RU2074252C1

RU2074252C1 - Strain of fungus microsporium canis used for immunogenicity vaccine control against animal dermatophytosis

Info

Publication number: RU2074252C1
Application number: RU94029852A
Authority: RU
Inventors: К.П. Летягин; К.А. Саркисов; А.Н. Панин; М.Г. Маноян
Priority date: 1994-08-11
Filing date: 1994-08-11
Publication date: 1997-02-27

Abstract

FIELD: veterinary mycology. SUBSTANCE: invention relates to new strain Microsporium canis showing high level of sporogenesis, population homogeneity, high virulent properties that provide the objective control of vaccine immunogenic activity against dermatophytosis in animals. Strain Microsporium canis is deposited in Microorganism Collection ВГНКИ veterinary preparations at N 20-LTG. For estimation of immunogenic properties of biopreparations the control strain Microsporium canis N 20-LTG provides more stable and reliable results and can be used as standard for epizootic strain virulence study. EFFECT: enhanced effectiveness of immunogenicity control. 1 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к получению штамма Microsporum canis, используемого для контроля иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных, в состав которых в качестве антигена входит гриб Microsporum canis. The invention relates to veterinary mycology, in particular to the production of a strain of Microsporum canis, used to control the immunogenicity of vaccines against dermatophytosis of animals, which include Microsporum canis as an antigen.

Известен штамм гриба Microsporum canis 2084, используемый для контроля иммуногенности вакцин против микроспории животных. Данный штамм обладает характерными, присущими ему культурально-морфологическими, спорообразующими признаками, вирулентными свойствами (Авт. св. СССР N 1336559 51/3 С 12 N 1/14, A 61 K 39/00, 1986). A known strain of the fungus Microsporum canis 2084, used to control the immunogenicity of vaccines against animal microsporia. This strain has characteristic cultural-morphological, spore-forming, virulent properties (Aut. St. USSR N 1336559 51/3 C 12 N 1/14, A 61 K 39/00, 1986).

Недостатком данного штамма является снижение его вирулентных свойств, вследствие преобладания в его популяции слабовирулентных вариантов, неоднородности состава популяции по морфологическим признакам и признаку спорообразования, что приводит к необъективной оценке иммуногенных свойств вакцин против дерматофитозов животных. The disadvantage of this strain is a decrease in its virulent properties, due to the prevalence of weakly virulent variants in its population, heterogeneity of the composition of the population according to morphological characteristics and the sign of spore formation, which leads to a biased assessment of the immunogenic properties of vaccines against dermatophytosis of animals.

Целью изобретения является получение штамма Microsporum canis, обладающего высоким уровнем спорообразования, однородным состав популяции, высокими вирулентными свойствами, обеспечивающими объективный контроль иммуногенной активности вакцин против дерматофитозов животных. The aim of the invention is to obtain a strain of Microsporum canis with a high level of spore formation, homogeneous population composition, high virulent properties, providing objective control of the immunogenic activity of vaccines against dermatophytosis of animals.

Штамм Microsporum canis N с.20 получен от больной микроспорией кошки методом повышения спорообразования,путем ступенчатого отбора колоний, стабильных по культурально-морфологическими признакам, депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер с.20. The strain Microsporum canis N p.20 was obtained from a cat with microsporia by increasing spore formation by stepwise selection of colonies that are culturally and morphologically stable, deposited in the collection of the All-Russian State Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines and has a registration number c. 20.

Штамм Microsporum canis N с.20 характеризуется следующими признаками и свойствами. The strain Microsporum canis N p.20 is characterized by the following features and properties.

Морфологические признаки. Мицелий не окрашен, ровный, ветвистый, септированный. Микроконидии овальные, грушевидные, располагающиеся на поверхности мицелия отдельно или гроздьями, размером 1,5 х 40 мкм. Макроконидии веретенообразные, с двуконтурной оболочкой, многокамерные, до 10 клеток, размером 15-25 х 50-100 мкм. Иногда наблюдаются терминальные, интеркалярные и латеральные хламидоспоры, размером 3-9 мкм в диаметре (обычно образуются в стареющих культурах или при неблагоприятных условиях культивирования). Morphological signs. The mycelium is not colored, smooth, branched, septate. Microconidia are oval, pear-shaped, located on the surface of the mycelium separately or in clusters, 1.5 x 40 microns in size. Macroconidia are spindle-shaped, with a double-contour shell, multi-chamber, up to 10 cells, size 15-25 x 50-100 microns. Sometimes terminal, intercalar and lateral chlamydospores are observed, 3-9 microns in diameter in diameter (usually formed in aging cultures or under adverse culturing conditions).

Культуральные свойства. На сусло-агаре растет в виде колонии приподнятой в центре, иногда сильно складчатой радиально, ближе к растущему краю плоской, пушистой, с паутинистым растущим краем, белого цвета или с бледно кремовым оттенком, диаметр колонии 52-78 мм (20 дней роста). Cultural properties. On wort agar grows in the form of a colony raised in the center, sometimes radially folded, closer to the growing edge, flat, fluffy, with a cobwebby growing edge, white or with a pale cream tint, colony diameter 52-78 mm (20 days of growth).

На агаре Григораки растет в виде колонии приподнятой в центре, сильно складчатой радиально, по периферии почти голой со слабо развитым воздушным мицеллием, ровным растущим краем, белого цвета с кремовым оттенком, реверс не окрашен, вокруг колонии очень слабая зона осветления питательной среды, диаметр колонии 65-68 мм (20 дней роста). On agar, Grigoraki grows in the form of a colony raised in the center, highly folded radially, almost naked on the periphery with a weakly developed aerial mycelium, even growing edge, white with a cream tint, the reverse is not painted, around the colony there is a very weak clarification zone of the nutrient medium, the colony diameter 65-68 mm (20 days of growth).

На картофельном агаре растет в виде плоской колонии, сильно складчатой в центре и приподнятой за счет образования пушистого ватообразного белого мицеллия, по периферии мицелий паутинистый, воздушный мицелий развит слабо, более развит по радиусам колонии, в центре колония белого цвета, по периферии желтоватого, растущий край ровный, реверс бледно-желтый, диаметр колонии 63-65 мм (20 дней роста). On potato agar, it grows in the form of a flat colony, strongly folded in the center and raised due to the formation of a fluffy cotton-like white mycelium, on the periphery of the mycelium is arachnoid, aerial mycelium is poorly developed, more developed along the radius of the colony, in the center a white colony, on the periphery of a yellowish, growing the edge is even, the reverse is pale yellow, the diameter of the colony is 63-65 mm (20 days of growth).

На агаре Чапека-Докса растет в виде прозрачной, паутинистой колонии, мицелий в основном субстратный, но в центре белый воздушный мицелий развит достаточно хорошо, бархатисто-пушистый, иногда идущий от центра по радиусам, растущий край паутинистый, реверс светло желтый, диаметр колонии 72-76 мм (20 дней роста). On Chapek-Doks agar, it grows in the form of a transparent, cobwebly colony, the mycelium is mainly substrate, but in the center the white aerial mycelium is developed quite well, velvety fluffy, sometimes extending from the center along the radii, the growing edge is arachnoid, the reverse is light yellow, the colony diameter is 72 -76 mm (20 days of growth).

Спорообразование: максимальный уровень спорогенеза на сусло-агаре 57,7-138,0 млн/см³.Spore formation: the maximum level of sporogenesis on wort agar is 57.7-138.0 million / cm ³ .

Вирулентные свойства. При аппликации гомогенизированной культуры штамма Microsporum canis N с.20 вместе со средой выращивания (сусло-агар) на эпиллированный и скарифицированный участок кожи площадью 3 х 3 см в пояснично-крестцовой области у кроликов или морских свинок вызывает типичную клинику микроспории. Заражающая доза 0,2-0,5 см³млн/см³ микроконидий. На месте аппликации культуры на 5-8 день отмечается резко выраженная экссудативно-воспалительная реакция, поверхность кожи эрозируется с наслоением на ней толстых дерматофитозных корок. Самовыздоровление животных, в частности кроликов, наблюдается в течение 30-50 дней.Virulent properties. When a homogenized culture of the strain Microsporum canis N p. 20 is applied together with the growth medium (wort agar) to an epilated and scarified skin area of 3 x 3 cm in the lumbosacral region in rabbits or guinea pigs, it causes a typical clinic of microsporia. The infectious dose of 0.2-0.5 cm ³ million / cm ³ microconidia. At the site of application of the culture, a pronounced exudative-inflammatory reaction is noted on days 5-8, the skin surface eroses with layering of thick dermatophytic crusts on it. Self-recovery of animals, in particular rabbits, is observed within 30-50 days.

Субкультуры штамма гриба, выделенные после аппликации культуры M.canis N с.20 из дерматофитозного очага, по своим признакам и свойствам соответствует культурам, взятым для заражения. The subcultures of the fungal strain isolated after application of the culture of M.canis N p.20 from the dermatophytic focus, according to its signs and properties, correspond to the cultures taken for infection.

Биохимические свойства. Штамм M.canis N с.20 активно образует комплекс экзопротеаз при выращивании на жидких питательных средах (Сабуро, Чапека с человеческими волосами). Фильтрат культуральной жидкости, содержащий экзопротеазы, разрушает эмульсионный слой фотопленки в течение 165-210 мин. Biochemical properties. Strain M.canis N p.20 actively forms a complex of exoproteases when grown on liquid nutrient media (Saburo, Capeca with human hair). The filtrate of the culture fluid containing exoproteases destroys the emulsion layer of the film for 165-210 minutes

Штамм M. canis N с. 20 отличается высоким уровнем спорогенеза и вирулентностью, что при заражении ранее не иммунизированных и не болевших дерматофитозом (микроспорией) животных, воспроизводит у них дерматофитозный очаг с классическими признаками заболевания. Данный штамм используют для контроля иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных, в состав которых входят штаммы M.canis. Strain M. canis N s. 20 is distinguished by a high level of sporogenesis and virulence, which, when infected with animals that have not been immunized and have not had dermatophytosis (microsporia), reproduces a dermatophytic focus with classical signs of the disease. This strain is used to control the immunogenicity of vaccines against dermatophytosis in animals, which include M.canis strains.

Пример 1. Культуру штамма Microsporum canis N с.20 выращивают на сусло-агаре в пробирках при температуре 26-28^oС в течение 15-25 дней. В пробирки с выросшей культурой заливают 5 см³ стерильной дистиллированной воды, с помощью микологического крючка готовят суспензию культуры штамма. Суспензию последовательно разводят до необходимой концентрации микроконидий, которая определяется путем подсчета с помощью камеры Горяева. При приготовлении суспензии с необходимой концентрацией микроконидий в нее добавляют сусло-агар перед аппликацией.Example 1. The culture of the strain Microsporum canis N p.20 is grown on wort agar in test tubes at a temperature of 26-28 ^o C for 15-25 days. 5 cm ^{3 of} sterile distilled water is poured into test tubes with grown culture, and a suspension of strain culture is prepared using a mycological hook. The suspension is subsequently diluted to the required concentration of microconidia, which is determined by counting using a Goryaev camera. When preparing a suspension with the required concentration of microconidia, wort agar is added to it before application.

Испытание полученных концентраций (0,5; 0,25; 0,125 млн/см³) проводят на кроликах.The test of the obtained concentrations (0.5; 0.25; 0.125 million / cm ³ ) is carried out on rabbits.

Кроликов заражают общепринятым методом накожно в пояснично-крестцовую область. Оценку вирулентности проводят по длительности переболевания животных, характеру и тяжести инфекционного процесса. Результаты заражения кроликов культурой штамма M.canis N с.20 представлены в таблице. Rabbits are infected with the generally accepted method of cutaneous injection into the lumbosacral region. Assessment of virulence is carried out according to the duration of the disease of the animals, the nature and severity of the infectious process. The results of infection of rabbits with a culture of strain M.canis N p.20 are presented in the table.

Пример 2. Культуру M.canis N с.20 готовят по примеру 1. Отбирают 12 кроликов массой 2,5-3,0 кг, одного возраста, одной породы, иммунизируют вакциной Микродерм в дозе 1 см³, содержащей 40±5 млн/см³ микроконидий, двукратно, с интервалом 10-14 дней. Спустя 40 дней после второй иммунизации 6 иммунизированных (из 12 кpоликов иммунизируют 6) и 6 кроликов контрольной группы (не иммунизированных) экспериментально заражают вирулентной культурой M.canis N с.20 в пояснично-крестцовую область в дозе 0,25 млн/см³ микроконидий.Example 2. Culture M.canis N p.20 is prepared according to example 1. 12 rabbits weighing 2.5-3.0 kg, one age, one breed are selected, immunized with Microderm vaccine in a dose of 1 cm ³ containing 40 ± 5 million / cm ³ microconidia, twice, with an interval of 10-14 days. 40 days after the second immunization, 6 immunized (out of 12 rabbits were immunized 6) and 6 rabbits of the control group (not immunized) were experimentally infected with a virulent culture of M.canis N p.20 in the lumbosacral region at a dose of 0.25 million / cm ^{3 of} microconidia .

Спустя 30 дней после экспериментального заражения, устанавливают отсутствие клинических признаков дерматофитоза у иммунизированных кроликов. У кроликов контрольной группы наблюдают типичную клинику микроспории: дерматофитозный очаг, обычно шелушащийся. Пик развития очага у этих кроликов отмечают на 20-25 день после заражения, с картиной резко выраженной экссудативно-воспалительной эрозии и формированием дерматофитозных корок. 30 days after the experimental infection, the absence of clinical signs of dermatophytosis in immunized rabbits was established. In rabbits of the control group, a typical clinic of microsporia is observed: a dermatophytic focus, usually flaky. The peak of the outbreak in these rabbits is observed on 20-25 days after infection, with a pattern of pronounced exudative-inflammatory erosion and the formation of dermatophytic crusts.

Штамм Microsporum canis N с.20 высоко эффективен при испытании иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных, в состав которых входит M.canis. The strain Microsporum canis N p.20 is highly effective in testing the immunogenicity of vaccines against dermatophytosis in animals, which include M.canis.

Использование культуры штамма M.canis N с.20 на предприятиях-изготовителях вакцин, в учреждениях, применяющих вакцины против дерматофитозов животных, в научно-исследовательских лабораториях позволит с большей достоверностью судить о качестве изготавливаемых биопрепаратов, с возможностью ее применения в качестве эталона при изучении вирулентности эпизоотических штаммов, выделенных из природных источников, в частности от больных дерматофитозом животных. The use of culture of the strain M.canis N p.20 at vaccine manufacturing enterprises, in institutions using vaccines against dermatophytosis of animals, in research laboratories will make it possible to more accurately judge the quality of manufactured biological products, with the possibility of its use as a reference in the study of virulence epizootic strains isolated from natural sources, in particular from animals with dermatophytosis.

Claims

The strain of the fungus Microsporium canis VGNKI N with. 20-DEPT used to control the immunogenicity of vaccines against dermatophytosis in animals.