RU2088932C1 - Способ оценки пролиферативной активности в-лимфоцитов in vitro с использованием биофлавоноида из корня шиповника - Google Patents
Способ оценки пролиферативной активности в-лимфоцитов in vitro с использованием биофлавоноида из корня шиповника Download PDFInfo
- Publication number
- RU2088932C1 RU2088932C1 RU92000949A RU92000949A RU2088932C1 RU 2088932 C1 RU2088932 C1 RU 2088932C1 RU 92000949 A RU92000949 A RU 92000949A RU 92000949 A RU92000949 A RU 92000949A RU 2088932 C1 RU2088932 C1 RU 2088932C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lymphocytes
- mitogen
- proliferative activity
- culture
- vitro
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: биология, медицина, для оценки пролиферативной активности B-лимфоцитов in vitro. Сущность изобретения: из пробы периферической крови выделяют мононуклеарные клетки, культивируют их в присутствии B-клеточного митогена с последующим учетом результатов радиоизотопным методом, при этом в качестве B-клеточного митогена используют биофлавоноид из корня шиповника. 4 табл.
Description
Изобретение относится к биологии и медицине и может применяться для изучения стадий и регуляторных механизмов созревания B-лимфоцитов, изучения особенностей иммунопатогенеза заболеваний, разработки стратегии и контроля за иммуномодулирующей терапией.
Известен способ оценки пролиферативной активности B-лимфоцитов in vitro, включающий выделение мононуклеарных клеток /МНК/ из периферической крови людей, их культивирование в присутствии B-клеточного митогена и учет пролиферативной активности клеток радиоизотопным методом, отличающийся тем, что в качестве B-клеточного митогена применен формалинизированный золотистый стафилококк /Staphylococcus aureus CowanI, SAC/ /Romagnani S. The molecular basis of B-cell differentiation and function. New York, 1986, p.67-68/.
Недостатком способа является то, что митоген SAC обладает низкой степенью стимуляции пролиферации B-лимфоцитов, что затрудняет оценку митоген-индуцированной пролиферации B-лимфоцитов человека в сравнении со спонтанной пролиферацией B-лимфоцитов, которая может значительно варьировать по интенсивности у разных людей.
Известен способ оценки пролиферативной активности B-лимфоцитов in vitro, включающий выделение МНК из периферической крови людей, их культивирование в присутствии B-клеточного митогена и учет пролиферативной активности клеток радиоизотопным методом, в котором в качестве B-клеточного митогена применен экстракт растения лаконоса, митоген лаконоса /Pokeweed Mitogen, PWM/ /Waldemann T. A. Broder S. Polyclonal B-cell activators in the study of the regulation of immunoglobulin synthesis in the human system/ /advances in immunology, 1982, vol.32, p.1-63/.
Недостатком способа является то, что PWM действует на B-лимфоциты обязательно в присутствии моноцитов /Мц/ и T-лимфоцитов. Это не позволяет оценить изолированно пролиферативную активность только B-лимфоцитов.
Задачей изобретения является создание способа оценки пролиферативной активности B-лимфоцитов in vitro, который позволял бы оценить активность только B-лимфоцитов без участия регуляторных факторов со стороны Мц и T-лимфоцитов.
Для этого в способе оценки пролиферативной активности B-лимфоцитов in vitro, включающем выделение МНК из периферической крови людей, их культивирование в присутствии B-клеточного митогена и учет пролиферативной активности радиоизотопным методом, в качестве B-клеточного митогена применен биофлавоноид из корня шиповника /БКШ/.
Пример. Способ выполняли следующим образом. МНК периферической крови людей выделяли на одноступенчатом градиенте плотности фиколлаверографина /1,078 г/см3/ и трижды отмывали забуференным физиологическим раствором /культура B-лимфоцитов, дополненных T-лимфоцитами и Мц/. Освобождение культуры МНК от Мц проводили путем адгезии Мц к пластиковой поверхности на чашках Петри в течение 60 мин в газовом инкубаторе при 37oC /культура B-лимфоцитов, дополненных T-лимфоцитами/. Получение культуры МНК, освобожденных от T-лимфоцитов, приводили методом двукратного осаждения E-розеткообразующих клеток /культура B-лимфоцитов, дополненная Мц/. Получение обогащенной суспензии B-лимфоцитов проводили методом освобождения МНК от Мц на чашках Петри с последующим двукратным осаждением E-розеткообразующих клеток /культура B-лимфоцитов/.
Культивирование проводили в триплетах, в лунках 96-луночных планшетов для иммунологических исследований при 37oC в газовом инкубаторе в течение 120 ч в культуральной среде, состоящей из среды RPMI-1640, дополненной инактивированной сывороткой человека AB/IV/ группы, HEPES буфером, α-глютамином и антибиотиками. В лунки в количестве 33% от общего объема вносили или культуральную среду /1-й контроль/, или PWM /2-й контроль/, или БКШ /опыт/.
Интенсивность пролиферации клеток оценивали по включению в нуклеопротеидные фракции лимфоцитов радиоактивного вещества 3H-тимидина, который вносили в лунки за 18 ч до окончания культивирования.
Результаты оценки активности пролиферации B-лимфоцитов трех доноров приведены в табл.1-4, где использованы следующие обозначения: B B-лимфоциты, T T-лимфоциты, Мц моноциты, PWM митоген лаконоса, БКШ биофлавоноид из корня шиповника.
В табл. 1 приведены данные по спонтанной пролиферации культуры B-лимфоцитов в присутствии T-лимфоцитов и моноцитов без митогена /1 строчка/, в присутствии митогена лаконоса /PWM/ /2строчка/ и в присутствии БКШ /3 строчка/.
Как видно из табл. 1, в культуре B-лимфоцитов, дополненной T-лимфоцитами и моноцитами, митоген лаконоса /PWM/ достоверно усиливает пролиферацию лимфоцитов, в то время как БКШ достоверно не активен.
В табл. 2 приведены данные по пролиферации культуры B-лимфоцитов в присутствии T-лимфоцитов, но без моноцитов, без митогена /1 строчка/, в присутствии митогена лаконоса /PWM/ /2 строчка/ и в присутствии БКШ /3 строчка/.
Как видно из табл. 2, в культуре B-лимфоцитов, дополненных T-лимфоцитами, но освобожденными от моноцитов, митоген лаконоса достоверно усиливает пролиферацию лимфоцитов, в то время как БКШ достоверно не активен.
В табл. 3 приведены данные по пролиферации культуры B-лимфоцитов в присутствии МЦ, но без T-лимфоцитов, без митогена /1 строчка/, в присутствии митогена лаконоса /PWM/ и в присутствии БКШ /3 строчка/.
Как видно из табл. 3, в культуре B-лимфоцитов, дополненной моноцитами, но без T-лимфоцитов, и митоген лаконоса, и БКШ не активны.
В табл. 4 приведены данные по спонтанной пролиферации культуры B-лимфоцитов /1 строчка/, в присутствии митогена лаконоса /PWM/ /2 строчка/ и БКШ /3 строчка/.
Как видно из табл. 4, в культуре B-лимфоцитов митоген лаконоса не активен, а БКШ достоверно и значительно усиливает пролиферацию B-лимфоцитов.
Таким образом, в культурах B-лимфоцитов, содержащих или T-лимфоциты, или моноциты, или T-лимфоциты и моноциты, митоген лаконоса /PWM/ усиливает пролиферацию лимфоцитов, а в культуре B-лимфоцитов, освобожденной от T-лимфоцитов и моноцитов, он не активен, то есть на чистую популяцию B-лимфоцитов митоген лаконоса /PWM/ не влияет.
В отличие от него биофлавоноид из корня шиповника /БКШ/ достоверно усиливает пролиферацию B-лимфоцитов /в культуре без T-лимфоцитов и моноцитов/.
При этом интенсивность влияния БКШ на пролиферацию культуры B-лимфоцитов достаточно велика: у донора 1 пролиферация усиливается в 3,8 раза; у донора 2 в 5,1 раза; у донора 3 в 7,2 раза.
Таким образом, с помощью предложенного способа можно оценить пролиферацию культуры B-лимфоцитов человека.
Источники информации
Панков Ю. А. Брюховецкая Е.В. Джумаев М.А. Технология выделения суммы катехинов и получения P-витаминного препарата из корневищ и корней шиповника морщинистого. Вопросы фармации на Дальнем Востоке, Хабаровск, 1980, с. 54-60.
Панков Ю. А. Брюховецкая Е.В. Джумаев М.А. Технология выделения суммы катехинов и получения P-витаминного препарата из корневищ и корней шиповника морщинистого. Вопросы фармации на Дальнем Востоке, Хабаровск, 1980, с. 54-60.
Claims (1)
- Способ оценки пролиферативной активности В-лимфоцитов in vitro, включающий выделение мононуклеарных клеток из периферической крови людей, их культивирование в присутствии В-клеточного митогена и учет пролиферативной активности клеток радиозотопным методом, отличающийся тем, что в качестве митогена используют биофлавоноид из корня шиповника.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU92000949A RU2088932C1 (ru) | 1992-10-14 | 1992-10-14 | Способ оценки пролиферативной активности в-лимфоцитов in vitro с использованием биофлавоноида из корня шиповника |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU92000949A RU2088932C1 (ru) | 1992-10-14 | 1992-10-14 | Способ оценки пролиферативной активности в-лимфоцитов in vitro с использованием биофлавоноида из корня шиповника |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU92000949A RU92000949A (ru) | 1995-05-20 |
| RU2088932C1 true RU2088932C1 (ru) | 1997-08-27 |
Family
ID=20130583
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU92000949A RU2088932C1 (ru) | 1992-10-14 | 1992-10-14 | Способ оценки пролиферативной активности в-лимфоцитов in vitro с использованием биофлавоноида из корня шиповника |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2088932C1 (ru) |
-
1992
- 1992-10-14 RU RU92000949A patent/RU2088932C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Waldmann T.A., Broder S.,Polyclonal B-cell activators in the stady of the regulathion of immunoglobulin synthesesis in the human sistem, Advaces in immunology, 1982, v. 32, p. 1 - 63. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mueller et al. | A Viscum album oligosaccharide activating human natural cytotoxicity is an interferon γ inducer | |
| Paige et al. | Natural cytotoxic cells against solid tumors in mice: II. Some characteristics of the effector cells | |
| Thomas et al. | Functional analysis of human T cell subsets defined by monoclonal antibodies. IV. Induction of suppressor cells within the OKT4+ population. | |
| US5849589A (en) | Culturing monocytes with IL-4, TNF-α and GM-CSF TO induce differentiation to dendric cells | |
| Sugiura et al. | Wheat germ agglutinin-positive cells in a stem cell-enriched fraction of mouse bone marrow have potent natural suppressor activity. | |
| US5801193A (en) | Compositions and methods for immunosuppressing | |
| Ashman et al. | Enhancement of human lymphocyte responses to phytomitogens in vitro by incubation at elevated temperatures. | |
| Metcalf et al. | The nature of the cells generating B‐lymphocyte colonies in vitro | |
| Glaser et al. | In vitro generation of secondary cell-mediated cytotoxic response against a syngeneic Gross virus-induced lymphoma in rats | |
| Vernino et al. | Analysis of the expression of CD5 by human B cells and correlation with functional activity | |
| Goodwin | Modulation of conconavalin-A-induced suppressor cell activation by prostaglandin E2 | |
| CN113260360A (zh) | 用于增加干细胞功能的试剂和方法 | |
| Bloom et al. | Monocyte-mediated augmentation of human natural cell-mediated cytotoxicity | |
| Gibofsky et al. | The identification of HL-A antigens on fresh and cultured human endothelial cells | |
| RU2088932C1 (ru) | Способ оценки пролиферативной активности в-лимфоцитов in vitro с использованием биофлавоноида из корня шиповника | |
| Dock et al. | Peripheral blood monocytes in the autologous mixed lymphocyte reaction | |
| Aldo-Benson et al. | Long-term growth of lines of murine dinitrophenyl-specific B lymphocytes in vitro. | |
| Tai et al. | Differential natural killer cell reactivity against T cell lymphomas by cells from normal or stimulated mice. | |
| Nagarkatti et al. | Differential effects of BCNU on T cell, macrophage, natural killer and lymphokine-activated killer cell activities in mice bearing a syngeneic tumor | |
| Falk et al. | In vitro correlates of transplantation immunity: The release of substances by immune lymphocytes confronted with specific antigens | |
| Gladman et al. | Impaired antigen-specific suppressor cell activity in patients with systemic lupus erythematosus. | |
| Rolstad et al. | Spontaneous alloreactivity of natural killer (NK) and lymphokine-activated killer (LAK) cells from athymic rats against normal haemic cells. NK cells stimulate syngeneic but inhibit allogeneic haemopoiesis. | |
| Al‐Balaghi et al. | Spontaneous DNA synthesis in rheumatoid arthritis: evidence of enhanced circulating non‐T‐cell proliferation | |
| Meyer et al. | Cell cycle associated changes in histamine release from rat basophilic leukemia cells separated by counterflow centrifugal elutriation. | |
| Sitia et al. | Differentiation in the murine B cell lymphoma 1.29: inductive capacities of lipopolysaccharide and Mycoplasma fermentans products |