RU2077727C1

RU2077727C1 - Method of diagnosis of fetus nonbearing at the first trimester of pregnancy

Info

Publication number: RU2077727C1
Application number: RU93044384A
Authority: RU
Inventors: М.В. Корулина; Н.Ю. Сотникова; Л.Б. Брагина; А.А. Мартенова
Original assignee: Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства
Priority date: 1993-09-21
Filing date: 1993-09-21
Publication date: 1997-04-20

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves determination of content of peripheral T_γ-lymphocytes before and after their incubation. State of immune state is evaluated as pathological and threatening with respect to fetus nonbearing at decrease of Fc_γR expression on the T-lymphocytes surface by 12% and above as compared with parent level. EFFECT: increased precision of prognosis. 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины с целью прогнозирования осложнений беременности. The invention relates to medicine, namely to obstetrics, and can be used to assess the state of the immune system of a pregnant woman in order to predict pregnancy complications.

Известно, что по данным ВОЗ в I триместре прерывается до 25% беременностей. По данным литературы 50% случаев спонтанных абортов имеют в своей основе нарушения иммунных механизмов взаимодействия матери и плода [5]
Известен способ оценки имунной системы беременной женщины, позволяющий диагностировать угрозу прерывания с помощью определения в сыворотке крови трофобластического β₁-гликопротеина (ТБГ) [3] Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков:
ТБГ определяется в очень незначительной концентрации в сыворотке крови у мужчин и женщин, что снижает его диагностическую ценность в ранние сроки, когда выкидыш встречается наиболее часто;
большие индивидуальные колебания протеина как в норме, так и при патологии;
необходимость дорогостоящего оборудования, специально оснащенной лаборатории;
способ является полуколичественным.It is known that according to WHO data, up to 25% of pregnancies are terminated in the first trimester. According to the literature, 50% of cases of spontaneous abortion are based on violations of the immune mechanisms of the interaction of the mother and fetus [5]
There is a method of evaluating the immune system of a pregnant woman, which allows to diagnose the threat of interruption by determining trophoblastic β ₁ -glycoprotein (TBH) in blood serum [3] However, this method has several significant disadvantages:
TBH is determined in a very low concentration in the blood serum of men and women, which reduces its diagnostic value in the early stages, when a miscarriage occurs most often;
large individual protein fluctuations both in norm and in pathology;
the need for expensive equipment, a specially equipped laboratory;
the method is semi-quantitative.

Наиболее близким по техническому решению к заявленному способу является способ диагностики угрозы невынашивания беременности по определению сенсибилизации лимфоцитов матери к эмбриональному антигену и наличию блокирующих антител в сыворотке крови женщин [2] Однако данный способ имеет ряд недостатков:
способ является менее точным 53,3 ± 13,3% поскольку блокирующиеантитела, определяемые данным способом, выявляются лишь в 50-67% случаев, т.е. у половины беременных женщин, в связи с чем способ нельзя использовать для оценки состояния имунной системы [2]
результаты реакции могут искажаться за счет изменения блокирующей способности сыворотки (20%) [2]
3) антигены, используемые в реакции, изготавливаются лабораторным путем и не являются стандартными, поэтому содержат большое количество неидентифицированных антигенных детерминант, снижающих специфичность метода;
наличие неспецифической адгезии;
не во всех случаях действие антигена проявляется в торможении прилипания лимфоцитов, но и в усилении прилипания лимфоцитов;
способ является менее специфически 62,5 ± 12,9% чувствительным 36,4 ± 12,9, чем заявляемый способ.The closest technical solution to the claimed method is a method for diagnosing the threat of miscarriage by determining the sensitization of maternal lymphocytes to the embryonic antigen and the presence of blocking antibodies in the blood serum of women [2] However, this method has several disadvantages:
the method is less accurate 53.3 ± 13.3% since blocking antibodies determined by this method are detected only in 50-67% of cases, i.e. in half of pregnant women, and therefore the method cannot be used to assess the state of the immune system [2]
reaction results may be distorted due to changes in serum blocking ability (20%) [2]
3) the antigens used in the reaction are laboratory-made and not standard, therefore they contain a large number of unidentified antigenic determinants that reduce the specificity of the method;
the presence of nonspecific adhesion;
not in all cases the effect of the antigen is manifested in the inhibition of adherence of lymphocytes, but also in the enhancement of adherence of lymphocytes;
the method is less specific 62.5 ± 12.9% sensitive 36.4 ± 12.9 than the claimed method.

Целью заявляемого способа является оценка состояния иммунной системы беременной женщины в I триместре беременности и выбора последующей тактики ее ведения. The aim of the proposed method is to assess the state of the immune system of a pregnant woman in the first trimester of pregnancy and the choice of the subsequent tactics of its management.

Цель достигается путем оценки способности к изменению экспрессии FcγR на поверхности Т-лимфоцитов под влиянием растворимых плацентарных факторов (АМГФ), и при снижении ее под воздействием АМГФ на 12 и более от исходного уровня Tγ-клеток определяется ослабление супрессорного потенциала Т-лимфоцитов, что позволяет оценить состояние беременной женщины как угрожающее невынашиванием. The goal is achieved by assessing the ability to change the expression of FcγR on the surface of T-lymphocytes under the influence of soluble placental factors (AMHF), and when it decreases under the influence of AMHF by 12 or more from the initial level of Tγ-cells, weakening of the suppressor potential of T-lymphocytes is determined, which allows assess the condition of a pregnant woman as threatening miscarriage.

Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.

В пробе крови определяют содержание Т-лимфоцитов по методу Moretta L. [6] К обогащенной суспензии этой же порции Tγ-лимфоцитов добавляют АМГФ в концентрации 600 нг/мл. После 60 мин инкубации с этим препаратом оценивают уровень экспрессии FcγP на поверхности периферических Т-лимфоцитов по изменению количества FcγR позитивных Т-лимфоцитов и сравнивают с первоначальным уровнем Tγ-клеток. Процент изменения Tγ-клеток до и после инкубации с АМГФ вычисляют по формуле

по общепринятой методике [1]
Tγ-клетки относятся к супрессорным клеткам, играющим важную роль при беременности. Существует несколько форм FcγR рецепторов: лабилбная FcγRI низкоавидная и связанная или встроенная, высокоавидная FcγRII форма [4] Различные стимулы индуцируют связывание FcγR и последующий переход из одной формы в другую. АМГФ относится к одному из основных белков фортильности, уровень которого отражает состояние фето-плацентарного комплекса и обусловливает характер течения беременности. Он обладает выраженным иммуномодулирующим действием. Взаимодействие АМГФ с Tγ-лимфоцитами изменяет уровень их супрессорной активности и тем самым состояние иммунной системы женщины. В связи с этим оценка влияния АМГФ на состояние рецепторного аппарата Т-лимфоцитов позволяет более точно оценить уровень их функциональной активности и происходящие в организме процессы иммунорегуляторного взаимодействия матери и плода.In a blood sample, the content of T-lymphocytes is determined by the method of Moretta L. [6] AMHF at a concentration of 600 ng / ml is added to the enriched suspension of the same portion of Tγ-lymphocytes. After 60 min incubation with this drug, the level of FcγP expression on the surface of peripheral T-lymphocytes is estimated by the change in the number of FcγR positive T-lymphocytes and compared with the initial level of Tγ-cells. The percentage change in Tγ cells before and after incubation with AMHF is calculated by the formula

according to the generally accepted method [1]
Tγ cells are suppressor cells that play an important role in pregnancy. There are several forms of FcγR receptors: labile FcγRI low-avidity and bound or integrated, highly avid FcγRII form [4] Various stimuli induce FcγR binding and subsequent transition from one form to another. AMHF is one of the main proteins of fertility, the level of which reflects the state of the feto-placental complex and determines the nature of the course of pregnancy. It has a pronounced immunomodulatory effect. The interaction of AMHF with Tγ-lymphocytes changes the level of their suppressor activity and thereby the state of the woman’s immune system. In this regard, the assessment of the effect of AMHF on the state of the receptor apparatus of T-lymphocytes allows us to more accurately assess the level of their functional activity and the processes of immunoregulatory interaction of the mother and fetus in the body.

Новизна заявленного способа заключается в способе оценки состояния иммунной системы по способности к изменению экспрессии FcgR, что дает возможность определить одномоментно и количественно супрессорный потенциал Т-супрессоров в I триместре беременности. The novelty of the claimed method lies in the method for assessing the state of the immune system by the ability to change the expression of FcgR, which makes it possible to determine simultaneously and quantitatively the suppressor potential of T-suppressors in the first trimester of pregnancy.

Способ основан на впервые установленной авторами закономерности изменения экспрессии FcγR на поверхности периферических Т-лимфоцитов при неосложненной и осложненной угрозой невынашивания беременности. При увеличении экспрессии FcγR cостояние иммунной cистемы оценивается как нормальное, способствующее сохранению беременности. При снижении экспрессии FcγR на 12 и более от исходного уровня Tγ-лимфоцитов состояние беременной оценивается как угрожающее невынашиванием. Как впервые установили авторы, точность заявленного способа намного выше известного (93%). Ранее способ с указанной целью не использовался. The method is based on the first established by the authors of the pattern of changes in the expression of FcγR on the surface of peripheral T-lymphocytes with uncomplicated and complicated threat of miscarriage. With increased expression of FcγR, the state of the immune system is assessed as normal, contributing to the preservation of pregnancy. With a decrease in the expression of FcγR by 12 or more from the initial level of Tγ-lymphocytes, the state of the pregnant woman is assessed as threatening miscarriage. As the authors first established, the accuracy of the claimed method is much higher than the known (93%). Previously, the method for this purpose was not used.

Преимуществами заявляемого способа от прототипа являются:
высокая точность 93 ± 4,58% специфичность -88 ± 5,83% чувствительность 93 ± 4,58%
возможность своевременно, до появления клинической симптоматики, диагностировать развитие угрозы невынашивания беременности, что дает возможность правильного ведения беременной женщины;
простота в исполнении, метод не требует дорогостоящих реактивов и оборудования.The advantages of the proposed method from the prototype are:
high accuracy 93 ± 4.58% specificity -88 ± 5.83% sensitivity 93 ± 4.58%
the ability to timely, before the onset of clinical symptoms, diagnose the development of the threat of miscarriage, which makes it possible to properly manage a pregnant woman;
simplicity in execution, the method does not require expensive reagents and equipment.

Существенные отличия заявляемого способа:
1. В заявленном способе оценивается способность к изменению экспрессии FcγR на поверхности периферических Т-лимфоцитов под влиянием белка беременности АМГФ;
2. Установление динамики изменения экспрессии FcγR на поверхности периферических Т-лимфоцитов позволяет оценивать состояние иммунной системы беременной женщины и благодаря этому прогнозировать развитие угрозы невынашивания в I триместре беременности;
3. Данный способ учитывает состояние мембраны Т-лимфоцитов и влияние на экспрессию FcγR плацентарных факторов (АМГФ).Significant differences of the proposed method:
1. The claimed method assesses the ability to change the expression of FcγR on the surface of peripheral T-lymphocytes under the influence of the pregnancy protein AMGF;
2. The establishment of the dynamics of changes in the expression of FcγR on the surface of peripheral T-lymphocytes makes it possible to assess the state of the immune system of a pregnant woman and thereby predict the development of the threat of miscarriage in the first trimester of pregnancy;
3. This method takes into account the state of the membrane of T-lymphocytes and the influence on the expression of FcγR of placental factors (AMHF).

Пример 1. Беременная К. 22 года, беременность 6 недель, первобеременная. Менструальная функция беременной с 13 лет, по 3-4 дня, через 28 дней. Нарушений менструальной функции в анамнезе нет. Гинекологическую и соматическую патологию отрицает. На учете по беременности с 6 недель беременности. Обследована при взятии на учет. При объективном осмотре размеры матки соответствуют гестационному сроку беременности. При объективном обследовании патологии не выявлено. Содержание ТБГ, экстриола, прогестерона в крови в пределах нормы. При исследовании иммунного статуса выявлено: 1. Способ-прототип. Показатель сенсибилизации к эмбриональному антигену 63% блокирующие антитела 6% т.е. сенсибилизация к эмбриональному антигену, блокирующая способность сыворотки крови находится в пределах нормы. Состояние иммунной системы без изменений. Заключение: беременность будет протекать без осложнений. 2. Заявляемый способ. Содержание Tγ-лимфоцитов 39% После инкубации с АМГФ 24% Заключение: отмечается снижение экспрессии FcγR на 62% от исходного уровня. По данным заявляемого способа состояние иммунной системы оценивается как нарушенное, что свидетельствует о развитии угрозы невынашивания в I триместре. Беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 12 недель. Example 1. Pregnant K., 22 years old, pregnancy 6 weeks, first pregnant. The menstrual function of a pregnant woman is from 13 years old, for 3-4 days, after 28 days. There is no history of menstrual dysfunction. Gynecological and somatic pathology denies. Registered in pregnancy from 6 weeks of gestation. Inspected upon registration. With an objective examination, the size of the uterus corresponds to the gestational gestational age. An objective examination of the pathology was not detected. The content of TBH, extriol, progesterone in the blood is within normal limits. When examining the immune status revealed: 1. The prototype method. Sensitivity to embryonic antigen 63% blocking antibodies 6% i.e. sensitization to the embryonic antigen, the blocking ability of blood serum is within normal limits. The state of the immune system is unchanged. Conclusion: pregnancy will proceed without complications. 2. The inventive method. The content of Tγ lymphocytes 39% After incubation with AMHF 24% Conclusion: there is a decrease in the expression of FcγR by 62% from the initial level. According to the proposed method, the state of the immune system is assessed as impaired, which indicates the development of the threat of miscarriage in the first trimester. Pregnancy ended in a spontaneous miscarriage in the period of 12 weeks.

Пример 2. Беременная Н. 24 года. Встала на учет по беременности в сроке 10 недель. В анамнезе -1-е своевременные роды, 1-й медицинский аборт без осложнений. Менструальная функция не нарушена. Муж здоров. При объективном обследовании: матка увеличена до 10 недель беременности. Обследована. Соматической патологии не выявлено, изменений в клинических анализах нет. Содержание половых гормонов на уровне нормы. Содержание ХГ в моче соответствует сроку беременности. Исследование иммунного статуса беременной показало: 1. Cпособ-прототип. Показатель сенсибилизации к эмбриональному антигену 85% блокирующая способность сыворотки 11% Заключение: cостояние иммунной системы соответствует сроку гестации. Беременность протекает без осложнений. 2. Заявляемый способ. Содержание Tγ-лимфоцитов -35% после воздействия АМГФ 31% т.е. экспрессия FcγR уменьшилась на 12% Заключение: состояние иммунной системы нарушено, что свидетельствует о снижении невынашивания в I триместре. В сроке 11 недель беременная Н. госпитализирована с симптоматикой угрозы невынашивания. Самопроизвольный выкидыш в 1-е сутки госпитализации. Example 2. Pregnant N. 24 years. I registered for pregnancy in the period of 10 weeks. A history of -1th timely delivery, 1st medical abortion without complications. Menstrual function is not impaired. The husband is healthy. An objective examination: the uterus is enlarged to 10 weeks of pregnancy. Surveyed. No somatic pathology was detected; there were no changes in clinical analyzes. The content of sex hormones is normal. The content of chronic hepatitis C in the urine corresponds to the gestational age. A study of the immune status of a pregnant woman showed: 1. The prototype method. Sensitivity to embryonic antigen 85% serum blocking ability 11% Conclusion: the state of the immune system corresponds to the gestational age. Pregnancy proceeds without complications. 2. The inventive method. The content of Tγ-lymphocytes is -35% after exposure to AMHF 31% i.e. FcγR expression decreased by 12%. Conclusion: the state of the immune system is impaired, indicating a decrease in miscarriage in the first trimester. At 11 weeks pregnant N. was hospitalized with symptoms of a threat of miscarriage. Spontaneous miscarriage on the 1st day of hospitalization.

Пример 3. Беременная Л. 28 лет. Повторнобеременная, первородящая. В анамнезе 2 медицинских аборта, 1 самопроизвольный выкидыш в сроке беременности 12 недель. Данная беременность -4-я. На учете по беременности состоит со срока 7 недель. В настоящее время срок беременности 8 недель. Субъективно чувствует себя хорошо. Обследована: отклонений в общеклиническом статусе не выявлено. Исследование экстриола мочи, прегнадиола на уровне нормы. Содержание ТБГ, ПЛ в сыворотке крови снижено. Исследование иммунного статуса: 1. Способ-прототип. Показатель сенсибилизации 12% блокирующая способность сыворотки 20% Заключение: отмечается снижение сенсибилизации к эмбриональному антигену, блокирующие антитела в сыворотке крови отсутствуют, что свидетельствует об отклонениях в состоянии иммунной системы, которые ведут к развитию угрозы невынашивания. 2. Заявляемый способ. Исходное содержание Tγ-клеток 25% после инкубации с АМГФ 37% т.е. экспрессия FcγR усилилась на 48% Заключение: наблюдается усиление экспресии FcγR под влиянием АМГФ, что свидетельствует о нормальном состоянии иммунной системы соответственно гестационному сроку. Беременность в I триместре будет протекать без осложнений. Беременная Л. госпитализирована в клинику для наблюдения. В сроке 16 недель выписана из стационара в удовлетворительном состоянии. Example 3. Pregnant L. 28 years. Re-pregnant, primiparous. A history of 2 medical abortions, 1 spontaneous miscarriage during pregnancy 12 weeks. This pregnancy is the 4th. Registered in pregnancy consists of a period of 7 weeks. Currently, the gestational age is 8 weeks. Feels good subjectively. Examined: deviations in the general clinical status were not detected. The study of extriol urine, pregnadiol at the normal level. The content of TBH, PL in the blood serum is reduced. The study of the immune status: 1. The prototype method. Sensitization rate 12% serum blocking capacity 20% Conclusion: there is a decrease in sensitization to the embryonic antigen, serum blocking antibodies are absent, which indicates deviations in the state of the immune system, which lead to the development of a threat of miscarriage. 2. The inventive method. The initial content of Tγ cells 25% after incubation with AMHF 37% i.e. FcγR expression increased by 48%. Conclusion: FcγR expression is enhanced by AMHF, which indicates the normal state of the immune system according to the gestational age. Pregnancy in the first trimester will proceed without complications. Pregnant L. is hospitalized in a clinic for observation. She was discharged from the hospital in satisfactory condition within 16 weeks.

Данным способом оценка иммунной системы беременной женщины была проведена у 32 женщин. Сравнительный анализ точности, специфичности и чувствительности заявляемого способа и способа-прототипа представлен в таблице. По заявляемому способу точность составила 93 ± 4,58% чувствительность 98 ± 4,58% специфичность 88 ± 5,83% По способу-прототипу точность составила 53,3 ± 13,3% чувствительность 36,4 ± 12,9% специфичность 62,5 ± 12,9%
Таким образом, предлагаемый способ обладает более высокой точностью, специфичностью, чувствительностью, чем способ-прототип, что дает возможность более точно оценивать состояние иммунной системы беременной женщины и благодаря этому прогнозировать развитие угрозы невынашивания беременности в I триместре до появления клинической симпоматики.In this way, an assessment of the immune system of a pregnant woman was performed in 32 women. A comparative analysis of the accuracy, specificity and sensitivity of the proposed method and the prototype method are presented in the table. According to the claimed method, the accuracy was 93 ± 4.58% sensitivity 98 ± 4.58% specificity 88 ± 5.83% according to the prototype method, the accuracy was 53.3 ± 13.3% sensitivity 36.4 ± 12.9% specificity 62 5 ± 12.9%
Thus, the proposed method has higher accuracy, specificity, sensitivity than the prototype method, which makes it possible to more accurately assess the state of the immune system of a pregnant woman and thereby predict the development of the threat of miscarriage in the first trimester before the onset of clinical sympathomics.

Источники информации
1. Власов В.В. Эффективность диагностических исследований. М. Медицина, 1988.Sources of information
1. Vlasov V.V. The effectiveness of diagnostic studies. M. Medicine, 1988.

2. Говалло В.И. Иммунология репродукции. М. Медицина, 1987. 2. Govallo V.I. Immunology of reproduction. M. Medicine, 1987.

3. Татаринов Ю.С. Масюкевич В.Н. Иммунохимическая идентификация нового BI-глобулина в сыворотке крови беременных женщин //Бюл. эксп. биол. 1970, N 6. 3. Tatarinov Yu.S. Masyukevich V.N. Immunochemical identification of a new BI-globulin in the blood serum of pregnant women // Bull. exp biol. 1970, N 6.

4. Gergeley G. Erdel A. Saudeor M. Sarmay G. Ulur F. The Fc-Receptor model of membrane cytoplasmic signalling //Mol. Immunol. 1982, V. 19, N 10, p. 1223-1228. 4. Gergeley G. Erdel A. Saudeor M. Sarmay G. Ulur F. The Fc-Receptor model of membrane cytoplasmic signalling // Mol. Immunol. 1982, V. 19, N 10, p. 1223-1228.

5. Gill T.J. Immunological and Genetic factors influencing pregnancy and development //Amer. J. Reprod. Immunol. Microbiol. 1986, V. 10, N 3, p. 120. 5. Gill T.J. Immunological and Genetic factors influencing pregnancy and development // Amer. J. Reprod. Immunol. Microbiol. 1986, V. 10, N 3, p. 120.

6. Moretta L. Webb S.R. Lydyard F.W. Cooper M.D. Functional analysis of two numan T-cell subpopulation help and suppression of B-cell bearing receptors for IgM or IgG //J. Exp. Med. 1977, N 1, p. 184-200. 6. Moretta L. Webb S.R. Lydyard F.W. Cooper M.D. Functional analysis of two numan T-cell subpopulation help and suppression of B-cell bearing receptors for IgM or IgG // J. Exp. Med. 1977, N 1, p. 184-200.

Claims

A method for diagnosing the threat of miscarriage in the first trimester of pregnancy, including a blood test and determining the state of the patient’s immune system, characterized in that the level of T _γ lymphocytes from peripheral blood is determined before and after incubation with soluble placental factors (AMGF) and with a decrease in F expression _c γR on the surface of T _γ lymphocytes by 12 percent or more with respect to the initial level is diagnosed with the threat of miscarriage.