RU2041609C1 - Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" - Google Patents
Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" Download PDFInfo
- Publication number
- RU2041609C1 RU2041609C1 RU93005426A RU93005426A RU2041609C1 RU 2041609 C1 RU2041609 C1 RU 2041609C1 RU 93005426 A RU93005426 A RU 93005426A RU 93005426 A RU93005426 A RU 93005426A RU 2041609 C1 RU2041609 C1 RU 2041609C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plants
- nutrient medium
- medium
- grape
- grape seeds
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Использование: в сельском хозяйстве и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размещения и оздоровления сортов винограда. Сущность способа: вначале осуществляют микрочеренкование пробирочных растений с 8 10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10 - 12 мм с узлом и листом, а затем высаживают их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга. В питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5 от объема среды. 5 табл.
Description
Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам размножения растений, и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размножения и оздоровления перспективных сортов винограда, в исследованиях по физиологии винограда, служит охране окружающей среды.
Известна основная модель клонального микроразмножения растений пролиферация пазушных побегов, основанная на снятии апикального доминирования [1] Есть два направления осуществления этого способа:
получение побегов нормальных пропорций с последующим их делением на однопочковые микрочеренки, которые используются в качестве вторичных эксплантов для повторения цикла размножения,
введение в питательную среду цитокининов, что приводит к формированию побегов с относительно укороченными междоузлиями, а пазушные почки и меристематические бугорки дают начало новым побегам.
получение побегов нормальных пропорций с последующим их делением на однопочковые микрочеренки, которые используются в качестве вторичных эксплантов для повторения цикла размножения,
введение в питательную среду цитокининов, что приводит к формированию побегов с относительно укороченными междоузлиями, а пазушные почки и меристематические бугорки дают начало новым побегам.
Недостатком данного способа является недостаточно высокий коэффициент размножения в процессе культивирования.
Известен способ клонального микроразмножения винограда микрочеренкованием [2] при котором побег, образовавшийся из изолированной почки и имеющей 8-10 междоузлий, асептически разрезают на фрагменты, включающие узел с листом и почкой. Полученные микрочеренки высаживают в биологические пробирки на агаровую среду, так чтобы нижняя часть была погружена в агар, а затем культивируют в камере фитотрона.
Недостатком способа является то, что в качестве индуктора корнеобразования взята феруловая кислота, которая способна ингибировать рост побегов и снижать выход растений из черенков.
Известен способ микроклонального размножения винограда "Ин витро", включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8-10 междoузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга [3]
В качестве индукторов корнеобразования здесь используют индолилмасляную и индолилуксусную кислоты.
В качестве индукторов корнеобразования здесь используют индолилмасляную и индолилуксусную кислоты.
Трудность заключается том, что при клональном микроразмножении растения растут относительно медленно и это ограничивает эффективность метода при размножении побегов микрочеренками. Одной из причин медленного роста являются стрессовые условия, в которых находятся растения "Ин витро". Кроме этого, основной сложностью технологии на первом этапе является ингибирование ростовых процессов экспланта токсическими веществами, выделямыми им в среду. В результате травмы, полученной эксплантом при изолировании, активизируются ферменты, окисляющие фенолы растений, различные фенолозы. Продукты окисления фенолов обычно ингибируют деление и рост клеток экспланта. Чтобы улучшить положение добавляют активированный уголь, который уменьшает число погибающих растений, или антиоксиданты.
Изобретение предназначено для повышения эффективности клонального микроразмножения.
В предложенном способе микроклонального размножения винограда "Ин витро", заключающем микрочеренкование пробирочных растений с 8-10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга, в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1-0,5% от объема среды.
Новым в предложенном способе является то, что оптимизацию клонального микроразмножения осуществляют за счет питательной среды, в составе которой предлагают стимуляторы роста естественного прохождения, а именно семена винограда, в виде тонкоразмолотого порошка.
Известно, что виноградные семена используют при производстве масла, кормовой муки, удобрений, естественного парника. В предложенном способе семена используются как стимуляторы роста ввиду того, что в них находятся вещества с ценными биологическим свойствами: абсцизовая и хлорогеновая кислоты, общий фенолы, рутин, свободные ауксины и цитокинины.
В состав семян винограда входят такие осмотически активные вещества как соли, сахара, органические кислоты. Также входит большое количество фитогормонов (ауксинов и цитокининов), которые обладают трофическим действием, т.е. способны тормозить деструктивные процессы, которые являются характерной чертой старения органов или целых организмов. Использование семян винограда в виде тонкоразмолотого порошка позволяет адсорбировать токсические вещества, выделяемые растениями при их микрочеренковании в питательную среду, и заменить таким образом активированный уголь. Т.е. налицо неоднозначность предлагаемого приема: адсорбирование токсических веществ, выделяемых пробирочными растениями в питательную среду при их микрочеренковании, и обогащение питательной среды цитокининами, ауксинами и другими фитогормонами, входящими в состав семян винограда. Адсорбирование токсических веществ осуществляют с целью уменьшения ингибирования наружного роста и увеличения регенеративной способности выделенных эксплантов.
Способ осуществляют следующим образом.
Отбирают клонально-размноженные из меристематических верхушек пробирочные растения винограда. Растения должны иметь 8-10 глазков, а затем приступают к приготовлению питательной среды Мурасиге Скуга по общепринятой методике.
Применяют следующий порядок приготовления питательной среды. В 1 л бидистиллированной воды растворяют макроэлементы, микроэлементы, витамины и другие составные части среды.
Навеску предварительно промытого и высушенного агара переносят в колбу, заливают половинным количеством (от объема среды) бидистиллированной воды 1 л и нагревают на плите до 80-100оС. Семена винограда тщательно промывают, просушивают, перемалывают на лабораторной мельнице до малой фракции около 5 мин. Добавляют их в раствор макро- и микроэлементов, сахара, витаминов и других составных частей среды. Молотые семена добавляют в концентрации 0,25% После растворения и некоторого охлаждения агара к нему добавляют приготовленный раствор. Температура агара и добавленного раствора одинаковая и составляет 80оС.
Среду фильтруют через два слоя марли и доводят до нужного объема бидистиллятом.
Готовую среду разливают по пробиркам, которые закрывают предварительно простерилизованными в автоклаве ватными пробками, штатив с пробирками закрывают целлофаном и обвязывают шпагатом, а затем среду автоклавируют в автоклаве ГК-1000.
Микрочеренкование осуществляют в операционной комнате в ламинарном боксе "Роботрон". Побеги, имеющие 8-10 глазков, при помощи пинцета извлекают из пробирки, помещают на стерильную чашку Петри, разрезают на микрочеренки, имеющие узел с листом и почкой. Длина микрочеренка 10-12 мм, 2 мм над почкой, остальные под почкой. Получение микрочеренки высаживают в пробирки с приготовленной твердой средой, так чтобы нижняя часть до почки была погружена в агар. Культивирование осуществляют в культуральной комнате при освещенности 2,0-3,0 тыс.люксов, фотопериоде 16 ч, температуре 25-27±2оС, влажности воздуха 70-75%
Наблюдения за ростом растений осуществляют через 15 дней. Добавление размолотых семян винограда в первую очередь влияет на развитие корневой системы увеличивается число корней и уменьшается их длина, что объясняется наличием в составе семян свободных ауксинов. В конечном итоге количество корней возрастает в 1,8 раза, соответственно уменьшается их длина, но корни от этого не ухудшаются, они становятся более мощными и общая их масса возрастает в 4,1 раза (табл.1.).
Наблюдения за ростом растений осуществляют через 15 дней. Добавление размолотых семян винограда в первую очередь влияет на развитие корневой системы увеличивается число корней и уменьшается их длина, что объясняется наличием в составе семян свободных ауксинов. В конечном итоге количество корней возрастает в 1,8 раза, соответственно уменьшается их длина, но корни от этого не ухудшаются, они становятся более мощными и общая их масса возрастает в 4,1 раза (табл.1.).
Это оказывает положительное влияние на рост побегов, образование листьев и новых узлов, хотя на первом этапе отличалось угнетение этих процессов, но на втором месяце культивирования скорость роста пробирочных растений увеличивается за счет добавления в питательную среду размолотых семян винограда, что способствует мощному развитию корневой системы. Торможение же роста в течение первого месяца зависит от наличия в составе семян абсцизовой кислоты и фенолов, которые являются ингибиторами широкого спектра действия.
Положительное действие добавки в питательную среду размолотых семян винограда наблюдали при их концентрации 0,1% от объема среды, максимальный положительный эффект был получен при концентрации 0,25% При дальнейшем увеличении концентрации размолотых семян в среде (0,5%) положительное действие сохраняется, но отмечается тенденция к его снижению.
Развитие пробирочных растений в зависимости от количества молотых семян винограда, добавленных в питательную среду (через 63 дня после начала культивирования), представлено в табл.2.
Таким образом, добавление в питательную среду естественных стимуляторов роста из размолотых семян винограда способствует значительному улучшению корневой системы пробирочных растений после их микрочеренкования, что в свою очередь благоприятствует лучшему росту побегов в высоту, развитию большой листовой поверхности, увеличению общей массы побегов. В результате этого увеличивается число узлов (листьев, в пазухе которых находится почка), которые дают начало новым растениям "Ин витро" после их микрочеренкования, т. е. увеличивается потенциальное микрочеренкование и эффективность клонального микроразмножения.
В табл. 3 и 4 соответственно показаны признаки и состав питательной среды.
Предложенная совокупность признаков способствует повышению эффективности клонального микроразмножения на 27,0% и достаточна для достижения поставленной цели.
Добавление в питательную среду размолотых семян винограда оказывает, в первую очередь, положительное влияние на укоренение и развитие корневой системы пробирочных растений: уменьшается длина главного и придаточных корней, но возрастает их число, что способствует увеличению корневой системы.
Динамика развития пробирочных растений без добавления и при добавлении в питательнуюс. реду размолотых семян винограда 0,25 об. среды представлена в табл.5.
Claims (1)
- СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ВИНОГРАДА "ИН ВИТРО", включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8 10 междоузлиями на фрагменты длиной 10 12 мм с узлом и листом, посадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга и культивирование из них растений, отличающийся тем, что в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5% от объема среды.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93005426A RU2041609C1 (ru) | 1993-02-01 | 1993-02-01 | Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93005426A RU2041609C1 (ru) | 1993-02-01 | 1993-02-01 | Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2041609C1 true RU2041609C1 (ru) | 1995-08-20 |
RU93005426A RU93005426A (ru) | 1997-04-20 |
Family
ID=20136420
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93005426A RU2041609C1 (ru) | 1993-02-01 | 1993-02-01 | Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2041609C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2521992C1 (ru) * | 2013-01-09 | 2014-07-10 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Чеченский Государственный Университет" | СПОСОБ МИКРОЧЕРЕНКОВАНИЯ ВИНОГРАДА in vitro |
MD705Z (ru) * | 2013-04-19 | 2014-07-31 | Институт Генетики И Физиологии Растений Академии Наук Молдовы | Способ микроклонального размножения винограда |
-
1993
- 1993-02-01 RU RU93005426A patent/RU2041609C1/ru active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
1. Высоцкий В.А. Клональное микроразложение растений. Культура клеток растений и биотехнологии. М, 1986, с.93. * |
2. Бургутин А.Б. и др. Быстрое клональное размножение виноградного растения. Сельскохозяйственная биология, 1983, N 7, с.48 - 50. * |
3. Дорошенко Н.П. Рекомендации. Клональное микроразмножение и оздоровление посадочного материала винограда для создания из него сортовых маточников интенсивного типа. М.: УНТИПиР, 1992, с.11 - 13. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2521992C1 (ru) * | 2013-01-09 | 2014-07-10 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Чеченский Государственный Университет" | СПОСОБ МИКРОЧЕРЕНКОВАНИЯ ВИНОГРАДА in vitro |
MD705Z (ru) * | 2013-04-19 | 2014-07-31 | Институт Генетики И Физиологии Растений Академии Наук Молдовы | Способ микроклонального размножения винограда |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Soneji et al. | Germination of synthetic seeds of pineapple (Ananas comosus L. Merr.) | |
Islam et al. | In vitro regeneration protocol for artificial seed production in an important medicinal plant Mentha arvensis L | |
Saborio et al. | In vitro regeneration of plantlets from mature embryos of Pinus ayacahuite | |
Warakagoda et al. | In vitro propagation of Pterocarpus santalinus L.(Red Sandalwood) through tissue culture | |
Shaheen et al. | Nutrient encapsulation of nodal segments of an endangered white cedar for studies of regrowth, short term conservation and ethylene inhibitors influenced ex vitro rooting | |
US7932086B2 (en) | Commercially viable process for in vitro mass culture of Jatropha curcas | |
Atak et al. | Micropropagation of Anthurium spp | |
Grigoriadou et al. | In vitro propagation of Primula veris L. subsp. veris (Primulaceae): A valuable medicinal plant with ornamental potential | |
Akram et al. | Establishment of embryogenic cultures and efficient plant regeneration system from explants of forced softwood shoots of teak (Tectona grandis L.) | |
Kumar et al. | Callus induction and plant regeneration from leaf explants of apple (Pyrus malus L.) cv. golden delicious | |
Singh et al. | Plant regeneration from alginate-encapsulated somatic embryos of Dalbergia sissoo Roxb. | |
Pang et al. | Establishment of an efficient micropropagation protocol for Cameron Highlands White Strawberry (Fragaria x ananassa) using a light emitting diode (LED) system | |
RU2041609C1 (ru) | Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" | |
Moola et al. | Direct regeneration of plantlets from shoot tip explants of a vulnerable medicinal plant–Celastrus paniculatus Willd | |
Reddy et al. | In vitro multiple shoot induction through axillary bud of Asclepias curassavica L.-a valuable medicinal plant | |
RU2110172C1 (ru) | Способ длительного сохранения in vitro растений винограда | |
Koilpillai et al. | In vitro Propagation of Graptophyllum pictum L.(Acanthaceae)-A Medicinal plant. | |
Singh et al. | A quick method for micro-propagation of Aloe vera L. from leaf explants via callus induction | |
KR102609856B1 (ko) | 개정향풀의 식물체 대량증식 배양 방법 | |
Micheli et al. | Encapsulation of black mulberry microcuttings: studies on capsules and synthetic seeds | |
CN112690215B (zh) | 一种猪血木组织培养方法 | |
US20090249511A1 (en) | Method for in vitro mass culture of aloe vera | |
CN112753579B (zh) | 一种民族药石吊兰叶的离体培养及植株再生的方法 | |
EP4292426A1 (en) | Juvenile bamboo plant of the genus fargesia | |
Rahman et al. | In vitro plantlet regeneration from internode explant of native Olive (Elaeocarpus robustus roxb.) |