RU2064794C1 - Средство для определения степени аттенуации вируса полиомиелита - Google Patents
Средство для определения степени аттенуации вируса полиомиелита Download PDFInfo
- Publication number
- RU2064794C1 RU2064794C1 RU9292014469A RU92014469A RU2064794C1 RU 2064794 C1 RU2064794 C1 RU 2064794C1 RU 9292014469 A RU9292014469 A RU 9292014469A RU 92014469 A RU92014469 A RU 92014469A RU 2064794 C1 RU2064794 C1 RU 2064794C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tomatooside
- virus
- poliomyelitis virus
- solution
- poliomyelitis
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Использование: медицина, медицинская вирусология, для определения степени аттенуации вируса полиомиелита. Сущность изобретения: в целях расширения ассортимента маркеров для генетической характеристики полиовируса предлагается использовать раствор томатозида - триазид-(25S) -5α-3β-22α, 26-триол-26-0-b-D-глюкопиранозид в конечной концентрации 0,01%. 1 табл.
Description
Изобретение относится к вирусологии, а именно, к средствам оценки степени аттенуации вируса полиомиелита. Известно использование триозид-(25S) -5α-3β-22α, 26-триол-26-0-b-D-глюкопиранозида (томатозида) в качестве химического иммунизатора для защиты растений табака от вируса бронзовости табака (ВБТ) (1, 2).
Целью изобретения является расширение ассортимента маркеров, используемых для оценки степени аттенуации вируса полиомиелита за счет выявления новых дополнительных свойств томатозида, ранее неизвестных.
Для достижения цели в качестве маркера используют раствор томатозида. Основой предлагаемого маркера является тот факт, что динамика подавления репродукции вакцинных вариантов вируса полиомиелита в культуре клеток, при наличии в поддерживающей среде раствора томатозида в конечной концентрации 0,01% значительно опережает аналогичный процесс, касающийся диких вариантов вируса полиомиелита. При отличии показателей интенсивности подавления репродукции изолятов вируса полиомиелита в культуре клеток при наличии и отсутствии томатозида в поддерживающей среде до 3,0 lg ЦПД50/мл включительно, их относят к диким, при разнице больше 4,0 lg ЦПД50/мл к вакцинным, а если отличие между этими показателями колеблется в пределах от 3,0 до 4,0 lg ЦПД50, то их относят к промежуточным.
Использование предлагаемого маркера для оценки степени аттенуации вируса полиомиелита показывает, что данные, полученные с помощью этого признака, полностью коррелируют с антигенным признаком (Ag).
Использование томатозида для определения степени аттенуации вируса полиомиелита иллюстрирует следующий пример.
Приводят результаты определения степени аттенуации 35 штаммов вируса полиомиелита, в частности, изолированных от больных полиомиелитом, из образцов проб водных объектов, а также музейных штаммов вируса полиомиелита, включая дикие варианты (Mahoney, Луговской, Смирновой, MЕE-1, Saukett), промежуточные (Коньков + LSc2ab) и вакцинные (LSc2ab, P712Ch2ab, Leon12a1b), по антигенному признаку и по предлагаемому нами маркеру.
Приготовление рабочего раствора томатозида. Отвешивают 100,0 мг томатозида, порошкообразного кристаллического вещества, желто-коричневого цвета, и помещают в стерильную стеклянную емкость (до 200,0 мл), куда добавляют 100,0 мл питательной среды (среда 199, Игла и др.). Взвесь периодически встряхивают в течение 1 ч до полного растворения томатозида. Полученный раствор стерилизуют через асбестовый фильтр и сохраняют в объеме до 25,0 мл в темных флакончиках, хорошо закупоренных, при температуре 4oC.
Приготовление перевиваемой культуры HEp-2 осуществляют следующим образом: перед посевом культуры обязательно проводят просмотр и оценку монослоя. Отбирают культуру со сплошным монослоем клеток, имеющих типичную для данной линии морфологию, с четко выраженными границами между клетками. Клетки снимают со стекла матрасов трипсин-версеном. Для этого приготавливают смесь равных объемов 0,25%-ного раствора трипсина и раствора версена, подогревают ее в водяной бане до 30 0 35oС. Вначале с матраса выливают питательную среду, клеточный слой промывают 3 раза фосфатно-буферным раствором (рН 7,5), не содержащим ионы кальция и магния. Затем теплой смесью (трипсин-версен) заливают монослой культуры клеток так, чтобы все участки были покрыты жидкостью. В матрасы объемом 100,0; 250,0 и 1000,0 мл раствор добавляют соответственно по 10,0; 15,0 и 30,0 мл. Матрасы встряхивают и помещают в термостат 37oС на 15 20 мин до полного отделения клеток от поверхности стекла.
Крупные конгломераты клеток диспергируют, пипетируя несколько раз клеточную взвесь. Суспензию клеток центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин, смесь трипсин-версен удаляют. Осажденные центрифугированием клетки ресуспендируют в небольшом объеме ростовой питательной среды, количество клеток подсчитывают в счетной камере Горяева. Взвесь клеток контролируют на бактериальную стерильность, разводят питательной средой с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл содержалось 60 тыс. клеток. В качестве среды для выращивания клеток используют среду Игла, среду 199, Игла-МЕМ с добавлением сыворотки крупного рогатого скота 10,0% и антибиотиков. Перевиваемую культуру НЕр-2 разливают в пробирки по 1,0 мл. В качестве поддерживающей среды используют те же вышеприведенные питательные среды без добавления сыворотки. Обновление сплошного монослоя клеток новой генерации наблюдают через 5 6 суток.
Титрование изолятов вируса полиомиелита того или иного иммунологического типа с целью изучения степени их аттенуации, а также стандартных вакцинных и диких штаммов вируса полиомиелита, проводят и диких штаммов вируса полиомиелита, проводят в культуре клеток НЕр-2 методом конечного разведения по цитопатогенному действию и выражают в lg ЦПД50/мл. Для титрования штаммов вируса полиомиелита вначале готовят его разведение, обычно десятикратные, от 10-1 до 10-9. Во все пробирки вносят по 9,0 мл стерильного физиологического раствора или раствора Хэнкса. Затем в первую пробирку вносят 1,0 мл вируссодержащего материала и получают разведение 10-1 (1:10). При помощи новой пипетки содержимое первой пробирки тщательно перемешивают и 1,0 мл переносят во вторую пробирку, получая разведение 10-2 (1:100) и т.д. до 10-9.
Затем раствор томатозида (0,1%) в объеме 0,5 мл соединяют с равным объемом вируссодержащего материала каждого разведения. Смесь раствора томатозида и вируса выдерживают в течение 1 ч при 37oС. Предварительно перед заражением монослоя культуры НЕр-2 смесью вирус + раствор томатозида производят 3 раза отмывание культуры клеток от сыворотки раствором Хэнкса, рН 7,4 или раствором Эрла, рН 7,6. На каждое десятикратное разведение вируссодержащего материала используют по 4 пробирки с культурой клеток. Смесь раствора томатозида и вируса в объеме 0,2 мл добавляют в пробирки с культурой клеток, в которые предварительно заливают поддерживающую среду в объеме 0,8 мл. Пробирки помещают в термостат в специальных лотках в горизонтальном положении. Состояние зараженных культур периодически проверяют под световым микроскопом в течение 7 дней. Результат цитопатического действия ЦПД50 вируса считается положительным, если не менее половины клеток в культуре подвергались специфической дегенерации.
Опыт сопровождается следующими контролями:
1. контроль репродукции стандартных штаммов вируса полиомиелита титруют вирус полиомиелита в культуре клеток НЕр-2 при отсутствии и наличии раствора томатозида в поддерживающей среде клеток в конечной концентрации 0,01%
2. контроль культуры клеток используют интактную культуру клеток НЕр-2 при отсутствии и наличии в поддерживающей среде 0,01%-ного раствора томатозида. Титр (50,0% эффективной дозы) вычисляют по методу Рида-Менча (Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний. М. Медицина, 1974, с. 7 56; под ред. проф. Э. Леннета и Н. Шмидта; Методы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций. М. Медицина, c. 150, Ворошилова М.К. Жевандрова В.И. Балоян М.С.) и методом пробитов, используя специальные таблицы (Методические рекомендации по санитарно-вирусологическому контролю объектов окружающей среды, М. c. 76, под ред. проф. Дроздова С.Г. и Казанцевой В.А.).
1. контроль репродукции стандартных штаммов вируса полиомиелита титруют вирус полиомиелита в культуре клеток НЕр-2 при отсутствии и наличии раствора томатозида в поддерживающей среде клеток в конечной концентрации 0,01%
2. контроль культуры клеток используют интактную культуру клеток НЕр-2 при отсутствии и наличии в поддерживающей среде 0,01%-ного раствора томатозида. Титр (50,0% эффективной дозы) вычисляют по методу Рида-Менча (Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний. М. Медицина, 1974, с. 7 56; под ред. проф. Э. Леннета и Н. Шмидта; Методы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций. М. Медицина, c. 150, Ворошилова М.К. Жевандрова В.И. Балоян М.С.) и методом пробитов, используя специальные таблицы (Методические рекомендации по санитарно-вирусологическому контролю объектов окружающей среды, М. c. 76, под ред. проф. Дроздова С.Г. и Казанцевой В.А.).
Результаты оценки динамики подавления интенсивности репродукции штаммов вируса полиомиелита в культуре клеток НЕр-2 при наличии и отсутствии томатозида в поддерживающей среде учитывают только при соблюдении следующих контролей:
1. Монослой незараженной культуры НЕр-2 (при наличии и отсутствии в поддерживающей среде томатозида в конечной концентрации 0,01%) должен сохраниться до конца опыта, т.е. до седьмых суток включительно после заражения (контроль культуры клеток).
1. Монослой незараженной культуры НЕр-2 (при наличии и отсутствии в поддерживающей среде томатозида в конечной концентрации 0,01%) должен сохраниться до конца опыта, т.е. до седьмых суток включительно после заражения (контроль культуры клеток).
2. Разница в интенсивности репродукции в культуре клеток НЕр-2 при отсутствии и наличии томатозида в поддерживающей среде для аттенуированных стандартных штаммов вируса полиомиелита (LSc2ab, P712Ch2ab, Leon12a1b) составляет более 104,0 ЦПД50/мл, тогда как для диких стандартных штаммов вируса полиомиелита (Mahoney, Луговской, MEF-1, Смирновой, Saukett) этот показатель составляет до 103,0 ЦПД50/мл включительно.
Анализ результатов, полученных при определении степени подавления репродукции томатозидом 14 изолятов вируса полиомиелита типа l, показывает, что для изолятов, сходных в антигенном отношении со штаммами Mahoney, Луговской, разница в подавлении их репродукции в культуре составляет до 3,0 lg ЦПД50/мл включительно. Исключение составляет один изолят, сходный в антигенном отношении с промежуточным вариантом Коньков + LSc2ab. Для этого штамма отличие в титре составляет 3,5 lg ЦПД50/мл. Остальные изоляты этого же иммунологического типа имели антигенное сходство со штаммом LSc2ab. В данном случае разница в интенсивности подавления репродукции изолятов вируса полиомиелита составляет больше 4,0 lg ЦПД50/мл.
Подобные результаты получены при изучении влияния раствора томатозида на динамику подавления репродукции штаммов вируса полиомиелита типа II в культуре клеток. Величина разницы интенсивности подавления репродукции 7 штаммов вируса полиомиелита типа II, в антигенном отношении сходных со штаммами MEF-1 и Смирновой, составляет до 3,0 lg ЦПД50/мл, тогда как для остальных 4 изолятов вируса полиомиелита, сходных в антигенном отношении со штаммом P712Ch2ab, эта величина составляет больше 4,0 lg ЦПД50/мл. Такая же динамика подавления репродукции характерна и для изолятов вируса полиомиелита типа III. Отличие в интенсивности подавления репродукции 7 изолятов, сходных в антигенном отношении со штаммом Saukett, составляет до 3,0 lg ЦПД50/мл включительно в культуре клеток НЕр-2, где процент томатозида в питательной среде составляет 0,01% по сравнению с таковой, где томатозид не добавляют. Что касается остальных 3 изолятов вируса полиомиелита типа III, в антигенном отношении сходных с вакцинным вирусом Leon12a1b, то для них эта разница составляет 3,0 lg ЦПД50/мл. Сходные результаты получены при изучении влияния томатозида на репродуктивную способность стандартных (музейных) штаммов вируса полиомиелита (таблица). Так, для диких штаммов вируса полиомиелита (Mahoney, Луговской, MEF-1, Смирновой, Saukett) этот показатель составляет до 3,0 lg ЦПД50/мл включительно, а для вакцинных (LSc2ab, P713Ch2ab, Leon12a1b) больше 4,0 lg ЦПД50/мл.
Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о полном совпадении информации, касающейся степени аттенуации вариантов вируса полиомиелита, полученной с помощью известного теста (3, 4) и предложенного нами маркера. Это позволяет рассматривать томатозид как новый маркер оценки степени аттенуации вирусов. Предложенный маркер не уступает по чувствительности известному маркеру (Ag), выявляемому в реакции диффузионной преципитации в геле, широко доступен и экономически выгоден.
Claims (1)
- Использование томатозида в качестве средства для определения степени аттенуации вируса полиомиелита.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU9292014469A RU2064794C1 (ru) | 1992-12-24 | 1992-12-24 | Средство для определения степени аттенуации вируса полиомиелита |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU9292014469A RU2064794C1 (ru) | 1992-12-24 | 1992-12-24 | Средство для определения степени аттенуации вируса полиомиелита |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU92014469A RU92014469A (ru) | 1995-04-20 |
| RU2064794C1 true RU2064794C1 (ru) | 1996-08-10 |
Family
ID=20134277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU9292014469A RU2064794C1 (ru) | 1992-12-24 | 1992-12-24 | Средство для определения степени аттенуации вируса полиомиелита |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2064794C1 (ru) |
-
1992
- 1992-12-24 RU RU9292014469A patent/RU2064794C1/ru active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 1. Журнал Всесоюзного химич. общ-ва им.Д.И.Менделеева, 1988, N 5, с. 584 - 585. * |
| 2. Ворошилова М.К. Энтеровирусные инфекции человека.- М.: Медицина, 1979, с. 148 - 189. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miller et al. | Lymphoma in cotton-top marmosets after inoculation with Epstein-Barr virus: tumor incidence, histologic spectrum antibody responses, demonstration of viral DNA, and characterization of viruses. | |
| Wu et al. | Spread of hepatitis E virus among different‐aged pigs: two‐year survey in Taiwan | |
| Kaplan et al. | A comparison of herpes simplex and pseudorabies viruses | |
| MacGregor et al. | Virus infection of endothelial cells increases granulocyte adherence | |
| Lewis Jr et al. | Studies of Nondefective Adenovirus 2-Simian Virus 40 Hybrid Viruses V. Isolation of Additional Hybrids Which Differ in Their Simian Virus 40-Specific Biological Properties | |
| Waller | Sensitivity of Encephalitozoon cuniculi to various temperatures, disinfectants and drugs | |
| Dougherty et al. | Isolation and characterization of a papovavirus from human urine | |
| Shien et al. | Experimental infections of rabbits with rabbit haemorrhagic disease virus monitored by polymerase chain reaction | |
| Sekellick et al. | Persistent infection II. Interferon-inducing temperature-sensitive mutants as mediators of cell sparing: possible role in persistent infection by vesicular stomatitis virus | |
| Rosenberger et al. | Characterization of several viruses isolated from chickens with inclusion body hepatitis and aplastic anemia | |
| Darai et al. | Neoplastic transformation of rat embryo cells with herpes simplex virus | |
| Burnet | Immunological studies with the virus of infectious laryngotracheitis of fowls using the developing egg technique | |
| Schell et al. | Potentiation of oncogenicity of adenovirus type 12 grown in African green monkey kidney cell cultures preinfected with SV40 virus. Persistence of both T antigens in the tumors and evidence for possible hybridization. | |
| Gajdusek | Spongiform virus encephalopathies | |
| Gerber | Patterns of Antibodies to SV40, in Children Following the Last Booster with Inactivated Poliomyelitis Vaccines | |
| CN106367402A (zh) | 用于纯化体外产生的病毒的方法及对于病毒的清除测定 | |
| Wecker et al. | Genomic masking produced by double-infection of HeLa cells with heterotypic polioviruses | |
| Deshmukh et al. | Avian reoviruses. II. Physicochemical characterization and classification | |
| RU2064794C1 (ru) | Средство для определения степени аттенуации вируса полиомиелита | |
| Phillpotts et al. | A search for persistent virus infection in Crohn's disease. | |
| Yoshimura et al. | Search for evidence of a viral aetiology for inflammatory bowel disease. | |
| Fattal et al. | Enterovirus types in Israel sewage | |
| RU1799598C (ru) | Маркер оценки аттенуации вирусов полиомиелита | |
| Schmidt et al. | Adeno-associated virus in adenovirus type 3 conjunctivitis | |
| RU2046139C1 (ru) | Ингибитор ротавирусов |