RU2075934C1 - Method of agent making for plant treatment - Google Patents

Method of agent making for plant treatment Download PDF

Info

Publication number
RU2075934C1
RU2075934C1 RU9696114036A RU96114036A RU2075934C1 RU 2075934 C1 RU2075934 C1 RU 2075934C1 RU 9696114036 A RU9696114036 A RU 9696114036A RU 96114036 A RU96114036 A RU 96114036A RU 2075934 C1 RU2075934 C1 RU 2075934C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
carried out
extraction
biomass
mixture
product
Prior art date
Application number
RU9696114036A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU96114036A (en
Inventor
В.П. Желифонова
О.И. Квасенков
А.И. Кульнев
Original Assignee
Кульнев Анатолий Иванович
Инженерно-маркетинговая фирма "Биотех-Сэприс лимитед" (акционерное общество закрытого типа)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кульнев Анатолий Иванович, Инженерно-маркетинговая фирма "Биотех-Сэприс лимитед" (акционерное общество закрытого типа) filed Critical Кульнев Анатолий Иванович
Priority to RU9696114036A priority Critical patent/RU2075934C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2075934C1 publication Critical patent/RU2075934C1/en
Publication of RU96114036A publication Critical patent/RU96114036A/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: agriculture, biotechnology. SUBSTANCE: method involves the preparing agent by cultivation of micromycetes Mortierella alpina, biomass separation, semiproduct isolation from biomass that contains arachidonic acid derivatives as an active substance and addition to it the additional components for the end product preparing. EFFECT: improved method of preparing. 25 cl

Description

Изобретение относится к технологии производства средств для иммунизации и регулирования роста растений. The invention relates to the production technology of means for immunization and regulation of plant growth.

Известен способ производства средства для обработки растений, предусматривающий культивирование микромицета Mortierella hygrophila ВКМ F-1854, отделение биомассы, выделение из нее полупродукта, содержащего в качестве активного начала этиловый или метиловый эфиры арахидоновой кислоты и введение в него дополнительных компонентов для получения целевого продукта (RU, патент N 2058078, кл. А 01 N 63/04, 1996). A known method of manufacturing a plant treatment product, comprising cultivating a micromycete Mortierella hygrophila VKM F-1854, separating biomass, isolating an intermediate from it containing arachidonic acid ethyl or methyl esters as an active principle and introducing additional components into it to obtain the target product (RU, Patent N 2058078, class A 01 N 63/04, 1996).

Недостатком этого способа является использование узкой сырьевой базы, содержащей малое количество активного начала и узкий спектр действия получаемого средства, ограниченный только иммунизацией. The disadvantage of this method is the use of a narrow raw material base containing a small amount of active principle and a narrow spectrum of action of the obtained funds, limited only by immunization.

Целью изобретения является расширение сырьевой базы и повышение выхода активного начала из сырья, а также расширение спектра действия получаемого средства. The aim of the invention is to expand the raw material base and increase the yield of active principle from raw materials, as well as expanding the spectrum of action of the resulting product.

Это достигается тем, что в способе производства средства для обработки растений, предусматривающем культивирование микромицета рода Mortierella, отделение биомассы, выделение из нее полупродукта, содержащего в качестве активного начала производные арахидоновой кислоты, и введение в него дополнительных компонентов для получения целевого продукта, из микромицентов рода Mortierella используют вид Mortierella alpina. This is achieved by the fact that in a method for producing a plant treatment product, comprising cultivating a micromycete of the genus Mortierella, separating biomass, isolating from it an intermediate product containing arachidonic acid derivatives as an active principle, and introducing additional components into it to obtain the target product, from micromycetes of the genus Mortierella use the species Mortierella alpina.

Это позволяет увеличить выход активного начала, расширить сырьевую базу и получить средство, обладающее более широким спектром действия за счет возможности получения активного начала в виде кислоты и появления в выделенном полупродукте эйкозапентаеновой кислоты или ее низших алкиловых эфиров. This allows you to increase the yield of the active principle, expand the raw material base and obtain a tool with a wider spectrum of action due to the possibility of obtaining the active principle in the form of an acid and the appearance of eicosapentaenoic acid or its lower alkyl esters in the isolated intermediate.

В предпочтительном варианте изобретения предусмотрено выделение полупродукта из биомассы путем экстрагирования, желательно с использованием в качестве экстрагента метилового и/или этилового спирта и/или предельных или непредельных углеводородов, содержащих 5-10 атомов углерода в молекуле, и/или их галогенпроизводных, и/или сжиженных газов, выбранных из группы, включающей инертные газы, азот, закись азота, двуокись углерода, предельные и непредельные углеводороды, содержащие до 4 атомов углерода в молекуле, их галогенпроизводные и их смеси. In a preferred embodiment of the invention, it is possible to isolate the intermediate from biomass by extraction, preferably using methyl and / or ethyl alcohol and / or saturated or unsaturated hydrocarbons containing 5-10 carbon atoms in the molecule and / or their halogen derivatives as extractant, and / or liquefied gases selected from the group consisting of inert gases, nitrogen, nitrous oxide, carbon dioxide, saturated and unsaturated hydrocarbons containing up to 4 carbon atoms in a molecule, their halogen derivatives and their mixtures and.

Это позволяет получить препарат с минимальным содержанием сопутствующих веществ за счет селективности экстрагентов. This allows you to get a drug with a minimum content of related substances due to the selectivity of extractants.

В этом случае возможно интенсифицировать процесс получения полупродукта за счет осуществления экстрагирования в поле СВЧ, или в электростатическом поле высокой напряженности, или в постоянном или переменном магнитном поле, или в поле ультразвуковых колебаний. В последнем случае желательно создавать ультразвуковые колебания путем конденсации в экстракционной смеси паров экстрагента. Это позволяет одновременно интенсифицировать процесс выделения полупродукта и снизить его энергоемкость. In this case, it is possible to intensify the process of obtaining the intermediate by extracting in the microwave field, or in the electrostatic field of high intensity, or in a constant or alternating magnetic field, or in the field of ultrasonic vibrations. In the latter case, it is desirable to create ultrasonic vibrations by condensation of the extractant vapor in the extraction mixture. This allows you to simultaneously intensify the process of separation of the intermediate product and reduce its energy intensity.

В этом же случае возможно проведение перед экстрагированием гидролиза, или ферментолиза, или плазмолиза, или радиолиза биомассы. In the same case, hydrolysis, or fermentolysis, or plasmolysis, or radiolysis of biomass is possible before extraction.

Это позволяет повысить выход полупродукта. This allows you to increase the yield of the intermediate.

В этом же случае также возможно проведение концентрирования экстракта, предпочтительно упариванием или мембранных методом. In the same case, it is also possible to concentrate the extract, preferably by evaporation or by the membrane method.

Это позволяет сократить расход экстрагента. This reduces the consumption of extractant.

Также в этом же случае возможно осуществление сушки биомассы перед экстрагированием, предпочтительно путем лиофилизации. Also in this case, it is possible to carry out drying of the biomass before extraction, preferably by lyophilization.

Это облегчает экстракционное выделение полупродукта, а в последнем случае сокращает технологические потери активного начала. В этом же случае возможно осуществление обработки биомассы перед экстрагированием низшим спиртом или смесью низших спиртов, наиболее желательно в присутствии минеральной кислоты или ацетилхлорида. Это позволяет сократить выход сопутствующих веществ в процессе экстрагирования. This facilitates the extraction extraction of the intermediate, and in the latter case reduces the technological loss of the active principle. In the same case, it is possible to carry out the processing of biomass before extraction with a lower alcohol or a mixture of lower alcohols, most preferably in the presence of a mineral acid or acetyl chloride. This allows you to reduce the yield of related substances in the extraction process.

В другом предпочтительном варианте воплощения изобретения предусмотрено дополнительное введение в полупродукт воды и/или низших спиртов с получением целевого продукта в жидкой товарной форме, при этом целесообразно фасовать смесь в герметичную тару, наиболее целесообразно в газовой среде, содержащей инертные газы, и/или азот, и/или закись азота, и/или двуокись углерода. Это позволяет получить средство в жидкой товарной форме с увеличенным сроком хранения. In another preferred embodiment, the invention provides for the additional introduction of water and / or lower alcohols into the intermediate product to obtain the target product in liquid commodity form, it being advisable to pack the mixture in sealed containers, most preferably in a gaseous medium containing inert gases and / or nitrogen, and / or nitrous oxide and / or carbon dioxide. This allows you to get the tool in liquid commodity form with an extended shelf life.

В другом предпочтительном варианте в полупродукт дополнительно вводят твердый наполнитель, антислеживатель и смачиватель с получением твердой товарной формы. Это позволяет расширить ассортимент готовой продукции и облегчить возможность ее хранения. In another preferred embodiment, a solid filler, an anti-caking agent, and a wetting agent are further added to the intermediate to form a solid commodity form. This allows you to expand the range of finished products and facilitate the possibility of its storage.

В этом случае возможно осуществлять таблетирование или гранулирование смеси, а также фасовку в герметичную тару или герметичную упаковку, наиболее предпочтительно в газовой среде состава, аналогичного указанному выше. Это позволяет получить средство длительного срока хранения. In this case, it is possible to carry out tabletting or granulation of the mixture, as well as packing in sealed containers or sealed packaging, most preferably in a gaseous medium of a composition similar to the above. This allows you to get a tool for a long shelf life.

Еще одним предпочтительным вариантом предусмотрено введение в полупродукт антиоксиданта. Это позволяет дополнительно повысить срок хранения полупродукта. Another preferred option is the introduction of an intermediate antioxidant. This allows you to further increase the shelf life of the intermediate.

Способ реализуется следующим образом. The method is implemented as follows.

Микромицет вида Mortierella alpina культивируют на питательных средах до максимального накопления биомассы, последнюю отделяют от культуральной жидкости. Micromycetes of the species Mortierella alpina are cultivated on nutrient media to the maximum accumulation of biomass, the latter is separated from the culture fluid.

В зависимости от состава используемого субстрата и условий культивирования в биомассе накапливается от 8 до 27% в пересчете на сухое вещество арахидоновой кислоты и до 2,5% эйкозапентаеновой кислоты. В контрольных опытах на микромицете Mortierella hygrophila ВКМ F-1854 биомасса содержала не более 3% арахидоновой кислоты, а эйкозапентаеновая кислота ни в одном из случаев не была обнаружена. Depending on the composition of the substrate used and cultivation conditions, from 8 to 27%, calculated on the dry matter of arachidonic acid and up to 2.5% eicosapentaenoic acid, accumulate in the biomass. In control experiments on micromycete Mortierella hygrophila VKM F-1854, the biomass contained no more than 3% arachidonic acid, and eicosapentaenoic acid was not detected in any of the cases.

Далее из отделенной биомассы непосредственно или после подготовки извлекают полупродукт, содержащий в качестве активного начала арахидоновую кислоту или ее низшие алкиловые эфиры, а также в ряде случаев эйкозапентаеновую кислоту или ее низшие алкиловые эфиры. Then, a semi-product containing arachidonic acid or its lower alkyl esters, as well as in some cases eicosapentaenoic acid or its lower alkyl ethers, is extracted directly or immediately after preparation from the separated biomass.

В качестве подготовки к извлечению полупродукта может быть осуществлена сушка биомассы, желательно лиофильная для максимального сохранения действующего начала. Для разрушения клеточных мембран грибов и облегчения выхода содержимого может быть использован гидролиз, ферментолиз, плазмолиз или радиолиз. Для облегчения очистки полупродукта от сопутствующих веществ биомассу можно обработать низшими спиртами, одним или несколькими, при этом для ускорения процесса образования эфиров жирных кислот этерификацию проводят в присутствии минеральной кислоты, например серной или соляной, или ацетилхлорида. Их добавление нецелесообразно в случае предварительного проведения кислотного гидролиза. In preparation for the extraction of the intermediate product, biomass can be dried, preferably lyophilic, to maximize the preservation of the active principle. To destroy the cell membranes of fungi and facilitate the release of contents, hydrolysis, fermentolysis, plasmolysis or radiolysis can be used. To facilitate the purification of the intermediate product from the accompanying substances, the biomass can be treated with lower alcohols, one or more, and in order to accelerate the formation of fatty acid esters, the esterification is carried out in the presence of a mineral acid, for example sulfuric or hydrochloric, or acetyl chloride. Their addition is impractical in case of preliminary acid hydrolysis.

Выделение полупродукта из биомассы возможно осуществлять прессованием, но наиболее целесообразно осуществлять методом экстрагирования. Этот метод позволяет извлекать любые вещества наиболее полно. В то же время для снижения выхода из биомассы сопутствующих веществ экстрагент следует выбирать из группы, обладающей наибольшей селективностью. В эту группу входят метиловый и этиловый спирты, предельные и непредельные углеводороды, содержащие 5-10 атомов углерода в молекуле, и их галогенпроизводные, а также сжиженные газы, включающие инертные, азот, закись азота, двуокись углерода, предельные и непредельные углеводороды, содержащие до 4 атомов углерода в молекуле, и их галогенпроизводные, и смеси перечисленных экстрагентов. It is possible to isolate the intermediate from biomass by pressing, but it is most expedient to carry out the extraction method. This method allows you to extract any substance most fully. At the same time, to reduce the yield of associated substances from biomass, the extractant should be selected from the group with the highest selectivity. This group includes methyl and ethyl alcohols, saturated and unsaturated hydrocarbons containing 5-10 carbon atoms in the molecule, and their halogen derivatives, as well as liquefied gases, including inert, nitrogen, nitrous oxide, carbon dioxide, saturated and unsaturated hydrocarbons containing up to 4 carbon atoms in the molecule, and their halogen derivatives, and mixtures of the listed extractants.

Процесс экстрагирования может быть интенсифицирован рядом методов, не изменяющих селективность экстрагентов. К ним относятся проведение экстрагирования в поле СВЧ, в электростатическом поле высокой напряженности, в постоянном или переменном магнитном поле и в поле ультразвуковых колебаний. Они также не оказывают влияния на химический состав извлекаемых жирных кислот или их эфиров, которые не претерпевают превращений под действием перечисленных факторов. The extraction process can be intensified by a number of methods that do not change the selectivity of the extractants. These include extraction in a microwave field, in an electrostatic field of high tension, in a constant or alternating magnetic field and in the field of ultrasonic vibrations. They also do not affect the chemical composition of recoverable fatty acids or their esters, which do not undergo transformations under the influence of these factors.

В случае экстракционного извлечения полупродукта его концентрация в экстрагенте может составлять от нескольких сотых до нескольких десятых долей процента. Использование полупродукта в таком виде в целях длительного хранения или производства твердых товарных форм нецелесообразно. В этом случае проводят концентрирование экстракта путем упаривания в случае использования низкокипящего экстрагента или путем мембранного разделения в случае, если температура кипения экстрагента превышает безопасный предел тепловой обработки ненасыщенных жирных кислот. In the case of extraction extraction of the intermediate product, its concentration in the extractant may be from several hundredths to several tenths of a percent. The use of the intermediate in this form for the long-term storage or production of solid commodity forms is impractical. In this case, the extract is concentrated by evaporation in the case of using a low-boiling extractant or by membrane separation if the boiling point of the extractant exceeds the safe limit of heat treatment of unsaturated fatty acids.

В случае, когда осуществляется концентрирование экстракта упариванием, наиболее целесообразным представляется использование образующихся паров для интенсификации процесса экстрагирования путем создания ультразвуковых колебаний в экстракционной смеси при конденсации в ней барботируемых паров экстрагента. В этом случае достигается снижение энергопотребления за счет утилизации энергии фазового перехода экстрагента. In the case when the extract is concentrated by evaporation, it is most appropriate to use the generated vapors to intensify the extraction process by creating ultrasonic vibrations in the extraction mixture during condensation of the sparged vapors of the extractant in it. In this case, a reduction in energy consumption is achieved by utilizing the energy of the phase transition of the extractant.

Выделенный таким образом полупродукт в дальнейшем используется для приготовления целевого продукта в твердой или жидкой товарной форме. Полупродукт содержит смесь жирных кислот или их низших алкиловых эфиров, в которую входят арахидоновая кислота или ее эфиры и, в ряде случаев, эйкозапентаеновая кислота или ее эфиры, являющиеся активным началом получаемых средств. The intermediate thus selected is subsequently used to prepare the target product in solid or liquid marketable form. The intermediate product contains a mixture of fatty acids or their lower alkyl esters, which includes arachidonic acid or its esters and, in some cases, eicosapentaenoic acid or its esters, which are the active principle of the funds obtained.

В отличии от полупродукта, получаемого по способу-прототипу, который содержит только эфиры арахидоновой кислоты в количестве 10-45% от суммы жирных кислот, полупродукт, получаемый по предлагаемому способу, содержит арахидоновую кислоту в количестве 30-50% от суммы жирных кислот и до 10% эйкозапентаеновой кислоты от суммы жирных кислот. In contrast to the intermediate obtained by the prototype method, which contains only arachidonic acid esters in the amount of 10-45% of the total fatty acids, the intermediate obtained by the proposed method contains arachidonic acid in the amount of 30-50% of the total fatty acids and 10% eicosapentaenoic acid of the amount of fatty acids.

Для получения жидкой товарной формы в полупродукт вводят воду и/или низшие спирты. В таком виде готовый продукт может быть использован непосредственно после приготовления или расфасован для длительного хранения в герметичную тару, например пузырьки или ампулы. Для получения твердой товарной формы в полупродукт вводят твердый наполнитель, антислеживатель и смачиватель. Твердая товарная форма, как правило, не используется непосредственно после приготовления, а предназначается для длительного хранения, поэтому ее фасуют или упаковывают герметично. Для облегчения дозирования средства в твердой товарной форме осуществляют гранулирование или таблетирование порошка перед фасовкой или упаковкой. To obtain a liquid commodity form, water and / or lower alcohols are introduced into the intermediate. In this form, the finished product can be used immediately after preparation or packaged for long-term storage in sealed containers, such as vials or ampoules. To obtain a solid commodity form, a solid filler, an anti-caking agent and a wetting agent are introduced into the intermediate. The solid commodity form, as a rule, is not used immediately after preparation, but is intended for long-term storage, therefore it is packaged or packaged hermetically. To facilitate the dosing of the product in solid commodity form, granulation or tabletting of the powder is carried out before packing or packaging.

Как твердая, так и жидкая товарная форма целевого продукта могут содержать микроэлементы и/или антиоксидант. Их вводят в состав композиции на стадии приготовления товарной формы. Микроэлементы способствуют расширению спектра действия и усилению эффективности применения средства, а антиоксидант способствует увеличению срока хранения средства за счет предотвращения окисления ненасыщенных жирных кислот, являющихся активным началом получаемого средства. Both solid and liquid commodity form of the target product may contain trace elements and / or antioxidant. They are introduced into the composition at the stage of preparation of the commodity form. Microelements contribute to the expansion of the spectrum of action and increase the effectiveness of the use of the product, and the antioxidant helps to increase the shelf life of the product by preventing the oxidation of unsaturated fatty acids, which are the active principle of the product.

Поскольку химические изменения ненасыщенных жирных кислот, в первую очередь, связаны с окислением кислородом воздуха, то рекомендуется весь технологический процесс, а особенно фасовку или упаковку, осуществлять в среде газа, не способного к химической реакции с веществами активного начала средства. К ним относятся инертные газы, азот, закись азота, двуокись углерода и их смеси. Продукт, полученный в среде этих газов, хранится практически без изменения химического состава в течение трех лет. Since chemical changes in unsaturated fatty acids are primarily associated with oxidation of oxygen by the air, it is recommended that the entire process, and especially packaging or packaging, be carried out in a gas environment that is not capable of chemical reaction with the substances of the active principle of the agent. These include inert gases, nitrogen, nitrous oxide, carbon dioxide and mixtures thereof. The product obtained in the environment of these gases is stored with virtually no change in chemical composition for three years.

Применение полученного таким образом средства при обработке растений показало, что оно обладает иммуностимулирующей активностью против различных патогенных грибов, бактерий, вирусов и нематод, а также стимулирует рост растений, что не было характерно для средства, полученного по способу-прототипу. The use of the thus obtained product in the treatment of plants showed that it has immunostimulating activity against various pathogenic fungi, bacteria, viruses and nematodes, and also stimulates the growth of plants, which was not typical for the product obtained by the prototype method.

Пример 1. Было исследовано 5 вариантов почв из окрестностей г.Пущино Московской области. Почвенную суспензию в разведении 1:100-1:10000 высевали на чашки Петри с 5 вариантами сред: агар с разведенным суслом (1:9); голодный агар; картофельный агар с 0,5% глюкозы; среда Чапека с 0,5% глюкозы; почвенная агаризованная среда. Начальная рН сред составляла 5,0-5,5, температура культивирования 25oС.Example 1. It was investigated 5 soil options from the vicinity of Pushchino, Moscow region. A soil suspension at a dilution of 1: 100-1: 10000 was sown on Petri dishes with 5 media options: agar with diluted wort (1: 9); hungry agar; potato agar with 0.5% glucose; Chapek's medium with 0.5% glucose; agarized soil environment. The initial pH of the medium was 5.0-5.5, the temperature of cultivation 25 o C.

В течение 14 сут ежедневно наблюдали за ростом и проводили примерную идентификацию выросших грибов. Отбирались грибы, принадлежащие по морфологическим признакам к порядку Mucorales семейства Mortierellaceae, для которых характерны пушистый бесцветный мицелий без перегородок, распространяющийся концентрическими зонами или лопастями при полном отсутствии или слабом спорангиальном спороношении характерной структуры. В результате проведенной работы было отобрано 5 изолятов, с которыми была проведена селекция продуцентов арахидоновой кислоты микробиологическим методом. Отобранные изоляты пересевали на глюкозокартофельный агар с ацетилсалициловой кислотой. Среда содержала, г/л: отвар картофеля 100, глюкоза 10, агар 20, ацетилсалициловая кислота 0,84. Ацетилсалициловую кислоту растворяли в этаноле и вносили в стерильную среду. Культивирование проводили при 25oС в течение 14 сут. В процессе исследований из 5 отобранных изолятов один не рос на данной среде с ацетилсалициловой кислотой. Дальнейшую работу проводили с данным изолятом с присвоенным номером БС-1. Была проведена идентификация данного штамма, изучен его жирнокислотный состав. На сусло-агаре при 28oС культура семидневной колонии белая, пушистая. Высота воздушного мицелия 1,0-1,5 см. Скорость роста мицелия на чашках Петри при 28oС составляет 5-6 мм в сутки.Температурный оптиум для роста мицелия 28oС. От места инокуляции агаровой среды мицелий распространяется концентрическими зонами или лопастями в виде неправильной розетки. Гифы бесцветные, их ширина 5-7 мкм, длина 10-60 мкм. Слабо спороносят на сусло-агаре, хорошо на голодном агаре. Спорангиеносцы шиловидные, 60-150 мкм, диаметр у верхушки 2-4 мкм, у оснований 6-16 мкм, отходят от субстрата. Спорангии округлые с бугристыми выступами, у основания часто слегка приплюснутые, диаметр 10-20 мкм, четырехспоровые. Спорагиоспоры эллиптически-цилиндрические, 4-5,5х1,5-2,5 мкм, обычно с 1-2 каплями жира. Данные морфологические признаки соответствуют Mortierella alpina Peyronel, входящему в семейство Mortierellacea порядок Mucorales класс Phycomycetes отдел Mycophyta (Милко А.А. Определитель мукоральных грибов. Киев: Наукова думка, 1974).For 14 days, growth was monitored daily and approximate identification of grown mushrooms was carried out. Mushrooms belonging to the order of Mucorales of the Mortierellaceae family, which are characterized by fluffy colorless mycelium without partitions, spreading in concentric zones or lobes with complete absence or weak sporangial sporulation of the characteristic structure, were selected by morphological characters. As a result of the work, 5 isolates were selected, with which the selection of arachidonic acid producers was carried out using the microbiological method. Selected isolates were subcultured on glucose-potato agar with acetylsalicylic acid. The medium contained, g / l: potato broth 100, glucose 10, agar 20, acetylsalicylic acid 0.84. Acetylsalicylic acid was dissolved in ethanol and introduced into a sterile medium. Cultivation was carried out at 25 o C for 14 days. In the course of research, of the 5 selected isolates, one did not grow on this medium with acetylsalicylic acid. Further work was carried out with this isolate with the assigned number BS-1. This strain was identified and its fatty acid composition was studied. On wort agar at 28 o C, the culture of the seven-day colony is white, fluffy. The height of the aerial mycelium is 1.0-1.5 cm. The growth rate of mycelium on Petri dishes at 28 o C is 5-6 mm per day. The temperature optium for the growth of mycelium is 28 o C. From the site of inoculation of the agar medium, the mycelium spreads in concentric zones or blades in the form of the wrong outlet. Hyphae are colorless, their width is 5-7 microns, length is 10-60 microns. Weakly spore on wort agar, well on hungry agar. Sporangiophores are awl-shaped, 60-150 microns, diameter at apex 2-4 microns, at bases 6-16 microns, depart from the substrate. Sporangia are rounded with tuberous protrusions, often slightly flattened at the base, 10-20 microns in diameter, four-spore. Sporagiospores are elliptical cylindrical, 4-5.5 x 1.5-2.5 microns, usually with 1-2 drops of fat. These morphological characters correspond to Mortierella alpina Peyronel, a member of the Mortierellacea family, order Mucorales class Phycomycetes division Mycophyta (Milko A.A. Key to mucoral fungi. Kiev: Naukova Dumka, 1974).

Средство готовят путем культивирования выделенного, как описано выше, из почвы штамма микромицета Mortierella alpina до максимального накопления мицелиальной массы, ее лиофильной сушкой, метанолизом в присутствии соляной кислоты, экстрагированием этанолом, добавлением бутилокситолуола разбавлением экстракта водой. Полученное средство используют для обработки семян пшеницы сорта Скифянка из расчета 0,5 мг на 1 т семян. Всхожесть по сравнению с контролем повышена на 18% энергия прорастания на 20% При дополнительной обработке вегетирующих растений развитие корневых гнилей фузариозно-церкоспореллезного типа снизилась на 35-53% урожайность повысилась на 5-6 ц/га. При опрыскивании посевов развитие мучнистой росы снизилось на 68-75% септориозной пятнистости на 36-41% фитофторозной на 37-47% заспоренность семян возбудителями альтернариоза при обработке посевов в период колошения снизилась в 6 раз. The agent is prepared by culturing the strain Mortierella alpina isolated from the soil from the soil to the maximum accumulation of the mycelial mass, freeze drying it, methanolysis in the presence of hydrochloric acid, extracting with ethanol, adding butyloxytoluene with diluting the extract with water. The resulting tool is used to treat wheat seeds of the Skifyanka variety at the rate of 0.5 mg per 1 ton of seeds. Germination compared to control increased by 18%, germination energy by 20%. With additional treatment of vegetative plants, the development of root rot of the fusarium-cercosporellosis type decreased by 35-53%, the yield increased by 5-6 c / ha. When spraying crops, the development of powdery mildew decreased by 68-75% septorious spotting by 36-41% late blight, by 37-47%, seed contamination by pathogens of alternariosis during processing of crops during the heading period decreased by 6 times.

Пример 2. Средство готовят путем культивирования штамма Mortierella alpina, выделенного из почвы по примеру 1, до максимального накопления мицелиальной массы, отделения биомассы, сушки под вакуумом при 55oС, экстрагирования в непрерывном потоке жидкой двуокиси углерода в поле ультразвуковых колебаний, создаваемых при конденсации в экстракционной смеси паров экстрагента, при температуре 20oС и давлении 6,7 МПа, выделения полупродукта из экстракта при повышении температуры до 40oС, его смешивания с мочевиной, раствором бутилокситолуола в гексане, компонентами "Твин-20" и "Аэросил АМ-1-300" и микроэлементами калием, марганцем и медью. Полученное средство таблетируют и упаковывают в блистеры в атмосфере, содержащей аргон с примесями других инертных газов. После хранения в течение 3 лет средство растворяют в воде и проводят обработку огурцов сорта Королек на стадии предпосадочной из расчета 1 мг активного начала на 1 т семян и на вегетирующих растениях из расчета 10 мг активного начала на 1 га посадки. Облиственность по сравнению с контролем увеличилась на 21,4% мучнистая роса устранена полностью, вирус-стрик полностью, заболевания черной бактериальной пятнистостью снижены вдвое, зараженность галловыми нематодами снижена в 3 раза, количество плодов увеличилось на 50%
Таким образом, предлагаемый способ позволяет при расширении сырьевой базы получить средства для обработки растений в жидкой и твердой товарных формах, обладающие как иммуностимулирующей активностью, так и являющиеся регуляторами роста.
Example 2. The tool is prepared by culturing a strain of Mortierella alpina, isolated from the soil according to example 1, to the maximum accumulation of mycelial mass, separation of biomass, drying under vacuum at 55 o C, extraction in a continuous stream of liquid carbon dioxide in the field of ultrasonic vibrations generated by condensation in the extraction mixture extractant vapors at a temperature of 20 o C and a pressure of 6.7 MPa, the intermediate isolation of the extract as the temperature rises to 40 o C, it is mixed with urea solution of butylhydroxytoluene in hexane, to nents "Tween 20" and "AEROSIL AM-1-300" and trace elements potassium, manganese and copper. The resulting product is tabletted and packaged in blisters in an atmosphere containing argon with impurities of other inert gases. After storage for 3 years, the product is dissolved in water and the Korolek cucumbers are treated at the preplant stage at the rate of 1 mg of active principle per 1 ton of seeds and on vegetative plants at the rate of 10 mg of active principle per 1 ha of planting. Compared to the control, vagalism increased by 21.4%; powdery mildew was completely eliminated, the strick virus was completely eliminated, black bacterial spotting diseases were halved, gall nematode infection was reduced by 3 times, the number of fruits increased by 50%
Thus, the proposed method allows for the expansion of the raw material base to obtain funds for the treatment of plants in liquid and solid commodity forms that have both immunostimulating activity and are growth regulators.

Claims (25)

1. Способ производства средства для обработки растений, предусматривающий культивирование микромицета рода Mortierella, отделение биомассы, выделение из нее полупродукта, содержащего в качестве активного начала производные арахидоновой кислоты, и введение в него дополнительных компонентов для получения целевого продукта, отличающийся тем, что из микромицетов рода Mortierella используют вид Mortierella alpina. 1. A method of manufacturing a plant treatment product, comprising cultivating a micromycete of the genus Mortierella, separating biomass, isolating from it an intermediate product containing arachidonic acid derivatives as an active principle, and introducing additional components into it to obtain the target product, characterized in that it is from micromycetes of the genus Mortierella use the species Mortierella alpina. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выделение полупродукта из биомассы осуществляют путем экстрагирования. 2. The method according to p. 1, characterized in that the selection of the intermediate from biomass is carried out by extraction. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве экстрагента используют метиловый, и/или этиловый спирты, и/или предельные или непредельные углеводороды, содержащие 5 10 атомов углерода в молекуле, и/или их галогенпроизводные, и/или сжиженные газы, выбранные из группы, включающей инертные газы, азот, закись азота, двуокись углерода, предельные и непредельные углеводороды, содержащие до 4 атомов углерода в молекуле, их галогенпроизводные и их смеси. 3. The method according to p. 2, characterized in that as the extractant use methyl, and / or ethyl alcohols, and / or saturated or unsaturated hydrocarbons containing 5 to 10 carbon atoms in the molecule, and / or their halogen derivatives, and / or liquefied gases selected from the group consisting of inert gases, nitrogen, nitrous oxide, carbon dioxide, saturated and unsaturated hydrocarbons containing up to 4 carbon atoms in a molecule, their halogen derivatives and mixtures thereof. 4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что экстрагирование осуществляют в поле СВЧ. 4. The method according to p. 2, characterized in that the extraction is carried out in the microwave field. 5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что экстрагирование осуществляют в электростатическом поле высокой напряженности. 5. The method according to p. 2, characterized in that the extraction is carried out in an electrostatic field of high tension. 6. Способ по п. 2, отличающийся тем, что экстрагирование осуществляют в постоянном или переменном магнитном поле. 6. The method according to p. 2, characterized in that the extraction is carried out in a constant or alternating magnetic field. 7. Способ по любому из пп. 2 6, отличающийся тем, что экстрагирование осуществляют в поле ультразвуковых колебаний. 7. The method according to any one of paragraphs. 2 to 6, characterized in that the extraction is carried out in the field of ultrasonic vibrations. 8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что ультразвуковые колебания создают путем конденсации в экстракционной смеси паров экстрагента. 8. The method according to p. 7, characterized in that the ultrasonic vibrations are created by condensation of the extractant vapor in the extraction mixture. 9. Способ по п. 2, отличающийся тем, что перед экстрагированием проводят гидролиз, или ферментолиз, или плазмолиз, или радиолиз биомассы. 9. The method according to p. 2, characterized in that before extraction, hydrolysis, or fermentolysis, or plasmolysis, or radiolysis of biomass is carried out. 10. Способ по п. 2, отличающийся тем, что экстракт концентрируют. 10. The method according to p. 2, characterized in that the extract is concentrated. 11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что концентрирование осуществляют упариванием. 11. The method according to p. 10, characterized in that the concentration is carried out by evaporation. 12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что концентрирование осуществляют мембранным методом. 12. The method according to p. 10, characterized in that the concentration is carried out by the membrane method. 13. Способ по п. 2, отличающийся тем, что биомассы перед экстрагированием сушат. 13. The method according to p. 2, characterized in that the biomass is dried before extraction. 14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что сушку осуществляют путем лиофилизации. 14. The method according to p. 13, characterized in that the drying is carried out by lyophilization. 15. Способ по п. 2, отличающийся тем, что биомассу перед экстрагированием обрабатывают низшим спиртом или смесью низших спиртов. 15. The method according to p. 2, characterized in that the biomass before extraction is treated with a lower alcohol or a mixture of lower alcohols. 16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что обработку спиртом или смесью спиртов осуществляют в присутствии минеральной кислоты или ацетилхлорида. 16. The method according to p. 15, characterized in that the treatment with an alcohol or a mixture of alcohols is carried out in the presence of a mineral acid or acetyl chloride. 17. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве дополнительных компонентов в полупродукт вводят воду и/или низшие спирты. 17. The method according to p. 1, characterized in that as additional components in the intermediate product is introduced water and / or lower alcohols. 18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что после введения дополнительных компонентов смесь фасуют в герметичную тару. 18. The method according to p. 17, characterized in that after the introduction of additional components, the mixture is Packed in a sealed container. 19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что фасовку осуществляют в газовой среде, содержащей инертные газы, и/или азот, и/или закись азота, и/или двуокись углерода. 19. The method according to p. 18, characterized in that the packing is carried out in a gaseous medium containing inert gases and / or nitrogen and / or nitrous oxide and / or carbon dioxide. 20. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве дополнительных компонентов в полупродукт вводят твердый наполнитель, антислеживатель и смачиватель. 20. The method according to p. 1, characterized in that as additional components in the intermediate product is introduced a solid filler, anti-caking agent and wetting agent. 21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что полученную смесь таблетируют. 21. The method according to p. 20, characterized in that the resulting mixture is tableted. 22. Способ по п. 20, отличающийся тем, что полученную смесь гранулируют. 22. The method according to p. 20, characterized in that the resulting mixture is granulated. 23. Способ по п. 21 или 22, отличающийся тем, что гранулы или таблетки фасуют в герметичную тару или упаковку. 23. The method according to p. 21 or 22, characterized in that the granules or tablets are Packed in sealed containers or packaging. 24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что фасовку осуществляют в газовой среде, содержащей инертные газы, и/или азот, и/или закись азота, и/или двуокись углерода. 24. The method according to p. 23, characterized in that the packaging is carried out in a gaseous medium containing inert gases and / or nitrogen and / or nitrous oxide and / or carbon dioxide. 25. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в полупродукт дополнительно вводят антиоксидант. 25. The method according to claim 1, characterized in that the antioxidant is additionally added to the intermediate.
RU9696114036A 1996-07-25 1996-07-25 Method of agent making for plant treatment RU2075934C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU9696114036A RU2075934C1 (en) 1996-07-25 1996-07-25 Method of agent making for plant treatment

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU9696114036A RU2075934C1 (en) 1996-07-25 1996-07-25 Method of agent making for plant treatment

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2075934C1 true RU2075934C1 (en) 1997-03-27
RU96114036A RU96114036A (en) 1997-09-27

Family

ID=20183136

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU9696114036A RU2075934C1 (en) 1996-07-25 1996-07-25 Method of agent making for plant treatment

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2075934C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2596921C2 (en) * 2013-07-16 2016-09-10 Общество с ограниченной ответственностью "Органик парк" Method of producing base composition of biopreparation for plant growing
RU2683041C1 (en) * 2018-04-03 2019-03-26 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт сои" Mid-ripening soybean varieties seeds pre-sowing treatment method

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Патент РФ N 2058078, кл. A 01 N 63/04, 1996. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2596921C2 (en) * 2013-07-16 2016-09-10 Общество с ограниченной ответственностью "Органик парк" Method of producing base composition of biopreparation for plant growing
RU2683041C1 (en) * 2018-04-03 2019-03-26 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт сои" Mid-ripening soybean varieties seeds pre-sowing treatment method

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2834978T3 (en) Two-phase fermentation process for the production of an isoprenoid
WO2002020727A2 (en) Method for propagating fungi using solid state fermentation
JP2862302B2 (en) Preparation of nematicide
WO2022100568A1 (en) Tricholoma matsutake and method for producing ergothioneine thereby
JPH02196780A (en) Glycosidase-inhibitor sarbostatin and its manufacture
US5246842A (en) Production of eicosapentaenoic acid from filamentous fungi utilizing lactose as a primary carbon source
RU2075934C1 (en) Method of agent making for plant treatment
AU2020102899A4 (en) A Method for Producing Glutathione by Fermentation of s. cerevisiae L5267
AU2001253340B2 (en) Method for producing nematocidal composition by heat treating a pH-adjusted fermentation broth
CN111424005B (en) Strain for producing tyrosine ammonia lyase and application thereof
US20160348063A1 (en) Method for cultivating antrodia cinnamomea and formula composition of a culture medium for cultivating antrodia cinnamomea
Ginterová et al. The relationship between Pleurotus ostreatus and Aspergillus flavus and the production of aflatoxin
RU2116729C1 (en) Method of production of an agent for plant treatment, an agent for plant treatment and method of producing the plant growing production using its
RU2289957C1 (en) Method for production of biologically active product of hepatoprotective action
CA2105527A1 (en) Process for producing .beta.-carotene
Trione et al. Lipids as bioregulators of teliospore germination and sporidial formation in the wheat bunt fungi, Tilletia species
CN107142220B (en) Trichosporon for producing gamma-decalactone and application thereof
FR2480304A1 (en)
RU2647569C1 (en) Method for biofungicide obtaining
KR101856473B1 (en) Method of mass producing eudesmol from fungal cultures of Polyporus brumalis
RU2223650C1 (en) Method for manufacturing agricultural microbiological preparation and method for plant protection against diseases due to application of this preparation
RU2115678C1 (en) Method of lycopin preparing
Pestsov et al. Cultivation of mycelium of the edible fungus Pleurotus ostreatus (oyster mushroom) with the use of wet sparging grain, the waste of the brewing industry.
CN104561135A (en) Method of using trichoderma reesei to produce aromatic substance
Sidorenko et al. Production of submerged mycelium of Laricifomes officinalis (Vill) Kotl. et Pouzar

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20130726