formed after 14-20 days.

5. Характеристика культивирования гибридомы в организме животного. Образует асцитические опухоли на мышах линии BA В/с. Доза клеток при прививке 4-10 млн/мл мышам, праймированным 0,5 мл ангарного масла за 5-20 дней до введения клеток. Срок образования асцита 10-20 дней, не теряет антителопродуцирующей способности при прививке в течение 15-20 пассажей на мышах (срок наблюдения). 5. Characterization of the cultivation of hybridomas in the body of the animal. It forms ascitic tumors in mice of the BA B / s line. The dose of cells inoculated with 4-10 million / ml mice primed with 0.5 ml of hangar oil 5-20 days before the introduction of cells. The term for ascites formation is 10–20 days; it does not lose antibody-producing ability when vaccinated for 15–20 passages in mice (observation period).

6. Цитогенетическая (кариологическая) характеристика. Кариотип соответствует виду (мышиный). Модальный класс 86 хромосом. Модальный класс для родительской миеломной линии ПАИ-64 хромосомы. 6. Cytogenetic (karyological) characteristic. The karyotype corresponds to the species (mouse). Modal class 86 chromosomes. The modal class for the parental myeloma line PAI-64 chromosome.

7. Цитоморфологическая характеристика. Клетки круглые, различной величины. Ядра занимают большую часть клетки. 7. Cytomorphological characteristic. The cells are round, of various sizes. Nuclei occupy most of the cell.

8. Онкогенность. Штамм обладает онкогеными свойствами, характеризующимися образованием асцитов или твердых опухолей у мышей линии BA L В/с. 8. Oncogenicity. The strain has oncogenic properties, characterized by the formation of ascites or solid tumors in mice of the line BA L B / s.

9. Маркерные характеристики. Изоферменты ЛДГ соответствуют мышиным (одна изоформа с дополнительной полосой). Гибридные клетки продуцируют МАт к ВБА штамм УНИИЭВ 18В. 9. Marker characteristics. LDH isoenzymes correspond to murine ones (one isoform with an additional band). Hybrid cells produce Mab to BWA strain UNIIEV 18B.

10. Данные о контаминации. Микробиологическим, цитохимическим (окраска оливоцинином, акридиновым оранжевым) и электронномикроскопческим методами контаминанты не обнаружены
11. Биотехнологическая характеристика. Штамм продуцирует МАт, относящийся к классу JgG и обладающие специфической активностью в ИФА, РН, РЗ на мышатах-сосунах. МАт обнаруживаются в асцитической жидкости в ИФА на протяжении 15-20 пассажей на мышах (срок наблюдения) в разведениях 10-3-10-5 и обладают специфической активностью к ВБА штамм УНИИЭВ 18В. Отмечена в РН-6, Олог2, РЗ на мышатах-сосунах -3,2. Культуральную жидкость можно применить в качестве диагностического антительного препарата, однако для получения более высокого титра антител по 105 гибридные клетки в дозе 1-10 млн/0,5 мл вводят внутрибрюшинно мышам линии BA L В/с, праймированным внутрибрюшинно ангарским маслом. Через 14-20 дней после появления у мышей асцитных или твердых опухолей собирают жидкость (3-10 мл), клетки осаждают центрифигурированием при 1000 об/мин в течении 10 мин. Недосадочная жидкость содержит МАт. Осадок, содержащий гибридные клетки, переводят в культуру или вводят мышам. Для повышения активности и специфичности МАт проводят их концентрирование и очистку, выделяя чистые иммуноглобулины. Иммуноглобулиновую фракцию получают путем двукратного осаждения 10 ПЭГ с м.м. 6000 (к антителам добавляют равный объем 20 ПЭГ и центрифугируют при 3500 об/мин в течении 30 мин).
10. Data on contamination. Microbiological, cytochemical (staining with olivocinin, acridine orange) and electron microscopic methods did not detect contaminants
11. Biotechnological characteristics. The strain produces Mabs belonging to the class JgG and having specific activity in ELISA, pH, RE in mouse suckers. Mabs are found in ascitic fluid in ELISA for 15-20 passages in mice (observation period) at dilutions of 10 -3 -10 -5 and have specific activity for BWA strain UNIIEV 18B. It was noted in RN-6, Olog 2 , RZ on mouse suckers -3.2. The culture fluid can be used as a diagnostic antibody preparation, however, to obtain a higher antibody titer of 10 5, hybrid cells at a dose of 1-10 million / 0.5 ml are administered intraperitoneally to mice of the BA L B / s line, primed with intraperitoneal Angara oil. 14-20 days after the appearance of ascites or solid tumors in mice, liquid (3-10 ml) is collected, the cells are precipitated by centrifugation at 1000 rpm for 10 minutes. Non-stop liquid contains Mab. The pellet containing hybrid cells is transferred to culture or injected into mice. To increase the activity and specificity of Mabs, they are concentrated and purified, isolating pure immunoglobulins. The immunoglobulin fraction is obtained by double precipitation of 10 PEG with m.m. 6000 (an equal volume of 20 PEG is added to the antibodies and centrifuged at 3500 rpm for 30 minutes).

Осадок ресуспендируют в уменьшенном количестве фосфатно-буферного раствора (ФБР). Раствор диализуют против ФБР 24 ч при 4 oC. Культуральная жидкость содержит 10-20 мкг/мл, а асциты -20-30 мг/мл специфических иммуноглобулинов.The precipitate was resuspended in a reduced amount of phosphate buffered saline (PBS). The solution is dialyzed against the FBI for 24 hours at 4 o C. The culture fluid contains 10-20 μg / ml, and ascites -20-30 mg / ml of specific immunoglobulins.

12. Способ криоконсервирования. Гибридомные клетки консервируют в жидком азоте в пластиковых или стеклянных ампулах в объеме 1 мл с концентрацией 4-10 млн/мл. Криозащитная среда: ДМЕМ-50 фетальная сыворотка КРС-43, диметилсульфоксид (ДМСО) 7 Выживаемость клеток после хранения 60-90
Как только среда станет жидкой, клетки переносят в конический пластиковый стакан с 50 мл холодной питательной среды и осаждают центрифигурированием при 1000 об/мин. Осадок ресуспендируют в 5 мл среды ДМЕМ с 20 фетальной сыворотки и ГАТ и высеивают в стеклянный матрас объемом 50 см3. Клетки инубируют при температуре 37 oC. Когда колонии заполняют 50-70 площади матраса, отбирают пробу культуральной жидкости для определения титра антител к ВБА в ИФА. Наивысший титр антител отмечен при полном монослое.
12. The method of cryopreservation. Hybridoma cells are preserved in liquid nitrogen in plastic or glass ampoules in a volume of 1 ml with a concentration of 4-10 million / ml. Cryoprotective medium: DMEM-50 fetal serum KRS-43, dimethyl sulfoxide (DMSO) 7 Cell survival after storage 60-90
Once the medium becomes liquid, the cells are transferred to a conical plastic beaker with 50 ml of cold nutrient medium and precipitated by centrifugation at 1000 rpm. The precipitate is resuspended in 5 ml of DMEM medium with 20 fetal serum and GAT and plated in a 50 cm 3 glass mattress. Cells are inhibited at a temperature of 37 o C. When the colonies fill 50-70 areas of the mattress, a sample of culture fluid is taken to determine the titer of antibodies to VBA in ELISA. The highest antibody titer was observed with a complete monolayer.

Предложенный штамм гибридных культивируемых клеток получили по ранее разработанной методике /22/ следующим образом. The proposed strain of hybrid cultured cells was obtained according to a previously developed technique / 22 / as follows.

Мышам линии BA L В/с в возрасте 1,5-2 мес вводили интраперитонально ВБА штамм УНИИЭВ 18В в количестве 100 мкг/ мышь в смеси с полным адъювантом Фрейда в соотношении 1: 1. Через 21 день проводили гипериммунизацию мышей интраперитонеально этим же антигеном в дозе 100 мкг/мышь без адъюванта. Спустя три дня после повторного введения антигена проводили тестирование сыворотки крови мышей на наличие специфических антител в ИФА. В опыт отбирали доноров с титром антител в сыворотке крови менее 103.Mice of the BA L B / c line at the age of 1.5-2 months were injected intraperitoneally with the BBA strain UNIIEV 18B in an amount of 100 μg / mouse in a mixture with Freud's complete adjuvant in a ratio of 1: 1. After 21 days, mice were hyperimmunized intraperitoneally with the same antigen in dose of 100 mcg / mouse without adjuvant. Three days after the repeated administration of the antigen, the blood serum of mice was tested for the presence of specific antibodies in ELISA. Donors with an antibody titer in the blood serum of less than 10 3 were selected for the experiment.

Для гибридизации у иммунизированных мышей стерильно брали селезенку и ресуспендировали в 50 мл культуральной среды ДМЕМ без сыворотки. Клетки миеломы линии ПАИ в логарифмической фазе роста отмывали в среде ДМЕМ от сыворотки, смешивали с иммунными клетками селезенки в соотношении от 1:1 до 1:5 и осаждали центрифигурированием при 1000 об/мин 10 мин. К осадку по каплям в течение минуты добавляли 50 -й раствор ПЭГ м.м. 4000, содержащий 5 ДМСО. Клетки оставляли на 5 мин с ПЭГ. Затем добавляли 5 мл среды ДМЕМ без сыворотки и оставляли на контакт еще на 5 мин. Полученную суспензию клеток разбавляли средой ДМЕМ, содержащей 20 фетальной сыворотки и ГАТ в количестве 13,6 мг/л; 0,176 мг/л и 3,78 мг/л соответственно в рабочих концентрациях. Клетки вносили в 96-24-луночные пластины фирмы "Flow Laboratories" (Великобритания) по 0,2-1,0 мл с концентрацией 100-20 тыс/лунка соответственно. Через 10-14 дней супернатанты гибридных клонов тестировали на наличие антител в ИФА. Позитивные клоны составляли 5-20 от общего количества клонов. Эти клоны дважды субклонировали методом предельных разведений. Стабильный клон с наивысшим титром антител (МАт-1В4) заложили на хранение в клеточный банк ВНИИЗЖ под авторским названием N 1 ГВБАУ-94 (GV ВАИ-94/1) и депонировали во Всероссийской коллекции клеточных культур Института цитологии РАН (г. Санкт-Петербург) под регистрационным номером ВСКК(П) N 642 Д. For hybridization, spleen was sterilized from immunized mice and resuspended in 50 ml of serum-free DMEM culture medium. PAI line myeloma cells in the logarithmic growth phase were washed in serum from DMEM medium, mixed with spleen immune cells in a ratio of 1: 1 to 1: 5, and precipitated by centrifugation at 1000 rpm for 10 min. A 50% PEG solution of m.m was added dropwise to the precipitate over a minute. 4000 containing 5 DMSO. Cells were left for 5 min with PEG. Then 5 ml of serum-free DMEM was added and left to contact for another 5 minutes. The resulting cell suspension was diluted with DMEM medium containing 20 fetal serum and GAT in an amount of 13.6 mg / l; 0.176 mg / L and 3.78 mg / L, respectively, at working concentrations. Cells were introduced into 96-24-well plates of Flow Laboratories (UK) 0.2-1.0 ml at a concentration of 100-20 thousand / well, respectively. After 10-14 days, supernatants of hybrid clones were tested for the presence of antibodies in ELISA. Positive clones comprised 5-20 of the total number of clones. These clones were subcloned twice by limiting dilution. The stable clone with the highest titer of antibodies (MAb-1B4) was stored in the VNIIZH cell bank under the author's name N 1 GVBAU-94 (GV VAI-94/1) and deposited in the All-Russian Collection of Cell Cultures of the Institute of Cytology RAS (St. Petersburg ) under the registration number VSCK (P) N 642 D.

Пример. Антиген ВБА штамм УНИИЭВ 18В индентифицируют в ИФА с помощью МАт. Для этого МАт, разведенные в 0,-2-молярном карбонатно-бикарбонатном буфере pH 9,5 в количестве 200 мкл/лунка в концентрации 1-10 нг/мл, вносят в лунки пластин из полистирола для серологических реакций и инкубируют в течение 2-14 ч при температуре 20-4 oC. Раствор антител удаляют и 3-5 раз промывают лунки ФБР. Затем в лунки вносят по 200 мкл испытуемого антигена в ФБР с 10 фетальной сыворотки КРС. Антиген готовят путем пяти- или десятикратных разведений в этом же растворе. Антиген инкубируют в лунках планшета 2 ч при 37 oC и 3-5 раз отмывают в ФБР. Затем в лунки вносят конъюгат (МАт, меченные пероксидазой хрена) в рабочем разведении. Конъюгат разводят на ФБР с 10 фетальной сыворотки КРС до концентрации 1-5 мкг/мл в расчете на JgG и инкубируют 1-2 ч при комнатной температуре. Затем лунки 3-5 раз промывают в ФБР и в них вносят субстрат, содержащий ортофенилендиамин 0,4 мг/мл в 0,1 м цитрат-фосфатном буфере pH 5,0 и 0,01 H2 О2. После инкубации при комнатной температуре в течение 1-5 мин проводят учет реакции путем определения оптической плотности раствора на автоматическом 1-канальном фотометре фирмы "Dyna". Реакцию можно учитывать и визуально по интенсивности окраски оранжевого цвета. Установлено, что штамм гибридных клеток стабилен как по культуральным и морфологическим признакам, так и по титру специфических антител в ИФА, РН и РЗ.Example. Antibody WBA strain UNIIEV 18B identified in ELISA using mAbs. For this, Mabs diluted in 0, -2-molar carbonate-bicarbonate buffer pH 9.5 in an amount of 200 μl / well at a concentration of 1-10 ng / ml are added to the wells of polystyrene plates for serological reactions and incubated for 2- 14 hours at a temperature of 20-4 o C. The antibody solution is removed and the wells are washed 3-5 times with PBS. Then, 200 μl of the test antigen in the FBI with 10 fetal cattle serum is introduced into the wells. The antigen is prepared by five- or ten-fold dilutions in the same solution. The antigen is incubated in the wells of the tablet for 2 hours at 37 o C and washed 3-5 times in the FBI. Then a conjugate (MAb labeled with horseradish peroxidase) was added to the wells in working dilution. The conjugate was diluted on PBS with 10 fetal bovine serum to a concentration of 1-5 μg / ml per JgG and incubated for 1-2 hours at room temperature. Then the wells are washed 3-5 times in the PBS and a substrate containing orthophenylenediamine 0.4 mg / ml in 0.1 m citrate-phosphate buffer pH 5.0 and 0.01 H 2 O 2 is introduced into them. After incubation at room temperature for 1-5 minutes, the reaction is counted by determining the optical density of the solution on a Dyna automatic 1-channel photometer. The reaction can be taken into account visually according to the color intensity of the orange color. It was found that the strain of hybrid cells is stable both in cultural and morphological characters, and in the titer of specific antibodies in ELISA, pH and RE.

Активность и специфичность МАт к ВБА определяли в ИФА, РН и РЗ как с гетерологичными антигенами (ящур, ВБС, ВЭС, диарея, КРС), так и с гомологичными антигенами ВБА. The activity and specificity of Mabs for IBA was determined in ELISA, PH, and RE with both heterologous antigens (foot and mouth disease, CHD, CHP, diarrhea, cattle), and homologous BBA antigens.

Проведенные испытания показали, что МАт к ВБА не реагируют с возбудителями ящура (А22и Азия-1), ВБС, ВЭС и диареи КРС.Tests have shown that Mabs for BWA do not react with foot-and-mouth disease pathogens (A 22 and Asia-1), VBS, VES, and cattle diarrhea.

Данные определения специфической активности асцитической жидкости, содержащей МАт, полученные от штамма N 1 ГВБАИ-94 (GVВАИ-94/1) регистрационный номер ВСКК (П) 642Д, с гомологичным антителами ВБА представлены в таблице. The data on the determination of the specific activity of ascitic fluid containing Mab obtained from strain N 1 of HVBAI-94 (GVVAI-94/1) registration number VSCK (P) 642D, with homologous antibodies of VBA are presented in the table.

Штаммы ВБА Арский, Бран, БУК, Женевский, Мараштанский любезно предоставлены д.в.н. Камаловым Г.Х. (КазНИВИ, г.Казань). The WBA strains Arsky, Bran, BUK, Geneva, Marashtansky were kindly provided by Dr. Sc. Kamalov G.Kh. (KazNIVI, Kazan).

Штамм Верблюжий выделен проф. д.в.н. Мищенко В.А. во время вспышки заболевания у верблюдов в Туркмении в 1992 году. The Camel strain is highlighted by prof. Ph.D. Mishchenko V.A. during an outbreak of illness in camels in Turkmenistan in 1992.

Штамм МК получен от доктора Тереклекова П. (Болгария). Strain MK was obtained from Dr. Tereklekov P. (Bulgaria).

Согласно таблице наиболее высокая специфическая активность МАт отмечена со штаммами УНИИЭВ 18В и БРАН, что, вероятно, свидетельствует о большой степени родства вышеуказанных штаммов. С другими гомологичными антигенами установлена более низкая активность. According to the table, the highest specific activity of MAb was noted with strains of UNIIEV 18B and BRAN, which probably indicates a high degree of kinship between the above strains. With other homologous antigens, lower activity is established.

Полученные в соответствии с изобретением МАт как химически чистые реагенты могут применяться в ИФА, РН и РЗ для обнаружения ВБА, противовирусных антител в сыворотке крови восприимчивых сельскохозяйственных животных, а также при генно-инженерной и молеккуляно-биологической характеристике возбудителя. Obtained in accordance with the invention, Mabs as chemically pure reagents can be used in ELISA, PH and RE for the detection of VVA, antiviral antibodies in the blood serum of susceptible farm animals, as well as for genetic engineering and molecular biological characterization of the pathogen.

МАт против ВБА могут быть весьма полезны в ветеринарной вирусологии в практических и чисто научных областях при:
идентификации антигенных сайтов на уровне аминокислотных последовательностей;
характеристике антигенных сайтов с использованием различных модификации ИФА;
идентификации иммунологически важных антигенных сайтов;
использовании МАт для ускорения идентификации вирусных изолятов;
контроле технологии изготовления вакцин;
выделении и очистке вируса;
иммунизации и терапии животных.
Mabs against BW can be very useful in veterinary virology in practical and purely scientific fields with:
identification of antigenic sites at the level of amino acid sequences;
characterization of antigenic sites using various modifications of ELISA;
identification of immunologically important antigenic sites;
the use of mAbs to accelerate the identification of viral isolates;
control of vaccine manufacturing technology;
virus isolation and purification;
immunization and therapy of animals.

Использование МАт в ветеринарной практике при диагностике, профилактике и лечении сельскохозяйственных животных позволит оптимизировать эпизоотическую ситуацию в стране по болезни Ауески. The use of Mabs in veterinary practice in the diagnosis, prevention and treatment of farm animals will optimize the epizootic situation in the country for Aujeszky's disease.

Источники информации:
1. Малеев В. В. Сюрин В.Н. Болезнь Ауески. БМЭ, 1975, изд. 3, т. 2, с. 362.
Information sources:
1. Maleev V.V. Syurin V.N. Aujeszky's disease. BME, 1975, ed. 3, v. 2, p. 362.

2. Guadagnini P.F. Gelmett D. Malatia di Aujeski, ove strategie di profalassi Selez Veter. 1985, 26, 4, 534-541. 2. Guadagnini P.F. Gelmett D. Malatia di Aujeski, ove strategie di profalassi Selez Veter. 1985, 26, 4, 534-541.

3. Oirschot J.T. Van Ctielkens A.L.J. Some characteristies of four attenuated Vaccine Virus strains and a virulent strain of Anijeszky's disease virus Veter. Q, 1984 г. 6, 4, 225-229. 3. Oirschot J.T. Van Ctielkens A.L.J. Some characteristies of four attenuated Vaccine Virus strains and a virulent strain of Anijeszky's disease virus Veter. Q, 1984 6, 4, 225-229.

4. Мищенко В.А. Дудников А.И. Бондаренко А.Ф. Оценка иммуногенной активности инактивированной вакцины против болезни Ауески на кроликах. Матер. науч. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992 г. 1, 194. 4. Mishchenko V.A. Dudnikov A.I. Bondarenko A.F. Evaluation of the immunogenic activity of an inactivated vaccine against Aujeszky's disease in rabbits. Mater. scientific conf. VNIIVViM, Pokrov, 1992 1, 194.

5. Прохорова Э.М. Посабцева Л.А. Активность трех вирулентных штаммов болезни Ауески. Специфическая профилактика и диагностика болезней животных, 1986 г. 16-18. 5. Prokhorova E.M. Posabtseva L.A. The activity of three virulent strains of Aujeszky's disease. Specific prevention and diagnosis of animal diseases, 1986 16-18.

6. Ben-Porat T. De Marchi J.M. and all Role of glycoproteins of psendorabis virus in eliciting neutralizing antibodies Virologi, 1986, 154, 325-324. 6. Ben-Porat T. De Marchi J.M. and all Role of glycoproteins of psendorabis virus in eliciting neutralizing antibodies Virologi, 1986, 154, 325-324.

7. Chang-Hee Kweon, Dong-Sup Lul, Moo Huyng Jun. Serological diagnosis of pseudorabies uting monoclonal antibody Veterinary Viral diseases, 1985, 478-479. 7. Chang-Hee Kweon, Dong-Sup Lul, Moo Huyng Jun. Serological diagnosis of pseudorabies uting monoclonal antibody Veterinary Viral diseases, 1985, 478-479.

8. Eliоt M. Bourghaia H. and all. Identification of antigenic sites on pseudorabies virus glycoprotein gp 50 implicated in virus penetration of the host cell J.Gen Virol, 1990, 71,9, 2179-2183. 8. Eliot M. Bourghaia H. and all. Identification of antigenic sites on pseudorabies virus glycoprotein gp 50 implicated in virus penetration of the host cell J. Gen Virol, 1990, 71.9, 2179-2183.

9. Eliot M. Fageaud D. Vannier P. Toma B. Development of an ELJSA to differentiable between animals either vacianated with or infected by Anjeszky's disease virus veter. Res, 1989, 4, 91-94. 9. Eliot M. Fageaud D. Vannier P. Toma B. Development of an ELJSA to differentiable between animals either vacianated with or infected by Anjeszky's disease virus veter. Res, 1989, 4, 91-94.

10. Jacobs L. Meloen R.N. Gielkeus A.L. Van Oirschot J.T. Epitope analisi's of glycoprotein 1 psendorafies virus J Gen Virol, 1990, 71, 4, 381-387. 10. Jacobs L. Meloen R.N. Gielkeus A.L. Van Oirschot J.T. Epitope analisi's of glycoprotein 1 psendorafies virus J Gen Virol, 1990, 71, 4, 381-387.

11. Mastuda Asami, Okada Nobutaka, Katayama Shigeyi e.a. Characterizaton of protective viral glycoproteins for pseudorabies virus infection. J Vet. Med. Sci. 1991, 53, 4, 734-741. 11. Mastuda Asami, Okada Nobutaka, Katayama Shigeyi e.a. Characterizaton of protective viral glycoproteins for pseudorabies virus infection. J Vet. Med. Sci. 1991, 53, 4, 734-741.

12. Osorio F.A. Doster A.R. Rapid diagnosis on pseudorabies EC (extension curcular) Nebraska cooperative extension service, Nebraska agr. -res. div. 1987, 87-219, 14-15. 12. Osorio F.A. Doster A.R. Rapid diagnosis on pseudorabies EC (extension curcular) Nebraska cooperative extension service, Nebraska agr. -res. div 1987, 87-219, 14-15.

13. Wather M.W. Wather L.M.K. Isolation, characterization and physical mapping of a psendorabie virrus mutant containing antigenically altered gp 50. J. Virol. 1984, 51, 1, 57-62. 13. Wather M.W. Wather L.M.K. Isolation, characterization and physical mapping of a psendorabie virrus mutant containing antigenically altered gp 50. J. Virol. 1984, 51, 1, 57-62.

14. Quist R. Sorensen K.J. Meiling A. Monoclonal blocking ELJSA detecting serum antibodies to the glycoprotein g.2 of Anjeszky's disease virus. J. Virol. Meth. 1989, 24, 169-180. 14. Quist R. Sorensen K.J. Meiling A. Monoclonal blocking ELJSA detecting serum antibodies to the glycoprotein g. 2 of Anjeszky's disease virus. J. Virol. Meth. 1989, 24, 169-180.

15. Моренков О.С. Манцыгин Ю.А. Сергеев В.А. и др. Получение и характеристика моноклональных антител к гликопротеину G2 вируса болезни Ауески и их использование для эпитопного картирования G2. Вопросы вирусолог. 1994, 4, 174-177. 15. Morenkov O.S. Mantsygin Yu.A. Sergeev V.A. and others. Obtaining and characterization of monoclonal antibodies to glycoprotein G2 of the Aujeszky's disease virus and their use for epitope mapping of G2. Questions virologist. 1994, 4, 174-177.

16. ЕПВ N 0231641, МПК3 А 61 К 39/42, С 12 Р 21/00, С 07 К 15/00, С 12 5/00, С 12 R 1:91, 19.12.86, пр. США 09.01.86, авторы: Marchidi C.C. Jancey R.J. Вакцина против болезни Ауески.16. EPO N 0231641, IPC 3 A 61 K 39/42, C 12 P 21/00, C 07 K 15/00, C 12 5/00, C 12 R 1:91, 12.19.86, USA 09.01 .86, authors: Marchidi CC Jancey RJ Aujeszky's disease vaccine.

17. Цымбал А.М. и др. Инактивированная культуральная вакцина УНИИЭВ против болезни Ауески свиней, овец и пушных зверей. Тез. докл. 3 Всесоюз. конф. "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". М. 21-23 окт. 1987 г. 49-50. 17. Tsymbal A.M. and others. Inactivated culture vaccine UNIIEV against Aujeszky's disease of pigs, sheep and fur animals. Thes. doc. 3 All-Union. conf. "Scientific basis of technology for the industrial production of veterinary biological products." M. October 21-23. 1987 49-50.

18. Цымбал А.М. Лысенко И.П. Конаржевский К.Е. и др. Лабораторное и производственное испытание инактивированной культуральной вакцины УНИИЭВ против болезни Ауески. Научн. основы профил. и борьбы с забол. с.-х жив-ых, 1987 г. 17-23. 18. Tsymbal A.M. Lysenko I.P. Konarzhevsky K.E. et al. Laboratory and production testing of inactivated culture vaccine UNIIEV against Aujeszky's disease. Scientific the basics of the profile. and fight against the disease. village live, 1987 17-23.

19. Цымбал А.М. Конаржевский К.Е. Белоконь В.С. и др. Вирулентные и иммуногенные свойства вируса болезни Ауески, репродуцированного на перевиваемых клетках линии СПЭВ, культивируемых на различных питательных средах. Ветеринария (Киев), 1989 г. вып. 64, 3-4. 19. Tsymbal A.M. Konarzhevsky K.E. Belokon V.S. et al. Virulent and immunogenic properties of Aujeszky's disease virus reproduced on transplantable cells of the SPEV line cultivated on various nutrient media. Veterinary medicine (Kiev), 1989 64, 3-4.

20. Наставление по применению эмульсионной инактивированной конценратвакцины против болезни Ауески из культурального вируса. Утв. 05.10.92 г. 20. Guidance on the use of emulsion inactivated concentrate vaccines against Aujeszky's disease from a culture virus. Approved 10/05/92 g.

21. Эмульсионная инактивированная вакцины ВНИЯИ-УНИИЭВ против болезни Ауески из культурального вируса. ТУ, утв. ГУВ Украины 25.01.92 г. 21. Emulsion inactivated vaccine VNIIII-UNIIEV against Aujeszky's disease from the culture virus. TU, approved. GUV of Ukraine 01/25/92

22. Методика получения и поддержания гибридных клеток, секретирующих моноклональные антитела к вирусу ящура Азия-1. Утверждена директором ВНИИЗЖ 22.06.94 г. 22. The method of obtaining and maintaining hybrid cells secreting monoclonal antibodies to foot and mouth disease Asia-1. Approved by the Director of ARRIAH 06/22/94

Claims (1)

Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L ВСКК(П) N 642Д продуцент моноклональных антител к вирусу болезни Ауески штамм УНИИЭВ 18В. The strain of hybrid cultured animal cells Mus musculus L VSCK (P) N 642D producer of monoclonal antibodies to the virus of Aujeszky's disease strain UNIIEV 18B.
RU95106279A 1995-04-19 1995-04-19 Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b RU2092554C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95106279A RU2092554C1 (en) 1995-04-19 1995-04-19 Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95106279A RU2092554C1 (en) 1995-04-19 1995-04-19 Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU95106279A RU95106279A (en) 1997-02-20
RU2092554C1 true RU2092554C1 (en) 1997-10-10

Family

ID=20167019

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU95106279A RU2092554C1 (en) 1995-04-19 1995-04-19 Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2092554C1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
RU95106279A (en) 1997-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE460907B (en) HUMAN MYEL CELL LINE, COMPOSITION CONTAINING SUCH CELLS, AND PROCEDURE FOR CELL LINE PREPARATION
UA73912C2 (en) A method for the cultivation of bacteria lawsonia intracellularis (variants), a strain lawsonia intracellularis, intended for producing vaccine (variants), a method for the determination of antibodies and a vaccine for induction of immune response to said bacteria by animals
RU2092554C1 (en) Strain of the hybrid cultured animal cell mus musculus l - a producer of monoclonal antibody raised to aujeszky's disease virus, strain uniiev-18b
JPS61185183A (en) Hybrid cell system for producing cell lytic monoclonal antibody to vagina trichomonas
RU2535982C1 (en) Strain of cultivated hybrid animal cells mus musculus l cchfv vd-1-producer of monoclonal antibody 4g4/b6 to virus of crimean-congo hemorrhagic fever (cchf)
RU2583306C1 (en) Hybrid strain of cultured cells of animals mus musculus -t 2e5 - producer of monoclonal antibodies isotype g 1 to b subunit of cholera toxin
RU2012594C1 (en) Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies to 146s-component of foot and mouth disease virus asia-1
RU2117700C1 (en) Strain of hybrid cultured cells of animal mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies raised to pig vesicular disease virus, strain t-75
JPS60156383A (en) Hybrid cell system for producing monoclonal antibody directed to vagina tricomonas determining factor
Jessup et al. Preparation of human–mouse heterohybridomas against an immunising antigen
RU2528869C1 (en) STRAIN OF CULTIVATED HYBRID CELLS OF ANIMAL MUS MUSCULUS L CCHFV Vd-3-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODY 3H6/F2 TO VIRUS OF CRIMEAN-CONGO HAEMORRHAGIC FEVER
RU2117043C1 (en) Strain of cultured hybrid cells of animal mus musculus - producer of monoclonal antibodies to thermostable antigen which is common for glanders and meliodosis pathogens
RU2186106C1 (en) Strain of hybrid cells e4/n-6 g5 of animal mus musculus l producing monoclonal antibodies raised to ebol's virus
RU2186107C1 (en) Strain of hybrid cells m/n-10g9 of animal mus musculus l producing monoclonal antibodies raised to marburg virus
RU2265658C2 (en) Strain of hybrid cells of animal mus musculus l, 9e2, used in preparing monoclonal antibody to west nile virus protein e of strain wnv/leiv-vig99-27889
SU1640157A1 (en) Strain of hybridous cultivating mammalian cells, mus musculus l, used for preparation of monoclonal antibodies for dna-dependent rna-polymerase of bacteriophage t7
Schots et al. Production of monoclonal antibodies
RU2590587C1 (en) Cultivated hybrid animal cells mus musculus ht 3e5 - producer of monoclonal antibodies isotype g 2a to b- subunit of cholera toxin
RU1801117C (en) Method of monoclonal antibody preparation to monoclonal antibody to the protein of human lymphocyte t4, culturing cell of hybridoma jti -if3 - a producer of monoclonal antibody to monoclonal antibody to the protein of human lymphocyte t4, culturing cell of hybridoma jti -if3-e5 - a producer of monoclonal antibody to monoclonal
RU2570634C1 (en) STRAIN OF CULTIVATED HYBRID ANIMAL CELLS MUS MUSCULUS L BPM VD-11 - PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODY 6A11/G12 TO ANTIGEN 200 kDA OF MELIOIDOSIS PATHOGEN
RU2031117C1 (en) Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus - a producer of monoclonal antibody to herpes simplex virus type i
SU1742325A1 (en) Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculis l - a producer of monoclonal antibodies to choleric enterotoxin of eltor biotype
RU2395575C1 (en) STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus musculus L - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES FOR EXPOSING VP40 PROTEIN OF MARBURG VIRUS, (Popp STRAIN) (VERSIONS), MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCED BY SAID STRAIN (VERSIONS) AND SET FOR "SANDWICH" FORMAT IMMUNOENZYMOMETRIC SYSTEM FOR EXPOSING VP40 MATRIX PROTEIN OF MARBURG VIRUS (Popp STRAIN)
RU2570638C1 (en) Strain of cultivated hybrid animal cells mus musculus l bpm vd-10 - producer of monoclonal antibody 5h11/e5 to antigen kda 200 of melioidosis pathogen
JP2525569B2 (en) How to identify Candida