RU2063044C1

RU2063044C1 - Method of prognosis of infectious-allergic bronchial asthma course

Info

Publication number: RU2063044C1
Authority: RU
Inventors: Т.П. Бардымова; Л.С. Колесниченко; Т.П. Сизых
Original assignee: Иркутский Государственный Медицинский Институт
Priority date: 1992-09-14
Filing date: 1992-09-14
Publication date: 1996-06-27

Abstract

FIELD: medicine, pulmonology. SUBSTANCE: regulation of glutathione transferase activity with cAMP is determined in blood erythrocytes. Enzyme activity is determined using 1-chloro-2,4-dinitrobenzene as substrate and activity is expressed as nmole/min/1 mg protein. Effect of cAMP is determined as an activity increase. In the absence of glutathione transferase regulation effect with cAMP phase of exacerbation disease and dispnea attacks were observed in patient that requires intensive broncholytic therapy application. Remission phase disease at favorable prognosis is diagnosed in the presence of glutathione transferase regulation with cAMP. EFFECT: increased precision, simplified analysis.

Description

Предполагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии. The alleged invention relates to medicine, namely to pulmonology.

Известны различные способы прогнозирования течения бронхиальной астмы. There are various methods for predicting the course of bronchial asthma.

Известен способ прогноза течения бронхиальной астмы путем определения эозинофилов в периферической крови. Однако, увеличение количества эозинофилов в крови не дает возможности разграничить формы бронхиальной астмы. Так эозинофилия крови является неспецифическим признаком, что снижает точность прогноза течения бронхиальной астмы (см. Н.Р.Палеев, "Болезни органов дыхания", т.3, М. "Медицина", 1990 г. стр. 71). A known method for predicting the course of bronchial asthma by determining eosinophils in peripheral blood. However, an increase in the number of eosinophils in the blood makes it impossible to distinguish between forms of bronchial asthma. So blood eosinophilia is a non-specific sign, which reduces the accuracy of the prognosis of the course of bronchial asthma (see N.R. Paleev, "Respiratory diseases", v.3, M. "Medicine", 1990, p. 71).

Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ прогнозирования течения бронхиальной астмы путем определения повышения активности калликреина, снижения содержания кининогена, падения активности ингибиторов калликреина и кининазной активности крови, при этом обнаруживается возрастание количества серотонина в тромбоцитах, нарастание концентрации ацетилхолина и гистамина в крови и снижение активности ферментов, участвующих в их инактивации. У больных с легким течением бронхиальной астмы одновременно с улучшением состояния происходит почти полная нормализация сдвигов в уровне биологически активных веществ. Однако известный способ недостаточно информативен, трудоемок, не обладает достаточной специфичностью. (см. Н.Р.Палеев. "Болезни органов дыхания". т.1, Москва, "Медицина", 1990 г. стр. 393). The closest and accepted by us as a prototype is a method for predicting the course of bronchial asthma by determining an increase in kallikrein activity, a decrease in kininogen content, a decrease in the activity of kallikrein inhibitors and kininase activity of the blood, while an increase in the amount of serotonin in platelets, an increase in the concentration of acetylcholine and histamine in the blood and a decrease the activity of enzymes involved in their inactivation. In patients with mild bronchial asthma, an almost complete normalization of shifts in the level of biologically active substances occurs simultaneously with an improvement in the condition. However, the known method is not sufficiently informative, time-consuming, does not have sufficient specificity. (see N.R. Paleev. "Diseases of the respiratory system." t.1, Moscow, "Medicine", 1990, p. 393).

Целью предполагаемого изобретения является повышение точности способа и упрощение исследования. The aim of the proposed invention is to improve the accuracy of the method and simplify the study.

Поставленная цель достигается путем биохимического исследования крови. Новым в достижении поставленной цели является то, что в эритроцитах крови определяют регуляцию цАМФ (циклоаденозинмонофосфатом) глутатионтрансферазы и при отсутствии эффекта регуляции определяют фазу обострения течения заболевания, а при наличии эффекта регуляции прогнозируют фазу ремиссии заболевания. The goal is achieved by biochemical blood tests. What is new in achieving this goal is that blood erythrocytes determine the regulation of cAMP (cycloadenosine monophosphate) of glutathione transferase and, in the absence of a regulatory effect, determine the phase of exacerbation of the disease, and in the presence of a regulatory effect, the phase of disease remission is predicted.

Авторы при исследовании эритроцитов здоровых людей, содержащих глутатионтрансферазы класса π, установили, что циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) активирует этот изофермент. У больных с тяжелым течение инфекционно-аллергической бронхиальной астмы активирующий эффект цАМФ на глутатионтрансферазу эритроцитов исчезает. Нарушение активации глутатионтрансферазы под влиянием цАМФ отрицательно сказывается на устойчивости организма к ряду неблагоприятных факторов: пероксидному стрессу и инактивации ксенобиотиков. The authors, when studying the erythrocytes of healthy people containing glutathione transferase of class π, found that cyclic adenosine monophosphate (cAMP) activates this isoenzyme. In patients with severe infectious-allergic bronchial asthma, the activating effect of cAMP on glutathione transferase of red blood cells disappears. Violation of the activation of glutathione transferase under the influence of cAMP negatively affects the body's resistance to a number of adverse factors: peroxide stress and inactivation of xenobiotics.

Катехоламины через b-адренорецепторы и цАМФ активируют глутатионтрансферазу. Эффект реализуется по регуляторной цепи: катехоламины --> b-адренорецепторы --> аденилатциклаза --> цАМФ --> протеинкиназа А --> глутатионтрансфераза. Catecholamines through b-adrenergic receptors and cAMP activate glutathione transferase. The effect is realized along the regulatory chain: catecholamines -> b-adrenergic receptors -> adenylate cyclase -> cAMP -> protein kinase A -> glutathione transferase.

Впервые установлено, что цАМФ активирует глутатионтрансферазу эритроцитов, а именно p глутатионтрансферазу. It has been found for the first time that cAMP activates erythrocyte glutathione transferase, namely, p glutathione transferase.

В фазу обострения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы активирующий эффект цАМФ на глутатионтрансферазу эритроцитов исчезает. Это согласуется с хорошо известным фактором, что при бронхиальной астме снижается реакция системы b адреноцепторы аденилатциклаза. По нашим данным следует, что нарушения происходят в рецепторном отделе, но и в конечном звене реализации регуляторных эффектов второго посредника цАМФ. Нарушается активация им протеинкиназы А. In the phase of exacerbation of infectious-allergic bronchial asthma, the activating effect of cAMP on glutathione transferase of red blood cells disappears. This is consistent with the well-known factor that with bronchial asthma the response of the b-adrenoceptor adenylate cyclase system decreases. According to our data, violations occur in the receptor department, but also in the final link in the implementation of the regulatory effects of the second cAMP mediator. They disrupt activation of protein kinase A.

При улучшении состояния больных (в фазу ремиссии) реакция глутатионтрансферазы на цАМФ полностью восстанавливается вследствие обратимости нарушений регуляции. With an improvement in the condition of patients (in the phase of remission), the reaction of glutathione transferase to cAMP is completely restored due to the reversibility of regulation disorders.

Из вышеизложенного следует, что заявленное техническое решение по сравнению с прототипом имеет отличительные существенные признаки, заключающиеся в том, что в эритроцитах крови определяют регуляцию цАМФ глутатионтрансферазы и при отсутствии эффекта регуляции определяют фазу обострения течения заболевания, а при наличии эффекта регуляции прогнозируют фазу ремиссии заболевания, что позволяет определить данное решение соответствующим критерию "новизна". Новая совокупность признаков обеспечивает достижение более высоко положительного эффекта, заключающегося в повышении точности способа и упрощении исследования, следовательно решение обладает "существенными отличиями". From the above it follows that the claimed technical solution in comparison with the prototype has distinctive essential features, namely, in the blood red blood cells determine the regulation of cAMP glutathione transferase and in the absence of a regulation effect determine the phase of exacerbation of the disease, and in the presence of the regulation effect, the phase of remission of the disease is predicted, which allows us to determine this decision according to the criterion of "novelty." A new set of features ensures the achievement of a more highly positive effect, which consists in increasing the accuracy of the method and simplifying the study, therefore, the solution has "significant differences".

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. The proposed method is as follows.

При поступлении больного в стационар ему проводят общеклиническое обследование, включая общие и биохимические анализы крови, общие анализы мочи, спирографию, рентгенографию органов грудной клетки, ЭКГ, анализы мокроты и мочи, по показаниям эндоскопические методы исследования (бронхоскопия). Для прогноза течения заболевания проводят определение регуляции цАМФ глутатионтрансферазы в эритроцитах крови. Upon admission, the patient undergoes a general clinical examination, including general and biochemical blood tests, general urinalysis, spirography, chest x-ray, ECG, sputum and urine tests, and, according to indications, endoscopic examination methods (bronchoscopy). To predict the course of the disease, the regulation of cAMP glutathione transferase in blood red blood cells is determined.

Утром натощак производят забор венозной крови из v.ulnoris в количестве 6,5 7,5 мл. с гепарином. Центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 минут отделяют плазму. Эритроциты промывают дважды холодным физиологическим раствором центрифугированием при 6000 об/мин 10 мин и гемолизируют дистилированной водой в соотношении 1:3 Полученный гемолизат разводят в 50 раз для получения рабочего раствора. In the morning on an empty stomach, venous blood is sampled from v.ulnoris in an amount of 6.5 to 7.5 ml. with heparin. Centrifugation at 1500 rpm for 10 minutes separates the plasma. The red blood cells are washed twice with cold saline by centrifugation at 6000 rpm for 10 minutes and hemolysed with distilled water in a ratio of 1: 3. The resulting hemolysate is diluted 50 times to obtain a working solution.

Определение активности фермента проводят по Habig et all (1974 г.) с субстратом 1 хлор, 2,4 динитробензолом. Determination of enzyme activity is carried out according to Habig et all (1974) with a substrate of 1 chlorine, 2,4 dinitrobenzene.

Общий объем инкубационной смеси 2 мл: 100 ml гемолизата, 5•10^-3M MgCl₂, 10^-4 M АТФ, цАМФ 10^-6 M, 0,1 M фосфатный буфер, 1мМЭДТА, pH 6,5.The total volume of the incubation mixture is 2 ml: 100 ml of hemolysate, 5 • 10 ^-3 M MgCl ₂ , 10 ^-4 M ATP, cAMP 10 ^-6 M, 0.1 M phosphate buffer, 1 mMEDTA, pH 6.5.

Контрольная проба не содержит цАМФ. Инкубируют 10 минут при 30^o и реакцию запускают добавлением GSH 1мМ и ХДНБ 1мМ. Изменения оптической плотности регистрируют на СФ-26 при длине волны 345 нм.The control sample does not contain cAMP. Incubated for 10 minutes at 30 ^o and the reaction is started by adding GSH 1 mm and CDNB 1 mm. Changes in optical density are recorded on the SF-26 at a wavelength of 345 nm.

Белок определяют по Лоури. Расчет активности проводят по формуле:

Δσ₃₄₅ изменение оптической плотности при 345 нм,
V объем пробы,
Б белок в пробе,
9,6 коэффициент микромолярной экстинции,
t время.Protein is determined by Lowry. The calculation of activity is carried out according to the formula:

Δσ ₃₄₅ change in optical density at 345 nm,
V sample volume
B protein in the sample,
9.6 micromolar extinction coefficient,
t time.

Активность фермента выражают в нмоль/мин на 1 мг Б (белка). Эффект цАМФ
как прирост активности.Enzyme activity is expressed in nmol / min per 1 mg B (protein). CAMP effect
as an increase in activity.

Таким образом при отсутствии эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы у больного наблюдается фаза обострения заболевания с ожидаемыми частыми приступами удушья и необходимостью более интенсивной бронхолитической терапии. При наличии эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы у больного диагностируется фаза ремиссии заболевания с благоприятным прогнозом. Thus, in the absence of the effect of cAMP glutathione transferase regulation, the patient experiences an exacerbation phase of the disease with the expected frequent attacks of suffocation and the need for more intensive bronchodilator therapy. In the presence of the effect of cAMP glutathione transferase regulation, the patient is diagnosed with a phase of disease remission with a favorable prognosis.

Предложенный способ прогнозирования течения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы подтверждается клиническим примером. The proposed method for predicting the course of infectious-allergic bronchial asthma is confirmed by a clinical example.

Больная К (58 лет) поступила в пульмотерапевтическое отделение ОКБ с диагнозом инфекционно-аллергическая бронхиальная астма, тяжелое течение, обострение, ДН_П. При поступлении предъявляла жалобы на одышку при незначительной физической нагрузке экспираторного характера, приступы удушья до 3 5 раз в сутки. Приступы начинались с одышки экспираторного характера и заканчивались кашлем с отделением вязкой, стекловидной мокроты в небольшом количестве. Из анамнеза: страдает бронхиальной астмой 19 лет. Объективно: состояние средней тяжести, сознание ясное, положение активное. Телосложение правильное. Перкуторно звук с коробочным оттенком. Аускультативно дыхание ослабленное везикулярное, масса сухих жужжащих, свистящих хрипов, ЧДД-24 в минуту. Границы сердца в пределах нормы. Тоны ритмичные (сердца), ЧСС-92 в минуту, АД 130/90. Живот без особенностей. Отеков нет.Patient K (58 years old) was admitted to the pulmonotherapy department of the Design Bureau with a diagnosis of infectious-allergic bronchial asthma, severe course, exacerbation, DN _P. On admission, she complained of shortness of breath with little exertional exertion, asthma attacks up to 3 5 times a day. The attacks began with shortness of breath of an expiratory character and ended with a cough with a separation of viscous, vitreous sputum in a small amount. From the anamnesis: suffers from bronchial asthma for 19 years. Objectively: moderate state, clear consciousness, active position. The physique is correct. Percussion sound with a boxed tint. Auscultatory weakened vesicular breathing, mass of dry buzzing, wheezing, RRV-24 per minute. The boundaries of the heart are within normal limits. Rhythmic tones (heart), heart rate-92 per minute, blood pressure 130/90. Belly without features. No swelling.

Нами исследована регуляция глутатионтрансферазы цАМФ в эритроцитах крови по выше описанной методике. Установлено отсутствие эффекта регуляции (в контрольной пробе 5,79 нмоль• мин/мг белка, опытной 3,24 нмоль•мин/мг белка, что указывает в пользу фазы обострения заболевания. We studied the regulation of cAMP glutathione transferase in blood erythrocytes according to the method described above. The absence of the regulation effect was found (in the control sample 5.79 nmol • min / mg protein, experimental 3.24 nmol • min / mg protein, which indicates the phase of exacerbation of the disease.

У этой же больной при улучшении состояния, когда купировались приступы удушья, при аускультации легких исчезли сухие хрипы, улучшилось общее состояние было проведено исследование регуляции глутатионтрансферазы цАМФ в эритроцитах крови. Установлено наличие эффекта регуляции (контрольная проба 1,74 нмоль•мин/мг белка и опытная 2,19 нмоль•мин/мг белка), что свидетельствует о фазе ремиссии заболевания. In the same patient, when the condition improved, when asthma attacks stopped, dry rales disappeared with auscultation of the lungs, the general condition improved, and the study of the regulation of cAMP glutathione transferase in blood red blood cells was conducted. The presence of a regulatory effect was found (control sample 1.74 nmol • min / mg protein and experimental 2.19 nmol • min / mg protein), which indicates the phase of disease remission.

Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования течения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы позволяет повысить точность прогноза течения заболевания, упростить методику исследования, снизить себестоимость исследования, приводит к экономии лекарственных средств и снижению койко-дня, позволяет своевременно коррегировать лечение. Thus, the proposed method for predicting the course of infectious-allergic bronchial asthma can improve the accuracy of the prognosis of the course of the disease, simplify the research methodology, reduce the cost of the study, lead to the saving of medicines and reduce the hospital bed, and allow timely treatment correction.

Claims

A method for predicting the course of infectious-allergic bronchial asthma, including a biochemical blood test, characterized in that a hemolysate is prepared from red blood cells, which is diluted with distilled water at a ratio of 1:49, a known incubation medium is added to both samples to determine the activity of glutathione transferase, while in the experimental the sample is additionally added with a cAMP solution in a final concentration of 10 ^-6 M, followed by spectrophotometry of both samples at 345 nm and calculation of the effect of regulation of cAMP glutathione erythrocyte ansferase and, in the presence of a regulatory effect in the cAMP experimental sample, erythrocyte glutathione transferase in comparison with the control predict a phase of disease remission, and in the absence of a regulatory effect in the experimental sample, the disease exacerbation phase is relative to the control.