RU2041609C1 - Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" - Google Patents

Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" Download PDF

Info

Publication number
RU2041609C1
RU2041609C1 RU93005426A RU93005426A RU2041609C1 RU 2041609 C1 RU2041609 C1 RU 2041609C1 RU 93005426 A RU93005426 A RU 93005426A RU 93005426 A RU93005426 A RU 93005426A RU 2041609 C1 RU2041609 C1 RU 2041609C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
plants
nutrient medium
medium
grape
grape seeds
Prior art date
Application number
RU93005426A
Other languages
English (en)
Other versions
RU93005426A (ru
Inventor
Б.А. Музыченко
Н.П. Дорошенко
Original Assignee
Научно-Производственное Объединение "Виноград"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Научно-Производственное Объединение "Виноград" filed Critical Научно-Производственное Объединение "Виноград"
Priority to RU93005426A priority Critical patent/RU2041609C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2041609C1 publication Critical patent/RU2041609C1/ru
Publication of RU93005426A publication Critical patent/RU93005426A/ru

Links

Images

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

Использование: в сельском хозяйстве и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размещения и оздоровления сортов винограда. Сущность способа: вначале осуществляют микрочеренкование пробирочных растений с 8 10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10 - 12 мм с узлом и листом, а затем высаживают их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга. В питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5 от объема среды. 5 табл.

Description

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам размножения растений, и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размножения и оздоровления перспективных сортов винограда, в исследованиях по физиологии винограда, служит охране окружающей среды.
Известна основная модель клонального микроразмножения растений пролиферация пазушных побегов, основанная на снятии апикального доминирования [1] Есть два направления осуществления этого способа:
получение побегов нормальных пропорций с последующим их делением на однопочковые микрочеренки, которые используются в качестве вторичных эксплантов для повторения цикла размножения,
введение в питательную среду цитокининов, что приводит к формированию побегов с относительно укороченными междоузлиями, а пазушные почки и меристематические бугорки дают начало новым побегам.
Недостатком данного способа является недостаточно высокий коэффициент размножения в процессе культивирования.
Известен способ клонального микроразмножения винограда микрочеренкованием [2] при котором побег, образовавшийся из изолированной почки и имеющей 8-10 междоузлий, асептически разрезают на фрагменты, включающие узел с листом и почкой. Полученные микрочеренки высаживают в биологические пробирки на агаровую среду, так чтобы нижняя часть была погружена в агар, а затем культивируют в камере фитотрона.
Недостатком способа является то, что в качестве индуктора корнеобразования взята феруловая кислота, которая способна ингибировать рост побегов и снижать выход растений из черенков.
Известен способ микроклонального размножения винограда "Ин витро", включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8-10 междoузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга [3]
В качестве индукторов корнеобразования здесь используют индолилмасляную и индолилуксусную кислоты.
Трудность заключается том, что при клональном микроразмножении растения растут относительно медленно и это ограничивает эффективность метода при размножении побегов микрочеренками. Одной из причин медленного роста являются стрессовые условия, в которых находятся растения "Ин витро". Кроме этого, основной сложностью технологии на первом этапе является ингибирование ростовых процессов экспланта токсическими веществами, выделямыми им в среду. В результате травмы, полученной эксплантом при изолировании, активизируются ферменты, окисляющие фенолы растений, различные фенолозы. Продукты окисления фенолов обычно ингибируют деление и рост клеток экспланта. Чтобы улучшить положение добавляют активированный уголь, который уменьшает число погибающих растений, или антиоксиданты.
Изобретение предназначено для повышения эффективности клонального микроразмножения.
В предложенном способе микроклонального размножения винограда "Ин витро", заключающем микрочеренкование пробирочных растений с 8-10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга, в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1-0,5% от объема среды.
Новым в предложенном способе является то, что оптимизацию клонального микроразмножения осуществляют за счет питательной среды, в составе которой предлагают стимуляторы роста естественного прохождения, а именно семена винограда, в виде тонкоразмолотого порошка.
Известно, что виноградные семена используют при производстве масла, кормовой муки, удобрений, естественного парника. В предложенном способе семена используются как стимуляторы роста ввиду того, что в них находятся вещества с ценными биологическим свойствами: абсцизовая и хлорогеновая кислоты, общий фенолы, рутин, свободные ауксины и цитокинины.
В состав семян винограда входят такие осмотически активные вещества как соли, сахара, органические кислоты. Также входит большое количество фитогормонов (ауксинов и цитокининов), которые обладают трофическим действием, т.е. способны тормозить деструктивные процессы, которые являются характерной чертой старения органов или целых организмов. Использование семян винограда в виде тонкоразмолотого порошка позволяет адсорбировать токсические вещества, выделяемые растениями при их микрочеренковании в питательную среду, и заменить таким образом активированный уголь. Т.е. налицо неоднозначность предлагаемого приема: адсорбирование токсических веществ, выделяемых пробирочными растениями в питательную среду при их микрочеренковании, и обогащение питательной среды цитокининами, ауксинами и другими фитогормонами, входящими в состав семян винограда. Адсорбирование токсических веществ осуществляют с целью уменьшения ингибирования наружного роста и увеличения регенеративной способности выделенных эксплантов.
Способ осуществляют следующим образом.
Отбирают клонально-размноженные из меристематических верхушек пробирочные растения винограда. Растения должны иметь 8-10 глазков, а затем приступают к приготовлению питательной среды Мурасиге Скуга по общепринятой методике.
Применяют следующий порядок приготовления питательной среды. В 1 л бидистиллированной воды растворяют макроэлементы, микроэлементы, витамины и другие составные части среды.
Навеску предварительно промытого и высушенного агара переносят в колбу, заливают половинным количеством (от объема среды) бидистиллированной воды 1 л и нагревают на плите до 80-100оС. Семена винограда тщательно промывают, просушивают, перемалывают на лабораторной мельнице до малой фракции около 5 мин. Добавляют их в раствор макро- и микроэлементов, сахара, витаминов и других составных частей среды. Молотые семена добавляют в концентрации 0,25% После растворения и некоторого охлаждения агара к нему добавляют приготовленный раствор. Температура агара и добавленного раствора одинаковая и составляет 80оС.
Среду фильтруют через два слоя марли и доводят до нужного объема бидистиллятом.
Готовую среду разливают по пробиркам, которые закрывают предварительно простерилизованными в автоклаве ватными пробками, штатив с пробирками закрывают целлофаном и обвязывают шпагатом, а затем среду автоклавируют в автоклаве ГК-1000.
Микрочеренкование осуществляют в операционной комнате в ламинарном боксе "Роботрон". Побеги, имеющие 8-10 глазков, при помощи пинцета извлекают из пробирки, помещают на стерильную чашку Петри, разрезают на микрочеренки, имеющие узел с листом и почкой. Длина микрочеренка 10-12 мм, 2 мм над почкой, остальные под почкой. Получение микрочеренки высаживают в пробирки с приготовленной твердой средой, так чтобы нижняя часть до почки была погружена в агар. Культивирование осуществляют в культуральной комнате при освещенности 2,0-3,0 тыс.люксов, фотопериоде 16 ч, температуре 25-27±2оС, влажности воздуха 70-75%
Наблюдения за ростом растений осуществляют через 15 дней. Добавление размолотых семян винограда в первую очередь влияет на развитие корневой системы увеличивается число корней и уменьшается их длина, что объясняется наличием в составе семян свободных ауксинов. В конечном итоге количество корней возрастает в 1,8 раза, соответственно уменьшается их длина, но корни от этого не ухудшаются, они становятся более мощными и общая их масса возрастает в 4,1 раза (табл.1.).
Это оказывает положительное влияние на рост побегов, образование листьев и новых узлов, хотя на первом этапе отличалось угнетение этих процессов, но на втором месяце культивирования скорость роста пробирочных растений увеличивается за счет добавления в питательную среду размолотых семян винограда, что способствует мощному развитию корневой системы. Торможение же роста в течение первого месяца зависит от наличия в составе семян абсцизовой кислоты и фенолов, которые являются ингибиторами широкого спектра действия.
Положительное действие добавки в питательную среду размолотых семян винограда наблюдали при их концентрации 0,1% от объема среды, максимальный положительный эффект был получен при концентрации 0,25% При дальнейшем увеличении концентрации размолотых семян в среде (0,5%) положительное действие сохраняется, но отмечается тенденция к его снижению.
Развитие пробирочных растений в зависимости от количества молотых семян винограда, добавленных в питательную среду (через 63 дня после начала культивирования), представлено в табл.2.
Таким образом, добавление в питательную среду естественных стимуляторов роста из размолотых семян винограда способствует значительному улучшению корневой системы пробирочных растений после их микрочеренкования, что в свою очередь благоприятствует лучшему росту побегов в высоту, развитию большой листовой поверхности, увеличению общей массы побегов. В результате этого увеличивается число узлов (листьев, в пазухе которых находится почка), которые дают начало новым растениям "Ин витро" после их микрочеренкования, т. е. увеличивается потенциальное микрочеренкование и эффективность клонального микроразмножения.
В табл. 3 и 4 соответственно показаны признаки и состав питательной среды.
Предложенная совокупность признаков способствует повышению эффективности клонального микроразмножения на 27,0% и достаточна для достижения поставленной цели.
Добавление в питательную среду размолотых семян винограда оказывает, в первую очередь, положительное влияние на укоренение и развитие корневой системы пробирочных растений: уменьшается длина главного и придаточных корней, но возрастает их число, что способствует увеличению корневой системы.
Динамика развития пробирочных растений без добавления и при добавлении в питательнуюс. реду размолотых семян винограда 0,25 об. среды представлена в табл.5.

Claims (1)

  1. СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ВИНОГРАДА "ИН ВИТРО", включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8 10 междоузлиями на фрагменты длиной 10 12 мм с узлом и листом, посадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга и культивирование из них растений, отличающийся тем, что в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5% от объема среды.
RU93005426A 1993-02-01 1993-02-01 Способ микроклонального размножения винограда "ин витро" RU2041609C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU93005426A RU2041609C1 (ru) 1993-02-01 1993-02-01 Способ микроклонального размножения винограда "ин витро"

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU93005426A RU2041609C1 (ru) 1993-02-01 1993-02-01 Способ микроклонального размножения винограда "ин витро"

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2041609C1 true RU2041609C1 (ru) 1995-08-20
RU93005426A RU93005426A (ru) 1997-04-20

Family

ID=20136420

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU93005426A RU2041609C1 (ru) 1993-02-01 1993-02-01 Способ микроклонального размножения винограда "ин витро"

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2041609C1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2521992C1 (ru) * 2013-01-09 2014-07-10 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Чеченский Государственный Университет" СПОСОБ МИКРОЧЕРЕНКОВАНИЯ ВИНОГРАДА in vitro
MD705Z (ru) * 2013-04-19 2014-07-31 Институт Генетики И Физиологии Растений Академии Наук Молдовы Способ микроклонального размножения винограда

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Высоцкий В.А. Клональное микроразложение растений. Культура клеток растений и биотехнологии. М, 1986, с.93. *
2. Бургутин А.Б. и др. Быстрое клональное размножение виноградного растения. Сельскохозяйственная биология, 1983, N 7, с.48 - 50. *
3. Дорошенко Н.П. Рекомендации. Клональное микроразмножение и оздоровление посадочного материала винограда для создания из него сортовых маточников интенсивного типа. М.: УНТИПиР, 1992, с.11 - 13. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2521992C1 (ru) * 2013-01-09 2014-07-10 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Чеченский Государственный Университет" СПОСОБ МИКРОЧЕРЕНКОВАНИЯ ВИНОГРАДА in vitro
MD705Z (ru) * 2013-04-19 2014-07-31 Институт Генетики И Физиологии Растений Академии Наук Молдовы Способ микроклонального размножения винограда

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Soneji et al. Germination of synthetic seeds of pineapple (Ananas comosus L. Merr.)
Islam et al. In vitro regeneration protocol for artificial seed production in an important medicinal plant Mentha arvensis L
Saborio et al. In vitro regeneration of plantlets from mature embryos of Pinus ayacahuite
Warakagoda et al. In vitro propagation of Pterocarpus santalinus L.(Red Sandalwood) through tissue culture
Shaheen et al. Nutrient encapsulation of nodal segments of an endangered white cedar for studies of regrowth, short term conservation and ethylene inhibitors influenced ex vitro rooting
US7932086B2 (en) Commercially viable process for in vitro mass culture of Jatropha curcas
Atak et al. Micropropagation of Anthurium spp
Grigoriadou et al. In vitro propagation of Primula veris L. subsp. veris (Primulaceae): A valuable medicinal plant with ornamental potential
Akram et al. Establishment of embryogenic cultures and efficient plant regeneration system from explants of forced softwood shoots of teak (Tectona grandis L.)
Kumar et al. Callus induction and plant regeneration from leaf explants of apple (Pyrus malus L.) cv. golden delicious
Singh et al. Plant regeneration from alginate-encapsulated somatic embryos of Dalbergia sissoo Roxb.
Pang et al. Establishment of an efficient micropropagation protocol for Cameron Highlands White Strawberry (Fragaria x ananassa) using a light emitting diode (LED) system
RU2041609C1 (ru) Способ микроклонального размножения винограда "ин витро"
Moola et al. Direct regeneration of plantlets from shoot tip explants of a vulnerable medicinal plant–Celastrus paniculatus Willd
Reddy et al. In vitro multiple shoot induction through axillary bud of Asclepias curassavica L.-a valuable medicinal plant
RU2110172C1 (ru) Способ длительного сохранения in vitro растений винограда
Koilpillai et al. In vitro Propagation of Graptophyllum pictum L.(Acanthaceae)-A Medicinal plant.
Singh et al. A quick method for micro-propagation of Aloe vera L. from leaf explants via callus induction
KR102609856B1 (ko) 개정향풀의 식물체 대량증식 배양 방법
Micheli et al. Encapsulation of black mulberry microcuttings: studies on capsules and synthetic seeds
CN112690215B (zh) 一种猪血木组织培养方法
US20090249511A1 (en) Method for in vitro mass culture of aloe vera
CN112753579B (zh) 一种民族药石吊兰叶的离体培养及植株再生的方法
EP4292426A1 (en) Juvenile bamboo plant of the genus fargesia
Rahman et al. In vitro plantlet regeneration from internode explant of native Olive (Elaeocarpus robustus roxb.)