RU2067094C1

RU2067094C1 - 1,3-dinitroglycerol esters of polyunsaturated fatty acids, hydroxy-derivatives of polyunsaturated fatty acids and prostaglandins and methods of their synthesis

Info

Publication number: RU2067094C1
Application number: RU93045839A
Authority: RU
Inventors: Владимир Виленович Безуглов; Игорь Викторович Серков
Original assignee: Владимир Виленович Безуглов; Игорь Викторович Серков
Priority date: 1993-09-27
Filing date: 1993-09-27
Publication date: 1996-09-27

Abstract

FIELD: organic chemistry. SUBSTANCE: product: 1,3-dinitroglycerol esters of the formula RCOOCH(CH ONO ) where R - residue of polyunsaturated fatty acid, hydroxypolyunsaturated fatty acid or prostaglandin and 3 methods of their synthesis. Proposed compounds were used in extremal biology. EFFECT: improved method of synthesis. 4 cl, 6 tbl

Description

Изобретение относится к органической химии, конкретно к новым биологически активным соединениям производным полиненасыщенных жирных кислот, гидроксиполиненасыщенных жирных кислот и простагландинов общей формулы I:

где R остаток простанландина формулы:

где одна из двух групп у С-9 атома (R₁ или R₂) атом водорода, а другая гидроксил (R₂ или R₁) или R₁ и R₂ вместе образуют кето- или гидроксииминогруппу; и где одна из двух групп у С-11 атома (R₃ или R₄) атом водорода, а другая гидроксил (R₄ или R₃) или R₃ и R₄ вместе образуют кето- или гидроксииминогруппу; при условии, что R₃ и R₄ не образуют кето- или гидроксииминогруппу когда R₁ и R₂ вместе образуют кето- или гидроксииминогруппу; и где одна из двух групп у С-15 атома (R₅ или ₆) атом водорода, а другая (R₆ или R₅) гидроксил или атом фтора; символ

представляет одинарную или цис-двойную связи; или R - остаток простагландина формулы:

где одна из групп у С-9 атома (R₇ или R₈) атом водорода или гидроксил, а другая водород, символ

представляет одинарную или двойную связи, при условии, что R₇ или R₈ не образуют гидроксил, когда С-10 и С-11 атомы соединены двойной связью, или при условии, что если ₇ или R₈ гидроксил С-12 и С-13 атомы соединены транс-двойной связью; и где одна из двух групп у С-15 атома (R₉ или R₁₀) атом водорода, а другая (R₁₀ или R₉) гидроксил;
или R остаток простагландина типа I формулы:

где группа Q у С-5 атома атом йода или брома, символ

представляет одинарную или двойную связи, при условии, что Q не является бромом или йодом, когда С-5 и С-6 атомы соединены двойной связью;
или R остаток полиеновой жирной кислоты формулы:

где а 0 6, f 1 6, b 1 7 при условии, что общая длина углеродной цепи 18-22 атома углерода;
или R остаток гидроксикислоты формулы:

где m 1 7, x 0 4, k 0 4, n 0 3 при условии, что общая длина углеродной цепи 18-22 атома углерода, и способам их получения.The invention relates to organic chemistry, specifically to new biologically active compounds derived from polyunsaturated fatty acids, hydroxypolyunsaturated fatty acids and prostaglandins of the general formula I:

where R is a prostanlandin residue of the formula:

where one of the two groups at the C-9 atom (R ₁ or R ₂ ) is a hydrogen atom and the other hydroxyl (R ₂ or R ₁ ) or R ₁ and R ₂ together form a keto or hydroxyimino group; and where one of the two groups at the C-11 atom (R ₃ or R ₄ ) is a hydrogen atom and the other hydroxyl (R ₄ or R ₃ ) or R ₃ and R ₄ together form a keto or hydroxyimino group; with the proviso that R ₃ and R ₄ do not form a keto or hydroxyimino group when R ₁ and R ₂ together form a keto or hydroxyimino group; and where one of the two groups at the C-15 atom (R ₅ or ₆ ) is a hydrogen atom and the other (R ₆ or R ₅ ) is hydroxyl or a fluorine atom; symbol

represents a single or cis double bond; or R is a prostaglandin residue of the formula:

where one of the groups at the C-9 atom (R ₇ or R ₈ ) is a hydrogen atom or hydroxyl, and the other is hydrogen, the symbol

represents a single or double bond, provided that R ₇ or R ₈ does not form hydroxyl when C-10 and C-11 atoms are connected by a double bond, or provided that if ₇ or R _{8 is} hydroxyl C-12 and C-13 atoms are connected by a trans double bond; and where one of the two groups at the C-15 atom (R ₉ or R ₁₀ ) is a hydrogen atom and the other (R ₁₀ or R ₉ ) is hydroxyl;
or R is a prostaglandin type I residue of the formula:

where the Q group of the C-5 atom is an iodine or bromine atom, the symbol

represents a single or double bond, provided that Q is not bromine or iodine when the C-5 and C-6 atoms are connected by a double bond;
or R is a polyene fatty acid residue of the formula:

where a 0 6, f 1 6, b 1 7 provided that the total length of the carbon chain is 18-22 carbon atoms;
or R is a hydroxy acid residue of the formula:

where m 1 7, x 0 4, k 0 4, n 0 3 provided that the total carbon chain length is 18-22 carbon atoms, and methods for their preparation.

Предлагаемые соединения обладают измененным по сравнению с соответствующими природными соединениями спектром физиологической активности и могут быть использованы в экспериментальной биологии и медицине. The proposed compounds have a modified spectrum of physiological activity compared to the corresponding natural compounds and can be used in experimental biology and medicine.

Изменение спектра физиологической активности заключается в усилении одних видов биологической активности соединения или возникновении новых ранее не характерных для данного типа соединения свойств с одновременным сохранением или ослаблением других видов биологической активности. Полиненасыщенные жирные кислоты, гидроксиполиненасыщенные жирные кислоты и простагландины являются полифункциональными соединениями, для которых характерно одновременное проявление широкого спектра биологической активности, например, сочетание дилататорной (на гладких мышцах бронхов), констрикторной (на гладких мышцах желудочно-кишечного тракта), антиагрегационной (на тромбоцитах), гипо- или гипертензивной активностей. Широкий спектр биологической активности соединений этого класса препятствует их использования в качестве лекарственных препаратов из-за множественных побочных эффектов. Модификация указанных соединений для изменения спектра их биологической активности в сторону уменьшения тех видов активности, которые ответственны за возникновение нежелательных побочных эффектов при одновременном усилении профильных видов биологической активности позволяет обойти эти ограничения. A change in the spectrum of physiological activity consists in enhancing certain types of biological activity of a compound or in the appearance of new properties previously not characteristic of this type of compound, while preserving or attenuating other types of biological activity. Polyunsaturated fatty acids, hydroxypolyunsaturated fatty acids and prostaglandins are multifunctional compounds characterized by the simultaneous manifestation of a wide range of biological activity, for example, a combination of dilator (on the smooth muscles of the bronchi), constrictor (on the smooth muscles of the gastrointestinal tract), and antiplatelet (on the thrombosis) , hypo - or hypertensive activities. A wide range of biological activity of compounds of this class prevents their use as medications due to multiple side effects. Modification of these compounds to change the spectrum of their biological activity in the direction of reducing those types of activity that are responsible for the occurrence of undesirable side effects while enhancing the profile types of biological activity allows you to circumvent these limitations.

Новые соединения общей формулы I обладают, в частности, антиагрегационной активностью, способностью расслаблять гладкую мускулатуру бронхов, аорты, а также гипотензивным действием на лабораторных животных. The new compounds of the general formula I possess, in particular, antiaggregatory activity, the ability to relax the smooth muscles of the bronchi, aorta, and also the hypotensive effect on laboratory animals.

Предлагаемые соединения принадлежат к новому классу так называемых "бинарных" производных полиненасыщенных жирных кислот, гидроксиполиненасыщенных жирных кислот и простанландинов, сочетающих в одной молекуле два фармакофора. Фармакофор химический фрагмент, обладающий определенными фармакологическими свойствами. При правильном сочетании различных фармакофоров в рамках одной молекулы нового вещества происходит существенное усиление физиологических эффектов, присущих обоим исходным фармакофорам, и в ряде случаев для новых, бинарных, соединений характерно появление новых видов биологической активности. При этом новое, бинарное, соединение обладает, как правило, повышенной фармакологической эффективностью и характеризуется уменьшением побочных эффектов. The proposed compounds belong to a new class of so-called "binary" derivatives of polyunsaturated fatty acids, hydroxypolyunsaturated fatty acids and prostanlandins, combining two pharmacophores in one molecule. Pharmacophore is a chemical fragment with certain pharmacological properties. With the correct combination of various pharmacophores within the framework of a single molecule of a new substance, a significant increase in the physiological effects inherent in both initial pharmacophores occurs, and in some cases new, binary compounds are characterized by the appearance of new types of biological activity. In this case, a new, binary, compound has, as a rule, increased pharmacological effectiveness and is characterized by a decrease in side effects.

Для получения предлагаемых соединений использовали в качестве второго, нелипидного, фармакофора химическое соединение, генерирующее окись азота, а именно, 1,3-динитрат глицерина. To obtain the proposed compounds used as a second, non-lipid, pharmacophore chemical compound that generates nitric oxide, namely, 1,3-dinitrate glycerol.

Окись азота (NO) является биологическим медиатором, действующим на многие клетки и ткани организма, как предполагают, через механизм, включающий активацию цитозольной гуанилатциклазы (S.Moncada, E.A.Higge, J.R.Berrazueta "Clinical Relevance of Nitric Oxide in the Cardiovascular System", 1991, Edicomplet, S.A. Spain). Nitric oxide (NO) is a biological mediator that acts on many cells and tissues of the body, as suggested by a mechanism that activates cytosolic guanylate cyclase (S. Moncada, EA Higher, JR Berrazueta "Clinical Relevance of Nitric Oxide in the Cardiovascular System", 1991 , Edicomplet, SA Spain).

Нитровазодилататоры, такие как гитроглицерин, нитросорбит и др. действуют как средства доставки NO в клетке органов и тканей в связанной форме, где NO высвобождается и оказывает свое физиологическое действие наряду с эндогенной окисью азота. Биологические эффекты NO и некоторых простагландинов и гидроксиполиненасыщенных жирных кислот часто близки по своей физиологической направленности, что обусловило выбор динитрата глицерина в качестве второго компонента бинарных соединений, приведенных выше формул. Nitrovasodilators, such as nitroglycerin, nitrosorbitol, etc., act as a means of delivering NO in the cells of organs and tissues in a bound form, where NO is released and exerts its physiological effect along with endogenous nitric oxide. The biological effects of NO and some prostaglandins and hydroxy polyunsaturated fatty acids are often similar in their physiological orientation, which led to the choice of glycerol dinitrate as the second component of the binary compounds of the above formulas.

1,3-Динитроглицериновые эфиры общей формулы I могут быть получены несколькими способами. 1,3-dinitroglycerin esters of the general formula I can be prepared in several ways.

Один из предлагаемых способов заключается в том, что карбоновую кислоту общей формулы II:
R-COOH (II),
где R имеет указанные выше значения, вначале превращают в смещенный ангидрид с арилсульфокислотой обработкой арилсульфохлоридом в органическом растворителе в присутствии третичного амина. Смешанный ангидрид далее конденсируют с 1,3-динитратом глицерина в присутствии диметиламинопиридина.One of the proposed methods is that the carboxylic acid of the General formula II:
R-COOH (II),
where R has the above meanings, first converted to a displaced anhydride with arylsulfonic acid by treatment with arylsulfochloride in an organic solvent in the presence of a tertiary amine. The mixed anhydride is then condensed with glycerol 1,3-dinitrate in the presence of dimethylaminopyridine.

Другой способ получения 1,3-динитроглицериновых эфиров общей формулы I заключается в том, что 1,3-динитрат глицерина конденсируют с имидазолидом, полученным из карбоновой кислоты, общей формулы II, обработкой карбонилдиимидазолом в органическом растворителе, в присутствии гидрохлорида пиридина. Another method for preparing 1,3-dinitroglycerin esters of general formula I is that glycerol 1,3-dinitrate is condensed with an imidazolid obtained from a carboxylic acid of general formula II by treatment with carbonyldiimidazole in an organic solvent in the presence of pyridine hydrochloride.

Третий из предлагаемых способов получения 1,3-динитроглицериновых эфиров общей формулы I заключается в том, что исходную карбоновую кислоту, общей формулы II, обрабатывают вначале смесью, состоящей из гексаметилдисилазана и триметилхлорсилана, при их объемном соотношении 2:1, в органическом растворителе. Полученное сильное производное далее обрабатывают фторирующим реагентом, приготовленным из эквимолярной смеси морфолинотрифторсульфурана и триметилсилилморфолина, в среде органического растворителя при пониженной температуре. Затем к полученной смеси прибавляют 1,3-динитрат глицерина и третичный амин. The third of the proposed methods for producing 1,3-dinitroglycerin esters of the general formula I is that the starting carboxylic acid of the general formula II is first treated with a mixture consisting of hexamethyldisilazane and trimethylchlorosilane, in a volume ratio of 2: 1, in an organic solvent. The resulting strong derivative is further treated with a fluorinating reagent prepared from an equimolar mixture of morpholinotrifluorosulfuran and trimethylsilyl morpholine in an organic solvent at reduced temperature. Then, glycerol 1,3-dinitrate and a tertiary amine are added to the resulting mixture.

Во всех трех предлагаемых способах процесс этерификации проходит с высоким выходом, что позволяет получать от нескольких миллиграмов до нескольких граммов динитроглицериновых эфиров в индивидуальном состоянии. In all three proposed methods, the esterification process takes place in high yield, which allows you to get from several milligrams to several grams of dinitroglycerin esters in an individual state.

Для получения некоторых динитроглицериновых эфиров простагландинов были использованы описанные в литературе способы превращения простагландинов одних типов в другие. To obtain some dinitroglycerin esters of prostaglandins, the methods described in the literature for converting some types of prostaglandins to others were used.

Так, 1,3-динитроглицериновые эфиры простагландинов J₂ и J₁ были получены из 1,3-динитроглицериновые эфиры простагландинов D₂ и D₁, соответственно, по описанной методике (N.Fukushima, T.Kaтo, K.Oта, Y.Arai, S.Narumia, S.Narumiya, O.Hayaishi. Biochem.Biophys.Res.Commun. 1982, Vol. 109, No 3, P.626-633) инкубацией при рН 7,2 при 30 35^oC в течение 1 3 дн. Также 1,3-динитроглицериновые эфиры дельта-12 простагландинов были получены из 1,3-динитроглицериновых эфиров соответствующих простагландинов типов D или J по описанной методике (U.L.Bundy, D.R.Norton, D.C.Peterson, E.E.Nishizawa, W.L.Miller. J. Med. Chem. 1983, Vol. 26, P. 790-799) реакцией с 1,5-диазабицикло[4.3.0] нон-5-еном в тетрагидрофуране.So, 1,3-dinitroglycerin esters of prostaglandins J ₂ and J ₁ were obtained from 1,3-dinitroglycerin esters of prostaglandins D ₂ and D ₁ , respectively, according to the described procedure (N. Fukushima, T. Kato, K. Ota, Y. Arai, S. Narumia, S. Narumiya, O. Hayaishi. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1982, Vol. 109, No. 3, P.626-633) by incubation at pH 7.2 at 30 35 ^o C for 1 3 days Also, 1,3-dinitroglycerin esters of delta-12 prostaglandins were obtained from 1,3-dinitroglycerin esters of the corresponding prostaglandins of type D or J according to the described procedure (ULBundy, DRNorton, DCPeterson, EENishizawa, WLMiller. J. Med. Chem. 1983, Vol. 26, P. 790-799) by reaction with 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene in tetrahydrofuran.

Предлагаемые соединения представляют собой вязкие бесцветные или слабоокрашенные масла (за исключением некоторых оксимов простагландинов, являющихся кристаллическими соединениями). Их спиртовые растворы временная лекарственная форма, использованная при проведении биологических экспериментов, устойчивы при хранении при температуре не выше 5 7^oС в течение не менее 1 года.The proposed compounds are viscous colorless or slightly colored oils (with the exception of some prostaglandin oximes, which are crystalline compounds). Their alcohol solutions are a temporary dosage form used in biological experiments that are stable when stored at a temperature not exceeding 5 ^° C for at least 1 year.

Биологическую активность синтезированных соединений изучали на изолированных препаратах гладких мышц лабораторных животных (крыса, морская свинка), на тромбоцитах человека, а также на целых наркотизированных животных (кролик, крыса). The biological activity of the synthesized compounds was studied on isolated preparations of smooth muscles of laboratory animals (rat, guinea pig), on human platelets, as well as on whole anesthetized animals (rabbit, rat).

Проведенные исследования показали, что предлагаемые соединения имеют измененный по сравнению с исходными соединениями спектр биологической активности. Studies have shown that the proposed compounds have a modified spectrum of biological activity compared to the starting compounds.

Так, фармакологические испытания выявили ряд существенных отличий в свойствах нитропростона (1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₂) и простагландина E₂, нитропростон в 5 раз более активен, чем простагландин E₂ как гипотензивный агент (в опытах на крысах и кроликах) (табл.1). При использовании нитропростона не было отмечено изменений частоты сердечных сокращений и тахифилаксин у экспериментальных животных. Другим важным отличием нитропростона является его высокая вазодилататорная активность по отношению к изолированной аорте (EC₅₀ 0,68 мкМ, крыса), тогда как простагландин E₂ в этом тесте вызывает сокращение аорты (табл. 2,3). Для нитропростона характерно значительное увеличение (в 20 раз) бронходилататорной активности (EC₅₀ 7,18 нМ, изолированная трахея морской свинки) по сравнению с простагландином E₂ (табл.3).So, pharmacological tests revealed a number of significant differences in the properties of nitroprotone (1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin E ₂ ) and prostaglandin E ₂ , nitroprone is 5 times more active than prostaglandin E ₂ as a hypotensive agent (in experiments on rats and rabbits) ( table 1). When using nitroprone, no changes in heart rate and tachyphylaxin were observed in experimental animals. Another important difference of nitroprone is its high vasodilator activity in relation to the isolated aorta (EC ₅₀ 0.68 μM, rat), while prostaglandin E ₂ in this test causes aortic contraction (Table 2.3). Nitroprostone is characterized by a significant 20-fold increase in bronchodilator activity (EC ₅₀ 7.18 nM, isolated guinea pig trachea) compared with prostaglandin E ₂ (Table 3).

Изменение фармакологического спектра отмечено также у 1,3-нитроглицериновых эфиров простагландина E₁, оксима простагландина E₁ и простагландина F_2альфа. Так, простанит (1,3-динитроглицериновый эфир простагландина E₁ обладает выраженной способностью ингибировать агрегацию тромбоцитов человека, индуцированную АДФ (IC₅₀ 0,19 мкМ). В то же время он, в отличие от природного простагландина E₁, эффективно расслабляет изолированную аорту крысы (EC₅₀ 2,1 мкМ). Нитропрокс (1,3-динитроглицериновый эфир 9-оксиминопростагландина E₁), оказался более активным,чем простанит в качестве вазодилататора (EC₅₀ 0,64 мкМ, аорта крысы), но менее активным как антиагрегат (IC₅₀ 1,1 мкМ, тромбоциты человека) (табл.4).A change in the pharmacological spectrum was also noted in 1,3-nitroglycerin esters of prostaglandin E ₁ , prostaglandin oxime E ₁ and prostaglandin F _{2 alpha} . Thus, prostanite (1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin E ₁ has a pronounced ability to inhibit human platelet aggregation induced by ADP (IC ₅₀ 0.19 μM). At the same time, unlike natural prostaglandin E ₁ , it effectively relaxes an isolated aorta rats (EC ₅₀ 2.1 μM). Nitroprox (1,3-dinitroglycerin ester of 9-oxyminoprostaglandin E ₁ ) was more active than prostanite as a vasodilator (EC ₅₀ 0.64 μM, rat aorta), but less active as antiaggregate (IC ₅₀ 1.1 μM, human platelets) (table 4).

Фармакологические испытания показали, что нитропрост-F (1,3-динитроглицериновый эфир простагландина F_2альфа) существенно превосходит простагландин F_2-альфа по способности сокращать миометрий матки крысы (EC₅₀ 9 нМ и 110 нМ соответственно). В то же время нитропрост-F менее активен, чем простагландин F_2альфа как констриктор гладких мышц желудка крысы, и не отличается от него по действию на гладкие мышцы кишечника (табл.5).Pharmacological tests show that nitroprost-F (1,3-dinitroglyceryl _2alpha ester of prostaglandin F) substantially exceeds prostaglandin F _2alpha for the ability to reduce rat uterine myometrium (EC 9 ₅₀ nM and 110 nM, respectively). At the same time, nitroprost-F is less active than prostaglandin F _2alpha as a constrictor of the smooth muscles of the rat’s stomach, and does not differ from it in terms of the effect on the smooth muscles of the intestines (Table 5).

У большинства предлагаемых соединений отмечена выраженная антиагрегационная активность, причем этот эффект наблюдали даже для 1,3-динитроглицеринового эфира апахидоновой кислоты, которая сама, как известно, является индуктором агрегации тромбоцитов (табл.6). Most of the proposed compounds showed marked anti-aggregation activity, and this effect was observed even for 1,3-dinitroglycerin ester of apachidonic acid, which itself is known to be an inducer of platelet aggregation (Table 6).

Исходные материалы для синтеза предлагаемых соединений были получены или с Опытного завода органического синтеза (Таллинн, Эстония) (простагландины) или Тихоокеанского института рыбоводства и океанографии (ТИНРО, Россия) (жирные кислоты и гидроксижирные кислоты). Простагландины A₁ и A₂ были получены из соответствующих простагландинов E₁ и E₂ по известной методике (Corey E.J. et al. Total synthesis of pure dl-E₁, -F₁, -A₁, and -B₁ Hormones, J.Am. Chem. Soc. V. 90, pp.3245 3247, 1968). 15-Фтор-15-дезоксипростагландины были синтезированы по описанным ранее методикам (В.В.Безуглов и Л.Д.Бергельсон. Синтез фторпростагландинов. 11-Фтор- и 15-фторпростагландины. Биоорган. химия, т. 5, с.1531-1536, 1979. Безуглов и др. Синтез 15-фтордезоксипростагландинов A₂ и E₂ из простагландина A₂ Plexaura homomalla. Доклады АН СССР, т.379, с.378-379; U.S.Patent 4, 665, 214).The starting materials for the synthesis of the proposed compounds were obtained either from the Experimental Plant for Organic Synthesis (Tallinn, Estonia) (prostaglandins) or the Pacific Institute of Fisheries and Oceanography (TINRO, Russia) (fatty acids and hydroxy fatty acids). Prostaglandins A ₁ and A ₂ were obtained from the corresponding prostaglandins E ₁ and E ₂ by a known method (Corey EJ et al. Total synthesis of pure dl-E ₁ , -F ₁ , -A ₁ , and -B ₁ Hormones, J. Am. Chem. Soc. V. 90, pp. 3245 3247, 1968). 15-Fluoro-15-deoxyprostaglandins were synthesized according to previously described methods (V.V. Bezuglov and L.D. Bergelson. Synthesis of fluoroprostaglandins. 11-Fluoro- and 15-fluoroprostaglandins. Bioorgan. Chemistry, v. 5, p. 1531- 1536, 1979. Bezuglov et al. Synthesis of 15-fluorodeoxyprostaglandins A ₂ and E ₂ from prostaglandin A ₂ Plexaura homomalla. Reports of the USSR Academy of Sciences, vol. 379, p. 378-379; USPatent 4, 665, 214).

Пример 1. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₁ (простанит).Example 1. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin E ₁ (prostanite).

Простангландин E₁ (1 г, 2,82 мМ) растворяют в 125 мл толуола и 20 мл абсолютного ацетона. К полученному раствору добавляют последовательно триэтиламин (1,46 г, 14,46 мМ), n-толуолсульфохлорид (2 г, 10,47 мМ), 4-диметиламинопиридин (1 г, 8,2 мМ) и 1,3-динитрат глицерина (1,5 г, 8,24 мМ) и перемешивают 1 ч при 25^oC. Реакционную смесь фильтруют через фильтр и упаривают до половины объема. Выпавший осадок снова отфильтровывают, а фильтрат наносят на колонку с 200 г силикагеля Л (100 250 мкм) и элюируют градиентной системой бензол ацетон с постепенным возрастанием полярной фазы (бензол, бензол ацетон 20:1, 7:1, 1:1, объем каждой системы 250 мл). Элюат после колонки собирают в пробирки по 50 мл. Пробирки, содержащие продукт (контроль осуществлялся с помощью ТСХ), объединяют и упаривают. Получено 950 мг (64,9) 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₁, бесцветное вязкое масло, R 0,51 (бензол диоксан уксусная кислота, 20:10:1); ПМР-спектр, (дейтерохлороформ, δ), ПМР (CDCl₃, м.д. 5,59 (2Н, м), 5,38 (1Н, м), 4,77, 4,57 (4Н, 2дд), 4,09 (2Н, м), 2,75 (2Н, дд), 0,89 (3Н, т), масс-спектр (FAB) m/z 517 (М + Н), 501 (М + Н Н₂O).Prostanglandin E ₁ (1 g, 2.82 mmol) is dissolved in 125 ml of toluene and 20 ml of absolute acetone. Triethylamine (1.46 g, 14.46 mmol), n-toluenesulfonyl chloride (2 g, 10.47 mmol), 4-dimethylaminopyridine (1 g, 8.2 mmol) and glycerol 1,3-dinitrate are successively added to the resulting solution. (1.5 g, 8.24 mmol) and stirred for 1 h at 25 ^° C. The reaction mixture was filtered through a filter and evaporated to half volume. The precipitate formed is again filtered off, and the filtrate is applied to a column of 200 g of silica gel L (100-250 μm) and the benzene acetone gradient is eluted with a gradual increase in the polar phase (benzene, benzene acetone 20: 1, 7: 1, 1: 1, each 250 ml system). The eluate after the column is collected in 50 ml tubes. Tubes containing the product (control was carried out using TLC), combined and evaporated. Received 950 mg (64.9) of 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin E ₁ , a colorless viscous oil, R 0.51 (benzene dioxane acetic acid, 20: 10: 1); 1 H-NMR spectrum, (deuterochloroform, δ), ₁ H-NMR (CDCl ₃ , ppm 5.59 (2H, m), 5.38 (1H, m), 4.77, 4.57 (4H, 2dd), 4.09 (2H, m), 2.75 (2H, dd), 0.89 (3H, t), mass spectrum (FAB) m / z 517 (M + H), 501 (M + H H ₂ O).

Следующие 1,3-динитроглицериновые эфиры были получены по описанной выше методике из соответствующих исходных соединения:
1,3-динитроглицериновый эфир простагландина E₂ (нитропростон): вязкое бесцветное масло, R_f 0,39 (бензол-диоксан-уксусная кислота, 40:10:1); ПМР (CDCl₃) d,, м.д. 5,6 (2Н, м), 5,36 (3Н, м), 4,74, 4,56 (4Н, 2дд), 4,11 (2Н, м), 2,72 (2Н, дд), 0,92 (3Н, т), масс-спектр (FAB) m/z 515 (М + Н). 1,3-динитроглицериновый эфир простагландина A₁: вязкое бесцветное масло, UV λ_max 218 nm, масс-спектр (FAB) m/z 501 (М + Н - Н₂O).The following 1,3-dinitroglycerin esters were obtained by the above procedure from the corresponding starting compounds:
Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester E ₂ (nitroprostone): colorless viscous oil, R _f 0.39 (benzene-dioxane-acetic acid, 40: 10: 1); PMR (CDCl ₃ ) d ,, ppm 5.6 (2H, m), 5.36 (3H, m), 4.74, 4.56 (4H, 2dd), 4.11 (2H, m), 2.72 (2H, dd), 0 92 (3H, t), mass spectrum (FAB) m / z 515 (M + H). Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester A ₁ : viscous colorless oil, UV λ _max 218 nm, mass spectrum (FAB) m / z 501 (M + H - H ₂ O).

1,3-Динитроглицериновый эфир простагландина A₂: вязкое желтое масло, UV λ_max 218 nм, масс-спектр (FAB) m/z 499 (М + Н), 481 (М + Н - Н₂O).Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester A ₂ : viscous yellow oil, UV λ _max 218 nm, mass spectrum (FAB) m / z 499 (M + H), 481 (M + H - H ₂ O).

1,3-динитроглицериновый эфир простагландина D₂: вязкое бесцветное масло, масс-спектр (FAB) m/z 515 (М + Н).Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester D ₂ : colorless viscous oil, mass spectrum (FAB) m / z 515 (M + H).

1,3-динитроглицериновый эфир простагландина D₁: вязкое бесцветное масло, масс-спектр (FAB) m/z 517 (M + Н).Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester D ₁ : colorless viscous oil, mass spectrum (FAB) m / z 517 (M + H).

1,3-динитроглицериновый эфир 15-фтор-15-дезоксипростагландина E₂: вязкое бесцветное масло, R_f 0,7 (толуол-диоксан-уксусная кислота, 40:10:1), масс-спектр (EI), m/z 519, 498, 480, 472, 452, 371, 353, 316, 298.15-fluoro-15-deoxyprostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester E ₂ : colorless viscous oil, R _f 0.7 (toluene-dioxane-acetic acid, 40: 10: 1), mass spectrum (EI), m / z 519, 498, 480, 472, 452, 371, 353, 316, 298.

1,3-динитроглицериновый эфир простагландина F_2альфа (нитропрост-F): вязкое бесцветное масло, R_f 0,25 (бензол-диоксан-уксусная кислота: 20:10:1); ПМР (CDCl3) δ, м.д. 5,49 (2Н, м), 5,34 (3Н, м), 4,78, 4,58 (4Н, 2дд), 4,14 (1Н, м), 4,04 (1Н, q), 3,9 (1Н, м), 0,89 (3Н, т), масс-спектр (FAB) m/z 517 (м + Н), 501 (М +- Н Н₂O).Prostaglandin F _{2 alpha} 1,3-dinitroglycerin ester (nitroprost-F): a viscous colorless oil, R _f 0.25 (benzene-dioxane-acetic acid: 20: 10: 1); PMR (CDCl3) δ, ppm 5.49 (2H, m), 5.34 (3H, m), 4.78, 4.58 (4H, 2dd), 4.14 (1H, m), 4.04 (1H, q), 3 9 (1H, m), 0.89 (3H, t), mass spectrum (FAB) m / z 517 (m + H), 501 (M + - H H ₂ O).

1,3-динитроглицериновый эфир 11-эпи-простагландина F_2альфа: вязкое бесцветное масло, R_f 0,25 (бензол-диоксан-уксусная кислота: 20: 10:1), масс-спектр (FAB) m/z 517 (М + Н), 501 (М + Н Н₂О).11-epi-prostaglandin F _{2 alpha} 1,3-dinitroglycerin ester: a viscous colorless oil, R _f 0.25 (benzene-dioxane-acetic acid: 20: 10: 1), mass spectrum (FAB) m / z 517 (M + H), 501 (M + H H ₂ O).

1,3-динитроглицериновый эфир арахидоновой кислоты: вязкое бесцветное масло, R_f 0,37 (бензол-гексан, 1:1).Arachidonic acid 1,3-dinitroglycerin ester: a viscous colorless oil, R _f 0.37 (benzene-hexane, 1: 1).

1,3-динитроглицериновый эфир докозагексаеновой кислоты: вязкое бесцветное масло, R_f 0,69 (бензол).Docosahexaenoic acid 1,3-dinitroglycerin ester: a viscous colorless oil, R _f 0.69 (benzene).

1,3-динитроглицериновый эфир 9,12,15-октадекатриеновой кислоты: вязкое бесцветное масло, R_f 0,61 (бензол), масс-спектр (FAB) m/z 442 (М).9,12,15-octadecatrienoic acid 1,3-dinitroglycerin ester: colorless viscous oil, R _f 0.61 (benzene), mass spectrum (FAB) m / z 442 (M).

1,3-динитроглицериновый эфир 13-гидрокси-6,9,11-октаденатриевой кислоты: вязкое бесцветное масло, R_f 0,84 (бензол-ацетон, 4:1), масс-спектр (FAB) m/z 441 (M Н₂O + Н).13-hydroxy-6,9,11-octadenosodium acid 1,3-dinitroglycerin ester: colorless viscous oil, R _f 0.84 (benzene-acetone, 4: 1), mass spectrum (FAB) m / z 441 (M H ₂ O + H).

Пример 2. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира 9-оксииминопростагландина E₁ (нитропрост).Example 2. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of 9-hydroxyiminoprostaglandin E ₁ (nitroprost).

1,3-Динитроглицериновый эфир простагландина E₁ (170 мг, 0,33 мМ) растворяют в 1,5 мл метанола. К полученному раствору добавляют раствор солянокислого гидроксиламина (170 мг, 2,5 мМ) и ацетата натрия (215 мг, 3,26 мМ) в 3 мл 50 -ного метанола. Раствор перемешивают 30 мин при 25^oC. Реакционную смесь разбавляют 5 мл воды и упаривают метанол. Выпавший белый кристаллический осадок отфильтровывают и высушивают. Получают 172 мг 1,3-динитроглицеринового эфира 9-оксиминопростагландина E₁ в виде белого кристаллического порошка, т.пл. 81 82^oC, R_f 0,55 (хлороформ-ацетон, 1:1); ПМР (CDCl₃), d м.д. 5,57 (2Н, м), 5,39 (1Н, м), 1,77, 4,67 (1Н, 2дд), 4,09 (1Н, м), 3,87 (1Н, м), 3,09 (2Н, дд), 0,81 (3Н, т), масс-спектр (FAB) m/z 534 (М + Н).Prostaglandin E ₁ -dinitroglycerin ester E ₁ (170 mg, 0.33 mmol) was dissolved in 1.5 ml of methanol. To the resulting solution was added a solution of hydroxylamine hydrochloride (170 mg, 2.5 mmol) and sodium acetate (215 mg, 3.26 mmol) in 3 ml of 50% methanol. The solution was stirred for 30 minutes at 25 ^° C. The reaction mixture was diluted with 5 ml of water and methanol was evaporated. The precipitated white crystalline precipitate is filtered off and dried. Receive 172 mg of 1,3-dinitroglycerin ester of 9-hydroxyminoprostaglandin E ₁ in the form of a white crystalline powder, so pl. 81 82 ^° C, R _f 0.55 (chloroform-acetone, 1: 1); PMR (CDCl ₃ ), d ppm 5.57 (2H, m), 5.39 (1H, m), 1.77, 4.67 (1H, 2dd), 4.09 (1H, m), 3.87 (1H, m), 3 09 (2H, dd), 0.81 (3H, t), mass spectrum (FAB) m / z 534 (M + H).

Следующие динитроглицериновые эфиры были получены по описанной выше методике из соответствующих исходных соединений:
1,3-динитроглицериновый эфир 9-оксииминопростагландина E₂, в виде белого кристаллического порошка, R_f 0,54 (хлороформ-ацетон, 1:1), масс-спектр (FAB) m/z 534 (M + H).The following dinitroglycerin esters were obtained by the above procedure from the corresponding starting compounds:
9-hydroxyiminoprostaglandin E ₂ 1,3-dinitroglycerin ester, in the form of a white crystalline powder, R _f 0.54 (chloroform-acetone, 1: 1), mass spectrum (FAB) m / z 534 (M + H).

1,3-динитроглицериновый эфир 9-оксииминопростагландина A₂, в виде белого кристаллического порошка, R_f 0,72 (хлороформ-ацетон, 1:1).9-hydroxyiminoprostaglandin A ₂ -dinitroglycerin ester A ₂ , in the form of a white crystalline powder, R _f 0.72 (chloroform-acetone, 1: 1).

1,3-динитроглицериновый эфир 9-оксииминопростагландина A₁, в виде белого кристаллического порошка, R_f 0,72 (хлороформ-ацетон, 1:1).9-hydroxyiminoprostaglandin A ₁ -dinitroglycerin ester A ₁ , in the form of a white crystalline powder, R _f 0.72 (chloroform-acetone, 1: 1).

Пример 3. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина F_1бета.Example 3. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin F 1 _beta .

К перемешиваемому раствору 24,8 мг 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₁ в 2 мл метанола при 0^oС прибавляют одной порцией 25 мг боргидрида натрия в атмосфере инертного газа. Смесь перемешивают 20 мин при 0^oC. Далее реакционную смесь разбавляют 1 мл воды и 1 мл насыщенного раствора сульфата аммония и экстрагируют этилацетатом (2 х 5 мл). Объединенные органические экстракты промывают 2 мл воды, затем насыщенным раствором хлорида натрия и сушат сульфатом натрия. Высушенный органический экстракт упаривают досуха в вакууме. Остаток растворяют в метаноле и очищают микропрепаративной ВЭЖХ (колонка: SEPARON SGX C18 4,6х250 (Tessek, СSFR); детектор UV 206 nм, чувств. 0,32; подвижная фаза: ACN-H₂O-AcOH 50:50:0,005, скорость потока 1,2 мл/мин; температура 35,0 ^oC). Получено: 13,24 мг 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина F_1альфа: вязкое, бесцветное масло, R_f 0,25 (бензол-диоксан-уксусная кислота, 20:10:1) и 11,86 мг 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина F_1бета: вязкое, бесцветное масло, R_f 0,16 (бензол-диоксан-уксусная кислота, 20: 10: 1), масс-спектр (FAB) m/z 519 (М + Н), 503 (М + Н Н₂О).To a stirred solution of 24.8 mg of prostaglandin E ₁ -dinitroglycerin ester E ₁ in 2 ml of methanol at 0 ^° C., 25 mg of sodium borohydride are added in one portion under an inert gas atmosphere. The mixture was stirred for 20 minutes at 0 ^° C. Then the reaction mixture was diluted with 1 ml of water and 1 ml of a saturated solution of ammonium sulfate and extracted with ethyl acetate (2 x 5 ml). The combined organic extracts were washed with 2 ml of water, then with a saturated sodium chloride solution and dried with sodium sulfate. The dried organic extract was evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in methanol and purified by micropreparative HPLC (column: SEPARON SGX C18 4.6x250 (Tessek, CSFR); UV detector 206 nm, sensitivity 0.32; mobile phase: ACN-H ₂ O-AcOH 50: 50: 0.005, flow rate 1.2 ml / min; temperature 35.0 ^° C.). Received: 13.24 mg of prostaglandin F _{1 alpha} 1,3-dinitroglycerin ester: viscous, colorless oil, R _f 0.25 (benzene-dioxane-acetic acid, 20: 10: 1) and 11.86 mg of 1,3-dinitroglycerin prostaglandin ester F 1 _beta : viscous, colorless oil, R _f 0.16 (benzene-dioxane-acetic acid, 20: 10: 1), mass spectrum (FAB) m / z 519 (M + H), 503 (M + H H ₂ O).

1,3-Динитроглицериновый эфир простагландина F_2бета был получен по этой же методике из соответствующего эфира простагландина F₂: вязкое, бесцветное масло, R_f 0,16 (бензол-диоксан-уксусная кислота, 20:10:1), масс-спектр (FAB) m/z 517 (М + Н), 501 (М + Н Н₂O).Prostaglandin F _{2 beta} 1,3-dinitroglycerin ester was obtained by the same procedure from the corresponding prostaglandin F ₂ ester: viscous, colorless oil, R _f 0.16 (benzene-dioxane-acetic acid, 20: 10: 1), mass spectrum (FAB) m / z 517 (M + H), 501 (M + H H ₂ O).

Пример 4. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира 15-фтор-15-дезоксипростагландина A₂.Example 4. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of 15-fluoro-15-deoxyprostaglandin A ₂ .

100 мг простагландина А₂ растворяют в 2 мл хлористого метилена, охлаждают до -48^oC и в атмосфере аргона прибавляют 200 мкл морфолинотрифторсульфурана. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при -48^oС. После окончания фторирования к реакционной массе добавляют 3 мл насыщенного раствора хлористого аммония и оставляют смесь самопроизвольно нагреваться до комнатной температуры. После этого смесь разбавляют 5 мл воды, отделяют органический слой, а водный слой экстрагируют хлороформом (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяют и промывают водой до рН 6,5 7 насыщенным раствором хлористого натрия, сушат сульфатом натрия. Сушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают. Полученное масло очищают колоночной хроматографией на силикагеле Л (100 160 ммк) (20 г) в градиентной системе гексан-эфир с постепенным возрастанием полярной фазы (гексан, гексан эфир 10:1, 7:1, 5:1, 3:1, 1: 1; объем каждой системы 50 мл). Получено 70 мг (70) фторгангидрида 15-фтор-15-дезоксипростагландина A₂ (ФА-15-F-ПГА₂), желтоватое вязкое масло, R_f 0,62 (бензол этилацетат 7:1); UV l_max 217 нм, δ 6000, этанол. Масс-спектр, m/z (1;): 338 (М; 38), 318 (М-HF; 45), 310 (М-СО; 10), 298 (М-2хHF; 30), 190 (100).100 mg of prostaglandin A _{2 was} dissolved in 2 ml of methylene chloride, cooled to -48 ^° C and 200 μl of morpholinotrifluorosulfuran were added in an argon atmosphere. The reaction mixture was stirred for 1 h at -48 ^° C. After the completion of fluorination, 3 ml of a saturated solution of ammonium chloride were added to the reaction mass and the mixture was allowed to spontaneously warm to room temperature. After this, the mixture was diluted with 5 ml of water, the organic layer was separated, and the aqueous layer was extracted with chloroform (3 x 10 ml). The organic extracts are combined and washed with water to pH 6.5 with a saturated solution of sodium chloride, dried with sodium sulfate. The drying agent is filtered off, the filtrate is evaporated. The resulting oil was purified by silica gel column chromatography L (100-160 μm) (20 g) in a hexane-ether gradient system with a gradual increase in the polar phase (hexane, hexane ether 10: 1, 7: 1, 5: 1, 3: 1, 1 : 1; volume of each system 50 ml). Received 70 mg (70) of 15-fluoro-15-deoxyprostaglandin A ₂ fluorohydride (FA-15-F-PHA ₂ ), a yellowish viscous oil, R _f 0.62 (7: 1 benzene ethyl acetate); UV l _max 217 nm, δ 6000, ethanol. Mass spectrum, m / z (1;): 338 (M; 38), 318 (M-HF; 45), 310 (M-CO; 10), 298 (M-2xHF; 30), 190 (100) .

Полученный ФА-15-F-ПГА₂ растворяют в 2 мл бензола и прибавляют последовательно 1,3-динитрат глицерина (75 мг, 0,4 мМ), триэтиламин (75 мг, 0,75 мМ) и каталитическое количество 4-диметиламинопиридина (1 мг) и перемешивают 1 ч при 25^oC. Реакционную массу выливают на колонку с силикагелем Л (100 160 ммк) (20 г) в градиентной системе гексан эфир с постепенным возрастанием возрастанием полярной фазы (гексан, гексан-эфир 10:1, 7:1, 5:1, 3:1, 1:1; объем каждой системы 50 мл). Получено 89,6 мг (30) 1,3-динитроглицеринового эфира 15-фтор-15-дезоксипростагландина А₂, желтоватое вязкое масло, R_f 0,7 (бензол этилацетат 5:1); UV l_max 218 нм, этанол. Масс-спектр, m/z (1;): 500 (М; 3), 480 (М-HF; 2,8), 434 (М-HF-NO₂; 1,1), 389 (M-HF-2xNO₂; 3,8), 391 (M-OH-2xNO₂; 2,6), 371 (M-OH-2xNO₂-HF; 2,9), 343 (М-F-3xNO₂; 3,9), 318 (М-(CH₂ONO₂)₂COH; 13,4), 315 (M-(CH₂ONO₂)₂COH-HF; 22,3), 190 (100).The obtained FA-15-F-PHA _{2 was} dissolved in 2 ml of benzene, and glycerol 1,3-dinitrate (75 mg, 0.4 mmol), triethylamine (75 mg, 0.75 mmol) and a catalytic amount of 4-dimethylaminopyridine were successively added ( 1 mg) and stirred for 1 h at 25 ^o C. The reaction mass was poured onto a column of silica gel L (100 160 mmk) (20 g) in a hexane ether gradient system with a gradual increase in the polar phase (hexane, hexane-ether 10: 1, 7: 1, 5: 1, 3: 1, 1: 1; the volume of each system is 50 ml). Received 89.6 mg of (30) 1,3-dinitroglycerin ester of 15-fluoro-15-deoxyprostaglandin A ₂ , a yellowish viscous oil, R _f 0.7 (benzene ethyl acetate 5: 1); UV l _max 218 nm, ethanol. Mass spectrum, m / z (1;): 500 (M; 3), 480 (M-HF; 2.8), 434 (M-HF-NO ₂ ; 1.1), 389 (M-HF- 2xNO ₂ ; 3.8), 391 (M-OH-2xNO ₂ ; 2.6), 371 (M-OH-2xNO ₂ -HF; 2.9), 343 (M-F-3xNO ₂ ; 3.9 ), 318 (M- (CH ₂ ONO ₂ ) ₂ COH; 13.4), 315 (M- (CH ₂ ONO ₂ ) ₂ COH-HF; 22.3), 190 (100).

Пример 5. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₂ (нитропростон).Example 5. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin E ₂ (nitroprostone).

100 мг простагландина Е₂ растворяют в 2 мл ацетонитрила и при постоянном перемешивании прибавляют 70 мг карбонилдиимидазола (Fluka). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 1,5 ч (21^oC) до прекращения выделения газа. Затем к реакционной смеси прибавляют 0,1 мл 1,3-динитрата глицерина и 70 мг сухого гидрохлорида пиридина. Полученную смесь перемешивают 1,5 2 ч при комнатной температуре и разбавляют 10 объемами этилацетата и 2 объемами воды. Органический слой промывают 2М раствором NsHSO₄, водой (3 х 5 мл), насыщенным раствором NaCl. Органический слой отделяют и сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток растворяют в бензоле и наносят на колонку с 20 мл силикагеля Л (100 250 мкм) и элюируют градиентной системой бензол - ацетон с постепенным возрастанием полярной фазы (бензол, бензол ацетон 20:1, 7:1, 1:1; объем каждой системы 30 мл). Элюат после колонки собирают в пробирки по 10 мл. Пробирки, содержащие продукт (контроль осуществлялся с помощью ТСХ), объединяют и упаривают в вакууме. Выход 50 мг чистого 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₂.100 mg of prostaglandin E _{2 was} dissolved in 2 ml of acetonitrile and 70 mg of carbonyldiimidazole (Fluka) was added with constant stirring. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours (21 ^° C.) until gas evolution ceased. Then, 0.1 ml of glycerol 1,3-dinitrate and 70 mg of dry pyridine hydrochloride are added to the reaction mixture. The resulting mixture was stirred for 1.5 2 hours at room temperature and diluted with 10 volumes of ethyl acetate and 2 volumes of water. The organic layer was washed with 2M NsHSO ₄ solution, water (3 x 5 ml), saturated NaCl solution. The organic layer was separated and dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in vacuo of a water-jet pump. The residue is dissolved in benzene and applied to a column with 20 ml of silica gel L (100 250 μm) and eluted with a benzene-acetone gradient system with a gradual increase in the polar phase (benzene, benzene acetone 20: 1, 7: 1, 1: 1; the volume of each system 30 ml). The eluate after the column is collected in 10 ml tubes. Tubes containing the product (control was carried out using TLC), combined and evaporated in vacuum. Yield 50 mg of pure prostaglandin E ₂ 1,3-dinitroglycerin ester.

Пример 6. Получение 1,3-динитроглицериновых эфиров простагландинов J₂ и J₁.Example 6. Obtaining 1,3-dinitroglycerin esters of prostaglandins J ₂ and J ₁ .

1,3-динитроглицериновые эфиры простагландинов J₂ и J₁ из 1,3-динитроглицериновые эфиры простагландинов D₂ и D₁, соответственно, инкубацией в Трис-HCl буфере (0,05 м, рН 7,2) при 30 -35^oC в течение 1 3 дн с последующей экстракцией органическими растворителями и очисткой хроматографией на силикагеле.1,3-dinitroglycerin esters of prostaglandins J ₂ and J ₁ from 1,3-dinitroglycerin esters of prostaglandins D ₂ and D ₁ , respectively, by incubation in Tris-HCl buffer (0.05 m, pH 7.2) at 30 -35 ^o C for 1 to 3 days, followed by extraction with organic solvents and purification by silica gel chromatography.

1,3-динитроглицериновый эфир простагландина J₂, бесцветное масло, UV λ_max 216 (этанол);
1,3-динитроглицериновый эфир простагландина J₁, бесцветное масло, UV λ_max 216 (этанол).Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester J ₂ , colorless oil, UV λ _max 216 (ethanol);
Prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester J ₁ , colorless oil, UV λ _max 216 (ethanol).

Пример 7. Получение 1,3-динитроглицериновых эфиров дельта-12 простагландинов. Example 7. Obtaining 1,3-dinitroglycerin esters of delta-12 prostaglandins.

1,3-динитроглицериновые эфиры дельта-12 простагландинов получали из 1,3-динитроглицериновые эфиры соответствующих простагландинов типов D или J реакцией с 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-еном в тетрагидрофуране (комнатная температура, 12 18 ч) с последующей очисткой хроматографией на силикагеле. Delta-12 prostaglandin 1,3-dinitroglycerin esters were prepared from 1,3-dinitroglycerin esters of the corresponding type D or J prostaglandins by reaction with 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene in tetrahydrofuran (room temperature, 12-18 h) ) followed by purification by chromatography on silica gel.

1,3-динитроглицериновый эфир дельта-12 простагландина J₂, желтоватое масло, UV λ_max 245 (этанол);
1,3-динитроглицериновый эфир дельта-12 простагландина J₁, желтоватое масло, UV λ_max 245 (этанол);
1,3-динитроглицериновый эфир дельта-12 простагландина D₂, бесцветное масло, UV λ_max 244 (этанол);
1,3-динитроглицериновый эфир дельта-12 простагландина D₁, бесцветное масло, UV λ_max 244 (этанол).Delta-12 prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester J ₂ , yellowish oil, UV λ _max 245 (ethanol);
Delta-12 prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester J ₁ , yellowish oil, UV λ _max 245 (ethanol);
Delta-12 prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester D ₂ , colorless oil, UV λ _max 244 (ethanol);
Delta-12 prostaglandin 1,3-dinitroglycerin ester D ₁ , colorless oil, UV λ _max 244 (ethanol).

Пример 8. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира 5-иодпростагландина I₁.Example 8. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of 5-iodoprostaglandin I ₁ .

К раствору 70 мг 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина F_2p в 2,5 мл эфира при 4^oC прибавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (6 мл) и при постоянном перемешивании в атмосфере аргона прибавляют по каплям раствор иода (45 мг) в эфире (3,5 мл). Смесь перемешивают в темноте в течение ночи при 4^oC. Реакционную смесь разбавляют 20 мл эфира, органический слой отделяют, промывают водным 10 раствором Na₂S₂O₃, водой, нас.раствором NaCl, сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток растворяют в хлороформе и наносят на колонку с 15 мл силикагеля Л (40 100 мкм) и элюируют градиентной системой хлороформ ацетон с постепенным возрастанием (по 2 на ступень) полярной фазы (т.е. 25 мл хлороформа, 25 мл 2 ацетона в хлороформе, 25 мл 4 ацетона в хлороформе и т.д). Элюат после колонки собирают в пробирки по 10 мл. Пробирки, содержащие продукт (контроль осуществлялся с помощью ТСХ), объединяют и упаривают в вакууме. Выход 55 мг чистого 1,3-динитроглицеринового эфира 5-иодпростагландина I₁: вязкое, бесцветное масло, R_f 0,48 (хлороформ ацетон, 1:2), масс-спектр (SIMS), m/z, 667 (М⁺ + Na), 627 (M⁺ CH).To a solution of 70 mg of prostaglandin F _2p 1,3-dinitroglycerin ester in 2.5 ml of ether at 4 ^° C was added a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate (6 ml), and with constant stirring in an argon atmosphere, iodine solution (45 mg) was added dropwise to ether (3.5 ml). The mixture was stirred in the dark overnight at 4 ^° C. The reaction mixture was diluted with 20 ml of ether, the organic layer was separated, washed with an aqueous 10 solution of Na ₂ S ₂ O ₃ , water, a saturated NaCl solution, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in a vacuum water-jet pump. The residue is dissolved in chloroform and applied onto a column of 15 ml of silica gel L (40-100 μm) and the chloroform acetone gradient is eluted with a gradient system (2 per step) of the polar phase (i.e. 25 ml of chloroform, 25 ml of 2 acetone in chloroform) 25 ml of 4 acetone in chloroform, etc.). The eluate after the column is collected in 10 ml tubes. Tubes containing the product (control was carried out using TLC), combined and evaporated in vacuum. Yield 55 mg of pure 1,3-dinitroglycerin ester of 5-iodoprostaglandin I ₁ : viscous, colorless oil, R _f 0.48 (chloroform acetone, 1: 2), mass spectrum (SIMS), m / z, 667 (M ⁺ + Na), 627 (M ⁺ CH).

Пример 9. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина I₂.Example 9. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin I ₂ .

Раствор 10 мг 1,3-динитроглицеринового эфира 5-иодопростагландина I₁ и 10 мкл 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена в 2 мл бензола нагревали при кипении растворителя в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют 6 мл эфира быстро промывали холодной водой (4^oC) водой и нас.раствором NaCl. Органический слой отделяли, фильтровали через 10 г безводного Na₂SO₄ и упаривали досуха в вакууме. Выход 8 мг 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина I₂ (простациклина): вязкое, слегка желтоватое масло, R_f 0,45 (хлороформ ацетон, 1:2).A solution of 10 mg of 5-iodoprostaglandin I 1,3-dinitroglycerin ester I ₁ and 10 μl of 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene in 2 ml of benzene was heated at the boiling point of the solvent for 2 hours. The reaction mixture was diluted with 6 ml ether was washed quickly with cold water (4 ^° C.) with water and a saturated NaCl solution. The organic layer was separated, filtered through 10 g of anhydrous Na ₂ SO ₄ and evaporated to dryness in vacuo. Yield 8 mg of 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin I ₂ (prostacyclin): a viscous, slightly yellowish oil, R _f 0.45 (chloroform acetone, 1: 2).

Пример 10. Получение 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₂ через фторангидрид простагландина E₂.Example 10. Obtaining 1,3-dinitroglycerin ester of prostaglandin E ₂ through prostaglandin fluoride E ₂ .

100 мг простагландина E₂ растворяют в 5 мл ТГФ, добавляют 300 мкл гексаметилдисилазана и 150 мкл триметилхлорсилана и перемешивают реакционную смесь 2 ч при комнатной температуре в атмосфере аргона и упаривают досуха в вакууме. Остаток растворяют в 5 мл сухого бензола и упаривают досуха в вакууме. Остаток растворяют в 0,5 мл хлористого метилена (раствор А).100 mg of prostaglandin E _{2 was} dissolved in 5 ml of THF, 300 μl of hexamethyldisilazane and 150 μl of trimethylchlorosilane were added and the reaction mixture was stirred for 2 hours at room temperature under argon and evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in 5 ml of dry benzene and evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in 0.5 ml of methylene chloride (solution A).

К раствору 300 мг морфолинотрифторсульфурана в 4 мл хлористого метилена прибавляют 200 мкл N-триметилсилиформолина при перемешивании в атмосфере аргона при 4^oС. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при этой температуре (раствор Б).To a solution of 300 mg of morpholinotrifluorosulfuran in 4 ml of methylene chloride was added 200 μl of N-trimethylsiliformofoline with stirring in an argon atmosphere at 4 ^° C. The reaction mixture was stirred for 1 h at this temperature (solution B).

К охлажденному до -65^oC раствору Б прибавляют раствор А при энергичном перемешивании в атмосфере аргона и перемешивают 30 мин при этой температуре. К реакционной массе добавляют 2 мл насыщенного раствора NaCl и экстрагируют 5 объемами этилацетата. Объединенный органический экстракт промывают водой (3 х 5 мл), насыщенным раствором NaCl (1 x 5 мл) и сушат безводными Na₂SO₄. Осушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают. Полученный фторангидрид растворяют в 2 мл сухого бензола и прибавляют последовательно 150 мг 1,3-динитроглицерина, 150 мг триэтиламина и 0,01 0,1 эквивалента 4-диметиламинопиридина при перемешивании. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 3 ч и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 2 мл метанола и прибавляют 100 мкл 1М водной HCl. Через 30 мин реакционную смесь разбавляют 15 мл этилацетата. Органический слой отделяют, промывают водой (3 х 5 мл), насыщенным раствором NaCl (1 х 5 мл) и сушат безводным Na₂SO₄. Сушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в бензоле и наносят на колонку (15 х 100 мм) с 20 мл силикагеля Л (40 100 мкм) и элюируют градиентной системой бензол - этилацетат, начиная с чистого бензола, с постоянным возрастанием (по 10 на ступень) полярной фазы (т.е. 20 мл бензола, 20 мл 10 20 мл 20 и т.д. этилацетата в бензоле) до чистого этилацетата. Элюат после колонки собирают в пробирки по 10 мл. Пробирки содержащие продукт (контроль осуществляли с помощью ТСХ) объединяют и упаривают в вакууме. Выход 50 мг чистого 1,3-динитроглицеринового эфира простагландина E₂.To solution B cooled to -65 ^° C, solution A was added with vigorous stirring in an argon atmosphere and stirred for 30 minutes at this temperature. 2 ml of a saturated NaCl solution are added to the reaction mass and extracted with 5 volumes of ethyl acetate. The combined organic extract was washed with water (3 x 5 ml), saturated NaCl (1 x 5 ml) and dried with anhydrous Na ₂ SO ₄ . The desiccant is filtered off, the filtrate is evaporated. The resulting fluorohydride was dissolved in 2 ml of dry benzene and 150 mg of 1,3-dinitroglycerin, 150 mg of triethylamine and 0.01 0.1 equivalent of 4-dimethylaminopyridine were successively added with stirring. The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in 2 ml of methanol and 100 μl of 1M aqueous HCl was added. After 30 minutes, the reaction mixture was diluted with 15 ml of ethyl acetate. The organic layer was separated, washed with water (3 x 5 ml), saturated NaCl solution (1 x 5 ml) and dried with anhydrous Na ₂ SO ₄ . The drying agent is filtered off, the filtrate is evaporated in vacuo. The residue is dissolved in benzene and applied to a column (15 x 100 mm) with 20 ml of silica gel L (40-100 microns) and eluted with a benzene-ethyl acetate gradient system starting from pure benzene with a constant increase (by 10 per step) of the polar phase (t ie 20 ml of benzene, 20 ml of 10 20 ml of 20, etc. ethyl acetate in benzene) to pure ethyl acetate. The eluate after the column is collected in 10 ml tubes. The tubes containing the product (control was carried out using TLC) are combined and evaporated in vacuo. Yield 50 mg of pure prostaglandin E ₂ 1,3-dinitroglycerin ester.

Пример 11. Гипотензивное действие синтезированных веществ. Гипотензивное действие динитроглицериновых эфиров простагландинов изучали на наркотизированных кроликах и крысах (самцы) без искусственного дыхания. Кроликов наркотизировали внутривенным введением барбамила (50 60 мг/кг), крыс внутрибрюшинным введением уретана (1,3 г/кг). Артериальное давление измеряли в бедренной артерии (кролики) или в правой сонной артерии (крысы). Example 11. The antihypertensive effect of the synthesized substances. The hypotensive effect of prostaglandin dinitroglycerin esters was studied in anesthetized rabbits and rats (males) without artificial respiration. Rabbits were anesthetized by intravenous administration of barbamil (50-60 mg / kg), rats by intraperitoneal administration of urethane (1.3 g / kg). Blood pressure was measured in the femoral artery (rabbits) or in the right carotid artery (rat).

Показано, что в опытах на крысах нитропростон по силе гипотензивного действия более чем в 3 раза превосходил простагландин E₂ и дибазол. В опытах на кроликах максимальное снижение давления для простагландина E₂ составило 42±7 а для нитропростона 35±5 однако действие последнего в первые секунды было мягче, а длительность действия и суммарный эффект больше, чем у простагландина E₂ (см.табл.1).It was shown that in experiments on rats, nitroprostone was more than 3 times stronger than prostaglandin E ₂ and dibazole in terms of its hypotensive effect. In experiments on rabbits, the maximum pressure drop for prostaglandin E ₂ was 42 ± 7 and for nitroproton 35 ± 5, however, the effect of the latter was softer in the first seconds, and the duration of the action and the total effect were longer than that of prostaglandin E ₂ (see table 1) .

Пример 12. Миотропная активность синтезированных веществ на изолированных препаратах гладких мышц. Example 12. Myotropic activity of synthesized substances on isolated preparations of smooth muscles.

В опытах использовались крысы и морские свинки обоего пола, весом 230±30 и 350±50 г соответственно. Препарат гладких мышц помещали в термостатируемую ванночку объемом 10 мл. В качестве физиологического раствора использовали раствор Кребса (аорта, трахея, дно желудка, кишка) или Де-Жалона (матка), температура среды 30±2^oC, рН 7,8, аэрация карбогеном. Все эксперименты проводились в присутствии в среде индометацина в концентрации 3 мкМ для подавления эндогенного биосинтеза простагландинов. В качестве стандартного агониста использовали простагландин E₁, E₂, F_2альфа или гистамин. Результаты испытаний представлены в табл.2 5.In the experiments, rats and guinea pigs of both sexes, weighing 230 ± 30 and 350 ± 50 g, respectively, were used. The smooth muscle preparation was placed in a 10 ml thermostatic bath. As a physiological solution used Krebs solution (aorta, trachea, bottom of the stomach, intestine) or De Jalon (uterus), medium temperature 30 ± 2 ^o C, pH 7.8, aeration with carbogen. All experiments were carried out in the presence of 3 μM indomethacin in the medium to suppress the endogenous prostaglandin biosynthesis. As a standard agonist, prostaglandin E ₁ , E ₂ , F ₂ _alpha or histamine was used. The test results are presented in table 25.

Пример 13. Антиагрегационная активность синтезированных веществ. Example 13. Antiaggregatory activity of synthesized substances.

В опытах использовалась обогащенная тромбоцитами плазма крови человека. Запись агрегации тромбоцитов проводили на агрегометрах фирм "Chrono-Log Corp. " (США) и "Payton" (США). Степень агрегации оценивали по проценту падения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы крови после окончания реакции по сравнению с исходным уровнем. In the experiments, platelet-rich human blood plasma was used. Platelet aggregation was recorded on aggregometers from Chrono-Log Corp. (USA) and Payton (USA). The degree of aggregation was estimated by the percentage drop in the optical density of platelet-rich blood plasma after the end of the reaction compared to the initial level.

Показано, что большинство испытанных соединений обладали выраженной способностью ингибировать агрегацию тромбоцитов человека, индуцированную АДФ. Так, динитроглицериновый эфир арахидоновой кислоты в дозе 0,1 мг/мл обогащенной тромбоцитами плазмы практически полностью ингибировал агрегацию тромбоцитов. В дозах 0,1 и 1 мг/мл плазмы динитроглицериновые эфиры октадекатриеновой, докозагексаеновой и 5-гидроксиэйкозапентаеновой кислот ингибировали агрегацию тромбоцитов на 30 50 Высокую активность ингибиторов агрегации тромбоцитов проявили также и некоторые динитроглицериновые эфиры простагландинов (см. табл. 6). It was shown that most of the tested compounds had a pronounced ability to inhibit ADP-induced human platelet aggregation. So, arachidonic acid dinitroglycerin ester in a dose of 0.1 mg / ml platelet-rich plasma almost completely inhibited platelet aggregation. At doses of 0.1 and 1 mg / ml of plasma, dinitroglycerin esters of octadecatrienoic, docosahexaenoic and 5-hydroxyeicosapentaenoic acids inhibited platelet aggregation by 30-50 Some platelet 6 dinitroglycerin esters also showed high activity of platelet aggregation inhibitors.

Таким образом показано, что предлагаемые соединения имеют измененный по сравнению с исходными полиненасыщенными жирными кислотами, их гидроксипроизводными или простагландинами спектр биологической активности, в частности, в направлении усиления миотропной, вазодилататорной и антиагрегационной активностей. Thus, it is shown that the proposed compounds have a changed spectrum of biological activity compared to the initial polyunsaturated fatty acids, their hydroxy derivatives or prostaglandins, in particular, in the direction of enhancing myotropic, vasodilator and anti-aggregation activities.

Предлагаемые вещества имеют новую, неописанную ранее структуру, которая обусловливает у них наличие новых отмеченных выше полезных свойств. ТТТ1 ТТТ2 The proposed substances have a new, previously undescribed structure, which makes them have the new beneficial properties noted above. TTT1 TTT2

Claims

1. 1,3-Dinitroglycerin esters of polyunsaturated fatty acids, hydroxy derivatives of polyunsaturated fatty acids and prostaglandins of the general formula I

where R is a prostaglandin residue of the formula

in which one of the two groups at the C-9 atom of R ₁ or R _{2 is} a hydrogen atom, and the other hydroxyl or R ₁ and R ₂ together form a keto or hydroxyimino group, one of the two groups at C-9 of the atom of R ₃ or R ₄ is a hydrogen atom and the other hydroxyl or R ₃ and R ₄ together form a keto or hydroxyimino group, provided that R ₃ and R ₄ form a keto or hydroxyimino group when R ₁ and R ₂ together form a keto or hydroxyimino group, one of two groups at the C-15 atom of R ₅ or R _{6 is} a hydrogen atom, and the other is hydroxyl or a fluorine atom, symbol

represents a single or dis double bond, or R is a prostaglandin residue of the formula

where one of the groups at the C-9 atom of R ₇ or R _{8 is} a hydrogen atom or hydroxyl, and the other is hydrogen, the symbol

represents a single or double bond, provided that R ₇ or R ₈ does not form hydroxyl when C-10 and C-11 atoms are connected by a double bond, or provided that if R ₇ or R _{8 is} hydroxyl C-12 and C- 13 atoms are connected by a trans double bond, and where one of the two groups of the C-15 atom is R ₉ or R ₁₀ a hydrogen atom, and the other R ₁₀ or R _{9 is} hydroxyl, or R is a type I prostaglandin residue of the formula

where the Q group of the C-5 atom is an iodine or bromine atom, the symbol

represents a single or double bond, provided that Q is not bromine or iodine when the C-5 and C-6 atoms are connected by a double bond, or R is the residue of a polyene fatty acid of the formula

where a 0 6, f 1 6, b 1 7 provided that the total length of the carbon chain is 18 22 carbon atoms, or R is the residue of a hydroxy acid of the formula

where m 1 7, X 0 4, k 0 4, n 0 3 provided that the total carbon chain length is 18 22 carbon atoms.

2. A method of obtaining compounds of General formula 1 according to claim 1, characterized in that the carboxylic acid of General formula II
R COOH,
where R takes the indicated values, is reacted with an arylsulfonyl chloride in an organic solvent in the presence of a tertiary amine, and then with 1,3 glycerol dinitrate in the presence of dimethylaminopyridine.

3. A method of obtaining compounds of General formula I according to claim 1, characterized in that the carboxylic acid of General formula II
R COOH,
where R takes the indicated values, is reacted with carbonyldiimidazole in an organic solvent, and then with glycerol 1,3-dinitrate in the presence of pyridine hydrochloride.

4. The method of obtaining compounds of General formula I according to claim 1, characterized in that the carboxylic acid of General formula II
R COOH,
where R takes the indicated values, it is treated with an excess (2-5 equiv) of a silylating mixture consisting of hexamethyldisilazane and trimethylchlorosilane in their volume ratio 2: 1 in an organic solvent, followed by reaction of the obtained silyl derivative with a fluorinating reagent prepared from an equimolar mixture of morpholinotrifluorosulfurine and trimethylsilylmorpholine, in an organic solvent at a temperature of -20 ^o C -50 ° C, and then with glycerol 1,3-dinitrate in the presence of a tertiary amine.