Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. The invention relates to the microbiological industry, in particular to the production of antibiotics.
Цель изобретения упрощение процесса выделения антибиотика, создание нового технологичного способа выделения целевого продукта. The purpose of the invention is to simplify the process of isolating an antibiotic, creating a new technologically advanced method for isolating the target product.
П р и м е р 1. От 1 л культуральной жидкости, содержащей 4000 мкг/мл омомицина, фильтрованием на воронке Бюхнера через бумажный фильтр или ткань "Бельтинг" отделяют мицелий. Получают 130 г влажного мицелия, содержащего не более 70% влаги. Мицелий замачивают на ночь при комнатной температуре четырехкратным объемом ацетона к весу влажного мицелия, т.е. 520 мл. Затем ацетоновый экстракт отделяют фильтрованием на воронке Бюхнера и мицелий промывают равным объемом ацетона (по отношению к весу влажного мицелия), т.е. 130 мл. Оба экстракта объединяют, получают 500 мл ацетонового экстракта интенсивно красного цвета, содержащего омомицин, антрациклиновый антибиотик галтамицин красного цвета, липофильные и другие примеси. Ацетоновый экстракт упаривают в вакууме на роторном испарителе при температуре 55-60оС и остаточном давлении 10-20 мм рт.ст. до водного остатка (до удаления ацетона). К водному остатку в количестве 50 мл добавляют равным объем петролейного эфира и смесь тщательно перемешивают в течение 5 мин. Органический слой петролейно-эфирный экстракт отделяют в делительной воронке, к водному остатку добавляют еще такую же порцию экстрагента (50 мл) и операцию повторяют вновь. Для более полного перехода омомицина в петролейный эфир проводят три операции, т.е. всего используют 150 мл экстрагента.PRI me R 1. From 1 l of culture fluid containing 4000 μg / ml omomycin, mycelium is separated by filtering on a Buchner funnel through a paper filter or Belting fabric. Obtain 130 g of wet mycelium containing not more than 70% moisture. The mycelium is soaked overnight at room temperature with a four-fold volume of acetone to the weight of wet mycelium, i.e. 520 ml. Then the acetone extract is separated by filtration on a Buchner funnel and the mycelium is washed with an equal volume of acetone (relative to the weight of the wet mycelium), i.e. 130 ml. Both extracts are combined to obtain 500 ml of an intensely red acetone extract containing omomycin, anthracycline antibiotic galtamycin red, lipophilic and other impurities. The acetone extract was evaporated in vacuo on a rotary evaporator at 55-60 ° C and a residual pressure of 10-20 mmHg to the aqueous residue (before removal of acetone). An equal volume of petroleum ether was added to the aqueous residue in an amount of 50 ml and the mixture was thoroughly mixed for 5 minutes. The organic layer of the petroleum ether extract is separated in a separatory funnel, the same portion of the extractant (50 ml) is added to the aqueous residue and the operation is repeated again. For a more complete transition of omomycin to petroleum ether, three operations are performed, i.e. total use of 150 ml of extractant.
Почти неокрашенный петролейно-эфирный экстракт, содержащий омомицин и липофильные примеси и не содержащий красного антибиотика галтамицина, концентрируют в вакууме на роторном испарителе при температуре 55-60оС и остаточном давлении 10-20 мм рт.ст. в три раза до 50 мл.Nearly achromatic petroleum ether extract-containing omomitsin and lipophilic impurities and containing no antibiotic galtamitsina red, concentrated in vacuo on a rotary evaporator at 55-60 ° C and a residual pressure of 10-20 mmHg three times to 50 ml.
К петролейно-эфирному экстракту антибиотика добавляют равный объем 90% -ного водного метанола (50 мл) и встряхивают в делительной воронке. При этом липофильные примеси остаются в петролейно-эфирной фазе, а антибиотик переходит в водно-метанольную фазу. После расслоения фаз растворителей водно-метанольный слой отделяют и к петролейно-эфирному слою вновь добавляют равный объем водного метанола, операцию повторяют. Наличие липофильных примесей в экстрактах контролируют методом ТСХ на силуфоле в системе растворителей бензол-ацетон-этанол (25:1:2); примеси обнаруживают в виде коричневых пятен после погружения пластинки в 1%-ный раствор KMnO4 в верхней части пластины, антибиотик имеет Rf 0,4. Объединенный водно-метанольный экстракт антибиотика упаривают досуха в указанных выше условиях. Получают порошок кремового цвета 3,2 г. Содержание основного вещества 87,0% Выход антибиотика от содержания его в мицелии составляет 80%
П р и м е р 2. От 1 л культуральной жидкости, содержащей 4500 мкг/мл омомицина, отделяют мицелий и антибиотик экстрагируют, как в примере 1, ацетоном. Ацетоновый экстракт антибиотика упаривают до водного остатка, как в примере 1, а реэкстракцию активного вещества из водного остатка осуществляют гексаном. Гексановый экстракт антибиотика концентрируют в вакууме в 3 раза и антибиотик реэкстрагируют в 90%-ный водный метанол, как в примере 1. Получают 3,8 г омомицина. Содержание основного вещества составляет 90% Выход антибиотика от содеражания его в мицелии 85%An equal volume of 90% aqueous methanol (50 ml) is added to the petroleum ether extract of the antibiotic and shaken in a separatory funnel. In this case, lipophilic impurities remain in the petroleum-ether phase, and the antibiotic passes into the water-methanol phase. After phase separation of the solvents, the water-methanol layer is separated and an equal volume of aqueous methanol is again added to the petroleum-ether layer, the operation is repeated. The presence of lipophilic impurities in the extracts is controlled by TLC on silufol in a benzene-acetone-ethanol solvent system (25: 1: 2); impurities are detected as brown spots after immersion of the plate in a 1% KMnO 4 solution in the upper part of the plate, the antibiotic has an Rf of 0.4. The combined aqueous methanol extract of the antibiotic was evaporated to dryness under the above conditions. A cream-colored powder of 3.2 g is obtained. The content of the basic substance is 87.0%. The antibiotic yield from its content in the mycelium is 80%.
PRI me R 2. From 1 l of culture fluid containing 4500 μg / ml omomycin, mycelium is separated and the antibiotic is extracted, as in example 1, with acetone. The antibiotic acetone extract was evaporated to an aqueous residue, as in Example 1, and the active substance was back-extracted from the aqueous residue by hexane. The antibiotic hexane extract was concentrated 3 times in vacuo and the antibiotic was re-extracted into 90% aqueous methanol, as in Example 1. 3.8 g of omomycin were obtained. The content of the main substance is 90%. The antibiotic yield from its content in the mycelium is 85%.